1、返回目录 DNA和蛋白质技术 专题5 返回目录 专题复习方案返回目录 专题 核心归纳章末 考法整合目录Contents 返回目录 专题核心归纳返回目录 知识要点速记1DNA在0.14 molL1的 NaCl溶液中溶解度最小。2DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精，可利用酒精将DNA和蛋白质分开。3PCR原理：DNA热变性原理。PCR每次循环都包括变性、复性和延伸三步。返回目录 4DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3端延伸DNA链。5利用凝胶色谱法分离蛋白质时，相对分子质量大的先洗脱出来，相对分子质量小的后洗脱出来。6蛋白质提取和分离的一般步骤是：样品处理、粗分离、纯化和纯度
2、鉴定。返回目录 7进行蛋白质纯度鉴定时，使用最多的方法是SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，在电泳过程中分子的迁移率完全取决于分子的大小。返回目录 1实验中2次加入蒸馏水的目的章末考法整合考法一 DNA粗提取与鉴定实验操作分析次数目的第一次使鸡血细胞吸水涨破第二次稀释NaCl溶液，使DNA逐渐析出返回目录 2实验中3次加入NaCl溶液的目的次数目的第一次溶解DNA，析出蛋白质等不溶杂质第二次使DNA再溶解，为了获得含杂质较少的DNA第三次溶解DNA，以便DNA与二苯胺反应返回目录 3实验中4次过滤的比较第一次过滤 第二次过滤 第三次过滤 第四次过滤滤液中含DNA的核物质DNA溶于0.14 mol/LNa
3、Cl溶液的杂质DNA纱布上细胞膜、核膜等残片不溶于2 mol/L NaCl溶液的杂质DNA不溶于2 mol/L NaCl溶液的杂质返回目录 第一次过滤第二次过滤 第三次过滤第四次过滤过滤前加入的物质蒸馏水NaCl溶液蒸馏水NaCl溶液过滤目的去除细胞膜、核膜等杂质去除不溶于2 mol/LNaCl溶液的杂质去除溶于0.14 mol/L NaCl溶液的杂质去除不溶于2 mol/LNaCl溶液的杂质返回目录 4实验中6次搅拌的目的目的第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液，加速细胞破裂第二次搅拌含DNA的高浓度盐溶液，加速DNA的溶解第三次搅拌加蒸馏水的NaCl溶液，均匀稀释以析出更多DNA返回目录 目的第
4、四次搅拌含DNA的高浓度盐溶液，加速DNA的溶解第五次搅拌含DNA的酒精溶液，提取含杂质较少的DNA第六次搅拌含DNA白色丝状物的盐溶液，加速DNA的溶解返回目录【真题1】下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是()A酵母和菜花均可作为提取DNA的材料BDNA既溶于2 mol/L NaCl溶液也溶于蒸馏水C向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，可见玻璃棒上有白色絮状物DDNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热，冷却后变蓝返回目录 答案 C 解析 理论上，只要含有DNA的生物组织均可作为该实验的材料，酵母和菜花均可作为提取DNA的材料，A项正确；DNA既溶于2 mol/L NaCl溶液，也溶于蒸馏水
5、，B项正确；向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，可使细胞破裂，释放DNA，但不会观察到玻璃棒上有白色絮状物，C项错误；DNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热，冷却后变蓝，D项正确。返回目录 1常用的蛋白质分离方法(1)凝胶色谱法考法二 血红蛋白的提取和分离方法蛋白质比较相对分子质量大 相对分子质量小凝胶内部排阻在凝胶颗粒外面，迅速通过进入凝胶颗粒内部，被滞留返回目录 蛋白质比较相对分子质量大 相对分子质量小运动方式垂直向下垂直向下和无规则扩散运动运动路程较短较长洗脱次序先流出后流出返回目录 注意：凝胶色谱柱的直径大小不影响分离效果，但直径过大造成洗脱液体积大，样品稀释度大；凝胶色谱柱的高度与分离度有关。加
6、快干凝胶膨胀的方法：可将加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热，逐渐升温至接近沸腾，通常只需12h。这种方法不但节约时间，而且可以除去凝胶中可能带有的微生物，排出胶粒内的空气。返回目录(2)电泳法在一定pH下，一些生物大分子(如多肽、核酸等)可解离的基团会带上正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。返回目录 由于分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状不同，使带电分子产生不同的迁移速率，从而实现样品中各种分子的分离。判断纯化的蛋白质是否达到要求使用最多的是SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法。返回目录 2蛋白质提取过程中需注意的问题(1)红细胞的洗涤与离心要求：
7、红细胞洗涤过程中，洗涤三次后，上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则无法除去血浆蛋白；离心时转速要低，时间要短，否则白细胞等会一同沉淀，达不到分离效果。(2)蒸馏水和甲苯的作用：血红蛋白释放过程中，蒸馏水的作用是涨破红细胞，甲苯的作用主要是溶解细胞膜。返回目录【真题2】以下关于猪血红蛋白提纯的叙述，不正确的是()A洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂B猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少C血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测返回目录 D在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢答案 D 返回目录 解析 生理盐水能维持细胞形态稳定，防止红细胞破裂；猪成熟
8、红细胞中没有细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少，是提纯血红蛋白的理想材料；血红蛋白的颜色可用于观察红色区带的移动情况，并据此判断分离效果；分离提纯血红蛋白时用凝胶色谱法，根据相对分子质量的大小来分离蛋白质，相对分子质量大的蛋白质移动速度较快。返回目录 1PCR中的物质条件(1)引物：PCR技术中所用的引物是一小段单链RNA或单链DNA，它能与DNA母链的一段碱基序列互补配对。DNA复制之所以需要引物，是因为DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，而只能从3端延伸DNA链。PCR的引物通常由2030个核苷酸聚合而成，引物的量需保证满足几十次循环反应的需要。考法三 PCR技术的基本操作和应用返回目录(2
9、)DNA聚合酶：PCR中所用的酶是从一种嗜热菌中分离得到的耐高温的Taq DNA聚合酶，高温不会失活。DNA聚合酶的特点是只能从3端延伸DNA链。返回目录 2PCR的应用(1)分析人的血液，对细菌、病毒感染情况进行早期诊断。(2)用于遗传病的基因诊断与基因治疗。(3)用于鉴别犯罪嫌疑人、亲子鉴定。(4)分析生物化石样品，追溯其生存年代或迁徙踪迹。(5)检测目的基因是否已经导入目标生物。返回目录【真题3】(2017江苏卷)金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下
10、，请回答下列问题：返回目录 返回目录(1)从高表达MT 蛋白的生物组织中提取mRNA，通过_获得_用于PCR扩增。(2)设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2)，为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的_位点。设计引物时需要避免引物之间形成_，而造成引物自连。返回目录(3)图中步骤1代表_，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。(4)PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏_的碱基配对。退火温度的 设 定 与 引 物 长 度、碱 基 组 成 有 关，长 度 相 同 但_的引物需要设定更高的退火温度。返回目录(5)如果PCR反应得不到任何
11、扩增产物，则可以采取的改进措施有_(填序号：升高退火温度 降低退火温度 重新设计引物)。解析(1)目的基因的获取：从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA，通过逆转录获得cDNA用于PCR扩增。返回目录(2)设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2)，为方便基因与运载体相连构建重组质粒，在引物中需要增加适当的限制性核酸内切酶的切割位点。为了避免引物自连，设计引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对。(3)根据PCR的过程可知，图中步骤1为变性，步骤2为退火，步骤3为延伸，这三个步骤组成一轮循环。返回目录(4)退火温度过高，会破坏引物与模板的碱基配对。因A、T之间形成两个氢键，G、C之间形成三个氢键，GC碱基含量高的引物，需要设定更高的退火温度。(5)如果PCR得不到任何扩增产物，可能的原因是退火温度过高，或者设计的引物不合适，不能与模板碱基配对。因此可采取的改进措施有降低退火温度、重新设计引物等。返回目录 答案(1)逆转录 cDNA(2)限制性核酸内切酶 碱基互补配对(3)变性(4)引物与模板 GC含量高(5)返回目录 专题5 跟踪测评
