1、考点二 动物细胞工程一、 动物细胞工程技术动物细胞培养（基础），动物细胞核移植，动物细胞融合，生产单克隆抗体二、 动物细胞培养从动物机体中取出相关的组织将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中。让这些细胞生长和增殖。原理：细胞的增值剪碎，用胰蛋白酶处理（适宜PH为7.2-8.4，处理时间不宜太长）过程：动物胚胎或幼龄动物的组织或器官 单个细胞 制成细胞悬液 原代培养：从机体取出后，立即培养的细胞。特点：贴壁生长，接触抑制特点。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出。配制成细胞悬液分装到2个或2个以上培养瓶中继续培养称之。原代培养培养到10代不易传下去，大部分细胞衰老，死亡。10-50代时增殖减
2、慢甚至停止，细胞核型可能会发生变化，传至50代后遗传物质改变成为癌细胞。细胞株：传代培养的细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡。少数传到50代。这种传代细胞称之细胞株。特点：遗传物质没改变，不可无限传代。细胞系：指细胞株传50代后，由于遗传物质的改变，变成无限增值的癌细胞。细胞培养的结果：细胞而不是个体动物细胞培养的条件：（1）无菌、无毒的环境（加一定量的抗生素，定期更换培养液，清除代谢产物）（2）营养：动物血清（3）温度：36.5左右；pH：7.2-7.4（4）气体环境：95%空气，5%CO2(维持培养液中的pH值)动物细胞培养的应用：制备病毒疫苗，产生单克隆抗体，检测有毒
3、物质，用于研究生理、病理药理等方面的知识。植物组织培养与动物细胞培养的比较植物组织培养动物细胞培养原理细胞全能性细胞增殖培养基性质固体培养基液体培养基培养基特有成分蔗糖、植物激素葡萄糖、动物血清培养结果植物体细胞株、细胞系培养目的快速繁殖、培育无病毒植株等获得细胞或细胞产物三、 核移植技术1概念：将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。2、原理：动物细胞核的全能性3、动物细胞核移植可分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植。原因：动物胚胎细胞
4、分化程度低，恢复其全能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难。4、体细胞核移植过程：（以克隆高产奶牛为例）注意：细胞核移植技术中注入去核卵母细胞中的不是供体细胞核，而是整个细胞，伴随着两细胞融合，体现细胞膜的结构特点：具有一定的流动性。受体细胞为减数第二次分裂中期的次级卵母细胞，此时在透明带内包含着第一极体，在去核的同时连同第一极体一并去掉。该技术形成重组细胞发育成一个新个体，体现了细胞核的全能性而非动物细胞的全能性。用卵母细胞做受体细胞原因：a卵母细胞体积大，便于操作；b含有促使细胞核表达全能性的物质；c.营养物质丰富克隆属于无性繁殖，产生新个体的性别、绝大多数性状与供核亲本
5、一致。四、 动物细胞融合1、 别名：细胞杂交2、 定义：指两个或多个细胞融合成一个细胞的过程3、 融合方法：物理法：电激、振动离心；化学法：PEG；生物法：灭活的病毒（常用）4、 原理：细胞膜流动性5、 结果：杂交细胞6、 意义：克服远缘杂交不亲和性，在研究细胞免疫、细胞遗传、肿瘤方面起着重要作用。7、 植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较五、 单克隆抗体1、 传统获得抗体方法：抗原动物体内抗体从动物血清中分离出抗体2、 传统抗体特点：产量低；纯度低；特异性差。3、 单克隆抗体操作过程：4、 杂交瘤细胞的特点：既能产生单一抗体，又能无限增殖5、 单克隆抗体的特点：大量制备，灵敏度强，特异性强。6、 应用：作为诊断试剂，用于治疗疾病或运载药物。
