1、第一章 微生物培养技术第一节 微生物的分离和纯培养(时间：30分钟满分：50分)考查知识点及角度难度及题号基础中档稍难培养基的成分与类型1、2接种与无菌技术3、45微生物的分离与纯培养678一、选择题(共6小题，每小题4分，共24分)1下列关于培养基的说法，错误的是 ()。A培养基中一般都含有碳源、氮源、水、无机盐B有的微生物生长对培养基的pH有特殊要求，对氧气没有要求C获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵D有的微生物的培养基中须添加特殊营养物质答案B2自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是 ()。A碳源 B氮源C无机盐 D生物因子答案A3金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎
2、等，还可能引起食物中毒，下述实验结束后的做法错误的是 ()。A对接种环进行灼烧处理B带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉C带菌培养基必须经加热后才能倒掉D接种后双手必须经肥皂洗净，再用70%的酒精棉球擦拭解析金黄色葡萄球菌有很强的致病力，所以在操作时一定要做到安全防范，接种后双手用肥皂洗净，再用70%的酒精棉球擦拭，以起到杀菌的作用；对接种环进行灼烧也可以杀灭细菌，防止污染环境；高压蒸汽灭菌也可杀死培养基中的金黄色葡萄球菌；如果只对带菌培养基进行加热，杀不尽其中的致病菌，因为此菌的耐高温能力很强，会污染环境。答案C4细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些
3、方法依次用于杀死杂菌的部位是 ()。A接种环、手、培养基B高压锅、手、接种环C培养基、手、接种环D接种环、手、高压锅解析此题考查学生对无菌技术的掌握。高压蒸汽通常用于培养基的灭菌；用酒精擦拭双手是消毒的一种方法；火焰灼烧，可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环。答案C5下列有关平板划线操作的叙述，不正确的是 ()。A第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物B每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种C在第二次划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液D划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者解析纯化大肠杆菌的
4、平板划线操作中，接种环取菌种前灼烧的目的是避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残留的菌种；划线结束仍需灼烧接种环，是避免细菌污染环境和感染操作者。从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。答案C6下列有关稀释涂布平板法，叙述错误的是 ()。A首先将菌液进行一系列的梯度稀释B然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C在适宜条件下培养D结果都可在培养基表面形成单个菌落解析稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下进行培养，因此A、B、C三个选项正
5、确。在不同稀释度的菌液接种后，只有在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物才能分散成单个细胞，从而能够在培养基表面形成单个菌落，而不是所有培养基上均可形成单个菌落，因此D错误。答案D二、非选择题(共2小题，共26分)7(14分)根据微生物培养的相关知识回答下列问题。(1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑_、_和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、_、_等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。(2)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行_(消毒、灭菌)；操作者的双手需要进行清洗和_；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外
6、线能使蛋白质变性，还能_。(3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_。(4)通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的_。(5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_。(6)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。解析(1)大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、生活周期短等优点，培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。(2)灭菌使用强烈的理
7、化因素杀死物体内外所有的微生物，所以对培养基和培养皿进行灭菌；消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，操作者的双手需要进行清洗和消毒；紫外线能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结构。(3)稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养，应保证样品稀释的比例合适。(4)对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。(5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。(6
8、)因为有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，并可能导致肠道出现严重症状，使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。答案(1)温度酸碱度易培养生活周期短(2)灭菌消毒损伤DNA的结构(3)比例合适(4)鉴定(或分类)(5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生(6)灭菌8(12分)(上海高考)分析有关微生物的资料，回答下面相关的问题。1982年澳大利亚学者从胃活检组织中分离出幽门螺杆菌。(1)幽门螺杆菌的遗传物质集中分布的区域称为_。(2)图中4支试管分别代表4种微生物在半固体培养基(琼脂含量3.5 g/L)中的生长状态，其中号试管代表
9、幽门螺杆菌的生长状态，由图判断，该菌在_条件下不能生长。产甲烷杆菌的生长状态最能由试管_代表。(3)下表是某培养基的配方。成分葡萄糖KH2PO4MgSO4NaClCaSO4CaCO3琼脂蒸馏水含量/g100.20.20.20.253.51 L将幽门螺杆菌接种到pH适宜的该培养基中，置于37 下培养一段时间后，在该培养基中幽门螺杆菌的数目比刚接种时_，主要原因是_。(4)幽门螺杆菌形态如右图所示，该菌在人体中可引起 胃溃疡等胃部疾病。幽门螺杆菌生长的最适pH为67，人体胃腔内pH在12之间，但胃黏膜的黏液层靠近上皮细胞侧pH为7.4左右。若幽门螺杆菌随食物进入胃腔，结合其结构特点以及能导致胃溃疡
10、的特性，推测该菌在胃内如何存活？_。解析(1)幽门螺杆菌为原核生物，没有核膜包围的细胞核，遗传物质集中在拟核。(2)幽门螺杆菌生活在半固体培养基的中部，说明它不能生活在氧气浓度过高或过低的地方；产甲烷杆菌为厌氧型细菌，应生活在半固体培养基的底部。(3)培养基中缺乏氮源，幽门螺杆菌不能正常生活，数量会减少。(4)幽门螺杆菌进入胃腔后，可以先依靠鞭毛运动至pH较高处缓冲，然后分泌蛋白中和胃酸，提高pH，以便继续生存和繁殖。答案(1)拟核(核区)(2)氧气浓度过高或过低(3)少缺少氮源(缺少氮源和生长因子)(4)幽门螺杆菌进入胃腔后，首先依靠鞭毛运动至pH较高处缓冲，然后分泌蛋白中和胃酸，提高pH，以便继续生存和繁殖
