1、高考资源网（） 您身边的高考专家11DNA重组技术的基本工具1.概述基因工程是在遗传学、微生物学、生物化学和分子生物学等学科的基础上发展而来的。2.阐明DNA重组技术的实现需要利用限制性核酸内切酶、DNA连接酶和载体三种基本工具。知识点一基础理论和技术的发展催生了基因工程1对基因工程概念的理解基因工程的别名基因拼接技术或DNA重组技术操作环境生物体外操作对象基因操作水平DNA分子水平基本过程剪切拼接导入表达原理基因重组结果创造出人类需要的新的生物类型和生物产品2.将人的胰岛素基因导入大肠杆菌体内，通过大肠杆菌能大量生产人胰岛素。该事例说明生物共用一套遗传密码。3基因工程的基础理论和技术支持连一
2、连1基因工程的原理是基因重组基因重组有两种情况：减数第一次分裂前期四分体的非姐妹染色单体间的交叉互换和减数第一次分裂后期非同源染色体的自由组合。基因工程突破了生殖隔离，实现了不同种生物间的基因重组。2基因工程的理论基础(1)拼接的基础基本组成单位相同：不同生物的DNA分子都是由脱氧核苷酸构成的。空间结构相同：不同生物的DNA分子一般都是由两条反向平行的脱氧核苷酸长链形成的规则的双螺旋结构。碱基配对方式相同：不同生物的DNA分子中两条链之间的碱基配对方式均是A与T配对，G与C配对。(2)表达的基础：生物共用一套遗传密码，相同的遗传信息在不同生物体内可表达出相同的蛋白质。科学家们经过多年的努力，创
3、立了一种新兴生物技术基因工程。实施该工程的最终目的是()A定向提取生物体的DNA分子B定向地对DNA分子进行人工“剪切”C在生物体外对DNA分子进行改造D定向地改造生物的遗传性状解析：选D。基因工程的内容就是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需的基因产物，也就是定向地改造生物的遗传性状。知识点二基因工程的基本工具工具酶1限制性核酸内切酶“分子手术刀”(1)来源：主要来自原核生物。(2)特点：具有专一性。识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列。切割特定核苷酸序列中的特定位
4、点。(3)作用：断开每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。(4)结果：产生黏性末端和平末端。2DNA连接酶“分子缝合针”(1)种类(2)作用：形成磷酸二酯键。(3)结果：形成重组DNA分子。1限制酶的切割位置及结果2DNA连接酶的作用Ecoli DNA连接酶和T4DNA连接酶均可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，相当于把梯子两边扶手的断口连接起来。即：(1)DNA连接酶的作用部位为，形成磷酸二酯键。(2)与限制酶的关系3与DNA分子相关的四种酶的比较种类项目限制酶DNA连接酶DNA聚合酶解旋酶作用底物DNA分子DNA分子片段脱氧核苷酸DNA分子作用部位磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键碱
5、基对间的氢键作用特点切割目的基因及载体，特异性识别核苷酸序列，使特定部位的磷酸二酯键断开将双链DNA片段“缝合”起来，恢复磷酸二酯键将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷酸链上将DNA两条链之间的氢键打开作用结果形成黏性末端或平末端形成重组DNA分子形成新的DNA分子形成单链DNA分子应用基因工程DNA复制提醒(1)限制酶是一类酶，而不是一种酶。(2)将一个基因从DNA分子上切割下来，需要切两处，同时产生4个黏性末端。(3)不同DNA分子用同一种限制酶切割产生的黏性末端都相同，同一个DNA分子用不同的限制酶切割，产生的黏性末端一般不相同。(4)不同限制酶切割形成的黏性末端，如果互补则可以重新配对相互连
6、接。(5)判断两个末端是否为同一种限制酶切割产生的方法：将其中一个末端旋转180，若与另一个完全相同，则说明这两个末端是由同一个限制酶切割产生的。1下列有关基因工程中限制酶的描述，错误的是()A一种限制酶只能识别一种特定的核糖核苷酸序列B限制酶的活性受温度、pH的影响，总有一个最合适的条件C限制酶能破坏相邻脱氧核苷酸之间的化学键D限制酶不只存在于原核生物中，其合成场所是核糖体解析：选A。限制酶只能识别双链DNA分子的某种特定的脱氧核苷酸序列，不能识别RNA分子的核糖核苷酸序列，A项错误；同其他的酶一样，限制酶同样受温度和pH的影响，而且具有发挥最大催化效率的最适温度和最适pH，B项正确；限制酶
7、催化的是特定部位磷酸二酯键的断裂，属于水解反应，C项正确；限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的，也有来自真核细胞的，其本质是蛋白质，在核糖体上合成，D项正确。2.下表为常用的限制性核酸内切酶（限制酶）及其识别序列和切割位点，以下说法中，推断正确的是(多选)注：Y表示C或T，R表示A或G。A.一种限制酶只能识别一种核苷酸序列B.限制酶切割后一定形成黏性末端C.不同的限制酶可以形成相同的黏性末端D.限制酶的切割位点可以位于识别序列的内部和外侧解析：选CD。根据表格内容可以推知，每种限制酶都能识别特定的核苷酸序列，但不一定是一种序列，如限制酶Hind,A项错误；限制酶切割后能形成黏性末端或平末端，
8、B项错误；不同的限制酶切割后可能形成相同的黏性末端，如限制酶BamH和Sau3A切割后露出的黏性末端相同，C项正确；限制酶的切割位点可以位于识别序列的内部和内部外侧，D项正确。3(2019辽宁沈阳模拟)用限制酶EcoR、Kpn和二者的混合物分别作用于一个1 000 bp(1 bp即1个碱基对)的DNA分子，同时对酶切产物分别进行凝胶电泳，在电场的作用下，酶切产物分开，凝胶电泳结果如图所示。该DNA分子的酶切图谱(单位：bp)正确的是()解析：选C。A选项中的DNA用Kpn单独酶切会得到600 bp和200 bp两种长度的DNA分子，与题意不符；B选项中的DNA用Kpn单独酶切会得到600 bp
9、和400 bp两种长度的DNA分子，与题意不符；C选项中的DNA用Kpn单独酶切后得到的DNA分子长度是1 000 bp，用EcoR 单独酶切会得到200 bp和800 bp两种长度的DNA分子，用EcoR、Kpn同时酶切后会得到200 bp和400 bp两种长度的DNA分子，与题意相符；D选项中的DNA用Kpn单独酶切后得到400 bp和600 bp两种长度的DNA分子，与题意不符。4下列关于DNA连接酶作用的叙述，正确的是()A将单个核苷酸加到某个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键B将断开的2个DNA片段的骨架连接起来，重新形成磷酸二酯键C连接2条DNA链上碱基之间的氢键D只能将双链DNA片
10、段互补的黏性末端连接起来，而不能将两者之间的平末端进行连接解析：选B。DNA连接酶和DNA聚合酶都是催化2个脱氧核苷酸分子之间形成磷酸二酯键。但DNA连接酶是在2个DNA片段之间形成磷酸二酯键，将2个DNA片段连接成重组DNA分子；DNA聚合酶是将单个的核苷酸分子加到已存在的核酸片段上形成磷酸二酯键，合成新的DNA分子。知识点三基因工程的基本工具：“分子运输车”载体学生用书P3,)1基因进入受体细胞的载体“分子运输车”(1)作用：将外源基因送入细胞中。在受体细胞内对目的基因进行大量复制。(2)种类：质粒、噬菌体的衍生物和动植物病毒等。(3) 2重组DNA分子的模拟操作(1)材料用具：剪刀代表E
11、coR_，透明胶条代表DNA连接酶。(2)切割位点分别从两块硬纸板上的一条DNA链上找出GAATTC序列，并选GA之间作切口进行“切割”。再从另一条链上互补的碱基之间寻找EcoR相应的切口剪开。(3)操作结果：若操作正确，不同颜色的黏性末端应能互补配对；否则，说明操作有误。关于基因工程中载体的三点提醒(1)两种载体的不同：基因工程中的载体与细胞膜上物质运输的载体不同，前者的实质是DNA分子，能将目的基因导入受体细胞，后者是蛋白质，与细胞膜的选择透过性有关。(2)载体需要加工：一般来说，天然载体不能同时满足所有条件，要对其进行人工改造才可以使用。(3)标记基因的筛选原理前提：载体上的标记基因一般
12、是一些抗生素的抗性基因。目的基因要转入的受体细胞没有抵抗相关抗生素的能力。过程：含有某抗生素抗性基因的载体导入受体细胞，抗性基因在受体细胞内表达，受体细胞对该抗生素产生抗性，然后在培养基中加入该抗生素。结果：在培养基上，被抗生素杀死的是没有抗性的受体细胞，没被杀死的具有抗性的受体细胞得以筛选。原理如下图所示：高中生物中的“载体”(1)物质跨膜运输的载体：细胞膜上的一种_。(2)基因工程中目的基因的载体：种类有_、噬菌体的衍生物和_等。(3)细胞中遗传信息的载体：细胞生物遗传信息的载体是_。(4)真核细胞中遗传物质的主要载体是_。(5)细胞间信息传递的载体：细胞释放的_，如：激素、神经递质等。答
13、案：(1)蛋白质(2)质粒动植物病毒(3)DNA(4)染色体(5)信号分子 1质粒是基因工程中最常用的目的基因运载工具。下列有关叙述正确的是()A质粒是只存在于细菌细胞质中能自主复制的小型环状双链DNA分子B在所有的质粒上总能找到一个或多个限制酶切割位点C携带目的基因的重组质粒只有整合到宿主细胞的染色体DNA上才会随后者的复制而复制D质粒上的抗性基因常作为标记基因供重组DNA的鉴定和选择解析：选D。质粒不只分布于原核生物中，在真核生物酵母菌细胞内也有分布，A项错误；并不是所有的质粒都能找到限制酶的切割位点而成为合适的运载目的基因的工具，B项错误；重组质粒进入受体细胞后，可以在细胞内自我复制，也
14、可以整合后复制，C项错误；质粒上抗性基因常作为标记基因，D项正确。2(经典题)质粒是基因工程中最常用的载体，它存在于许多细菌体内。某细菌质粒上有标记基因如下图所示，通过标记基因可以推知外源基因(目的基因)是否转入成功。外源基因插入的位置不同，细菌在培养基上的生长情况也不同，右图中表示出外源基因插入位置(插入点有a、b、c)，请根据表中提供的细菌生长情况，推测三种重组后细菌的外源基因插入点，正确的一组是()细菌在含氨苄青霉素的培养基上的生长状况细菌在含四环素的培养基上的生长状况能生长能生长能生长不能生长不能生长能生长A.是c；是b；是aB是a和b；是a；是bC是a和b；是b；是aD是c；是a；是
15、b答案：A核心知识小结要点回眸答题必备 基因工程突破了生殖隔离，实现了不同种生物间的基因重组。 不同生物基因能拼接在一起的理论基础是DNA分子都是由4种脱氧核苷酸构成的规则的双螺旋结构。 外源DNA导入受体细胞能成功表达的理论基础是密码子的通用性。 限制酶的作用特点是识别双链DNA分子特定的核苷酸序列，并在特定位点上切割。 限制酶和DNA连接酶的作用部位都是两个相邻核苷酸间的磷酸二酯键。 在基因工程中使用的载体除质粒外，还有噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 拓宽教材1(选修3 P7“思考与探究”改编)下列所示的末端至少是由几种限制酶作用产生的()AATTCAATTGCTATAG G C GAT
16、ATC A1种B2种C3种 D4种解析：选C。图中为相同的平末端，可能由同一种限制酶切割所得，故图示四种末端至少是由3种限制酶作用产生的。2(选修3 P6旁栏“思考题”改编)下图为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图，探究以下问题：(1)a代表的物质和质粒的化学本质都是_，都能进行自我复制。(2)若某目的基因切割末端为，则与之相连的质粒上至少有一段核苷酸序列为_。该质粒DNA分子的切割末端为_，可使用DNA连接酶把质粒和目的基因连接在一起。(3)氨苄青霉素抗性基因，能控制某物质的合成，该物质能抵抗氨苄青霉素，使含有该基因的生物能在含氨苄青霉素的环境中存活。氨苄青霉素抗性基因在质粒DNA上称为_，其作
17、用是_。答案：(1)DNA(2)(3)标记基因用于重组DNA的鉴定和选择精练好题3针对下图的叙述，错误的是()A限制酶将a处切断，一定形成相同的黏性末端BDNA连接酶将a处连接会脱去一分子水CDNA复制时需要解旋酶切断b处，基因工程操作中不需要Db处的化学键是氢键解析：选A。限制酶会将DNA切出具有黏性末端或平末端的两个片段，A项错误；磷酸二酯键的形成是一个脱水缩合的反应，B项正确；DNA复制需要解旋酶，而基因工程不需要，C项正确；观察题图，可以确定b处为碱基对之间形成的氢键，D项正确。4(2019黑龙江哈尔滨三中高二期末)下面是3种限制性核酸内切酶对DNA分子的识别序列和剪切位点图(箭头表示
18、切点，切出的断面为黏性末端)。下列相关叙述错误的是()限制酶1：GATC限制酶2：CCGCGG限制酶3：GGATCCA一般情况下，不同的限制酶有不同的识别序列和切割位点B限制酶2和3识别的序列都包含6个碱基对C限制酶1和3剪出的黏性末端互补D能够识别和切割RNA分子内一小段核苷酸序列的酶只有限制酶2解析：选D。一般情况下，不同限制酶有不同的识别序列和切割位点；限制酶2和3识别的序列分别是CCGCGG和GGATCC，均为6个碱基对；限制酶1和3剪出的黏性末端互补；三种限制酶均不能识别和切割RNA中的核糖核苷酸序列。5(2019江苏扬州高二期末)下列有关限制酶和DNA连接酶的叙述，正确的是(多选)
19、()A用限制酶剪切获得一个目的基因时得到两个切口，有4个磷酸二酯键被断开B限制酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的概率就越大C序列CATG和GGATCC被限制酶切出的黏性末端碱基数不同DT4DNA连接酶和Ecoli DNA连接酶都能催化平末端和黏性末端的连接解析：选AB。用限制酶剪切获得一个目的基因时得到两个切口，有4个磷酸二酯键被断开，A正确；限制酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的概率就越大，B正确；序列CATG和GGATCC被限制酶切出的黏性末端碱基数相同，都是4个，C错误；T4DNA连接酶和Ecoli DNA连接酶都能催化黏性末端的连接，其中只有T4DNA连接酶可以连接平末端，
20、D错误。6(2019北京海淀区高二练习)下图是基因工程主要技术环节的一个基本步骤，这一步骤需用到的工具酶是()ADNA连接酶和解旋酶BDNA聚合酶和限制性核酸内切酶C限制性核酸内切酶和DNA连接酶DDNA聚合酶和RNA聚合酶解析：选C。目的基因和载体结合需“分子手术刀”限制性核酸内切酶和“分子缝合针”DNA连接酶。此过程不涉及DNA复制，不需要DNA聚合酶和解旋酶。7下表所示为几种限制酶的识别序列及其切割位点，请回答下列问题：限制酶BamHHindEcoRSma识别序列及切割位点 GGATCCCCTAGG AAGCTTTTCGAA GAATTCCTTAAG CCCGGGGGGCCC(1)从表中
21、四种酶的切割位点看，可以切出平末端的酶是_。(2)将目的基因与质粒DNA缝合依靠的是_酶，它的作用是形成磷酸二酯键；两条链间的碱基对通过_连接起来。(3)图1中的质粒分子可被表中限制酶_切割，切割后的质粒含有_个游离的磷酸基团。(4)在相关酶的作用下，图1中的甲与图2中的乙_(填“能”或“不能”)拼接起来。请说明理由：_。解析：(1)由表中四种限制酶的切割位点可知，Sma可切出平末端。(2)目的基因与质粒缝合时用DNA连接酶进行连接，形成磷酸二酯键；两条链之间的碱基依据碱基互补配对原则形成氢键。(3)根据质粒的碱基序列可知，质粒分子可被限制酶EcoR切割，切割后形成链状DNA，有2个游离的磷酸
22、基团。(4)由图可知，甲和乙的黏性末端相同，在DNA连接酶的作用下可以拼接起来。答案：(1)Sma(2)DNA连接氢键(3)EcoR2(4)能二者具有相同的黏性末端一、单项选择题1下列有关基因工程诞生的说法，不正确的是 ()A基因工程是在生物化学、分子生物学和微生物学等学科的基础上发展起来的B工具酶和载体的发现使基因工程的实施成为可能C遗传密码的破译为基因的分离和合成提供了理论依据D基因工程必须在同物种间进行答案：D2下列有关下图所示的黏性末端的说法，错误的是()A甲、乙、丙黏性末端分别是由不同的限制酶切割产生的B甲、乙具有相同的黏性末端，可形成重组DNA分子，但甲、丙之间不能CDNA连接酶的
23、作用位点是b处D切割产生甲的限制酶不能识别由甲、乙黏性末端形成的重组DNA分子片段解析：选C。据图可知，切割形成甲、乙、丙黏性末端的限制酶识别序列与切割位点分别是GAATTC(在G与A之间切割)、CAATTG(在C与A之间切割)、CTTAAG(在C与T之间切割)，即甲、乙、丙是由不同的限制酶切割产生的，A正确。甲、乙的黏性末端互补，所以甲、乙可以形成重组DNA分子；甲、丙的黏性末端不互补，所以甲、丙无法形成重组DNA分子，B正确。DNA连接酶可以恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，而b处是氢键，C错误。甲、乙黏性末端形成的重组DNA分子片段为，其中没有切割产生甲的限制酶的识别序列及酶
24、切位点，所以切割产生甲的限制酶不能识别由甲、乙黏性末端形成的重组DNA分子片段，D正确。3下图所示为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制性核酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是()ABC D解析：选C。图示中是酶切割DNA分子双链产生黏性末端的过程，用到的酶是限制性核酸内切酶，是黏性末端连接的过程，用到的酶是DNA连接酶，是DNA分子解旋的过程，要用解旋酶，是DNA分子复制时子链的形成过程，需要DNA聚合酶。4质粒是基因工程中最常用的载体，其主要特点是()能自主复制不能自主复制结构简单是蛋白质是环状RNA是环状DNA能“友好”地“借居”A BC D解
25、析：选C。质粒存在于细菌和酵母菌等微生物中，是一种很小的、独立于拟核之外的环状DNA分子，上面有标记基因，便于在受体细胞中检测。质粒在受体细胞中能“友好”地“借居”，并能随受体细胞DNA的复制而复制，能进行目的基因的扩增和表达。5(2019衡水高二检测)一环状DNA分子，设其长度为1，限制酶A在其上的切点位于0.0处；限制酶B在其上的切点位于0.3处；限制酶C的切点未知，但C单独切或与A或与B同时切的结果如下表，请确定C在该环状DNA分子上的切点应位于图中的哪处()C单独切长度为0.8和0.2的两个片段C与A同时切长度为2个0.2和1个0.6的片段C与B同时切长度为2个0.1和1个0.8的片段
26、A0.2和0.4处 B0.4和0.6处C0.5和0.7处 D0.6和0.9处解析：选A。据图表信息可知：限制酶C单独切割环状DNA分子，获得长度为0.8和0.2的两个片段，可推知限制酶C有2个切割位点。限制酶A只有1个切割位点，且位于0.0处，又知限制酶C与限制酶A同时切割时，获得2个0.2和1个0.6的片段，因此以限制酶A切割点向左或向右推测，可得知限制酶C的切割位点可能为0.2、0.4或0.6、0.8处。再根据限制酶C与限制酶B同时切割时，获得2个0.1和1个0.8片段，可推知限制酶C的切割位点可能为0.1、0.2或0.4、0.5处。综上分析，只有0.2和0.4两处与之前推测相吻合，选项A
27、正确。6(2019河北巨鹿高二期中)下图表示某种质粒和人的胰岛素基因，其中a表示标记基因，b表示胰岛素基因，E1表示某限制酶的酶切位点，现用该种限制酶分别切割质粒和胰岛素基因，后用DNA连接酶连接切割后的质粒和胰岛素基因，下列选项中不可能出现的是()答案：C7基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶的识别序列和切点是GGATCC，限制酶的识别序列和切点是GATC。根据下图判断下列操作正确的是()A目的基因和质粒均用限制酶切割B目的基因和质粒均用限制酶切割C质粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割D质粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割解析：选D。解此题要明确目
28、的基因要切下，质粒只要切开。限制酶的识别序列和切点是GATC，单独使用时可以把目的基因和质粒都切断；限制酶的识别序列和切点是GGATCC，只能把它们切开，单独使用时不能切断，所以目的基因用限制酶切割，质粒用限制酶切割。用限制酶切割质粒时破坏了Gene，所以只能用Gene作为标记基因。8(2019江苏扬州中学质量检测)基因工程利用某目的基因(图甲)和P1噬菌体载体(图乙)构建重组DNA。限制性核酸内切酶Bgl、EcoR和Sau3A的酶切位点分别如图所示。下列分析错误的是()A构建重组DNA时，可用Bgl和Sau3A切割目的基因所在片段和P1噬菌体载体B构建重组DNA时，可用EcoR和Sau3A切
29、割目的基因所在片段和P1噬菌体载体C图乙中的P1噬菌体载体只用EcoR切割后，含有两个游离的磷酸基团D用EcoR切割目的基因所在片段和P1噬菌体载体，再用DNA连接酶连接，只能产生一种重组DNA解析：选D。用Bgl 和Sau3A 切割目的基因和P1噬菌体载体会形成相同的黏性末端，因此它们可构成重组DNA，A正确；由于Sau3A的切割位点在EcoR的两个酶切位点之间，因此，用EcoR和Sau3A切割目的基因和P1噬菌体载体会形成相同的黏性末端，因此它们可构成重组DNA，B正确；P1噬菌体载体为环状DNA，其上只含有一个EcoR的酶切位点，因此用EcoR切割后，该环状DNA分子变为双链DNA分子，
30、因每条链各含有一个游离的磷酸基团，故切割后含有两个游离的磷酸基团，C正确；由图甲可知，用EcoR切割目的基因所在片段和P1噬菌体后形成的黏性末端相同，可任意连接，不止产生一种重组DNA，D错误。二、多项选择题9某线性DNA分子含有3 000个碱基对(bp)，先用限制酶a切割，再把得到的产物用限制酶b切割，得到的DNA片段大小如下表。限制酶a和b的识别序列和切割位点如图所示。下列有关说法正确的是()a酶切割产物(bp)b酶再次切割产物(bp)1 600；1 100；300800；300A在该DNA分子中，a酶与b酶的识别序列都是2个Ba酶与b酶切出的黏性末端不能相互连接Ca酶与b酶切断的化学键不
31、同D用这两种酶和DNA连接酶对该DNA分子进行反复切割、连接操作，若干循环后，序列会明显增多解析：选AD。根据题图分析可知在该DNA分子中，a酶与b酶的识别序列都是2个，A正确；图中显示两个酶的识别序列不同，但是切割后露出的黏性末端相同，a酶与b酶切出的黏性末端可以相互连接，B错误；a酶与b酶切断的化学键都是磷酸二酯键，C错误；a酶和b酶切割后形成的黏性末端相同，在DNA连接酶的作用下可连接形成。所以用这两种酶和DNA连接酶对该DNA分子进行反复切割、连接操作，若干循环后，所得DNA分子中序列会明显增多，D正确。10(2019扬州高二模拟)下图为某种质粒的简图，小箭头所指分别为限制酶EcoR、
32、BamH的酶切位点，P为转录的启动部位。已知目的基因的两端有EcoR、BamH的酶切位点，受体细胞为无任何抗药性的原核细胞。下列叙述正确的是()A将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoR酶切，在DNA连接酶的作用下，由两个DNA片段之间连接形成的产物有三种BDNA连接酶的作用是将酶切后得到的黏性末端连接起来，形成一个重组质粒时形成两个磷酸二酯键C为了防止目的基因反向粘连和质粒自行环化，酶切时可选用的酶是EcoR和BamHD能在含青霉素的培养基中生长的受体细胞表明该目的基因已成功导入该细胞解析：选AC。如果将含有目的基因的DNA与质粒分别用EcoR酶切，那么酶切后二者的黏性末端相同，在DNA连
33、接酶的作用下，由两个DNA片段之间连接形成的产物有三种，只有一种符合基因工程的需求；DNA连接酶的作用是将酶切后的目的基因和质粒的黏性末端连接起来形成重组质粒，该过程形成4个磷酸二酯键；为了防止目的基因和质粒自行环化，酶切时可选用的酶是EcoR和BamH，这样切割后得到的DNA片段两侧的黏性末端不同；由于受体细胞为无任何抗药性的原核细胞，因此能在含青霉素的培养基中生长，可能是受体细胞成功导入了目的基因，也可能是只导入了不含目的基因的载体。三、非选择题11下图表示两种限制酶识别DNA分子的特定序列，并在特定位点对DNA分子进行切割的示意图，请回答以下问题：(1)图中甲和乙代表_。(2)EcoR、
34、Hpa代表_。(3)图中甲和乙经过相应操作均形成两个片段，切口的类型分别为_、_。甲中限制酶的切点是_之间，乙中限制酶的切点是_之间。(4)由图解可以看出，限制酶的作用特点是_。(5)如果甲中G碱基发生基因突变，可能发生的情况是_。解析：(1)由图示看出，甲和乙代表由脱氧核苷酸构成的不同的DNA片段。(2)EcoR和Hpa能切割DNA分子，说明它们是限制酶。(3)甲中切点在G、A之间，切口在识别序列中轴线两侧，形成黏性末端；乙中切点在A、T之间，切口在识别序列中轴线处，形成平末端。(4)(5)限制酶能识别DNA分子的特定核苷酸序列，并从特定位点切割DNA分子。当特定核苷酸序列变化后，就不能被相
35、应限制酶识别。答案：(1)有特定脱氧核苷酸序列的DNA片段(2)两种不同的限制酶(3)黏性末端平末端G、AA、T(4)能识别双链DNA分子的特定脱氧核苷酸序列，并从特定的位点将DNA分子切开(5)限制酶不能识别切割位点12根据基因工程的有关知识，回答下列问题：(1)限制酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有_和_。(2)质粒载体用限制酶X(识别的序列由6个核苷酸组成)切割后产生的片段如下：AATTCG GCTTAA该酶识别的序列为_，切割的部位是_。(3)为使切割后的载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用限制酶X切割外，还可用限制酶Y切割，两种酶共同的特点是_。(4)按其来源不同，
36、基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即_DNA连接酶和_DNA连接酶，其中后者只能连接一种末端。(5)基因工程中除质粒外，_和_也可作为载体。解析：(1)限制酶切割DNA分子后可产生两种类型的末端，即平末端和黏性末端。(2)将图中片段两端的黏性末端对接后可以看出限制酶X识别的序列为6个核苷酸组成的GAATTC，互补链是CTTAAG，切割的位点为G和A之间的磷酸二酯键。(3)质粒载体可以用限制酶X切割，也可以用另一种限制酶切割，说明该酶与限制酶X切割产生的黏性末端相同或者是互补。(4)基因工程使用的DNA连接酶，按来源可分为Ecoli DNA连接酶和T4 DNA连接酶，其中只能连接黏性末端的是
37、Ecoli DNA连接酶。(5)基因工程的载体有质粒、噬菌体的衍生物和动植物病毒。答案：(1)黏性末端平末端(2)GAATTC或CTTAAGG和A之间的磷酸二酯键(3)两种限制酶切割后形成的黏性末端相同或互补(4)T4Ecoli(5)噬菌体的衍生物动植物病毒13下图所示，质粒pZHZ9上含有X抗生素抗性基因(XR)和Y抗生素抗性基因(YR)。其中，XR内部含有限制酶Kas识别序列，YR内部含有限制酶Fse、Hpa、Nae、Ngo MIV识别序列，五种酶的识别序列如图B(表示切割位点)，且这些识别序列在整个质粒上均仅有一处，目的基因内部不存在这些识别序列。请回答下列有关遗传信息传递与表达的问题：
38、(1)若要将结构如图C所示的目的基因直接插入YR内形成重组质粒pZHZ10，则pZHZ9需用限制酶_切开。(2)将上述切开的质粒溶液与目的基因溶液混合，加入DNA连接酶连接后，进行大肠杆菌受体细胞导入操作。之后，受体细胞的类型(对两种抗生素表现出抗性R或敏感性S)包含_(多选)。AXR、YR BXR、YSCXS、YR DXS、YS解析：(1)图B中的限制酶Ngo MIV识别并切割形成的黏性末端与目的基因两端的黏性末端序列相同，所以pZHZ9需用限制酶Ngo MIV切割。(2)将切开的质粒溶液与目的基因溶液混合后，加入DNA连接酶，构建基因表达载体，培养液中会出现三类情况：第一类是目的基因和质粒
39、结合，这种基因表达载体上的YR抗性基因破坏，成为XR、YS类型质粒；第二类是质粒自身将切口处连接起来，恢复为正常质粒，具有XR、YR两个抗性基因；第三类是目的基因和目的基因连接。进行大肠杆菌受体细胞导入的操作后，若导入了第一类基因表达载体，则细菌的类型为XR、YS，若导入了第二种类型的质粒，则细菌的类型为XR、YR，若没有导入质粒，则细菌的类型为XS、YS。答案：(1)Ngo MIV(2)ABD14通过DNA重组技术使原有基因得以改造的动物称为转基因动物。运用这一技术使羊奶中含有人体蛋白质，下图表示这一技术的基本过程。在该工程中所用的基因“分子手术刀”能识别的序列和切点是GGATCC，请回答下列问题：(1)从羊染色体中“剪下”羊蛋白质基因的酶是_。人体蛋白质基因“插入”后连接在羊体细胞染色体中时需要的酶是_。(2)请在图中画出质粒被切割形成黏性末端的过程图。(3)人体蛋白质基因之所以能“插入”到羊的染色体内，是因为_。解析：在基因工程中用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶。在对载体和目的基因进行切割时，一定要用同一种限制酶，才能切出相同的黏性末端。当插入目的基因时，常用DNA连接酶使二者之间形成磷酸二酯键而连接起来。答案：(1)限制酶DNA连接酶(2)(3)人的遗传物质(基因)与羊的遗传物质都为DNA，其物质组成和空间结构相同高考资源网版权所有，侵权必究！
