1、第38讲微生物的培养与应用考纲明细1.微生物的分离和培养2.某种微生物数量的测定3.培养基对微生物的选择作用4.微生物在其他方面的应用考点1培养基及微生物的纯化培养技术1培养基(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。(2)营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。(3)种类按照物理性质可分为液体培养基、固体培养基、半固体培养基。按照成分的来源可分为天然培养基和合成培养基。按照功能用途可分为选择培养基、鉴别培养基等。2无菌技术(1)含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。(2)关键
2、：防止外来杂菌的入侵。(3)不同对象的无菌操作方法(连线)答案、b、a、3大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基操作步骤倒平板的方法及注意事项a请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙乙甲丁。b乙中的灭菌方法是灼烧灭菌。c丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。(2)纯化大肠杆菌的两种方法1)平板划线法概念：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。注意事项：a.b灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。c第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌
3、繁殖而来的菌落。d划线时最后一区不要与第一区相连。e划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。2)稀释涂布平板法概念：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。操作过程(3)菌种的保存方法对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。1深挖教材(1)倒平板操作为什么需要使锥形瓶的瓶口通火焰？提示通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。(2)平板冷凝后，为什么要将平板倒置？提示平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以
4、防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。2判断正误(1)氮源不可能作为细菌的能源物质()(2)培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊的物质()(3)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上()(4)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害()(5)为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落()(6)用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，就能在培养基表面形成单个菌落()题组一培养基及其制备方法分析1下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是()A操作的顺序为计算称量溶化倒平板灭菌B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入
5、烧杯C待培养基冷却到50 左右时倒平板D待平板冷却凝固后将平板倒置答案A解析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算称量溶化灭菌倒平板，不能颠倒，A错误；牛肉膏比较黏稠，所以将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，待牛肉膏溶化并与称量纸分离后用玻璃棒取出称量纸，B正确； 待培养基冷却到50 左右时倒平板，此时不烫手且为液体状态，C正确；平板冷却凝固后才能将平板倒置，D正确。2下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是()A从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基B该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨C该培养基缺少提供生长因子的物质D该培养基调节合适的p
6、H后就可以接种使用答案B解析从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于鉴别培养基，A错误；微生物的营养物质主要包括氮源、碳源、水和无机盐等，培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨，B正确；生长因子主要包括维生素、氨基酸和碱基等，它们一般是酶和核酸组成成分，蛋白胨可以提供生长因子，C错误；该培养基调节合适的pH后经灭菌后才可以接种使用，D错误。技法提升1培养基的配制原则(1)目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。(2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。(3)pH要适宜：细菌为6.57.5，放线菌为7.58.5，真菌为5.0
7、6.0，培养不同微生物所需的pH不同。2微生物对主要营养物质的需求特点(1)自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。(2)异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。题组二无菌技术的操作3.下列对灭菌和消毒的理解不正确的是()A灭菌是指杀灭环境中的一切微生物的细胞、芽孢和孢子B消毒和灭菌实质上是完全相同的C接种环用灼烧法灭菌D常用灭菌方法有灼烧灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法答案B解析消毒是使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微
8、生物(不包括芽孢和孢子)，灭菌则是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，B错误。4(2014江苏高考)为了获得胡萝卜素产品，某小组开展了产胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。请回答下列问题：(1)实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是_；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该_。(2)为了筛选出酵母菌，培养基中添加了青霉素，其目的是_。(3) 下图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙、丙指示的依次是_(填序号)。安全阀、放气阀、压力表放气阀、安全阀、压力表安全阀、放气阀、温度表放气阀、安全阀、温度表(4)为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在3块相同平板上划线，结果其中一块平板的
9、各划线区均未见菌生长，最可能的原因是_。答案(1)干热灭菌和湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)用牛皮纸(报纸)包扎器皿(2)抑制细菌(放线菌)的生长(3)(4)接种环温度过高，菌种被杀死解析(1)实验用的培养皿常用的灭菌方法是干热灭菌和湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)，在实验前应用牛皮纸或干净的报纸包扎器皿。(2)酵母菌是真菌，对青霉素具有抵抗能力，青霉素主要抑制细菌、放线菌的生长。(3)图中甲为安全阀，乙为放气阀，丙为压力表。(4)该接种过程中的3块平板相同，菌种来源相同，只有一块平板接种培养后无菌落，对比知，问题最可能出现在接种过程中，最可能的原因是接种环灼烧后未充分冷却，菌种被杀死。技法提升全面比较消毒和
10、灭菌题组三微生物的培养与纯化5.用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时()可以用相同的培养基都需要使用接种针进行接种都需要在火焰旁进行接种都可以用来计数活菌A B C D答案C解析平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基，正确；平板划线法采用接种环进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作，错误；纯化时，要进行无菌操作，需要在火焰旁接种，避免空气中的微生物混入培养基，正确；平板划线法一般用于分离而不是计数，错误。6为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机
11、取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_；然后，将1 mL 水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为_。(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过_灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_。(3)示意图A和B中，_表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。答案(1)检测培养基平板灭菌是否合格3.8107(2)灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3)B解析(1)涂布接种前，灭菌后的空白平板先培养一段时
12、间，若空白平板上无菌落形成，则说明培养基平板灭菌合格；平均每个平板上的菌落数目为38，稀释了100倍，取样为0.1 mL，则每毫升水中的活菌数目为381000.138000(个)，则每升水中的活菌数目为3800010003.8107(个)。(2)用平板划线法分离微生物的过程中，应对接种环进行灼烧灭菌；每次划线都要从上一次划线的末端开始，这样做可将聚集的菌体逐步稀释以便最终得到单个菌落。(3)示意图A是用平板划线法接种培养后得到的结果；示意图B是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。技法提升两种纯化细菌方法的比较考点2微生物的筛选和计数1土壤中分解尿素的细菌的分离与计数2分解纤维素的微生物的分离
13、(1)纤维素酶组成：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶作用 (2)纤维素分解菌的筛选原理筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。实验流程(3)分离纤维素分解菌所用的两种培养基比较分离纤维素分解菌的实验中先用选择培养基，再用鉴别培养基。选择培养基为液体培养基，以纤维素作为碳源和能源的微生物可以正常生长，而其他绝大多数微生物不能正常生长。鉴别培养基含琼脂，为固体培养基，细菌可在培养基上形成肉眼可见的菌落。刚果红染色法应用的就是鉴别培养基。3结果分析与评价1深挖教材除设置对照组外，设置重复组的
14、作用是什么？应如何设置重复组？提示设置重复组的作用是为排除偶然因素对实验结果的干扰；在每一稀释度下宜设置3个平板作重复组，选择菌落数均在30300且数目相差不大的三个平板，用“平均值”代入计数公式予以计算菌落数。2判断正误(1)选择培养基可以鉴定某种微生物的种类()(2)对细菌进行计数只能采用稀释涂布平板法，而不能用平板划线法()(3)刚果红可以与纤维素形成透明复合物，所以可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌()(4)筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源()(5)分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低()题组一土壤中分解尿素细菌的分离与计数
15、1.下面关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的叙述中正确的是()A只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素B筛选分解尿素的细菌时应以尿素作为培养基中的唯一营养物质C统计样品中的活菌数目时一般用平板划线法D在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则表明筛选到了分解尿素的细菌答案A解析酶具有专一性，故只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，A正确；筛选分解尿素的细菌的实验中，采用的是以尿素为唯一氮源的培养基，B错误；统计样品中的活菌数目时一般采用稀释涂布平板法，平板划线法不能用于统计样品中的细菌数，C错误；在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变
16、红，这样就能初步鉴定该种细菌能够分解尿素，D错误。2人和哺乳动物的尿液中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染，土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。某研究小组开展土壤中分解尿素的细菌的分离和培养实验，请回答下列问题：(1)该实验中，在以_为唯一氮源的培养基中加入_指示剂，能产生脲酶的细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成_色。(2)在接种前需要添加空白对照组以检测培养基是否被污染，该空白对照组应采取的操作要求和观察指标是_。(3)某同学在五个培养基平板下均接种稀释倍数为105的土壤样品液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、15
17、6、462、178和191。该过程采取的接种方法是_，每克土壤样品中的细菌数量为_个。答案(1)尿素酚红红(2)将已灭菌、未接种的培养基在适宜温度下放置相应的时间，观察培养基上是否有菌落产生(3)稀释涂布平板法1.75108解析(1)分解尿素的细菌能合成脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。(2)在接种前需要添加空白对照组以检测培养基是否被污染，该空白对照组应采取的操作要求和观察指标是将已灭菌、未接种的培养基在适宜温度下放置相应的时间，观察培养基上是否有菌落产生。(3)某同学在五个培养基平板下均
18、接种稀释倍数为105的土壤样品液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。该过程采取的接种方法是稀释涂布平板法，每克土壤样品中的细菌数量为0.11051.75108(个)。技法提升统计菌落数目的两种方法(1)显微镜直接计数法(2)间接计数法(活菌计数法)题组二分解纤维素的微生物的分离3.分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是()A经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上B富集培养这一步可省略，但培养的纤维素分解菌少C经稀释培养后，用刚果红染色D对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上答案A解析经选择培养后，再经稀释，才
19、能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上，A错误；富集培养可省略，B正确；经稀释培养后，用刚果红染色，C正确；设置对照能证明经富集培养的确得到了欲分离的微生物，D正确。4(2017山西太原一模)玉米秸秆含有大量的纤维素，用纤维素酶分解秸秆后的产物可以生产酒精。研究人员用化合物A、硝酸盐、磷酸盐以及微量元素配制培养基，成功地筛选到能产生纤维素酶的微生物，请分析回答：(1)纤维素酶至少包括_、_、_三种组分，在这三种酶的作用下，纤维素最终被水解成_。(2)培养基中加入的化合物A是_，为微生物的生长提供碳源，这种培养基属于_培养基，对培养基进行灭菌时常用的灭菌法为_。(3)在筛选纤维素分解菌的过程中
20、，通常用_染色法；如果培养基某部位出现_现象，则说明存在纤维素分解菌。(4)用获得的糖液发酵生产乙醇，常用的微生物是_，在_的发酵液中，该菌可以生长繁殖，而绝大多数其他生物受到抑制，常用_法对该菌进行计数，检测是否产生酒精的常用试剂是_，会变为_色。(5)实验结束后，使用过的培养基应该进行_处理后才能倒掉，这样做的目的是保护环境。答案(1)C1酶CX酶葡萄糖苷酶葡萄糖(2)纤维素选择高压蒸汽灭菌(3)刚果红透明圈(4)酵母菌酸性且缺氧稀释涂布平板法(其他答案正确也可)重铬酸钾灰绿(5)灭菌解析(1)纤维素酶至少包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，在这三种酶的作用下，纤维素最终被水解成葡萄糖。(2)
21、根据题干信息可知，实验目的是筛选到能产生纤维素酶的微生物，因此培养基应以纤维素作为唯一碳源，这种培养基属于选择培养基，对培养基进行灭菌时常用的灭菌法为高压蒸汽灭菌。(3)在筛选纤维素分解菌的过程中，通常用刚果红染色法；如果培养基某部位出现透明圈，则说明存在纤维素分解菌。(4)用获得的糖液发酵生产乙醇，常用酵母菌，在酸性且缺氧发酵液中，该菌可以生长繁殖，而绝大多数其他生物受到抑制。微生物的分离与纯化过程中常用稀释涂布平板法对该菌进行计数，检测是否产生酒精的常用试剂是重铬酸钾，会变为灰绿色。(5)实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理后才能倒掉，这样做的目的是保护环境。技法提升微生物的筛选与鉴
22、别方法(1)微生物的筛选方法(2)微生物的鉴别方法高考热点突破 1(2017全国卷)某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：(1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生_。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是_。但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是_(答出两点即可)。(2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择_(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素NH4NO3”)作为氮源，不选择其他两组的原因是_。(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有_(答出两点即可)。答案
23、(1)脲酶分解尿素的细菌是异养生物，不能利用CO2来合成有机物为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料(2)尿素其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用(3)为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定解析(1)有些细菌能分解尿素是因为这些细菌能产生脲酶，将尿素分解成CO2和NH3。能分解尿素的细菌是异养生物，不能利用CO2作为碳源合成有机物，但这些细菌可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是作为能源物质氧化分解为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料。(2)为了筛选可分解尿素的细菌，
24、在配制培养基时，应选择尿素作为唯一氮源，这样只有能分解尿素的细菌才能在培养基上生存。若选择“NH4NO3”或“尿素NH4NO3”作为氮源，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用。(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，它们可以为细菌生长提供无机营养；同时，KH2PO4和Na2HPO4还可以作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定。2(2016全国卷)空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：配制培养基(成分：牛肉膏、蛋白胨、Na
25、Cl、X、H2O)；制作无菌平板；设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；将各组平板置于37 恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。回答下列问题：(1)该培养基中微生物所需的氮来源于_。若要完成步骤，该培养基中的成分X通常是_。(2)步骤中，实验组的操作是_。(3)若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了_现象。若将30(即366)个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法_(填“正确”或“不正确”)。答案(1)牛肉膏、蛋白胨琼脂(2)将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间
26、(3)污染不正确解析(1)培养基中的牛肉膏和蛋白胨可为培养基中的微生物提供氮源；制备固体培养基需加入琼脂。(2)该实验的目的是了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况，所以需在教室不同高度的位置分别用平板收集微生物即开盖暴露一段时间。(3)该实验中空白对照组不应出现菌落，若空白对照组出现了菌落，则说明此次调查中出现了污染现象，实验组的污染情况不能确定，故不能用实验组与空白对照组菌落数的差值作为实验结果，而应重新进行实验。3(2016全国卷)某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：(1)分
27、离纯化乳酸菌时，首先需要用_对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是_。(2)推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有_和_。分离纯化时应挑选出_的菌落作为候选菌。(3)乳酸菌在20 长期保存时，菌液中常需要加入一定量的_(填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”)。答案(1)无菌水泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落(2)鉴别乳酸菌中和产生的乳酸(或酸)具有透明圈(3)甘油解析(1)分离纯化乳酸菌时，由于泡菜滤液中菌的浓度高，因此需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释，其目的是将聚集在一起的乳酸菌分散成单个细胞，以便在培养基表面形成单菌落。(2)乳酸菌代谢过程中可产生乳酸，若在培养
28、基中加入碳酸钙，则碳酸钙既可以中和乳酸，又可以在乳酸菌菌落的周围出现明显透明圈，据此可以用于乳酸菌的鉴别。(3)乳酸菌在20 长期保存时，为了避免水结冰产生冰晶损伤细胞，在菌液中常需要加入一定量的甘油。4(2015全国卷)已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。回答有关问题：(1)显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用_染色。微生物A产生的油脂不易挥发，可选用_(填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”)从菌体中提取。(2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以_为碳源的固体培养基进行培养。(3)
29、若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用_直接计数；若要测定其活菌数量，可选用_法进行计数。(4)为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35 、40 、45 温度下降解10 g 油脂所需酶量依次为4 mg、1 mg、6 mg，则上述三个温度中，_条件下该酶活力最小。为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕_设计后续实验。答案(1)苏丹(或苏丹)萃取法(2)油脂(3)血细胞计数板稀释涂布平板(4)4540解析(1)脂肪可用苏丹染液(或苏丹染液)进行染色。微生物A产生的油脂不易挥发，不能用水蒸气蒸馏法提取，应用萃取法加以提取。(2)能产生脂肪酶的微生物B可存在于含有油
30、料作物种子的腐烂物的土壤中，为了选择培养，固体培养基上应以油脂作为唯一碳源。(3)测定培养液中的微生物的菌体数，可在显微镜下用血细胞计数板直接计数；而要测定活菌数，则可利用稀释涂布平板法进行计数。(4)酶量需要最多的温度下，其酶活力最小，即酶活力最小的温度应为45 。三个温度下酶活力最大的温度是40 ，但40 不一定是该酶的最适温度，故应围绕40 设计后续实验。5(2017江苏高考)苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题：(1)酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和
31、水，其中可作为碳源的有_。(2)将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐_，以达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步_，以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加_。(3)下图为连续划线法示意图，在图中_(填图中序号)区域更易获得单菌落。(4)采用比色测定法(使用苯酚显色剂)检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中15号比色管的苯酚浓度应分别为_。管号123456苯酚浓度(mg/L)1如果废水为50 mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，则需将残留液稀释_(填序号：51020)倍后，再进行比色
32、。答案(1)蛋白胨、苯酚(2)增加稀释涂布凝固剂(3)(4)0、0.2、0.4、0.6、0.8解析(1)分析富集培养基的成分可知，培养基中蛋白胨、苯酚中含C，可作为碳源。(2)在接种培养时，随转接次数的增加，应逐渐增加培养基中苯酚(碳源)的含量，以达到富集酚降解菌的目的。若接种培养后平板中菌落过于密集，应继续稀释涂布，以降低平板上菌落密度，便于菌落计数与分离。稀释涂布时所用的培养基为固体培养基，制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加琼脂等物质作为凝固剂。(3)利用连续划线法接种时，越在最后划线区域，菌落的密度越稀，越容易获得单菌落，所以，图中区域更易获得单菌落。(4)根据表中6号比
33、色管中苯酚浓度为1 mg/L可以推知，15 号比色管的苯酚浓度应分别为0 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L、0.6 mg/L、0.8 mg/L。根据题意，废水为50 mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，要使稀释后的苯酚残留液浓度介于01 mg/L之间，需将残留液稀释20倍左右，再进行比色。6(2015江苏高考)人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的营养价值。为了增强发酵效果，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行了研究。请回答下列问题：(1)在样品稀释和涂布平板步骤中，下列选项不需要的是_(填序号)。酒精灯培养皿显微镜无菌
34、水(2)在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是_。(3)向试管内分装含琼脂的培养基时，若试管口粘附有培养基，需要用酒精棉球擦净的原因是_。(4)刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。研究人员在刚果红培养基平板上，筛到了几株有透明降解圈的菌落(如图)。图中降解圈大小与纤维素酶的_有关。图中降解纤维素能力最强的菌株是_(填图中序号)。(5)研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和J4，在不同温度和pH条件下进行发酵，测得发酵液中酶活性的结果如图，推测菌株_更适合用于人工瘤胃发酵，理由是_。答案(1)(2)培养基表面的菌悬液过多会出现
35、积液，导致菌体堆积，影响分离效果(3)避免培养基污染棉塞(4)量与活性(5)J4发酵过程会产热和产酸，J4菌株在较高温度和酸性环境下酶的活性更高解析(1)样品稀释需要无菌水，在酒精灯火焰附近操作；涂布平板需要培养皿，在酒精灯火焰附近操作，两者都不需要显微镜。(2)涂布平板时只能取少量菌悬液滴加到培养基表面，菌悬液量过多会导致菌体堆积，影响分离效果。(3)分装培养基时，试管口若粘附有培养基，则需用酒精棉球擦净，以免污染棉塞。(4)接种微生物培养过程中，纤维素被纤维素酶分解后，刚果红纤维素红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈(降解圈)，透明圈越大，说明纤维素酶的量越多，活性越强。(
36、5)在较高温度条件下J4菌种的纤维素酶活性较高，且J4菌种在较低pH条件下纤维素酶活性较高。发酵过程中，人工瘤胃中的温度升高、pH下降，故J4菌种更适合用于人工瘤胃发酵。限时规范特训1(2017安徽安庆二模)尿素分解菌能在如表所示配方的培养基上生长、形成菌落。回答下列问题：(1)从物理形态上看，上述培养基属于_培养基；从用途上看，上述培养基属于_培养基。(2)当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于_，此时平板上的菌落数较能准确地反映样品中的活菌数。(3)培养过程中，常选择菌落数在_的平板统计计数，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是_。(4)尿素分解菌经X射线照射后不能
37、正常生长，添加某种维生素后能正常生长，试解释其原因：_。答案(1)固体选择(性)(2)样品稀释液中的一个活菌(3)30300两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落(4)经X射线照射后导致尿素分解菌发生基因突变，从而缺少合成某种维生素必需的酶解析(1)培养基配方中含有琼脂(凝固剂)，所以是固体培养基；培养基中的氮源只有尿素，因此能筛选出尿素分解菌，属于选择培养基。(2)当样品稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌，此时通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中的活菌数。(3)为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。即使样品稀释度足够高，
38、但仍有可能两个或多个细菌细胞连到一起，此时平板上观察到的只是一个菌落，因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。(4)用X射线照射尿素分解菌，可能诱导其发生基因突变，若基因突变使尿素分解菌缺少合成某种维生素必需的酶，则不能在缺某种维生素的培养基中生长。2(2017甘肃兰州一模)微生物在生产中有重要应用，回答下列有关微生物的问题：(1)家庭酿制葡萄酒所用的微生物主要是_；家庭腌制泡菜的过程中，用水封坛的作用是_。(2)实验室中配置的培养基在使用前需用_法进行灭菌；在配制筛选耐盐细菌的选择培养基时，除加入基本营养物质外还需加入_。(3)某兴趣小组调查某品牌1 g牛奶中细菌数量时，若统计出在稀释倍数为
39、103的实验组的平板上平均菌落数为30个，所用稀释液的体积为0.2 ml，则每克牛奶样品中的细菌数为_。若空白对照组的一个平板上出现了7个菌落，这种结果说明在此实验中出现了_现象；为获取可靠实验数据，需_。答案(1)酵母菌制造缺氧环境，利于乳酸菌繁殖和抑制杂菌(2)高压蒸汽灭菌高浓度食盐(3)1.5105个污染再次配制培养基重新实验解析(1)家庭酿制葡萄酒是利用酵母菌在无氧条件下产生酒精；家庭腌制泡菜利用的微生物是厌氧型的乳酸菌，用水封坛的作用是制造缺氧环境，以利于乳酸菌繁殖，同时可以抑制杂菌生长。(2)培养基灭菌用高压蒸汽灭菌法进行；在配制筛选耐盐细菌的选择培养基时，除加入基本营养物质外还需
40、加入高浓度食盐。(3)某兴趣小组调查某品牌1 g牛奶中细菌数量时，若统计出在稀释倍数为103的实验组的平板上平均菌落数为30个，所用稀释液的体积为0.2 ml，则每克牛奶样品中的细菌数为300.21031.5105(个)。若空白对照组的一个平板上出现了7个菌落，说明实验中培养基被污染；为获取可靠实验数据，需再次配制培养基重新实验。3(2017河南三门峡二模)某实验小组对酸奶中乳酸菌的数量进行了测定，取6支灭菌的试管，分别加入9 mL灭菌的生理盐水，标号A1、A2、A3、A4、 A5、 A6，吸取1 mL酸奶样液加入试管A1中，然后另取一支吸管从A1中吸取1 mL溶液，加入A2中，依此类推，最后
41、从试管A6中取0.1 mL样液进行涂布计数，涂布三个平板，其菌落数分别为251、265、276个。请回答下列问题：(1)培养乳酸菌除了必要的营养物质外，还需将培养基的pH调至_。(2)制备乳酸菌的培养基过程中，对培养皿灭菌的常用方法是_，倒平板时培养基的温度不能太低，原因是_；待平板冷凝后，要将平板倒置，其目的是_。(3)该实验小组对乳酸菌接种所采用的方法是_，根据三个平板中菌落数，可推测原酸奶中乳酸菌的浓度为_个/mL，该方法测定的乳酸菌的含量和实际值相比，一般_(填“偏大”或“偏小”)。(4)为了使测量结果更加准确，该实验对照组的设置是_。答案(1)中性或微碱性(2)干热灭菌法温度太低会导
42、致培养基凝固，无法铺展均匀防止平板冷凝后，培养皿盖上凝结的水珠落入培养基中造成污染(3)稀释涂布平板法2.64109偏小(4)另增设一组培养基，接种等量灭菌的生理盐水解析(1)乳酸菌是一种细菌，制备细菌培养基时，需将培养基的pH调至中性或微碱性。(2)制备培养基过程中，对培养皿灭菌的常用方法是干热灭菌法，温度太低会导致培养基凝固，无法铺展均匀，因此倒平板时培养基的温度不能太低；待平板冷凝后，要将平板倒置，其目的是防止平板冷凝后，培养皿盖上凝结的水珠落入培养基中造成污染。(3)取6支灭菌的试管，分别加入9 mL灭菌的生理盐水，标号A1、A2、A3、A4、A5、A6，吸取1 mL酸奶样液加入试管A
43、1中，然后另取一支吸管从A1中吸取1 mL溶液，加入A2中，依此类推，最后从试管A6中取0.1 mL样液进行涂布计数，这种接种方法是稀释涂布法。根据操作步骤可推知得到101、102、103、104、105、106倍的稀释液，从试管A6中取0.1 mL样液进行涂布计数，三个平板中菌落数分别为251、265、276个，可推测原酸奶中乳酸菌的浓度为0.11062.64109(个/mL)。稀释涂布平板法测定活菌数目时，由于相邻的细菌可能形成一个菌落，因此测定值可能比实际值小。(4)为了使测量结果更加准确，需要另增设一组培养基，接种等量灭菌的生理盐水。4为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石
44、油污染过的土壤进行如图1所示的实验。请回答下列问题：(1)配制好的培养基通常使用_法灭菌。步骤与步骤中培养基成分相比，最大的区别是_。(2)同学甲进行步骤的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图2所示。该同学的接种方法是_，出现图2结果可能的操作失误是_。(3)步骤需要振荡培养，原因是_。(4)步骤后取样测定石油含量的目的是_。(5)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力_。(6)通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_和_。无菌技术要求实验操作应在酒精灯_附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。答案(1)高压蒸汽灭菌步骤的培养
45、基中石油是唯一碳源(2)稀释涂布平板法涂布不均匀(3)使石油分布均匀，与细菌充分接触，有利于细菌的繁殖(答案合理即可)(4)筛选出分解石油能力最强的细菌(5)强(6)干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰解析(1)培养基的灭菌方法常采用高压蒸汽灭菌法。步骤的培养基中石油是唯一的碳源，步骤会有其他有机物作为碳源。(2)图2中的菌落不是呈线形分布，所以采用的接种方法应是稀释涂布平板法。图2中的菌落分布不均匀，应是操作中涂布不均匀引起的。(3)步骤应进行振荡培养，其目的是使加入的石油分布均匀，石油与细菌充分接触，有利于细菌的繁殖。(4)步骤后取样测定石油的含量，可以得知被细菌分解的情况，如果含石油越少，则说明细菌
46、分解的石油越多，这样可以筛选出分解石油能力最强的细菌。(5)降解石油能力越强的菌株，在菌落周围形成的分解圈越大。(6)实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌(如接种环)、干热灭菌(如培养皿)、高压蒸汽灭菌(如培养基)等。无菌操作要求在整个实验过程中操作都在酒精灯火焰附近进行，以避免周围微生物的污染。5(2017山东泰安一模)多氯联苯是一种对人体有很大危害的有机物质，呈油状液体，污染土壤后，很难清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用，为消除这种污染，科研人员计划从受污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。(1)筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品_，接种到以_为唯一碳源的培养基上，从功能上讲
47、，该培养基属于_。(2)对初步提取到的菌株要进行_，一般操作方法有两种，如图是_法。(3)若要测定培养液中酵母菌的菌体数，可在显微镜下直接计数，若用_法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是_。(4)将1 ml酵母菌溶液稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 ml稀释液经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、57、58，据此可得出每升溶液中酵母菌活菌数为_。答案(1)稀释(溶解)多氯联苯选择培养基(2)纯化平板划线(3)稀释涂布平板(或涂布平板)检验培养基平板灭菌是否成功(倒平板是否感染杂菌或是否彻底灭菌)(4)5.7107个/L解析
48、(1)筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释，接种到以多氯联苯为唯一碳源的培养基上；只有能分解多氯联苯的菌株才能在这样的培养基中生存，因此从功能上讲，该培养基属于选择培养基。(2)对初步提取到的菌株要进行分离纯化，一般操作方法有两种，即平板划线法和稀释涂布平板法，图示是利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。(3)若要测定培养液中酵母菌的菌体数，可在显微镜下用血细胞计数板直接计数。若用稀释涂布平板法统计菌落数，在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板进行培养一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格。(4)由题意知1 ml水样中的菌落数是(565758
49、)30.11005.7104(个)，每升水样中的活菌数为5.71041035.7107(个)。6(2017山东济宁一模)请回答下列与微生物的分离、培养等有关的问题：(1)某培养基的配方：KH2PO4、NaNO3、MgSO47H2O、KCl、葡萄糖、H2O，如果使用该培养基来筛选土壤中分解尿素的细菌，则应去除的成分是_，同时需要添加的成分是_。(2)琼脂是从海藻中分离获得的多糖物质，在培养基中常常需要加入琼脂，其作用是_。(3)如图表示的微生物接种方法称为_，图示接种需要对接种环采用_灭菌，先后灭菌_次。(4)已知稀释倍数为106(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2 mL)，平板上分解尿素的细菌
50、菌落数的平均值为233，则每毫升样品中菌落数是_。答案(1)NaNO3尿素(2)作为凝固剂(3)平板划线法灼烧6(4)1.165109个解析(1)根据培养基配方可知，题干所给的培养基配方中氮源是NaNO3，若此培养基用于培养分解尿素的细菌，则应该使用以尿素为唯一氮源的选择培养基，即需要去除NaNO3，同时需要添加尿素。(2)在培养基中常常需要加入琼脂，其作用是作为凝固剂。(3)如图表示的微生物接种方法称为平板划线法，图示接种需要对接种环采用灼烧灭菌，由于每次划线前后均需要灼烧灭菌，因此需要先后灭菌6次。(4)根据题意可知，每毫升样品中的菌落数平板上菌落数的平均值体积稀释倍数2330.21061
51、.165109(个)。7(2017湖北重点中学第二次联考)我国规定每升饮用水中大肠杆菌不能超过3个。某兴趣小组尝试对某品牌饮用水的大肠杆菌含量进行检测，操作简图如图甲，伊红美蓝培养基配方如图乙。回答下列相关问题：(1)图甲中滤膜的孔径应_(“大于”或“小于”)大肠杆菌。受此启发，对某些不耐高温的试剂可以怎样除菌？_。(2)配制图乙中的基础培养基时，除了水分、无机盐以外，还应加入_(一种营养成分)以及_。伊红美蓝培养基上生长的大肠杆菌菌落呈现黑色，从功能上划分，该培养基属于_培养基。(3)该小组通过统计_的数目，计算出单位体积样品中大肠杆菌数目。理论上他们的统计值要比实际_(“偏高”或“偏低”)
52、，理由是_。答案(1)小于用滤膜过滤除菌(2)氮源琼脂鉴别(3)黑色菌落偏低两个或多个大肠杆菌连在一起时，平板上只能观察到1个菌落解析(1)图甲操作的目的是用滤膜过滤待测水样，以获得大肠杆菌，因此滤膜的孔径应小于大肠杆菌。受此启发，对某些不耐高温的试剂，可以用滤膜过滤除菌。(2)各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。图乙中的乳糖可为微生物的生长提供碳源，据此可知：在配制图乙中的基础培养基时，除了水分、无机盐以外，还应加入氮源。在固体培养基上大肠杆菌才能形成菌落，因此还需要加入琼脂。伊红美蓝培养基上生长的大肠杆菌菌落呈现黑色，从功能上划分，该培养基属于鉴别培养基。(3)由
53、“伊红美蓝培养基上生长的大肠杆菌菌落呈现黑色”可知：该小组通过统计黑色菌落的数目，计算出单位体积样品中大肠杆菌数目。当两个或多个大肠杆菌连在一起时，平板上只能观察到1个菌落，所以理论上他们的统计值要比实际偏低。8(2017黑龙江大庆一中高三段考)据报道，某地空气样本中检测出A、B、C 3种抗生素的耐药性基因，只有存在于某种活菌中的耐药性基因才能感染人体。为研究此地空气中是否存在这些耐药性活菌，某研究小组做了以下实验，步骤如下：配制培养基并灭菌；制作无菌平板，并收集、培养空气中的活菌；对步骤得到的活菌进行分离纯化；设置若干实验组和对照组，进行相关操作；将各组平板置于适宜温度的恒温箱中培养一段时间
54、，观察菌落的生长情况。回答下列问题：(1)步骤中的灭菌方法是_。(2)步骤中接种的方法是_。(3)若步骤中得到的菌落类型有5种，则步骤中需要设计至少_个实验组，对实验组的操作是_。(4)若将所得菌落接种到含有_培养基中，形成的菌落呈_色，则表明可能存在大肠杆菌，从功能角度分析此培养基属于_培养基。答案(1)高压蒸汽灭菌法(2)平板划线法(或稀释涂布平板法)(3)15接种每种活菌的培养基中分别添加A、B、C抗生素(4)伊红美蓝黑鉴别解析(1)培养基灭菌方法一般是高压蒸汽灭菌。(2)微生物常见的接种的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。(3)根据实验目的可知，要在“空气样本中检测出A、B、C 3种抗生素的耐药性基因”，并且步骤中得到的菌落类型有5种，因此步骤中需要设计至少3种抗生素5种菌落15个实验组，对实验组的操作是接种每种活菌的培养基中分别添加A、B、C抗生素。(4)若将所得菌落接种到含有伊红美蓝的培养基中，形成的菌落呈黑色，则表明可能存在大肠杆菌。从功能角度分析此培养基属于鉴别培养基。
