1、集训13生物技术实践1(2019甘肃兰州模拟)微生物分离技术在研究环境保护、水质净化、粮食储存和生物制药等方面都有重要作用，回答下列相关问题：(1)用纤维素粉作为唯一碳源制作培养基，可以分离能分泌_的微生物。(2)灭菌的培养基在接种前，随机取空白平板于适宜温度下放置24小时，目的是_。(3)划线用的接种环、涂布用的涂布器在接种之前都需要用_法进行灭菌。能分离出单个菌落，并能够用来统计样品中微生物活菌数目的接种方法是_。(4)需要振荡培养的微生物，要为培养的空间环境提供_，振荡培养能提高培养液中_的含量，还可以使菌体与培养液中的_充分接触，由此推测该种微生物的异化作用类型是_。解析(1)用纤维素
2、粉作为唯一碳源制作培养基，可以分离能分泌纤维素酶的微生物。(2)将灭菌后未接种的空白平板于适宜温度下放置24小时，观察是否会有菌落产生，从而检测培养基的灭菌效果。(3)划线用的接种环、涂布用的涂布器在接种之前都需要用灼烧灭菌法进行灭菌。平板划线法和稀释涂布平板法都能分离出单个菌落，但只有稀释涂布平板法能够用来统计样品中微生物活菌数目。(4)需要振荡培养的微生物，要为培养的空间环境提供无菌空气，振荡培养能提高培养液中氧气的含量，还可以使菌体与培养液中的营养物质充分接触，由此推测该种微生物的异化作用类型是需氧型。答案(1)纤维素酶(2)检测培养基的灭菌效果(3)灼烧灭菌稀释涂布平板法(4)无菌空气
3、氧气营养物质需氧型2我国是桑葚种植大国，桑葚品种、产量均居世界首位。桑葚果实富含白黎芦醇、花青素等有良好防癌、抗衰老功效的物质，以桑葚果实为原料进行发酵制作果酒和果醋，既开发了桑葚的保健价值，又解决了桑葚果实难以保存的问题。下图为发酵过程示意图，请据图回答有关问题：(1)处理桑葚果实时，应清洗后再除去枝梗，目的是防止_。(2)为了优化发酵工艺，科研人员研究了酵母菌接种量对果酒中酒精度的影响，结果如下表：酵母菌接种量(%)510152025酒精度(%)5.055.415.375.215.13由表可知，酵母菌接种量为_%时，果酒的酒精度最高；当酵母菌接种量过高时，果酒的酒精度会随接种量增大而下降，
4、分析其原因是_。果汁发酵后是否有酒精产生，可以用_来检测。(3)在发酵得到的桑葚果酒中接种醋酸菌，醋酸菌在_条件下，可将乙醇转变为_，进而生成醋酸。解析(1)在果酒制作过程中，为了防止杂菌污染，在处理桑葚果实时，应清洗后再除去枝梗。(2)根据表格数据分析，酵母菌接种量为10%时，果酒的酒精度最高；当酵母菌接种量过高时，果酒的酒精度会随接种量增大而下降，可能的原因是酵母菌种内竞争加剧，影响酒精生成；果汁发酵产生的酒精可以用酸性重铬酸钾来检测。(3)醋酸菌在氧气充足条件下，可将乙醇转变为乙醛，进而生成醋酸。答案(1)杂菌污染(2)10酵母菌种内竞争加剧，影响酒精生成酸性重铬酸钾(3)氧气充足乙醛3
5、(2019东北五校联考)图甲是某学生重复艾弗里证明DNA是遗传物质实验的其中一组实验；图乙是基因工程中运用影印法将培养基A上的菌落按原来方向印在培养基B上，以检测重组质粒是否导入大肠杆菌的示意图。请回答下列问题：(1)图甲、图乙的培养结果显示，两实验中使用的均为_(填物理状态)培养基。(2)在配制图乙中的培养基时，除考虑营养、pH、渗透压等条件外，还要考虑在培养基A和B中加入_(填“相同”或“不同”)种类的抗生素。在配制培养基和倒平板的过程中，下列选项需要的有_(填序号：酒精灯，接种环，培养皿)。(3)培养基灭菌是避免杂菌污染的有效途径之一。适用于图甲、图乙所示培养基的灭菌方法是_；接种前还需
6、检测灭菌效果，方法是将未接种的培养基置于恒温箱中，在适宜温度下培养一段时间，观察培养基上_。(4)实验证明，上述两项实验中R型细菌和大肠杆菌的转化率都很低，为获得图甲、图乙所示的培养结果，一是要设法提高图甲中S型细菌的_；二是要使用恰当的方法接种。两实验都不能用稀释涂布平板法接种，而应采用菌液直接涂布平板和影印法接种肺炎双球菌和大肠杆菌，理由是_。接种培养4天后，可通过观察菌落的形态特征来识别肺炎双球菌和大肠杆菌。解析(1)图甲和图乙的培养结果显示，实验中使用的是固体培养基。(2)根据题图可知，培养基A、B中可生长的菌落不一样，在配制图乙中的培养基时，除了考虑营养、pH、渗透压等条件外，还要考
7、虑在培养基A和B中加入不同种类的抗生素，以判定目的基因是否随重组质粒导入大肠杆菌；在配制培养基和倒平板的过程中，需要用到酒精灯和培养皿。(3)培养基灭菌的方法是高压蒸汽灭菌；将未接种的培养基置于恒温箱中，在适宜温度下培养一段时间后，观察培养基上是否有菌落产生，以检测灭菌的效果。(4)R型细菌和S型细菌的DNA混合培养后，有一小部分R型细菌会摄取S型细菌的DNA，实现自身DNA和S型细菌DNA的重组，这一部分R型细菌就有可能转化为S型细菌。若要提高图甲中R型细菌转化为S型细菌的转化率，要设法提高S型细菌DNA的纯度，让更多的R型细菌有机会摄取S型细菌的DNA，来实现自身DNA和S型细菌DNA的重
8、组；要提高图甲和图乙中细菌的转化率还要注意接种方法都不能采用稀释涂布平板法，而应采用菌液直接涂布平板和影印法接种肺炎双球菌和大肠杆菌，原因是菌液被稀释后会导致菌种数量极少而难以观察到转化成功的菌落。答案(1)固体(2)不同(3)高压蒸汽灭菌是否有菌落产生(4)DNA纯度稀释会导致菌种数量极少而无法观察到转化成功的菌落4玫瑰精油被称为“液体黄金”，是世界香料工业不可取代的原料。工业上常以玫瑰花瓣为原料，采用水蒸气蒸馏法提取玫瑰精油。请回答下列问题：(1)水蒸气蒸馏法是利用_将挥发性较强的玫瑰精油携带出来，形成油水混合物。在油水混合物中加入NaCl的目的是_。(2)分离出油层后，一般可加入一些_，
9、以吸收油层中的水分。之后进行过滤的目的是_。(3)当蒸馏装置中的水和原料量一定时，蒸馏过程中，影响玫瑰精油提取量的主要因素有_和蒸馏时间。如图是当玫瑰花瓣与清水的质量比为14时，出油率与蒸馏时间的变化关系，一般蒸馏时间最好控制在_小时。(4)用传统的水蒸气蒸馏法，玫瑰花瓣出油率较低。科研人员在适宜条件下用不同的辅助方法探究玫瑰精油的最优提取方法，结果如下表。据实验结果，水蒸气蒸馏法提取玫瑰精油的最优辅助方法为_，依据是_。解析(1)水蒸气蒸馏法的原理是利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来，形成油水混合物，冷却后，混合物会重新分离出油层和水层。在油水混合物中加入NaCl可增加盐的浓度，使玫
10、瑰精油与水出现明显的分层。(2)在分离出的油层中加入无水Na2SO4可吸收多余的水分，再通过过滤除去固体硫酸钠，即可得到玫瑰精油。(3)蒸馏时许多因素都会影响产品的提取量，如蒸馏温度、蒸馏时间等。据图分析，在蒸馏时间为4小时时，出油率刚好达到最大值，因此蒸馏时间最好控制在4小时。(4)分析实验目的，该实验的自变量是不同的辅助方法，根据实验结果可得出使用高压脉冲电场辅助提取玫瑰精油时，出油率较高，达到最高出油率的蒸馏时间较短，故本实验中水蒸气蒸馏法提取玫瑰精油的最优辅助方法为高压脉冲电场。答案(1)水蒸气加速油水分层(2)无水Na2SO4除去固体硫酸钠(3)蒸馏温度4(4)高压脉冲电场高压脉冲电
11、场辅助提取玫瑰精油时，出油率较高，达到最高出油率的蒸馏时间较短5生物技术实践在实际生产生活中有着多种应用。请回答下列有关问题：(1)泡菜发酵过程会产生少量的亚硝酸盐，若泡菜中的亚硝酸盐总量达到一定值，则会引起中毒，故需要检测泡菜中亚硝酸盐的含量，测定亚硝酸盐含量的常用方法是_。(2)微生物的接种方法有多种，常用于统计活菌数目的接种方法是_，使用该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目偏低，原因是_。统计微生物数目的方法除利用菌落进行活菌计数外，还有_法。(3)精油在日常生活中有着广泛的应用，不同精油的制备过程不同，这与其原料的性质等有关。柚皮在水中蒸馏时容易焦糊，宜采用_法提取柚皮精油；玫瑰精油
12、的化学性质稳定，难溶于水，常选择_法进行提取。(4)天然胡萝卜素具有保护视力，抗癌变，延缓衰老等功效。根据胡萝卜素具有易溶于有机溶剂的特点，常采用_法提取胡萝卜素；提取的胡萝卜素粗产品可通过_法进行鉴定。解析(1)亚硝酸盐与某些化学物质发生反应后形成玫瑰红色染料。先使泡菜样品及一系列已知浓度的亚硝酸盐溶液分别与化学物质发生显色反应，然后通过对比，可以估测出泡菜液样品亚硝酸盐的含量。(2)微生物的接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法，其中稀释涂布平板法常用于统计活菌数目；使用该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目偏低，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落；除了活菌计数法外
13、，显微镜直接计数也是测定微生物数目常用的方法。(3)柚皮在水中蒸馏时容易焦糊，宜采用压榨法提取柚皮精油；玫瑰精油的化学性质稳定，难溶于水，常选择水蒸气蒸馏法进行提取。(4)根据胡萝卜素具有易溶于有机溶剂的特点，常采用萃取法提取胡萝卜素；提取的胡萝卜素粗产品可通过纸层析法进行鉴定。答案(1)比色法(2)稀释涂布平板法当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落显微镜直接计数(3)压榨(水蒸气)蒸馏(4)(有机溶剂)萃取纸层析6(2019青岛高三质检)胡萝卜素作为一种重要的天然色素在人们的日常生活中有着广泛的应用。胡萝卜素可以通过微生物发酵的方法获得。研究小组尝试用橙色粘球菌生产胡萝卜素
14、，请回答下列问题：(1)从富含有机质的土壤中取样后，要进行选择培养，其目的是_。(2)用平板划线法纯化橙色粘球菌，通常使用的划线工具是_，其灭菌方法是_。某个平板共划线5个区域，则该过程中需要从试管中沾取_次菌液。培养一段时间后，挑取平板上形状、大小和隆起度等一致的、橙黄色的_进行重复培养，直到分离出单一菌株。(3)用萃取法从该微生物菌体中提取胡萝卜素时，应采用_加热的方法。加热时需安装冷凝回流装置，其目的是防止_。(4)鉴定萃取物中是否含有胡萝卜素时，通常采用_法，该方法也可用于分离色素，其原理是_。解析(1)从富含有机质的土壤中取样后，要进行选择培养，以增加橙色粘球菌浓度。(2)平板划线法
15、常用的接种工具是接种环，一般用灼烧灭菌的方法灭菌。平板划线法每一次划线都是从上一次划线的末端开始的，所以无论划过多少次线，都只需要从试管中沾取1次菌液。培养一段时间后，挑取平板上形状、大小和隆起度等一致的、橙黄色的菌落进行重复培养，直到分离出单一菌株。(3)用萃取法从该微生物菌体中提取胡萝卜素时，应该采用水浴加热的方法；加热时需安装冷凝回流装置，以防止有机溶剂挥发。(4)鉴定胡萝卜素常用纸层析法，其原理是不同色素在有机溶剂中的溶解度不同。答案(1)增加橙色粘球菌浓度(2)接种环灼烧灭菌1菌落(3)水浴有机溶剂挥发(4)纸层析不同色素在有机溶剂中的溶解度不同7(2019厦门一模)下面是对大肠杆菌
16、进行数量测定的实验，请回答有关问题：(1)制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。(2)为了得到更加准确的结果，选用适宜的方法接种样品：下图是利用_法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，为达到这一目的，操作上应注意_。(3)在适宜温度下培养。结果分析：甲同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为524个，那么每毫升样品中的细菌数是(接种时所用稀释液的体积为0.1 mL)_个。用这种方法所得的数量比实际活菌数量要_，因为_。(4)乙、丙同学测定同一样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果：乙同学在该浓度下
17、涂布了1个平板，统计的菌落数为47；丙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为43、54、326，然后取其平均值141作为统计结果。请评价这两位同学的实验结果的有效性。乙同学的结果_，原因是_。丙同学的结果_，原因是_。(5)丁同学采用血细胞计数板计数(规格为1625，0.1 mm3)，统计4个中格中的细菌数，计算出每个小格所含细菌的平均数为2个，则每毫升样品中的细菌数是(稀释倍数为103)_个。解析(2)根据给出的图示可知，此接种方法为平板划线法，为达到稀释的目的，从第二次划线开始，接种环每一次划线前均要灼烧并冷却，且从上一区划线末端开始划，首尾不能重叠。(3)每毫升样品中的细菌数为
18、524/0.11055.24108个，用这种方法所得的数量比实际活菌数量要少，因为两个或多个细胞在一起时平板上观察到的是一个菌落。(4)乙同学未设重复实验，结果无效；丙同学涂布的3个平板计数结果差距太大，可能存在操作失误，结果无效。(5)每毫升样品中的细菌数是(22516)/0.11031038109个。答案(2)平板划线第二次及以后每次划线前均要灼烧接种环，冷却后从上一区划线末端开始划，首尾区不重叠，以便于分散菌种(3)5.24108少两个或多个细胞在一起的时候，平板上观察到的是一个菌落(4)无效没有设置重复组实验，结果不具有说服力无效一个平板上的菌落计数结果与另外两个相差太大(5)8109
