1、课后素养落实(三)微生物的选择培养和计数(建议用时：40分钟)题组一选择培养基1分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是()加尿素不加尿素加琼脂不加琼脂加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸盐不加硝酸盐A BC DC尿素和硝酸盐都能作为氮源，而培养尿素分解菌的培养基应是以尿素为唯一氮源的固体培养基。因此培养基中应不加硝酸盐，加入尿素和琼脂。葡萄糖作为碳源，也需要加入。2(2020山东德州高二期末)某同学成功分离出了土壤中的固氮菌，结果如图所示。该实验使用了()A.平板划线法B.液体培养基C.不含氮源的培养基D.不含碳源的培养基C图示结果呈现的是单个菌落，故该实验采用了稀释涂布平板法，A项错误；在固体培养基
2、上才能形成菌落，B项错误；要分离土壤中的固氮菌，应该用不含氮源的选择培养基，C项正确；固氮菌为异养型生物，因此所用培养基需要加入碳源，D项错误。3(2021河北省检测)为了从土壤中分离获得尿素分解菌的单菌落，某同学设计了 A、B两种培养基，其成分如下表所示。请回答下列相关问题：项目葡萄糖KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O尿素琼脂水培养基A培养基B注：“”表示有，“”表示无。(1)培养基中的葡萄糖能为细菌的生长繁殖提供_和_。通常情况下，制备培养基时要根据所培养微生物的不同来调节培养基的pH，其原因是_。(2)据表判断，培养基A_(填“能”或“不能”)用于分离获得尿素分解菌的单菌落，原
3、因是_；培养基B不能用于分离尿素分解菌，原因是_。解析(1)培养基中的葡萄糖作为能源物质能作为细菌细胞呼吸的底物，为细菌的生长繁殖提供能量；葡萄糖氧化分解的中间产物能为合成其他有机物提供原料。不同微生物生长繁殖所需的最适pH不同，如培养霉菌时需要将pH调至酸性，培养细菌时需要将pH调至中性或微碱性。(2)培养基A没有添加尿素或其他氮源物质，尿素分解菌不能获得氮源而无法生长繁殖。培养基B没有添加凝固剂琼脂，属于液体培养基。液体培养基不能将培养的目的菌分散成单个的细菌，而无法获得单菌落。答案(1)能量(能源)碳源(合成其他有机物的原料或中间物质)不同微生物生长繁殖所需要的适宜pH不同(2)不能该培
4、养基缺少氮源，尿素分解菌不能获得氮源而无法生长繁殖培养基没有凝固剂，是液体培养基，不能将目的菌分散成单个细菌而无法获得单菌落题组二微生物的选择培养4原油中含有大量有害的、致癌的多环芳烃。土壤中有些细菌可以利用原油中的多环芳烃为碳源，在培养基中形成分解圈。为筛选出能高效降解原油的菌株并投入除污，某小组同学设计了相关实验。下列有关实验的叙述，不正确的是()A应配制来源于被原油污染土壤的土壤稀释液备用B配制以多环芳烃为唯一碳源的选择培养基C将土壤稀释液灭菌后接种到选择培养基上D在选择培养基上能形成分解圈的即为所需菌种C为了筛选、获取能利用多环芳烃为碳源的菌种，首先是取材，应配制来源于被原油污染土壤的
5、土壤稀释液备用，A项正确；其次配制以多环芳烃为唯一碳源的选择培养基，B项正确；然后进行接种，在无菌环境下，将土壤稀释液接种到选择培养基上，在适宜的条件下进行培养，若将土壤稀释液进行灭菌，就不能筛选出能高效降解原油的菌株，C项错误；在选择培养基上形成的菌落，若该菌落周围有分解圈，即为所需菌种，D项正确。5下图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的过程示意图，有关叙述错误的是()A在配制步骤的培养基时，应先调pH再进行高压蒸汽灭菌B步骤纯化分解尿素的细菌的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落C步骤采用涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素D步骤挑取中不同种的菌落分别接种，比较
6、细菌分解尿素的能力C配制培养基时，应先调pH再进行高压蒸汽灭菌，A项正确；步骤纯化分解尿素的细菌的原理是将聚集的细菌通过稀释涂布平板法分散，获得单细胞菌落，B项正确；步骤筛选分解尿素的细菌，培养基中应以尿素为唯一氮源，C项错误；步骤挑取中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力，D项正确。6(2020济南外国语学校高二月考)某种菌在30 的环境下，经过6周后会产生2种不同的酶，几乎可将PET塑料完全分解。下图是分离、纯化和保存菌株的过程，相关叙述正确的是()A塑料垃圾中含有大量微生物，是分离该菌株的首选样品B筛选培养基中需要加入PET塑料粉末，通过菌落特征挑出分解PET塑料的菌落C通过涂布
7、平板法可以获得单菌落D斜面培养基中含有大量营养物质，可在常温下长期保存菌株B塑料垃圾中含有大量微生物，但不一定含有分解PET塑料的菌株，A项错误；筛选培养基中需要加PET塑料粉末，通过菌落特征挑出分解PET塑料的菌落，从而获得分解PET塑料的菌株，B项正确；在涂布平板上长出的菌落，可以通过划线或稀释涂布平板法进一步纯化得到单个菌落，C项错误；斜面培养基中含有大量营养物质，可在低温下临时保存菌株，如果长期保存菌株应选择甘油管藏法，D项错误。题组三微生物数量的测定7下列关于统计菌落数目的方法的叙述，不正确的是()A采用稀释涂布平板法获得的菌落数往往少于实际的活菌数B当样品的稀释度足够高时，一个活菌
8、往往会形成一个菌落C为了保证结果准确，一般采用菌落密度较大的平板进行计数D在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果C稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，值得注意的是，该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，A、B正确。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数；设计实验时，一定要至少用三个平板做重复实验，才能增强实验的说服力和准确性；分析结果时，一定要考虑所设置的重复实验的结果是否
9、一致，差别不大时；取平均值作为统计结果，C错误，D正确。8(2020四川绵阳期末)某同学将1 mL土壤样液稀释100倍，在3个平板上用稀释涂布平板法分别接入0.1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、57和58。下列叙述错误的是()A可得出土壤样液中活菌大约为5.7107个/LB此方法统计的菌落数往往比实际的活菌数目低C一般选择菌落数为30300的平板进行计数D显微镜直接计数法统计的是稀释液中的活菌数D将1 mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、57和58，据此可得出每升样品中的活菌数为(565758)30
10、.11 0001005.7107(个)，A正确；由于两个或多个细胞连在一起时，在平板上观察到的只是一个菌落，所以统计的菌落数往往比实际的活菌数目低，B正确；为保证结果准确，一般选择菌落数为30300的平板进行计数，C正确；显微镜直接计数法统计的是稀释液中所有菌体的数目，包括活菌和死菌，D错误。9下面是探究如何从土壤中分离出自生固氮菌与计数的实验，请回答下列问题。实验原理：农田的表层土壤中自生固氮菌的数量比较多。将用表层土壤制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离。材料用具：农田的表层土壤、配制无氮培养基和牛肉
11、膏蛋白胨培养基的材料、盛有9 mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛有90 mL无菌水的锥形瓶、恒温箱等。(1)方法步骤培养基的制备：分别配制无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基，倒平板应在_操作。制备土壤稀释液：取土样10 g加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。用无菌吸管吸取上清液1 mL，转至盛有9 mL无菌水的试管中，依次稀释到1107稀释度。涂布平板操作：按照由11071103稀释度的顺序分别吸取0.1 mL进行涂布平板操作，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布_个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布_个。培养：放入恒温箱内，在2830 下培养34 d。计数：当菌落数目稳定时
12、，选取菌落数在_的平板进行计数。如果在稀释倍数为1105的平板上测定的平均值为50，则每克样品中的菌体数是_个。(2)预期结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数_(填“多于”或“少于”)无氮培养基上的数目。原因是_。解析(1)在酒精灯火焰旁倒平板，可以减少杂菌的污染。为了保证结果准确，一般每个稀释度下设置3个或3个以上平板，选择菌落数在30300的平板进行计数，并取平均值，则每克样品中的菌体数为(500.1)1055107(个)。(2)可用牛肉膏蛋白胨培养基作为对照组来说明无氮培养基的选择作用，牛肉膏蛋白胨培养基适合其他细菌生存，所以它比无氮培养基上的菌落数目多。答案(1)酒精灯火焰
13、附近31303005107(2)多于无氮培养基上只有土壤中的自生固氮菌能生长繁殖，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有微生物生长10(2020河北石家庄二中高二下期中)为了判断培养基是否被杂菌污染和选择培养基是否起到了选择作用，需要设置的对照组的培养基分别是()A未接种的选择培养基、未接种的牛肉膏蛋白胨培养基B未接种的培养基、接种了的牛肉膏蛋白胨培养基C接种了的选择培养基、接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D接种了的培养基、未接种的牛肉膏蛋白胨培养基B要判断培养基是否被杂菌污染，可将未接种的培养基放在恒温箱中培养，一段时间后，若有菌落产生，说明培养基被污染，若无菌落产生，说明培养基没有被污染。要判
14、断选择培养基是否起到了选择作用，接种了的选择培养基是实验组，将等量的稀释相同倍数的菌液接种到牛肉膏蛋白胨培养基上，作为对照组，在相同的条件下进行培养，观察比较对照组和实验组中的菌落数，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目应明显多于选择培养基上的菌落数目。综上所述，B正确。11生长图形法是一种测定微生物营养需求的简便方法。为探究某嗜热菌所需生长因子的种类，研究小组把该菌的悬浮液与不含任何生长因子但含有其他必需营养物质的培养基混合后倒入平板，然后在平板上划分数区，将甲、乙、丙三种生长因子分别添加到不同区域，培养结果如图所示。下列说法错误的是()A倒入平板后直接培养可判断培养基有无污染B倒入平板后培养基需
15、要进行灭菌处理C图示结果表明该菌需要生长因子乙和丙D生长图形法还可用于某些菌种的筛选B平板上不含任何生长因子，若倒入平板后直接培养，出现菌落说明培养基已被杂菌感染，因为该嗜热菌不能在缺乏生长因子的培养基中生长，A正确；制备培养基时，先灭菌再倒平板，B错误；图中菌落生活在乙、丙区域之间，说明同时需要乙和丙，C正确；不同菌种所需生长因子不同，可利用生长图形法筛选菌种，D正确。12(2020广东佛山顺德区高二期中)为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行下图A所示的实验。AB(1)配制好的培养基灭菌通常可以使用_法。步骤与步骤中培养基成分的最大区别是_。这种培养基从功能上
16、看属于_(填“选择”或“鉴别”)培养基。(2)同学甲进行步骤的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示。该同学的接种方法是_；推测同学甲用此方法接种时出现图B结果可能的操作失误是_；在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_。(3)同学乙也按照同学甲的接种方法进行了步骤的操作：将1 mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为_。这种计数方法得到的结果一般比实际值偏小，原因可能有_。(4)步骤需要振荡培养，其目的是提高培养液溶氧量，同时使_，提高营养物质利
17、用率。(5)步骤后取样测定石油含量的目的是_。解析(1)根据题意，要分离和纯化高效分解石油的细菌，配制好的培养基灭菌通常可以使用高压蒸汽灭菌法。图中步骤是扩大培养来自被石油污染过的土壤中的细菌，步骤是利用石油扩大培养分解石油的细菌，步骤与步骤中培养基成分的最大区别是步骤的培养基中石油是唯一碳源。这种培养基从功能上看属于选择培养基。(2)步骤是对分解石油的细菌进行分离，分析图B可知，分解石油的细菌在培养基上所形成的是单个菌落，说明同学甲进行过程的操作中接种方法是稀释涂布平板法；图B中培养基表面左侧的菌落数目明显比右侧多，推测同学甲用此方法接种时可能涂布不均匀；在接种前随机取若干灭菌后的空白平板先
18、行培养一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格。(3)同学乙也按照同学甲的接种方法进行了步骤的操作，据题干信息计算，可得出每升样品中的活菌数为(565857)30.11001 0005.7107(个)。由于细菌会相互重叠，当两个或多个细菌连在一起时，形成菌落后，平板上观察到的只是一个菌落，所以导致统计的细菌数目往往比实际数目少。(4)步骤需要振荡培养，其目的是提高培养液溶氧量，同时使菌体与培养液充分接触，提高营养物质利用率。(5)步骤后取样测定石油含量的目的是筛选出分解石油能力最好的细菌，其中石油剩余量最少的一组所含的细菌就是分解石油能力最好的细菌。答案(1)高压蒸汽灭菌步骤的培养基
19、中石油是唯一碳源选择(2)稀释涂布平板法 涂布不均匀检测培养基平板灭菌是否合格(3)5.7107(个)当两个或多个细菌连在一起时，形成菌落后，平板上观察到的只是一个菌落(4)菌体和培养液充分接触(5)筛选出分解石油能力最好的细菌 不能准确辨别平板划线法和稀释涂布平板法的异同13(2020北京密云区段考)下列关于稀释涂布平板法和平板划线法的叙述，不正确的是()A接种用具都需要进行严格灭菌B都只用于固体培养基接种C接种培养后都能获得单个菌落D都可以用于微生物的计数D为防止杂菌污染，接种工具需要灭菌后使用，A项正确；将微生物接种到固体培养基中的方法通常为平板划线法和稀释涂布平板法，B项正确；两种接种方法在培养基中都能形成单个菌落，C项正确；稀释涂布平板法接种可以形成单个菌落，所以常用来进行微生物的计数，平板划线法常用来筛选分离微生物，D项错误。
