1、课时作业(三十五)无菌操作技术实践一、选择题1下列关于微生物培养和利用的叙述不正确的是()A利用稀释涂布平板法既能分离微生物也能对微生物进行计数B接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落C以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌D用大白菜腌制泡菜的过程中亚硝酸盐含量变化是先减少后增加2(2013湘潭高三第一次模拟)关于灭菌和消毒的理解不正确的是()A灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽孢和孢子B消毒和灭菌实质是相同的C接种环是灼烧法灭菌D常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等3平板划线法和稀释涂布平板法是纯化微生物的两种常用方法，下列描述正确的是()A都
2、要将菌液进行一系列的梯度稀释B平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作C稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养D都会在培养基表面形成单个的菌落4(2013合肥质检)分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是()A经选择培养后即可将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上B选择培养这一步可省略，但纤维素分解菌少C经稀释培养后，用刚果红染色D此实验中需设置对照组5(2013赤峰质检)下表为某培养基的配方，有关叙述正确的是()成分牛肉膏葡萄糖K2HPO4伊红美蓝青霉素琼脂蒸馏水含量10 g10 g2 g0.4 g0.065 g1万单位适量1 000 mLA.
3、能在此培养基上生长的大肠杆菌，拟核上有抗青霉素的基因B此培养基是天然鉴别培养基C此培养基可以用来检测自来水中细菌含量是否符合饮用水标准D此培养基可以用于选育转基因大肠杆菌菌种的基因工程的操作过程中6下列有关刚果红染色法的叙述，不正确的是()A刚果红可以在细菌菌落形成前倒平板时加入B刚果红可以在菌落形成后加入C刚果红在菌落形成前倒平板时加入，加入的刚果红不需要灭菌D在菌落形成后加入刚果红时，刚果红不需要灭菌二、非选择题7下图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请回答相关问题：(1)图甲是利用_法进行微生物接种，图乙是利用_法进行微生物接种。这两种方法所用的接种工具分别是_和_；对这两种接种工具进行
4、灭菌和消毒的方法依次是_和酒精消毒。(2)接种操作为什么一定要在火焰附近进行？_。(3)接种后，在固体培养基上培养细菌时为什么进行倒置培养？_。(4)下图是采用上述接种方法接种后培养的效果图解，其接种方法是_(填图甲或图乙)。8.(2013武汉模拟)某些微生物能合成纤维素酶，通过对这些微生物的研究，人们能够利用秸秆等废弃物生产酒精，用纤维素酶处理服装面料等。研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能产生纤维素酶的微生物。请分析并回答问题：(1)培养基中加入的化合物A是_，为微生物的生长提供_，这种培养基属于_培养基。(2)在筛选纤维素分解菌的过程中，通常用_染色
5、法，这种方法能够通过颜色反应直接对纤维素分解菌进行筛选。甲同学在实验时得到了如上图所示的结果，则纤维素分解菌位于_内。ABC D(3)在培养纤维素分解菌的过程中，进行平板划线时，每次划线结束后仍然要灼烧接种环，原因是_。(4)某同学打算从牛胃中分离纤维素分解菌并计数，与分离醋酸菌相比，进行培养时除了营养不同外，最主要的实验条件差别是_，该同学采用活菌计数法统计的菌落数目往往比活菌的实际数目_。(5)丙同学在提取和分离纤维素酶的过程中，为了保证抵制外界酸和碱对酶活性的影响，采取的措施是向提取液和分离液中添加_；若探究纤维素酶活性的最适温度，如何设置对照？_。9(2012南昌一模)尿素是一种重要的
6、农业肥料，需经细菌的分解才能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：(1)如图是利用_法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步_到培养基的表面。除此方法外，常用的微生物接种方法还有_(写一种)。(2)如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行_，灼烧的接种环冷却后才能接种的原因是_。(3)下面是两种培养基的配方：表1：A培养基配方KH2PO4来源:z。zs。Na2HPO4MgSO47H2O葡萄糖尿素琼脂H2O1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g15.
7、0 g1 000 mL表2：B培养基配方纤维素粉NaNO3NaHPO47H2O来源:中教网KH2PO4MgSO47H2OKCl酵母浸膏H2O5 g1 g1.2 g0.9 g0.5 g0.5 g0.5 g1 000 mL配制培养基的操作步骤_(用字母顺序回答)。a倒平板b计算c溶化d称量e灭菌通常培养基采用_法灭菌，在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置，目的是_。如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择上述_(A、B)配方的培养基，在该培养基中加入_指示剂，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。据B培养基的成分，所培养微生物的同化作用类型是_。(4)如果进一步从尿素分解菌中提取出
8、DNA，利用PCR技术扩增，则每次循环复制可分为_三步。而尿素分解菌能分解尿素的直接原因是它们能合成_，该物质被提取出后的纯化方法通常是_。10(2013济南二模)生产实践中应用的菌种主要来自土壤，从土壤中分离微生物的实验流程如下：土壤取样选择培养梯度稀释鉴别培养。请回答下列有关问题：(1)将土壤浸出液接种到特定培养基上，可以将酵母菌从混杂的微生物群体中分离出来，获得纯种酵母菌，这一过程叫做_。在培养酵母菌的过程中，对培养基、接种环常采用的灭菌方法分别是_法。(2)在使用酵母菌发酵生产酒精的过程中，影响酵母菌酒精发酵的主要因素有_，常使用_的方法从发酵液中提取纯酒精。(3)从土壤中分离纤维素分
9、解菌，最好选择在_环境中采集土样，所选择的培养基应以_作为唯一碳源。(4)纤维素分解菌能够合成纤维素酶，为了使纤维素酶反复使用，可以对纤维素酶进行_处理，处理的方法有吸附法，共价键结合法和_法。11.近期，思念、三全、湾仔码头等企业生产的速冻食品相继检出金黄色葡萄球菌超标，“细菌门”事件引起公众的普遍关注。请回答下列问题：(1)某小组欲检测果汁类食品中是否含有金黄色葡萄球菌。经查资料：葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环。请完成下列实验。步骤：配制培养基：称取适量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl琼脂等，加入蒸馏水，搅拌加热至完全溶解后调节_，分
10、装到锥形瓶后_，在无菌状态下加入卵黄液(100 mL 10%灭菌NaCl溶液中加一个鸡蛋黄，振荡均匀)摇匀，立即倒平板。接种：取待检果汁2.5 mL加入到22.5 mL的灭菌生理盐水中，制成接种样液。实验组：将接种样液用_法接种在含卵黄的固体培养基上。对照组：将_用同样的方法接种在含卵黄的固体培养基上或不接种作空白对照。将上述接种后的培养皿同时放在36 的恒温箱中培养48 h观察：观察培养基表面_。(2)葡萄球菌能耐受高浓度的NaCl，所以在配制培养基时加入高浓度的NaCl可以将它分离出来。此培养基属于_培养基。(3)要统计每克果汁样品中活菌数目，宜采用_法接种，根据果汁样品的稀释倍数和接种稀
11、释液的体积，统计平板上的_就能大约推测出样品中活菌数。来源:.某同学在做微生物实验时，不小心把圆褐固氮菌样品和酵母菌样品混在一起，已知青霉素会影响固氮菌的生长繁殖，但不影响真菌生长繁殖。请填空完成分离这两种菌的主要实验步骤：(1)分别配置_的培养基和_的培养基，分别分成两份，依次标上A、a、B、b备用。(2)分别向A、B培养基接种_。(3)把接种后的培养基放在恒温箱中34 d。(4)从A、B培养基上生长的菌落中挑取生长良好的菌株，分别接种到_中。(5)_。课时作业(三十五)一、选择题1D稀释涂布平板法可以用于分离微生物以及对微生物计数；接种时要连续划线，这样可以获得单个菌落；大白菜腌制过程中开
12、始时细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加，一般腌制10天后亚硝酸盐含量下降。2B3D平板划线法不需要进行梯度稀释，稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液滴加到固体培养基的表面。平板划线法和稀释涂布平板法都能在培养基表面形成单个菌落。4A经选择培养后，再经稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上；选择培养可省略；经稀释培养后，用刚果红染色，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈；设置对照能证明经选择培养的确得到了欲分离的微生物。5D此表表示鉴定大肠杆菌的合成培养基。抗性基因一般位于大肠杆菌的质粒上，而不是拟核上；此培养基只能用来检测自来水中大肠杆菌含量是否符合饮用水标准。6C从对两种筛选纤维素
13、分解菌的方法进行比较分析入手，结合微生物培养过程无菌条件的控制方法来解答该题。刚果红可以与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。刚果红可以在细菌菌落形成前倒平板时加入，也可以在菌落形成后加入。若在细菌菌落形成前倒平板时加入刚果红，则所加刚果红要进行灭菌，以防杂菌的侵入，影响纤维素分解菌菌落的形成；若在菌落形成后加入刚果红，则不需要灭菌。二、非选择题7解析：图甲和图乙分别是平板划线法和稀释涂布平板法，这两种方法所用的接种工具分别是接种环和涂布器。由于在酒精灯火焰附近存在着无菌区域，因此接
14、种常在火焰附近进行。在微生物培养过程中会产生水，对微生物的生长造成影响，故需要倒置培养。答案：(1)平板划线稀释涂布平板接种环涂布器灼烧灭菌(2)火焰附近存在着无菌区域(3)避免培养过程产生的水分影响微生物的生长(4)图乙8解析：(1)根据该微生物能产生纤维素酶的特点，在其选择培养基中添加纤维素，可为其生长提供碳源。(2)利用刚果红染色法来筛选纤维素分解菌，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物。当培养基中的纤维素被纤维素酶分解后，刚果红纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。(3)进行平板划线接种时，每次划线后要灼烧接种环是为了及时杀死接种环上残留的菌种，避免
15、污染。(4)牛胃内是无氧环境，故应在无氧环境下分离牛胃中的纤维素分解菌。菌落是同种菌体的集合，相距很近的细菌可以形成一个菌落，故菌落数比活菌数少。(5)在提取液和分离液中添加缓冲溶液可保证液体的pH不受干扰。探究某种酶活性的最适温度应设置不同的温度梯度进行相互对照。答案：(1)纤维素碳源选择(2)刚果红A(3)及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境(4)保证无氧环境小(低)(5)缓冲溶液设置不同的温度梯度进行相互对照9解析：(1)图示利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释到培养基的表面。除此方法外，常用的微生物接种方法还有稀释涂布平板法。(2)接种环通过灼烧灭菌，灼烧的接种环
16、冷却后才能接种的原因是防止高温杀死需接种的微生物。(3)配制培养基的操作步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。通常培养基采用高压蒸汽灭菌法灭菌，在制备固体培养基的倒平板操作时，平板冷凝后，应将平板倒置，目的是防止培养皿内壁上出现的冷凝水污染培养基。如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择上述以尿素为氮源的培养基，在该培养基中加入酚红指示剂，可初步鉴定出该种细菌能否分解尿素。B培养基的成分中，碳源为有机物，所培养微生物的同化作用类型是异养型。(4)PCR技术扩增，则每次循环复制可分为变性、复性、延伸三步。而尿素分解菌能分解尿素的直接原因是它们能合成脲酶，该物质被提取出后的纯化方法通常是凝胶色谱法。答案：(1)平板划线稀释(分散、分离)稀释涂布平板法(2)灭菌防止高温杀死需接种的微生物(3)bdcea高压蒸汽灭菌防止培养皿内壁上出现的冷凝水污染培养基A酚红异养型(4)变性、复性、延伸脲酶凝胶色谱法10答案：(1)纯培养高压蒸汽灭菌、灼烧(2)温度、pH、氧气浓度等蒸馏(3)富含纤维素的纤维素(4)固定化包埋11答案：.(1)pH灭菌平板划线灭菌生理盐水是否出现周围有乳浊环的菌落(2)选择(3)稀释涂布平板菌落数目.(1)无氮 (或不含氮和青霉素)加青霉素(或加青霉素和氮)(2)混有两种菌的样品(4)a、b培养基(5)把接种后的培养基放在恒温箱中34 d
