1、新课标高考生物第一轮复习精品学案 课题：微生物的培养与应用【考纲要求】1、微生物的分离和培养2、培养基对微生物的选择作用3、某种微生物数量的测定4、利用微生物发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用【考纲知识梳理】一、微生物的实验室培养1、培养基（1）培养基的分类：按物理性质分：培养基可分为液体培养基和固体培养基。配置成液体状态的基质，一般用于生产。在液体培养基中加入凝固剂琼脂后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。按用途分为：选择培养基和鉴别培养基（2）培养基的组成要素各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种营
2、养物质。满足微生物生长还需要适宜的pH、氧气的要求（根据微生物的需求提供有氧或无氧环境）、特殊营养物质等。2、无菌技术（1）消毒与灭菌的区别消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法，还有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、红外线消毒。灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。（2）获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具
3、进行灭菌。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。3、纯化大肠杆菌以及菌种的保藏（1）制作牛肉膏蛋白胨固体培养基方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。（2）纯化大肠杆菌原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个细胞繁殖而来的子细胞群体。方法：平板划线法、稀释涂布平板法。（3）菌种的保藏短期保存：将菌种接种到试管的固体斜面培养基上4保存，菌种易被污染或产生变异。长期保存：20甘油管在冷冻箱中保藏。二、壤中分解尿素的细菌的分离与计数1、分离的原理（1）土壤中的细菌之所以能够分解
4、尿素，是因为它们体内能合成脲酶。这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起催化作用。（2）实验室中微生物的筛选应用的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。2、统计菌落数目的方法：稀释涂布平板法和显微镜直接计数。3、细菌分离与计数的实验流程土壤取样样品稀释取样涂布微生物培养观察并记录结果细菌计数三、分解纤维素的微生物的分离1、纤维素酶纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。纤维素最终被水解成葡萄糖，为微生物的生长提供营养。2、纤维素分解菌的
5、筛选方法及原理（1）方法：刚果红染色法。能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选。（2）原理：刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。纤维素被纤维素酶分解后，刚果红纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。这样，我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。3、土壤中纤维素分解菌的筛选土壤取样选择培养（此步是否需要，应根据样品中目的菌株数量的多少来确定）梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落【要点精解】一、培养基的用途分类培养基种类特点用途选择培养基培养基中加入某种化学物质，以抑制不需
6、要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物（如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；用尿素为唯一氮源的培养基用于分离分解尿素的细菌）鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物，如可用伊红美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌（若有，菌落成黑色）【例1】通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出（多选）A大肠杆菌 B霉菌 C放线菌 D固氮细
7、菌【解析】此题考察选择培养的有关知识，缺乏氮源的培养基可以选择出固氮细菌；在培养基中加入青霉素，可以选择出霉菌；在培养基基中加入10%的酚可以选择出放线菌。而无特殊的选择出大肠杆菌的培养基。 【答案】B、C、D二、培养基的营养成分微生物的营养物质：水、无机盐、碳源、氮源及特殊营养物质五类。碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、蛋白质、脂肪等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+、蛋白质、氨基酸等。只有固氮微生物才能利用N2。水：在生物体内含量很高，在低等生物体
8、内含量更高。无机盐：为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素，包括大量元素。特殊营养物质：生长必不可少的微量有机物。如维生素、氨基酸、碱基等。【例2】下列可以作为自养微生物氮源的是A N2、尿素 B牛肉膏、蛋白胨C尿素、酵母粉 D铵盐、硝酸盐【解析】自养微生物需要吸收的是界无机物，包括无机碳源和无机氮源。虽然N2可以被固氮菌直接利用，合成有机物，但是固氮微生物不属于自养型微生物。所以答案是D【答案】D【感悟高考真题】（2010全国1高考）34.（12分）下列是与微生物培养有关的问题，请回答：（1）某细菌固体培养基的组成成分是KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水，其
9、中凝固剂是，碳源是，氮源是。已知只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长，故该培养基属于培养基。按照化学成分分类，该培养基属于培养基。从同化作用类型上看，用该培养基培养的细菌属于。（2）将少量细菌接种到一定体积的液体培养基中，适宜条件下培养，定时取样测定菌体数目，以时间为横坐标，以细菌数目的对数为纵坐标，可得到细菌的曲线。该曲线中以菌体数目的对数作为纵坐标的原因是。实验室中，为了获得形态和生理特征一致的菌体，一般应在期取材；在生产中，常搜集培养至期的细菌用于次级代谢产物的提取。【解析】本题主要考查学生的理解能力，考查微生物的营养。第（1）小题，该培养基中，琼脂为凝固剂，葡萄糖为碳源，尿素为氮源
10、；由于只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长，可以用来选择出能够合成脲酶的细菌，在功能上称为选择培养基；由于其化学成分明确，故又称为合成培养基；由于该培养基中存在着有机碳源葡萄糖，故可推测从同化作用类型上看，用该培养基培养的细菌属于异养型。第（2）小题，在恒定容积的液体培养基上培养微生物，定期取样，然后以时间为横坐标，以细菌数目的对数为纵坐标，所得的曲线称为微生物的群体生长曲线，之所以以菌体数目的对数作为纵坐标的原因是菌体数目往往非常大，且变化率也很高，直接以菌体数目为纵坐标不利于作图。实验室中，为了获得形态和生理特征一致的菌体，一般应在对数期取材；在生产中，常搜集培养至稳定期的细菌用于次级
11、代谢产物的提取。【答案】（1）琼脂 葡萄糖 尿素 选择 合成 异养型（2）群体生长 菌体数目往往非常大，且变化率也很高，以菌体数目的对数为纵坐标有利于作图 对数 稳定（2010全国高考）34.（12分）某种细菌体内某氨基酸()的生物合成途径如图：这种细菌的野生型能在基本培养基（满足野生型细菌生长 的简单培养基）上生长，而由该种细菌野生型得到的两种突变型（甲、乙）都不能在基本培养基上生长；在基本培养基上若添加中间产物2，则甲、乙都能生长；若添加中间产物1，则乙能生长而甲不能生长。在基本培养基上添加少量的，甲能积累中间产物1, 而乙不能积累。请回答：（1）根据上述资料可推论：甲中酶 的功能丧失；乙
12、中酶 的功能丧失，甲和乙中酶 的功能都正常。由野生型产生甲、乙这两种突变型的原因是野生型的 （同一、不同）菌体中的不同 发生了突变，从而导致不同酶的功能丧失。如果想在基本培养基上添加少量的来生产中间产物1，则应选用 （野生型、甲、乙）。（2）将甲、乙混合接种于基本培养基上能长出少量菌落，再将这些菌落单个挑出分别接种在基本培养基上都不能生长。上述混合培养时乙首先形成菌落，其原因是 。（3）在发酵过程中，菌体中含量过高时，其合成速率下降。若要保持其合成速率，可采取的措施是改变菌体细胞膜的 ，使排出菌体外。【解析】【答案】（1）b a c 不同 基因 甲（每空1分，共2分）（2） 甲产生的中间产物1
13、供给乙，使乙能够合成X，保证自身生长产生菌落（其他合理答案也给分）（3） 通透性（2010安徽高考）3大肠杆菌可以直接利用葡萄糖，也可以通过合成 -半乳糖苷酶将乳糖分解为葡萄糖和半乳糖加以利用。将大肠杆菌培养在含葡萄糖和乳糖的培养基中，测定其细胞总数及细胞内-半乳糖苷酶的活性变化（如图）。据图分析，下列叙述合理的是A050min，细胞内无-半乳糖苷酶基因B50100min，细胞内无分解葡萄糖的酶C培养基中葡萄糖和乳糖同时存在时，-半乳糖苷酶基因开始表达D培养基中葡萄糖缺乏时，-半乳糖苷酶基因开始表达【解析】本题考查有关微生物相关知识，作为微生物的代谢调节有酶的合成和酶的活性调节两种，本题考点是
14、酶的合成调节，在有葡萄糖存在时，大肠杆菌直接利用现有的葡萄糖，当没有葡萄糖时才合成分解乳糖的半乳糖苷酶，才利用乳糖作为能源物质，所以D选项正确。【答案】D（2010江苏高考）19根据下列相关实验操作预期结果合理的是A 实验 8实验 C实验 D实验【解析】本题考查了考生对教材实验的理解能力和分析能力。实验（1）中结果应是0.3%溶液中质壁分离明显，实验（2）中毛霉应在20环境中生长最好，实验（4）中，如果此时2，4-D浓度低于最适浓度，则浓度再低的话促进生根效果则较差了，所以预期最合理的应是实验（3）即C项正确。【答案】C（2009上海生物）存在于盐湖和热泉中的两类细菌都具有的特征是A. 在极端
15、环境下进行遗传物质的复制B. 对利福平敏感C. 在极端环境下都不进行分裂生殖D. 都没有细胞壁【解析】两类细菌既然能在盐湖和热泉生存，必定适应了环境，一定会进行遗传物质的复制和分裂生殖；革兰氏阳性菌对利福平效果较为敏感；细菌是有细胞壁的。【答案】A（2009全国理综）右图是某种微生物体内某一物质代谢过程的示意图。下列有关酶活性调节的叙述，错误的是A丁物质既是酶催化生成的产物，又是酶的反馈抑制物B戊物质通过与酶结合导致酶结构变化而使其活性下降C当丁物质和戊物质中任意一种过量时，酶的活性都将受到抑制D若此代谢途径的终产物不断排出菌体外，则可消除丙物质对酶的抑制作用【解析】微生物代谢的调节主要有两种
16、形式：酶合成的调节和酶活性的调节。酶活性的调节是微生物通过改变已有酶的催化活性来调节代谢有速率。酶活性发生改变的主要原因是代谢过程中产生的物质与酶结合，致使酶的结构产生变化，但这种变化是可逆的，当代谢产物与酶脱离时，酶结构便会复原，又恢复原有的活性。因此A、B、D正确。当丁物质和戊物质中任意一种过量时，不一定会导致丙物质积累，以抑制酶的活性。故C错误。【答案】C（2009四川理综）下列关于几种微生物的营养代谢和生长繁殖的描述，正确的是A. 根瘤菌通过生物固氮，制造了含氮养料和含碳有机物B接种到培养基上的青霉菌，进入对数期能大量积累有毒素C培养液中溶氧量的变化，会影响酵母菌的生长繁殖和代谢途径D
17、用32P标记的噬菌体感染细菌，在新形成的噬菌体中都能检测到32P【解析】本题考察了几种微生物的营养代谢和生长繁殖的问题。A中根瘤菌通过生物固氮不能制造含碳有机物；B中接种到培养基上的青霉菌，进入稳定期能大量积累有毒素；C中酵母菌是兼性厌氧型生物，故溶氧量的变化，会影响酵母菌的生长繁殖和代谢途径，C正确；D中用32P标记的噬菌体感染细菌，在新形成的噬菌体中只有两个噬菌体能检测到【答案】C（2009上海理综）39.（9分）氯苯化合物是重要的有机化工原料，原因不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案（图1）筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌，培养基配方如表1。（1）配制号固体培养基时，除添
18、加号液体培养基成分外，还应添加1%的_。（2）培养基配制时，灭菌与调PH的先后顺序是_。（3）从用途上来说，号培养基和号培养基分别属于_培养基和_培养基。在号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是_。（4）在营养缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为_。（5）将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的号培养液中培养，得到生长曲线（如图2）。从图2可知SP1菌在_培养条件下最早停止生长，其原因是_。【解析】本题主要考查微生物相关知识。（1）固体培养基必须含有适量的琼脂；（2）配置培养基时应先调PH后灭菌；（3）号培养基是为了获得更多的菌株，属于通用培养基，号培养基是为选择出S
19、P1菌株属于选择培养基，号培养基成分中含N物质为硝酸铵，则应由它为SP1菌株提供氮源；（4）在恶劣环境下一些菌体会形成芽孢休眠体，来度过不良环境；（5）SP1菌株是以氯苯为碳源，当氯苯消耗尽菌株因缺少碳源而不能继续生存，故氯苯含量越少，SP1菌株越早停止生长。【答案】（1）琼脂（2）先调PH，后灭菌（3）通用 选择 硝酸铵（4）芽孢（5）20mg/L氯苯 硝酸最早耗尽（2009重庆理综）下列有关大肠杆菌的叙述，正确的是A. 大肠杆菌以复制方式进行繁殖，其你拟核实一个环状DNA分子B. 在含葡萄糖和乳糖的培养基上，大肠杆菌首先利用乳糖作碳源C. 用大肠杆菌工程菌生产干扰素时，应及时添加核算等生土
20、长基因子D.处于对数期的大肠杆菌，常作为生产作用的菌种和科研的材料【解析】大肠杆菌以二分裂方式进行繁殖；在含葡萄糖和乳糖的培养基上，大肠杆菌存在分解葡萄糖的组成酶和分解乳糖的诱导酶，分解葡萄糖的组成酶一直存在，只有葡萄糖分解完后，乳糖才能诱导产生分解乳糖的诱导酶，所以大肠杆菌首先利用葡萄糖作碳源；大肠杆菌的生长不须要生长因子；处于对数期的大肠杆菌生长繁殖活跃，代谢稳定，常作为生产作用的菌种和科研的材料。此题为中易题，识记理解类。【答案】D（2009辽宁、宁夏理综）（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑_、_和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、_、_
21、等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行_（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和_；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_。（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_。（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的_。（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_。（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_处理后才
22、能丢弃，以防止培养物的扩散。【解析】（1）大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、生活周期短等优点，培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。（2）灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，所以对培养基和培养皿进行灭菌，消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，操作者的双手需要进行清洗和消毒， 紫外线能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结构。（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养，应保证样品稀释的比例适合。（4）对获得的纯菌种还可以依据菌落的形
23、状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定。（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。（6）因为有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，并可能导致肠管出现严重症状，使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。【答案】（1）温度 酸碱度 易培养 生活周期短（2）灭菌 消毒 损伤DNA的结构（3）比例合适（4）鉴定(或分类)（5）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生.（6）灭菌（2008全国理综）下列关于细菌的叙述，错误的是（
24、 ）A硝化细菌能以NH3作为氮源和能源物质B某些细菌可以利用光能因定CO2合成有机物C生长因子是某些细菌生长过程中需要额外补充的营养物质D含伊红和美蓝试剂的培养基不能用来签别牛奶中的大肠杆菌【解析】某些细菌如蓝细菌（蓝藻）、光合细菌以及红螺菌都能进行光合作用。生长因子是指微生物生长不可缺少的微量有机物，主要包括维生素、氨基酸和碱基等。而微生物的营养物质包括水、无机盐、碳源、氮源和生长因子，它们都是要从外界获得补充的。常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌，如果有大肠杆菌，则菌落呈黑色。【答案】D（2008广东高考）（生物技术实践，10分）苯酚是工业生产排放的
25、有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，为土壤样品。请回答下列问题：（1）中培养目的菌株的选择培养基中应加入 作为碳源，中不同浓度碳源的培养基 （A影响；B不影响）细菌的数量，如果要测定中活细菌数量，常采用 法。（2）为对照，微生物在中不生长，在中生长，与培养基的主要区别在于 ；使用 法可以在上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时为什么进行倒置培养？（3）如何比较不同菌株降解苯酚能力的大小？（4）实验过程中如何防止其它微生物的污染？【解析】（生物技术实践，10分）
26、（1）中的选择培养基中应加入苯酚作为碳源，中不同浓度的碳源A影响细菌数量，稀释涂布平板法来测定中活菌数目。（2）与培养基的主要区别在于的培养基没有加入苯酚作为碳源，培养基的中加入苯酚作为碳源。使用释涂布平板法或平板划线法可以在（6）上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时要倒置培养，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基。（3）5支洁净培养瓶分别加入相同培养基（加等量的苯酚，用pH试纸检测这5支瓶内培养基的pH值，用苯酚调试使之相等，苯酚是唯一的碳源）分别接种5种等量的来自不同菌株的菌种在相同的适宜条件下培养相同时间再用pH试纸检测这5支瓶内培养基的pH. 苯酚显酸性，不同菌株的菌种降解苯
27、酚的能力不同，5支瓶内培养基中的苯酚被分解的量不同，所以pH值不同。用pH试纸检测这5支瓶内培养基的pH值，从而比较不同菌株降解苯酚能力的大小。（4）从制备培养基到接种与培养等全部实验过程要无菌操作： 略，见人教版选修1 P15【答案】（1）苯酚A稀释涂布平板法（2）与培养基的主要区别在于的培养基没有加入苯酚作为碳源，培养基的中加入苯酚作为碳源。使用释涂布平板法或平板划线法可以在（6）上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时要倒置培养，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基。（3）5支洁净培养瓶分别加入相同培养基（加等量的苯酚，用pH试纸检测这5支瓶内培养基的pH，用苯酚调试使之相等，苯酚
28、是唯一的碳源）分别接种5种等量的来自不同菌株的菌种在相同的适宜条件下培养相同的时间再用pH试纸检测这5支瓶内培养基的pH。苯酚显酸性，不同菌株的菌种降解苯酚的能力不同，5支瓶内培养基中的苯酚被分解的量不同，所以pH不同。用pH试纸检测这5支瓶内培养基的pH，从而比较不同菌株降解苯酚能力的大小。（4）从制备培养基到接种与培养等全部实验过程要无菌操作：略，具体内容见人教版选修1 P15【考点精题精练】1. 培养基的配制需要运用灭菌技术。下列关于灭菌的叙述中，正确的是 DA杀死一定环境中的所有细菌 B杀死一定环境中的所有的有害细菌C杀死一定环境中的所有微生物 D杀死一定环境中的所有微生物的细胞、芽孢
29、和孢子2. 不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为惟一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是 BA氮源物质为该微生物提供必要的氮素B碳源物质也是该微生物的能源物质C无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D水是该微生物的营养要素之一3. 大肠杆菌能够在哪种培养基上生长繁殖 DA无氮培养基 B分解尿素的细菌的选择培养基 C纤维素分解菌的选择培养基 D牛肉膏蛋白胨培养基4. （2010上海市长宁区高三二模）细菌培养过程中，分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法可依次用于消灭或杀灭哪些部位的杂菌 B A接种针、手、培养基 B培养基、手、接种针 C手、接种针
30、、培养基 D培养基、接种针、手5. 金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒，下述实验结束后的做法正确的是 ABDA对接种环进行灼烧处理B带菌培养基须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉 C带菌培养基须经加热后才能倒掉D接种后双手须经肥皂洗净，再用75的酒精棉球擦拭6. （2010安徽省合肥市高三第二次教学质量检测二模）用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时（ C ）可以用相同的培养基都需要使用接种针进行接种都需要在火焰旁进行接种 都可以用来计数活菌ABCD7. 在自然环境中常常是多种微生物混杂在一起，要对其中的某种微生物进行研究，就必需获得其纯培养物，以排除其他微生物的
31、干扰。下列关于微生物纯培养的叙述中，不正确的是 DA分离和纯培养微生物最常用的培养基是琼脂固体培养基B分离和纯培养微生物最常用的手段是平板分离微生物C涂布平板法和稀释平板法是平板分离法常用的两种方法D平板分离法可以采取连续划线的方法使微生物均匀分布8. 在涂布平板操作时正确的是 BCDA将涂布器在酒精灯火焰上灼烧，直到烧红 B取少量菌液滴加在培养基表面C将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，将酒精燃尽后，冷却810s再用D涂布时可转动培养皿，使涂布均匀9. 在农田土壤的表层自生固氮菌较多。将用表层土制成的稀泥浆接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮菌与其他细菌分开，对培养基的要求是( C )加抗
32、生素 不加抗生素 加氮素 不加氮素 加葡萄糖 不加葡萄糖 37恒温箱中培养 2830温度下培养A B C D10. 能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是 （ D ）ACO2和N2 B葡萄糖和NH3 CCO2和尿素 D葡萄糖和尿素11. 下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是 DA用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B取104、105 、106倍的土壤稀释液和无菌水各01ml，分别涂布于各组平板上C将实验组和对照组平板倒置，370C恒温培养24-48小时D确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数12. 微生物工业生产纤维素酶所需
33、要的产酶微生物有 DA、木霉 B、曲霉 C、青霉 D、包括A、B、C三项13. 加入刚果红的培养基中出现透明圈的菌落是 CA、分解尿素的细菌 B、硝化细菌 C、分解纤维素的细菌 D、乳酸菌14. 分解纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是 AA、经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上B、富集培养这一部可省略，但培养纤维素分解菌少C、经稀释培养后，用刚果红染色D、对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上15. 在农田土壤的表层自生固氮菌较多。将用表层土制成的稀泥浆接种到特制的培养基上培养，可将自生固氮菌与其他细菌分开，对培养基的要求是 C加抗生素 不加抗生素 加氮素 不加氮素
34、 加葡萄糖 不加葡萄糖 37恒温箱中培养 2830温度下培养A B C D16. 下列关于菌落的叙述中，不正确的是 CA每个菌落由多种细菌组成，相当于生物群落B菌落菌落在一定液体培养基才能形成，相当于种群C菌落特征是鉴定细菌种类的重要依据 D球菌菌落比杆菌菌落大，边缘不整齐17. （2010上海市卢湾区高三二模）下列依次表示倒平板、接种的位置，以及划线法接种的路径示意图，其中错误的是：D18. 为验证某同学的培养基是否被污染，可设计两组实验，甲组用严格消毒的培养基并稀释涂布培养，乙组直接用该同学的培养基进行培养，此实验中乙组为 AA、空白对照 B、自身对照 C、条件对照 D、标准对照19. 下
35、列说法不正确的是( B )A科学家从7080热泉中分离得到耐高温的TaqDNA聚合酶B统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数估计值C设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度D同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多20. 下表为某培养基的配方，下列叙述错误的是 ACD成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊红Y美蓝蒸馏水含量10g10g2g0.4g0.065g1000mLA从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基B培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨
36、C该培养基缺少提供生长因子的物质 D该培养基调节合适的pH后就可以接种使用21. （2010北京市西城区高三零模）自然界中的两种微生物，可以通过各自不同的作用将培养液中的葡萄糖转化为维生素C，其过程如下图所示。在欧文氏菌中无2，5-二酮基-D-葡萄糖酸还原酶（2，5-DKG还原酶），不能将2，5-二酮基-D-葡萄糖酸转化为2-二酮基-L-古龙酸；而棒状杆菌不能直接转化D-葡萄糖。通过基因工程技术，可以改造某种细菌，仅用一步发酵即可生成2-二酮基-L-古龙酸。请根据以上信息回答下列问题。（1）从图中分析，欧文氏菌和棒状杆菌的同化作用类型是_。（2）利用基因工程技术可以改造上述两种菌中的_菌，使其
37、可直接利用D-葡萄糖生成2-二酮基-L-古龙酸。（3）利用基因工程技术改造此细菌的基本方法是：先用_同时切割_和_，然后用DNA连接酶将上述切割产物连接，构成_并将其导入到受体菌中。（4）在获得转基因工程菌后，培养“工程菌”的培养基应含有_等几类营养物质。欲纯化此工程菌，可以采用_法将菌种接种在_培养基上，以获得_菌落；进行扩大培养和获得产品时，应选用_培养基。答案：（1）异养型 （2）欧文氏菌（2分）（3）同种限制性核酸内切酶 2，5-二酮基-D-葡萄糖酸还原酶基因（2，5-DKG还原酶基因）（2分） 质粒 重组质粒（重组DNA）（4）碳源、氮源、水、无机盐（生长因子、特殊成分）（2分）划线
38、（或稀释涂布）（2分） 固体（2分） 单个（2分） 液体（2分）22. 在做土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验时，出现如下问题，请给予解答： （1）一位同学用稀释倍数为106的稀释液在培养基中涂布了3个平板，统计的菌数数为21、212和256，该同学以这3个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。你认为这一结果是否接近真实值？如果需要改进，如何改进？_。 （2）A同学筛选出的菌落为150个，其他同学只选择出50个，并且他在设计实验时并没有设置对照。你认为A同学结果产生的原因可能有哪些？_。如何设计对照实验排除可能影响实验结果的因素：_。答案：（1）不接近真实值，接种前将菌液摇匀后重新实验（3
39、分） （2）可能是土样不同，也可能是培养基污染或操作失误；（3分）方案有二：一是由其他同学用与A同学一样的土壤进行实验，如果与A同学一致，则证明无误，如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基配制有问题。另一种方案是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。（4分） 23. 从自然菌样中筛选较理想生产菌种的一般步骤是：采集菌样富集培养纯种分离性能测定。（1）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养噬盐菌的菌样应从 环境采集，培养厌氧菌的菌样应从 采集。（2）富集培养指创设仅适应于
40、该条件的微生物旺盛生长的特定的环境条件，使待分离微生物在群落中的数量大大增加，从而达到从自然界中分离到所需的特定微生物目的的微生物培养方法。对噬盐菌富集培养的培养基应是 培养基；对高温淀粉酶的富集培养应选择 的培养基，并在 条件下培养。（3）实验室最常用的灭菌方法是利用高温处理达到杀菌的效果。高温灭菌的原理是高温使微生物的 等物质发生 。 灭菌法是微生物研究和教学中应用最广、效果最好的湿热灭菌法。AB（4）下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。获得图A效果的接种方法是 ，获得图B效果的接种方法是 。答案：（1）海滩等高盐环境 河底污泥、沼气池等无氧环境 （2）加盐培养基 以淀粉为唯一碳源 高温 （3）蛋白质和核酸 变性 高压蒸汽 （4）稀释涂布平板法 平板划线法w.w.w.k.s.5.u.c.o.m
