1、1下表中甲、乙分别是分离两种土壤中微生物的培养基的配方，图丙所示为相关分离过程，回答下列问题(注：水解酪素，即水解酪蛋白，由酪蛋白水解得到)：KH2PO41.4 g纤维素粉5.0 gNa2HPO42.1 gNaNO31.0 gMgSO47H2O0.2 gNa2HPO41.2 g葡萄糖10.0 gKH2PO40.9 g尿素1.0 gMgSO47H2O0.5 g琼脂15.0 gKCl0.5 g酵母膏0.5 g水解酪素0.5 g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL甲乙丙(1)从功能上看，甲培养基属于_。从物理性质上看，甲培养基属于_。其中提
2、供氮源的物质是_。(2)如果将乙培养基配制成固体培养基，则在该培养基上长出的菌落是否都能分解纤维素？_。如果培养基中加入_可以筛选出具有分解纤维素能力的菌株，同时透明圈越_(大、小)，表示该菌分解纤维素的能力越强。(3)为了计数微生物的数量，图丙采用_法进行接种培养计数，除此之外，还可以采用_法进行计数。其中前一种计数方法所得结果要比后一种计数方法所得结果_(大、小)。(4)一位同学利用图丙的方法步骤在4个平板培养基上分别接种0.1 mL土壤稀释液，培养后菌落数分别为180、155、176、129个，则1 mL原土壤样液中微生物数量约为_。解析：培养基应包括水、无机盐、碳源、氮源。有无琼脂是判
3、断培养基是否为固体培养基的依据，碳源和氮源则是判断培养基功能的主要依据，也是选择培养基的筛选原理。(1)由于甲配方中存在琼脂，且只有尿素含有N，故从物理性质上看，其属于固体培养基；从功能上看，其属于选择培养基。(2)因培养基中除纤维素粉外，还有水解酪素能提供碳源，且纤维素被分解后产生的糖类也可为其他微生物生长提供碳源，故能在该培养基上生长的微生物不一定都能分解纤维素。但通过加入刚果红可以筛选能分解纤维素的菌株，同时也可通过透明圈大小判断菌株分解纤维素的能力，透明圈越大，纤维素被分解的就越多，说明菌株分解纤维素的能力越强。(3)根据图丙中菌株的分布可以判断是采用了稀释涂布平板法进行接种培养计数的
4、，还可采用血球计数板计数法进行计数。由于可能存在多个微生物共同形成一个“菌落”的情况，故前一种计数方法所得结果要比后一种计数方法所得结果小。(4)4个平板中菌落的平均数量为160个，浓度为1 600个/mL，由题图可知，土壤样液被稀释了125倍，故原始样液中微生物的密度为1 600个/mL1252.0105个/mL。答案：(1)选择培养基固体培养基尿素(2)否刚果红大(3)稀释涂布平板血球计数板计数小(4)2.0105个2(2014高考四川卷)有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示。
5、(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、_四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是_。(2)与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和_，这些植物激素一般需要事先单独配制成_保存备用。(3)纯化菌株时，通常使用的划线工具是_。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其它划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有_。(4)为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是_，该实验设计是否合理？为什么？_。解析：(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质包括
6、水、碳源、氮源和无机盐；在培养基中加入苯磺隆作为唯一碳源，可将只能利用此碳源的菌种筛选出来。(2)植物组织培养基与微生物培养基相比，常常需要添加植物激素，包括生长素和细胞分裂素；这些植物激素事先按一定的质量浓度单独配成母液保存备用。(3)纯化菌株时，通常用接种环进行划线操作；第二区域划第一条线时，接种环灼烧后未冷却，致使所划第一条线上无菌落。若第二次划线未从第一区域末端开始，则第二划线区域无菌种。(4)由图乙可知本实验的目的是探究能降解苯磺隆的物质是否是该菌种所产生的蛋白质。为使实验设计更合理还需再设置一个对照组，将蛋白酶溶液改为等量的蒸馏水，其余设置不变。答案：(1)氮源和无机盐只有能利用苯
7、磺隆的微生物能正常生长繁殖(2)细胞分裂素母液(3)接种环接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始(4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质不合理，缺少空白对照3如图为利用农作物废弃物秸秆代替粮食作为原料生产燃料乙醇的主要技术及废弃物利用的流程图。请回答：(1)图中所需微生物可从土壤中获取，获取该微生物的过程称为微生物的_，选择培养基应以_为唯一碳源。纯化菌种时，将筛选获得的菌液稀释后用_法接种到培养基上。在筛选纤维素分解菌的过程中，常采用_法，_能与培养基上的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物就无法形成，培养基上就会出现以纤维素分解菌为中心的_，可以此来筛选纤维素分解菌。(2
8、)图中酒精发酵阶段接种的微生物是_，酒精发酵时一般将温度控制在_。在培养微生物的过程中，对培养基和接种环采用的灭菌方法分别是_、_。乙醇纯化一般需要使用_法。(3)图中产生的农作物废弃物，主要成分为木质素、纤维素和半纤维素，但是酵母菌无法直接利用农作物废弃物，原因是其_。(4)若要利用图示中的发酵产物生产醋酸，常用的菌种为_，则下一阶段的发酵过程中应通入_，温度严格控制在_。解析：(1)过程加入了微生物，其作用是使固体的秸秆颗粒分解，从土壤中获取所需微生物的过程称为微生物的分离；由于分离的微生物能分解纤维素，故选择培养基应以纤维素为唯一碳源；纯化菌种时，将菌液稀释后用稀释涂布平板法接种到培养基
9、上；在筛选纤维素分解菌时，常利用刚果红染色法，可通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。(2)酒精发酵阶段接种的微生物是酵母菌，20 左右最适合酵母菌繁殖，故酒精发酵时一般将温度控制在1825 。在培养微生物的过程中，对培养基和接种环采用的灭菌方法分别是高压蒸汽灭菌和灼烧灭菌。纯化乙醇时，一般需要使用蒸馏法。(3)由于酵母菌细胞缺乏能分解木质素、纤维素和半纤维素的酶系统，故农作物废弃物无法被酵母菌直接利用。(4)酵母菌发酵产物主要为乙醇，以乙醇为原料生产乙酸的过程为醋酸发酵，醋酸菌代谢类型为异养需氧型，故发酵过程中应通入无菌空气，并将温度控制在3035 之间。答案：(1)分离纤维素稀释涂布平板刚
10、果红染色刚果红透明圈(2)酵母菌1825高压蒸汽灭菌灼烧灭菌蒸馏(3)缺乏相应分解酶系(或缺乏能分解木质素、纤维素和半纤维素的酶)(4)醋酸菌无菌空气 30354莠去津是一种含氮农药，在土壤中不易降解，为修复被其污染的土壤，可按下面程序选育能降解莠去津的细菌(目的菌)。请据图回答：(已知莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明) (1)由图推断，从A瓶到C瓶液体培养的过程称为_，目的是_。(2)在将C瓶菌种接种到固体培养基之前通常要进行_，将菌种接种到固体培养基的方法有平板划线法和_法，从图中看本实验采用的是_(填“前者”或“后者”)。(3)一段时间后，培养基出现无透明圈和有透明圈
11、两种菌落，我们筛选的目的菌是_菌落中的细菌，该菌落生长所需的氮元素主要来源于_。(4)为弄清固体培养基中的非目的菌来自C瓶菌种还是培养基，应如何设置对照组？_。解析：(1)图中从A瓶到C瓶液体培养过程为选择培养，目的是初步选择能降解莠去津的细菌(目的菌)并增加其数量。(2)将菌种接种到固体培养基的方法有平板划线法和稀释涂布平板法两种，由图中固体培养基上的菌落分布比较均匀可知，该接种方法是稀释涂布平板法，包括梯度稀释操作和涂布平板操作。(3)根据题目信息“莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明”可知，能够降解莠去津的目的菌分解莠去津，使菌落周围出现透明圈，因此可以选择菌落周围存在透
12、明圈的细菌。由于培养基中只有莠去津一种氮源，因此分解莠去津的微生物所需的氮源主要由莠去津提供。(4)为弄清固体培养基中的非目的菌来自C瓶菌种还是培养基，应设置灭菌后不接种菌种的空白培养基，与实验组放在相同条件下培养，若培养基上无菌落出现，则非目的菌一定来自C瓶菌种，若培养基上出现菌落，则说明非目的菌可能来自培养基。答案：(1)选择培养初步选择能降解莠去津的细菌(目的菌)并增加其数量(2)梯度稀释稀释涂布平板后者(3)有透明圈莠去津(4)配制的培养基灭菌后不接种菌种，与实验组放在相同条件下培养5某科研机构研究了腐乳生产过程中不同浓度的食盐对腐乳中氨基酸含量和pH的影响，其中部分数据如下图所示。请
13、回答下列问题：(1)腐乳生产过程中有多种微生物的参与，其中起主要作用的是_。(2)腐乳制备过程中，加盐可以_，使豆腐块变硬。(3)由图可知，后期发酵过程中，随着时间的延长，腐乳中氨基酸的含量将_，蛋白质含量呈_趋势。这是由于前期发酵阶段产生了大量的_，在后期发酵阶段将豆腐中的蛋白质分解为小分子的氨基酸。(4)由图可知，后期发酵到60天时，盐度为_的腐乳已经腐败，说明_。解析：(1)参与腐乳生产的微生物主要是毛霉。毛霉产生的蛋白酶可以将蛋白质分解成小分子的游离氨基酸。(2)在腐乳制备过程中，加盐可以使豆腐中的水析出，使豆腐块变硬，同时也可以抑制其他微生物的生长。(3)由图可知，在后期发酵过程中，
14、氨基酸的含量上升，则蛋白质的含量会下降，蛋白质含量下降的原因是由于蛋白酶将其分解成游离氨基酸。(4)由图可知，后期发酵到60天时，盐浓度为5%的腐乳已经腐败，这是因为盐浓度过低，不足以抑制其他微生物的生长。答案：(1)毛霉(2)析出豆腐中的水 (3)上升下降 蛋白酶 (4)5%盐浓度过低，不足以抑制微生物的生长，导致腐乳腐败变质6(2014高考海南卷)已知泡菜中亚硝酸盐含量与泡制时间有关。为了测定不同泡制天数泡菜中亚硝酸盐的含量，某同学设计了一个实验，实验材料、试剂及用具包括：刻度移液管、比色管、不同浓度的亚硝酸钠标准溶液、亚硝酸盐的显色剂、不同泡制天数的泡菜滤液等。回答相关问题：(1)请完善
15、下列实验步骤。标准管的制备：用_和显色剂制成颜色深浅不同的系列标准管。样品管的制备：用刻度移液管分别吸取一定量的_，加到不同的比色管中，然后在各个比色管中加入等量的显色剂进行显色，得到样品管。将每个_分别与系列标准管进行比较，找出与样品管颜色深浅_的标准管，该管中亚硝酸钠含量即代表样品管中的亚硝酸盐含量，记录各样品管亚硝酸盐的含量。(2)右图表示的是泡菜中_趋势。(3)泡菜制作过程中产酸的细菌主要是_(填“醋酸杆菌”或“乳酸菌”)。解析：(1)亚硝酸盐可与显色剂发生颜色反应，根据颜色的深浅可确定亚硝酸盐的含量。用不同浓度的亚硝酸钠标准溶液与显色剂反应可制成颜色深浅不同的一系列标准管，不同颜色深
16、浅的标准管对应的亚硝酸钠含量是已知的；用刻度移液管分别吸取一定量的不同泡制天数的泡菜滤液与等量的显色剂反应，制备一系列的样品管，将样品管与标准管进行颜色比对，找到与样品管颜色深浅最接近的标准管，该管中亚硝酸钠含量即可代表样品管中的亚硝酸盐含量。(2)由图可知，横坐标为时间，纵坐标为亚硝酸盐含量，因此该曲线表示泡菜中亚硝酸盐含量随泡制时间的变化趋势。(3)制泡菜时使用的微生物是乳酸菌。答案：(1)不同浓度的亚硝酸钠标准溶液不同泡制天数的泡菜滤液样品管相同(相近)(2)亚硝酸盐含量的变化(3)乳酸菌7苹果醋是指以苹果汁经发酵而成的苹果原醋再兑以苹果汁等原料而制成的饮品。既有淡淡的醋味，又有果汁的香
17、甜，喝起来非常爽口。下图是苹果醋的制作简图，据图回答：鲜苹果汁高纯度苹果酒苹果原醋苹果汁等原料苹果醋(1)过程中使用到的微生物是_，属于生态系统成分中的_。若要检测是否产生了酒精可用_试剂进行检测。(2)过程中使用到的微生物是_，该微生物的代谢类型是_型。该微生物可以从食醋中分离纯化获得，方法是：第一步：配制培养基。该培养基必须含有微生物生长所需要的_等基本营养成分。第二步：灭菌。对培养基用_方法进行灭菌。第三步：接种。微生物常用的接种方法有_、_。第四步：培养。温度控制在_。第五步：挑选符合要求的菌落。解析：(1)过程利用了酵母菌无氧呼吸分解葡萄糖产生酒精的原理。酵母菌属于生态系统中的分解者
18、。(2)过程中醋酸菌利用培养液中的乙醇生成了醋酸。醋酸菌的代谢类型是异养需氧型。对微生物进行培养时，要对培养用具、培养基进行灭菌处理。醋酸菌的最适生长温度为3035 ，故应将培养温度控制在3035 范围内。答案：(1)酵母菌分解者重铬酸钾(2)醋酸菌异养需氧水、碳源、氮源、无机盐高压蒸汽平板划线法稀释涂布平板法3035 8木糖醇可作为甜味剂，还具有抗龋齿的特性。常被用来作为食品甜味剂或医疗上给糖尿病患者作糖的替代品。用微生物生产木糖醇副产物少且含量低，易于分离提纯。为了筛选木糖醇高产菌株，某研究小组设计了下表所示的培养基。请分析回答：营养物质含量(g)木糖20蛋白胨20酵母膏0.5MgSO47
19、H2O0.2CaCl22H2O0.1KH2PO42(NH4)2SO45水定容至1 000 mL(1)按照物理性质划分，该培养基为_培养基。若要利用该培养基获得木糖醇高产菌株的菌落，则应添加的成分是_。该培养基中主要的碳源和氮源分别是_。(2)为了防止杂菌污染，该培养基溶化后要进行_，常用的方法是_。(3)实验菌种通常从木糖厂废水、废弃的木糖液污泥中采集，说明木糖醇高产菌株主要生活在_的环境中。(4)为了快速获得木糖醇高产菌株，通常采用摇床培养的方法，由此说明木糖醇高产菌株的异化作用类型为_，此外，摇床培养的优点还有_。(5)若要检测培养液中菌体的数量，通常将菌液用_接种到固体平板培养基表面，根
20、据_估算菌液中菌体的数量。解析：(1)由表中成分可知，配方中无凝固剂，因此属于液体培养基。若要获得木糖醇高产菌株的菌落，则应在固体培养基上进行培养，因此须加入凝固剂(常用的是琼脂)。该培养基中主要的碳源为木糖，而主要的氮源则为蛋白胨。(2)防止杂菌污染的措施是多方面的，从培养基的角度分析，应保证无杂菌污染，因此培养基溶化后要进行高压蒸汽灭菌。(3)从自然界中寻找目的菌时应根据微生物对生存环境的需要到相应环境中去找，本题所用菌种为木糖醇高产菌株，因此应分布在富含木糖的环境中。(4)摇床培养可以增加培养液中溶解氧的浓度，这样的条件有利于需氧型微生物的生长，因此根据摇床培养可以快速获得大量的木糖醇高产菌株，由此可以判断木糖醇高产菌株的异化作用类型为需氧型。此外摇床培养还能使菌体与培养液充分接触，充分利用营养物质，因此摇床培养通常应用于发酵生产的过程中。(5)要利用固体平板培养基对微生物计数，则应采用稀释涂布平板法进行接种，原理是当稀释度足够高时，培养基上的一个菌落来自一个活菌，因此可以根据培养基上的菌落数估算菌液中菌体的数量。答案：(1)液体琼脂(凝固剂) 木糖、蛋白胨(2)灭菌高压蒸汽灭菌法(3)富含木糖(4)需氧型使菌体与培养液充分接触，充分利用营养物质(5)稀释涂布平板法菌落数
