1、考点一微生物的利用1图解微生物的培养、分离与计数(填空)2把握微生物分离与计数的两个实例(填空)(1)土壤中分解尿素的细菌的分离与计数：筛选菌株：利用选择培养基筛选菌株。测定微生物数量的常用方法：活菌计数法和显微镜直接计数。过程：土壤取样样品稀释微生物的培养与观察。鉴定方法：含酚红指示剂以尿素为唯一氮源的培养基细菌出现红色透明圈，则该菌能分解尿素。(2)分解纤维素的微生物的分离：实验原理：即：可通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。流程：土壤取样选择培养梯度稀释涂布平板挑选菌落。(1)倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上(2015江苏卷，T19B)()(2)某研究小组从有机废
2、水中分离微生物用于废水处理。接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养()(2013江苏卷，T18C)(3)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法()(4)在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌()(5)检测土壤中细菌总数实验操作中，确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数()(6)培养微生物的培养基分装到培养皿后进行灭菌()1(2016全国卷)空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：配制培养基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、X、
3、H2O)；制作无菌平板；设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；将各组平板置于37 恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。回答下列问题：(1)该培养基中微生物所需的氮来源于_。若要完成步骤，该培养基中的成分X通常是_。(2)步骤中，实验组的操作是_。(3)若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为36个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了_现象。若将30(即366)个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法_(填“正确”或“不正确”)。解析：(1)牛肉膏和蛋白胨中均含有氮元素，因此微生物所需的氮来源于牛肉膏和蛋白胨。若要完成步骤，需要进行倒
4、平板操作，用到的是固体培养基，所以培养基中要有琼脂。(2)该实验的空白对照组为不进行处理的无菌平板，实验组的操作为将各无菌平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露相同时间。(3)若空白对照组的平板上出现了菌落，说明实验过程中出现了污染现象。空白对照组的一个平板上出现了6个菌落，导致实验变量不唯一，不能确定实验组平板上的菌落是否仅由教室内不同高度空气中的微生物形成，因此不能求出实验组的菌落平均值。答案：(1)牛肉膏、蛋白胨琼脂(2)将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间(3)污染不正确2从土壤中分离分解尿素的细菌的一般过程为“采集土样稀释纯化分离性能测定”，下表为分离
5、分解尿素的细菌所用的培养基配方。请回答下列有关问题：KH2PO41.4 g葡萄糖10.0 gNa2HPO42.1 g尿素1.0 gMgSO47H2O0.2 g琼脂15.0 g蒸馏水定容至1 000 mL(1)该培养基含有培养微生物所需要的各种基本成分，其中最主要的碳源是_，氮源是_。获得纯净分解尿素的细菌的关键是_。(2)鉴定某种细菌是否能够分解尿素，应该在培养基中加入_指示剂，若该细菌能够分解尿素，则指示剂变为_色，原理是_。(3)微生物分离纯化的方法通常有平板划线法和稀释涂布平板法。如果要统计细菌的数目，只能用_法，在下面所示的四种菌落分布图中，不可能是用该方法得到的是_(填字母)。解析：
6、(1)微生物培养的培养基的基本成分是碳源、氮源、水、无机盐。题中表格内显示的主要碳源是葡萄糖，氮源是尿素。获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。(2)在细菌分解尿素的过程中，细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的pH升高，从而使酚红指示剂变红。(3)分离纯化微生物常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，计数时只能用稀释涂布平板法。答案：(1)葡萄糖尿素防止外来杂菌的入侵(2)酚红红在细菌分解尿素的过程中，细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的pH升高(3)稀释涂布平板D微生物纯化培养的方法比较(1)平板划线操作：(2)稀释涂布平板操作：先将菌液进行一系列梯度稀释后涂布平板，在稀
7、释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落。如图所示：考点二传统发酵技术的应用1果酒和果醋的制作(填空)2腐乳的制作(填空)(1)制作原理：(2)实验流程及影响因素：3泡菜的制作(填空)(1)勤向腐乳坯表面喷水，有利于毛霉菌丝的生长()(2015江苏卷，T17C)(2)泡菜腌制利用了乳酸菌的乳酸发酵()(3)腐乳制作利用了毛霉等微生物的蛋白酶和脂肪酶()(4)某研究性学习小组以樱桃番茄为材料进行果酒、果醋发酵实验。先供氧进行果醋发酵，然后隔绝空气进行果酒发酵()(5)在制作果醋时，如果条件适宜，醋酸菌可将葡萄汁中的糖分解成醋酸()(6)在制作腐乳时，
8、将长满毛霉的豆腐装瓶腌制时，底层和近瓶口处需加大用盐量()(7)在家庭中用鲜葡萄制作果酒时，让发酵装置接受光照并放在45 处()1(2017全国卷)豆豉是大豆经过发酵制成的一种食品。为了研究影响豆豉发酵效果的因素，某小组将等量的甲、乙两菌种分别接入等量的A、B两桶煮熟大豆中并混匀，再将两者置于适宜条件下进行发酵，并在32 h内定期取样观测发酵效果。回答下列问题：(1)该实验的自变量是_、_。(2)如果发现发酵容器内上层大豆的发酵效果比底层的好，说明该发酵菌是_。(3)如果在实验后，发现32 h内的发酵效果越来越好，且随发酵时间呈直线上升关系，则无法确定发酵的最佳时间；若要确定最佳发酵时间，还需
9、要做的事情是_。(4)从大豆到豆豉，大豆中的成分会发生一定的变化，其中，蛋白质转变为_，脂肪转变为_。解析：(1)实验使用甲、乙两种菌种，并在32 h内定期取样观测发酵效果，所以该实验的自变量是菌种和发酵时间。(2)如果发现发酵容器内上层大豆的发酵效果比底层的好，说明该发酵菌是好氧型微生物。(3)因“32 h内的发酵效果越来越好，且随发酵时间呈直线上升关系”，说明发酵的最佳时间可能超过32 h，故可继续延长发酵时间，定期取样观测发酵效果，以确定最好的发酵效果所对应的时间，此时间即为最佳发酵时间。(4)从大豆到豆豉，在相关微生物的作用下，大豆中的蛋白质转变为肽和氨基酸，脂肪转变为甘油和脂肪酸。答
10、案：(1)菌种发酵时间(2)好氧菌(3)延长发酵时间，观测发酵效果，最好的发酵效果所对应的时间即为最佳发酵时间(4)氨基酸和肽脂肪酸和甘油2如图是几种食品发酵的实验装置或操作步骤。请回答下列问题：(1)图甲是制作果酒的装置图。图中发酵瓶可用体积分数为70%的酒精进行_(填“消毒”或“灭菌”)，酒精发酵时一般将温度控制在_ 。(2)图乙是制作果醋的装置图。制作果醋过程中要不断通入空气，原因是_。当缺少糖源时，利用乙醇产生发酵产物的途径是_。(3)图丙是制作腐乳的操作步骤。参与豆腐发酵的微生物有多种，其中起主要作用的是_。将豆腐块加盐腌制能够_，避免豆腐块腐败变质。(4)图丁是制作泡菜的装置图。发
11、酵坛中要加入新鲜的蔬菜和盐水，其中盐水中清水和盐的质量比是_。向坛盖边沿的水槽中注满水的目的是保证发酵坛中的_环境。解析：(1)制作果酒时，发酵瓶可用体积分数为70%的酒精进行消毒。酒精发酵时一般将温度控制在1825 。(2)制作果醋所用的微生物是醋酸菌，醋酸菌属于好氧微生物，缺乏氧气会死亡，所以要不断向装置中通入空气(或氧气)。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇先转化为乙醛，再将乙醛转化为醋酸。(3)腐乳制作过程中，多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是毛霉。在制作腐乳的过程中，加盐的目的是析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬，同时能抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质。(4)制作泡菜所用盐水中清
12、水和盐的质量比是41。向坛盖边沿的水槽中注满水是为了使坛内形成一个无氧环境。答案：(1)消毒1825(2)制作果醋所用的微生物是醋酸菌，醋酸菌属于好氧微生物，缺乏氧气会死亡乙醇变为乙醛，乙醛再变为醋酸(3)毛霉抑制微生物的生长，析出豆腐块中的水分(4)41无氧控制杂菌的四大措施(1)通过发酵条件控制杂菌。无氧发酵时的无氧环境可以抑制好氧菌。乳酸发酵形成的酸性环境抑制杂菌繁殖。(2)利用盐控制杂菌，如腐乳的制作。(3)利用酒精控制杂菌，如果酒、腐乳的制作。(4)利用香辛料(调味料)控制杂菌，如腐乳、泡菜的制作。考点三生物技术在其他方面的应用1图解生物技术在其他方面的应用(填空)2归纳DNA粗提取
13、与鉴定(填空)3比较植物有效成分的提取(填表)物质方法原理步骤玫瑰精油水蒸气蒸馏法利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油带出来水蒸气蒸馏分离油层(加NaCl)除水过滤(加无水Na2SO4)橘皮精油压榨法通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油石灰水浸泡、漂洗压榨、过滤、静置再次过滤胡萝卜素萃取法使提取物溶解在有机溶剂中，蒸发后得到提取物粉碎、干燥萃取、过滤浓缩(1)用不同浓度的NaCl溶液反复溶解与析出DNA可去除蛋白质()(2)薄荷油是挥发性物质，提取薄荷油时应选用干薄荷叶做原料，可采用水蒸气蒸馏法提取()(3)用萃取法提取胡萝卜素的主要步骤是：干燥、粉碎、萃取、浓缩、过滤()(4)在胡萝卜颗粒的加热
14、干燥过程中，温度过高和时间过长会导致胡萝卜素分解()(5)提取的胡萝卜素可通过纸层析法进行鉴定，在鉴定过程中不需要对照()1真核生物细胞内，DNA和蛋白质以及一些RNA等混杂在一起，难以分离。生物兴趣小组的同学为了获得纯度相对较高的DNA展开了实验探究。(1)分离各种物质的基本思路是根据DNA和其他物质理化性质的不同而采取一定的方法，如图是从各种物质之间_的差异角度开展研究：a取鸡血细胞悬液10 mL，加蒸馏水20 mL，同时用玻璃棒_(填“轻轻搅拌”或“快速搅拌”)。过滤，取滤液，转移到塑料材质的大烧杯中。b沿大烧杯内壁持续、缓慢地加入饱和硫酸铵溶液，用玻璃棒沿一个方向_(填“轻轻搅拌”或“
15、快速搅拌”)，同时不断收集析出的物质。如图是根据鸡血中几种物质的析出情况绘制的曲线，请据图分析：c如果只收集纤维蛋白，可采取的措施是_。d先用饱和度40%的硫酸铵溶液析出绝大部分纤维蛋白和大部分球蛋白，再在饱和度约为_的硫酸铵溶液中析出DNA(既保证DNA提取量较大又避免其他杂质过多)，与此同时析出的物质还有_。(2)如果要进一步去掉其他杂质，尽可能提高获得的DNA纯度，可采取的两种办法有：将DNA与球蛋白的混合物加入到_中，收集再次析出物；用_处理溶有DNA与蛋白质的溶液。解析：(1)分析曲线图可知，不同物质在不同浓度的硫酸铵溶液中析出的相对量有所差别，即分离各种物质的基本思路是根据DNA和
16、其他物质之间溶解度的差异开展研究。加入蒸馏水使鸡血细胞胀破，为使细胞快速并充分破裂，应用玻璃棒快速搅拌；当物质开始析出后，为了防止目的产物被破坏，故要轻轻搅拌。由题图中看出，纤维蛋白在硫酸铵饱和度达到20%之前已经开始析出，随着硫酸铵饱和度增加，纤维蛋白的溶解度逐渐减小，在硫酸铵饱和度为30%时析出最快，且当硫酸铵饱和度超过30%后球蛋白也逐渐析出，因此如果只收集纤维蛋白，可以在硫酸铵饱和度达到30%之前收集析出物。在饱和度为40%的硫酸铵溶液中，纤维蛋白全部析出，部分球蛋白也析出，再用饱和度约为50%的硫酸铵可析出大量DNA和部分球蛋白。(2)为进一步提高获得的DNA纯度，可将DNA与球蛋白
17、的混合物加入到冷却的酒精中，由于DNA不溶于酒精，而其他杂蛋白可溶于酒精，因此收集再次析出物即可获得更高纯度的DNA；另外，还可用嫩肉粉(木瓜蛋白酶)处理溶有DNA与蛋白质的溶液，由于酶具有专一性，此时蛋白质杂质可以被酶水解，进而分离出纯度较高的DNA。答案：(1)溶解度快速搅拌轻轻搅拌在硫酸铵浓度达到30%之前收集析出物50%球蛋白(2)冷却酒精嫩肉粉(木瓜蛋白酶)2下面是与植物芳香油的提取相关的问题，请回答：(1)玫瑰精油的提取可使用图1所示装置，这种方法叫_法；收集的液体_(填“是”或“不是”)纯的玫瑰精油。(2)橘皮精油的提取原料是橘皮，但橘皮易焦糊，宜采用_法提取橘皮精油。(3)胡萝
18、卜素是_色的结晶。从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的是_法，加热时应该注意控制_，一般情况下，提取胡萝卜素时，提取效率与原料颗粒的含水量成_比。(4)将提取的胡萝卜素粗品通过纸层析进行鉴定，图2为鉴定结果示意图，请据图回答，A、B、C、D四点中，属于标准样品的样点是_。解析：(1)从图1装置可以看出，玫瑰精油的提取方法为蒸馏法；蒸馏后得到的蒸馏液不是纯的玫瑰精油，而是油水混合物。(2)橘皮易发生焦糊，因此应该采用压榨法提取橘皮精油。(3)胡萝卜素是橘黄色的结晶；从胡萝卜中提取胡萝卜素常用的方法是萃取法；由于高温时胡萝卜素会分解，因此加热时要注意控制好温度和时间；提取胡萝卜素时，原料中的含水量会影响提
19、取效率，因此提取效率与含水量成反比。(4)分析题图2可知，A、D为标准样品的样点。答案：(1)蒸馏不是(2)压榨(3)橘黄萃取温度和时间反(4)A、D植物有效成分提取应注意的五个关键点(1)水蒸气蒸馏过程中可用明火加热，萃取过程应该避免明火加热，采取水浴加热，这是因为有机溶剂都是易燃物，直接用明火加热容易引起燃烧、爆炸。(2)在用水蒸气蒸馏法制取玫瑰精油的过程中，油水混合物中要加入NaCl的目的是增大水的密度，有利于玫瑰精油与水的分层。加入无水Na2SO4的目的是吸收精油中残留的水分。(3)蒸馏时若温度太高，时间太短，产品品质较差，若提高产品品质，可适当延长蒸馏时间。(4)橘皮压榨前，可在石灰
20、水中浸泡10 h以上，既防止压榨时滑脱，提高出油率，又不会在过滤时堵塞筛眼。(5)萃取时一般来说原料颗粒小，萃取温度高，时间长，则提取的物质能够充分溶解，萃取效果较好。1(2017全国卷)某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：(1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生_。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是_。但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是_(答出两点即可)。(2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择_(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素NH4NO3”)作为氮源，不选择其他两组的原因是
21、_。(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有_(答出两点即可)。解析：(1)土壤中的某些细菌之所以能够分解尿素，是因为它们能产生脲酶。尿素分解菌是异养生物，不能利用CO2来合成有机物，必须利用现成的有机物(如葡萄糖)作为碳源；葡萄糖通过呼吸作用被分解时，能为细胞生命活动提供能量，同时，葡萄糖还可以转化成脂肪、某些氨基酸等物质，所以进入细菌体内的葡萄糖能为其他有机物的合成提供原料。(2)选择培养基只是允许特定种类的微生物(目的微生物)生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。本实验的目的菌是可分解尿素的细菌，因此配制的培养基应只允许尿素分解菌生长，NH4
22、NO3可以作为所有细菌的氮源，培养基中如含有NH4NO3，将不能起到筛选作用。(3)KH2PO4和Na2HPO4能为细菌生长提供钾盐、钠盐和磷酸盐，而H2PO/HPO可作为缓冲剂，使培养基中pH保持相对稳定。答案：(1)脲酶分解尿素的细菌是异养生物，不能利用CO2来合成有机物为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料(2)尿素其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用(3)为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定2(2016全国卷)某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含
23、有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用_对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是_。(2)推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有_和_。分离纯化时应挑选出_的菌落作为候选菌。(3)乳酸菌在20 长期保存时，菌液中常需要加入一定量的_(填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”)。解析：(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释，这样既可避免杂菌污染，又可将乳酸菌分散成单个细胞，以便在培养基表面形成单个菌落。(2)乳酸的积累影响乳酸菌的增殖，加入碳酸钙可以中和乳酸菌代谢(无氧呼吸)过程中产生的乳酸，另外，乳
24、酸和碳酸钙反应，进而导致碳酸钙分解形成透明圈，有利于乳酸菌的鉴别和分离。(3)对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。在3 mL的甘油瓶中，装入1 mL甘油后灭菌。将1 mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在20 的冷冻箱中保存。答案：(1)无菌水泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落(2)鉴别乳酸菌中和产生的乳酸(或酸)具有透明圈(3)甘油3(2016全国卷)苹果醋是以苹果汁为原料经发酵而成的。回答下列问题：(1)酵母菌的呼吸代谢途径如图所示。图中过程和是苹果醋生产的第一阶段，在酵母菌细胞的_中进行，其产物乙醇与_试剂反应呈现灰绿色，这一反应可用于乙醇的检验；
25、过程在酵母菌细胞的_中进行。与无氧条件相比，在有氧条件下，酵母菌的增殖速度_。(2)第二阶段是在醋酸杆菌的作用下将第一阶段产生的乙醇转变为醋酸的过程，根据醋酸杆菌的呼吸作用类型，该过程需要在_条件下才能完成。(3)在生产过程中，第一阶段和第二阶段的发酵温度不同，第一阶段的温度_(填“低于”或“高于”)第二阶段的。(4)醋酸杆菌属于_核生物，其细胞结构中_(填“含有”或“不含有”)线粒体。解析：(1)图中过程和是酵母菌进行无氧呼吸产生乙醇的过程，无氧呼吸的场所是细胞质基质。乙醇可用酸性的重铬酸钾试剂检测，颜色由橙色变为灰绿色。过程为有氧呼吸的第二和第三阶段，场所为线粒体。在有氧条件下酵母菌进行有
26、氧呼吸，产生更多的能量供酵母菌繁殖利用，故有氧条件下酵母菌的繁殖速度更快。(2)醋酸杆菌是好氧型细菌，因此，在醋酸杆菌作用下，将乙醇转变为醋酸的过程需要在有氧条件下才能完成。(3)在生产过程中，第一阶段酵母菌产生乙醇的适宜温度为1825 ，第二阶段醋酸杆菌产生醋酸的适宜温度为3035 ，故第一阶段的温度低于第二阶段的。(4)醋酸杆菌属于原核生物，原核细胞中的细胞器只有核糖体一种，不含线粒体。答案：(1)细胞质基质重铬酸钾线粒体快(2)有氧(3)低于(4)原不含有4(2015全国卷)回答与胡萝卜素有关的问题：(1)胡萝卜含有的胡萝卜素中，最主要的是_(填“胡萝卜素”“胡萝卜素”或“胡萝卜素”)，
27、该胡萝卜素在人体内可以转变成两分子_，后者缺乏会引起人在弱光下视物不清的病症，该疾病称为_，胡萝卜素是_(填“挥发性”或“非挥发性”)物质。(2)工业生产上，用养殖的岩藻作为原料提取胡萝卜素时，_(填“需要”或“不需要”)将新鲜的岩藻干燥。(3)现有乙醇和乙酸乙酯两种溶剂，应选用其中的_作为胡萝卜素的萃取剂，不选用另外一种的理由是_。解析：(1)胡萝卜含有的胡萝卜素有三类，其中最主要的是胡萝卜素，胡萝卜素在人体内可以被氧化成维生素A，维生素A缺乏会导致夜盲症。胡萝卜素是非挥发性物质。(2)胡萝卜素的提取一般采用萃取法，萃取前需要对材料进行干燥处理，以提高萃取的效率。(3)萃取胡萝卜素的有机溶剂
28、应该具有较高的沸点，能够充分溶解胡萝卜素，并且不与水混溶，如乙酸乙酯。乙醇是水溶性有机溶剂，因萃取过程中能与水混溶而影响萃取效果，所以不用它作萃取剂。答案：(1)胡萝卜素维生素A夜盲症非挥发性(2)需要(3)乙酸乙酯萃取胡萝卜素的有机溶剂应不与水混溶，而乙醇为水溶性有机溶剂(其他合理答案也可)5红细胞中含有大量血红蛋白，我们可以选用猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液进行实验来提取和分离血红蛋白。如图为血红蛋白的提取和分离流程图。请回答下列问题：(1)将实验流程补充完整，A为_，B为_。凝胶色谱法是根据_分离蛋白质的有效方法。(2)红细胞洗涤时洗涤次数不能过少，否则_；离心速度过高和_会使白细胞等一
29、同沉淀，达不到分离的效果。(3)为了加速膨胀，可以将加入洗脱液的湿凝胶用_法进行加热，这种方法不但节约时间，而且能除去凝胶中可能带有的微生物，排除胶粒内的_。(4)如果红色区带_，说明色谱柱制作成功。解析：(1)由图可知，A为血红蛋白的释放，B为样品的加入和洗脱，凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。(2)红细胞洗涤次数不能过少，否则无法除去血浆蛋白；离心速度过高和时间过长会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。(3)为了加速凝胶的膨胀，通常可以将加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热，逐渐升温至接近沸腾，这种方法不但节约时间，而且能除去凝胶中可能带有的微生物，排除胶粒内的空气。(4
30、)色谱柱制作成功的标志为红色区带均匀一致地移动。答案：(1)血红蛋白的释放样品的加入和洗脱相对分子质量的大小(2)无法除去血浆蛋白时间过长(3)沸水浴空气(4)均匀一致地移动6(2017全国卷)绿色植物甲含有物质W，该物质为无色针状晶体，易溶于极性有机溶剂，难溶于水，且受热、受潮易分解。其提取流程为：植物甲粉碎加溶剂振荡收集提取液活性炭处理过滤去除活性炭蒸馏(含回收溶剂)重结晶成品。回答下列问题：(1)在提取物质W时，最好应选用的一种原料是_(填“高温烘干”“晾干”或“新鲜”)的植物甲，不宜选用其他两种的原因是_。(2)提取物质W时，振荡的作用是_。(3)活性炭具有很强的吸附能力，在提取过程中
31、，用活性炭处理提取液的目的是_。(4)现有丙酮(沸点56 )、乙醇(沸点约78 )两种溶剂，在提取物质W时，应选用丙酮作为提取剂，理由是_。(5)该实验操作过程中应注意的事项是_(答出两点即可)。解析：(1)依据题干信息，物质W受热、受潮易分解，因此不宜选择高温烘干，而新鲜的植物甲含水量高，用于提取的极性有机溶剂会被水稀释，进而降低对物质W的提取效果，故不应选用新鲜的植物甲。(2)提取物质W时，振荡可以使原料和所加有机溶剂充分混匀。(3)利用活性炭的吸附能力，可以去除提取液中植物甲所含的色素，从而得到较为纯净的物质W与有机溶剂的混合物。(4)丙酮沸点低于乙醇，蒸馏时物质W分解较少。(5)物质W
32、容易受热分解，因此蒸馏操作适宜在较低的温度下进行，同时因实验中使用了有机溶剂，要注意防火。答案：(1)晾干高温烘干过程中，植物甲中的物质W易被破坏；新鲜的植物甲含水量高，用于提取的极性有机溶剂会被水稀释，进而降低对物质W的提取效果(2)使原料和溶剂充分混匀(3)去除提取液中的色素(4)丙酮沸点低于乙醇，蒸馏时物质W分解较少(5)在温度较低的情况下操作，防火课时作业 大题练，确保高分冲名校 1腐乳的品种很多，红方因加入红曲而呈红色，味厚醇香；糟方因加入酒精而糟香扑鼻；青方不加辅料，用豆腐本身渗出的水加盐腌制而成。腐乳的品种还会因豆腐的含水量、酒的种类和用量等因素而不同。回答下列与腐乳制作有关的问
33、题：(1)腐乳制作有多种微生物参与，其中起主要作用的是_。它与乳酸菌在结构上的主要区别是_。(2)豆腐发酵主要利用了微生物产生的_，通过发酵，豆腐中的营养物质种类_，且更易于被人体消化和吸收。(3)含水量为_左右的豆腐适于制作腐乳。若需要你对其他同学制作的腐乳进行评价，你会从_等方面评价腐乳的质量。(4)加盐腌制时，如果盐浓度过高，会影响腐乳的品味；而盐浓度过低，引起的严重后果是_。解析：(1)腐乳的制作利用的微生物主要是毛霉，毛霉是真核生物，乳酸菌是原核生物，二者在结构上的主要区别是毛霉有成形的细胞核。(2)毛霉等微生物能产生脂肪酶和蛋白酶等酶类，蛋白酶将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基
34、酸，脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸，便于人体消化和吸收。(3)腐乳的品质受豆腐含水量的影响，含水量为70%左右的豆腐适合菌丝的生长，有利于腐乳的制作。腐乳的质量与其色泽、口味、块形联系紧密，可从这三个方面加以评价。(4)制作腐乳时加盐可以析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬，还能抑制微生物的生长，盐过少不足以抑制微生物的生长，会导致豆腐腐败变质。答案：(1)毛霉毛霉有成形的细胞核(2)蛋白酶(脂肪酶)等酶类增多(3)70%色泽、口味、块形(4)不足以抑制微生物的生长，会导致豆腐腐败变质2近年来，舌尖上的中国引发全民关注美食的热潮，其中不乏利用微生物发酵制作的美食，如素有“东方奶酪”之称的“石宝寨牌”
35、忠州豆腐乳、中国泡菜领导品牌“吉香居”等。请回答下列有关问题：(1)“石宝寨牌”忠州豆腐乳前期发酵是在严格的无菌条件下，接入优良毛霉菌种，这样可以_，温度应控制在_，并保持一定的_。然后向长满毛霉的豆腐块加盐，其作用是_，同时，盐还能_，避免豆腐块腐败变质。后期加入食盐、香料粉、乌杨白酒密闭发酵6个月，乌杨白酒含量一般控制在12%左右的原因是_。(2)制作吉香居泡菜时，起主要作用的微生物是_。为了缩短制作时间，有人还会在冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液，加入陈泡菜液的目的是_。在发酵初期，很多杂菌会大量繁殖，其中导致泡菜水的表面长白膜的微生物是_。从开始制作到泡菜品质最佳这段时间内，泡菜液逐渐变
36、酸，这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是_。解析：(1)传统腐乳制作中所需的毛霉来自空气中的毛霉孢子，而现代的腐乳生产是将优良的毛霉菌种接种在豆腐上，这样可以避免其他菌种的污染，保证产品的质量。制作腐乳时温度应控制在1518 ，并保持一定的湿度。腐乳制作过程中，加盐可以析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬，同时，盐能抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质。酒含量要控制在12%左右，因为酒精含量过高，会使腐乳成熟的时间延长，酒精含量过低，不能抑制微生物的生长，造成杂菌污染。(2)制作泡菜时，起主要作用的微生物是乳酸菌。在冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液的目的是增加乳酸菌含量。在发酵初期，酵母菌(
37、或产膜酵母)可使泡菜水的表面形成白膜，开始制作后，泡菜液逐渐变酸，这段时间内泡菜坛中乳酸菌数量增加，杂菌数量减少。答案：(1)避免其他菌种的污染，保证产品的质量1518 湿度析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬抑制微生物的生长酒精含量过高会延长腐乳成熟的时间，含量过低，则不能抑制杂菌生长(2)乳酸菌增加乳酸菌含量酵母菌(或产膜酵母)乳酸菌数量增加，杂菌数量减少3.三孢布拉氏霉菌由于胡萝卜素含量高、易于培养等特点而广泛应用于工业化胡萝卜素的生产。请回答下列问题：(1)用稀释涂布平板法可以纯化三孢布拉氏霉菌，进行梯度稀释时一般是将1 mL菌液移入盛有_ mL无菌水的试管中。常用_法进行活菌计数，其原理是
38、培养基表面的一个菌落来源于_。但统计的菌落数往往_(填“多于”或“少于”)稀释液中的活菌数。(2)如图为提取的胡萝卜素样品通过纸层析法进行鉴定的结果，从图中分析可知，色带_为胡萝卜素。出现样品2的结果，可能原因是在操作过程中_(A.萃取温度高，时间长B干燥温度高，时间长)；_(A.未经浓缩蒸馏B点样太快，样点小)。解析：(1)在稀释涂布平板法中，进行梯度稀释时一般是将1 mL菌液移入盛有9 mL无菌水的试管中。该方法可以用于活菌的计数与分离。计数的原理是因为培养基表面的一个菌落来源于一个活菌。但是由于菌的重叠，往往计数值会偏小。(2)色带出现了标准样，说明是胡萝卜素。出现样品2的结果，可能原因
39、是在操作过程中干燥温度高，时间长，也可能是未经浓缩蒸馏。答案：(1)9稀释涂布平板一个活菌少于(2)BA4(2018届高三赣南五校联考)下表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方，请根据表格和所学知识回答下列相关问题：成分蛋白胨乳糖蔗糖K2HPO4指示剂琼脂含量(g)10.05.05.02.00.212.0将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL(1)从生态系统的成分上看，大肠杆菌属于_。(2)若根据用途划分，该培养基属于_(填“选择”或“鉴别”)培养基。若要用上述培养基来筛选出土壤中的尿素分解菌，培养基的营养成分必须怎样更改？_，并用_作为指示剂。(3)在微生物培养的过程中，
40、为防止杂菌污染，需要对培养基和培养皿进行_；操作者的双手需要进行清洗和_。(4)图1和图2是培养某细菌的结果图，其对应的接种方法分别是：_和_，这两种方法接种后培养基上都可以得到由单个细胞繁殖所形成的_。图1所用的接种方法可用来对活菌进行计数。此外，测定微生物数目的另一种方法是_。(5)以下微生物发酵生产特定产物时，所利用的主要微生物的细胞结构与大肠杆菌较相似的有_。(多选)A制作果酒B由果酒制作果醋C制作泡菜 D制作腐乳解析：(1)大肠杆菌只能从环境中摄取有机物，不能自己合成有机物，属于生态系统成分中的分解者。(2)该培养基中含有指示剂，属于鉴别培养基。尿素分解菌可以分解尿素，而其他微生物不
41、能，因此可将培养基中的唯一氮源蛋白胨改为尿素。尿素分解菌可使酚红变红。(3)培养微生物时，培养基和操作工具需要灭菌，操作者的双手需要清洗和消毒。(4)图1为稀释涂布平板法得到的结果，图2是平板划线法得到的结果图。单个微生物细胞培养获得的细胞群叫菌落。通过血细胞计数板计数法和稀释涂布平板法可以测定微生物数目。(5)A、B、C、D中所用到的微生物主要是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌、毛霉，醋酸菌、大肠杆菌和乳酸菌都是原核生物，细胞结构相似。答案：(1)分解者(2)鉴别将蛋白胨改成尿素酚红(3)灭菌消毒(4)稀释涂布平板法平板划线法菌落显微镜直接计数法(或血细胞计数板计数法)(5)B、C5如图是从玫瑰花中提
42、取玫瑰油的操作步骤。请据图回答下列问题：(1)图中的A表示_，B表示_。(2)玫瑰精油能用水蒸气蒸馏法提取的原因是玫瑰精油具有_的性质。(3)当蒸馏瓶中的水和原料量一定时，蒸馏过程中，影响精油提取量的主要因素有蒸馏时间和_。(4)提取橘皮精油时一般采用_法，不用水蒸气蒸馏法提取的原因是_。橘皮精油提取过程中，使用石灰水浸泡橘皮的目的是_。解析：(1)玫瑰精油的提取过程中，鲜玫瑰花加入清水后可进行水蒸气蒸馏，得到油水混合物后，加入NaCl分离出油层，再加入无水Na2SO4去水即可。(2)玫瑰精油具有易挥发、难溶于水、化学性质稳定等性质，适合用水蒸气蒸馏法提取。(3)当蒸馏瓶中的水和原料量一定时，
43、蒸馏过程中，影响精油提取量的主要因素有蒸馏时间和蒸馏温度。(4)由于橘皮精油的有效成分在用水蒸气蒸馏时会发生部分水解，使用水中蒸馏法又会产生原料焦糊的问题，故一般不采用水蒸气蒸馏法提取橘皮精油，而采用压榨法提取橘皮精油。橘皮精油提取过程中，使用石灰水浸泡橘皮的目的是防止橘皮压榨时滑脱，提高出油率。答案：(1)NaCl无水Na2SO4(2)易挥发、难溶于水、化学性质稳定(3)蒸馏温度(4)压榨橘皮精油的有效成分在用水蒸气蒸馏时会发生部分水解，使用水中蒸馏法又会产生原料焦糊的问题(合理即可)防止橘皮压榨时滑脱，提高出油率6蓝莓果实中富含花青素等营养成分，具有保护视力、防止脑神经老化、强心、抗癌、软
44、化血管、增强机体免疫力等功能。下面是获取蓝莓花青素、蓝莓酒和蓝莓醋的流程。结合所学知识，回答下列问题：(1)获取蓝莓果汁时加入果胶酶能将果胶分解成可溶性的_，使浑浊的果汁变得澄清。蓝莓花青素(在中性或碱性溶液中不稳定，在60 以下热稳定性较好)的提取可用溶剂萃取法，考虑到色素提取液作为食品添加剂的安全性问题，在下述方案中，你认为较好的方案是_(填序号)。A清水甲醇B盐酸乙醇C柠檬酸丙酮 D柠檬酸乙醇含花青素的粗品经真空干燥(可使水的沸点降至40 )制成成品，采用该方法的主要原因是_。(2)酿制蓝莓酒时，一般要先通气的目的是_。通常不需要对蓝莓进行严格的消毒处理，是因为在缺氧、呈酸性的发酵液中_
45、。醋酸菌将乙醇变为醋酸的环境条件是糖源_(填“充足”或“缺少”)。酿制成功的蓝莓果酒如果暴露在空气中会逐渐出现醋酸味，气温高的夏天更易如此，其原因是_。(3)若蓝莓果汁中已含有醋酸菌，在蓝莓果酒发酵旺盛时，醋酸菌能否将果汁中的糖发酵为醋酸？_，说明原因：_。为鉴定蓝莓果醋是否酿制成功，除可以通过观察菌膜、尝、嗅之外，还可以通过检测_作进一步的鉴定。解析：(1)果胶酶可将蓝莓果汁中的果胶分解成可溶性的半乳糖醛酸，使浑浊的果汁变得澄清。根据题干信息，蓝莓花青素在中性或碱性溶液中不稳定，故应用酸性溶液提取，考虑到食品添加剂的安全性问题，适宜选用柠檬酸乙醇作为提取剂；花青素在60 以下热稳定性较好，真
46、空干燥可使水的沸点降低，从而避免温度过高导致花青素分解。(2)酿制蓝莓酒时先通气有利于酵母菌大量繁殖。通常不需对蓝莓进行严格的消毒处理，是因为绝大多数微生物无法适应缺氧、呈酸性这一环境，生长受抑制。在糖源不足的情况下，醋酸菌在有氧条件下可以将果酒发酵成果醋。醋酸菌是好氧细菌，最适生长温度为3035 ，所以酿制成功的蓝莓果酒如果暴露在空气中会导致醋酸菌大量生长而逐渐出现醋酸味。(3)如果果汁中已含有醋酸菌，在果酒发酵旺盛时，醋酸菌不能将果汁中的糖发酵为醋酸，因为果酒发酵是在缺氧环境中进行的，而醋酸菌是好氧菌，果酒发酵时的缺氧环境能抑制醋酸菌生长。果醋是否酿制成功可以通过观察菌膜、尝、嗅，还可以检
47、测发酵前后的pH。答案：(1)半乳糖醛酸D避免干燥时温度过高导致花青素分解(2)让酵母菌在有氧条件下大量繁殖绝大多数微生物无法适应这一环境而受抑制缺少醋酸菌是好氧细菌，最适生长温度为3035 (夏天温度较高)，导致醋酸菌大量生长产生醋酸(3)不能果酒发酵时的缺氧环境能抑制醋酸菌生长发酵前后的pH7回答下列有关微生物的问题：(1)接种微生物的方法有很多，图中过程所示为_。(2)不论何种培养基，在进行调pH和倒平板操作之间要对用到的培养基进行_处理。(3)用该方法统计样本菌落数时，同时需要做A、B、C三个培养皿，原因是_。一般选择菌落数为_的平板进行计数结果更准确，这种统计菌落数目的方法被称为_。
48、(4)在尿素分解菌的分离与计数实验中一般都应设置对照组，使实验更有说服力。若牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目_选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。(5)尿素分解菌能分解尿素的直接原因是它们能合成_，在以尿素为唯一氮源的培养基中加入_指示剂，培养某种细菌后，若指示剂变红，就可以初步鉴定该种细菌能够分解尿素。(6)有机农药苯磺隆(C15H17N5O6S)是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。为从土壤中分离获得分解苯磺隆的菌落，某同学设计了一种培养基，其成分能满足分解苯磺隆细菌的营养需要，如下表：成分无机盐葡萄糖苯磺隆琼脂水培养基土壤中存在能分解苯磺隆
49、的细菌，从生物进化的角度分析，这是_的结果。据表判断，该培养基_(填“能”或“不能”)分离出分解苯磺隆的菌落，理由是_。解析：(1)分析题图可知，过程所示的接种微生物的方法为稀释涂布平板法。(2)不论何种培养基，在进行调pH和倒平板操作之间都要对用到的培养基进行灭菌处理。(3)用该方法统计样本菌落数时，为了使实验结果更加准确可靠，同时需要做A、B、C三个培养皿，分别计数3次，取平均值。为了保证结果准确，一般选择菌落数为30300的平板进行计数，这种统计菌落数目的方法被称为活菌计数法。(4)在尿素分解菌的分离与计数实验中一般应设置对照组，若牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目大于选择培养基的数目，说明选
50、择培养基已筛选出一些菌落。(5)尿素分解菌能合成脲酶，所以能分解尿素，由于尿素被分解成了氨，氨会使培养基的pH升高，使酚红指示剂变红色。因此在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，若指示剂变红，可以初步鉴定该种细菌能够分解尿素。(6)土壤中存在能分解苯磺隆的细菌，从生物进化的角度分析，这是自然选择的结果。该培养基的成分中没有凝固剂琼脂，为液体培养基，因此不能分离出菌落。答案：(1)稀释涂布平板法(2)灭菌(3)分别计数3次，取平均值，使实验结果更加准确可靠30300活菌计数法(4)大于(5)脲酶酚红(6)自然选择不能液体培养基不能分离出菌落8辣椒红素是一种常用的食用色素，属
51、类胡萝卜素类色素。可从辣椒或产生辣椒红素的微生物体中提取获得。请根据所学的知识回答下列问题。(1)制备微生物培养基时各种成分在溶解后分装前必须_，培养基在接种前要进行_灭菌。依据菌落特征对微生物计数，最常用的方法是_。(2)从辣椒中提取辣椒红素常用_法，该过程的效率主要取决于提取液的_和用量，同时还受原料颗粒的大小、含水量等条件的影响。(3)为了防止有机溶剂燃烧、爆炸，提取过程应采用_加热；为了防止加热时有机溶剂挥发，还要在加热瓶口安装_装置，为了达到理想的效果，应该从_(填“上端”或“下端”)加入自来水。解析：(1)制备培养基时各种成分在溶解后分装前必须调pH，接种前需采用高压蒸汽灭菌法对培
52、养基进行灭菌。依据菌落特征对微生物计数常用的方法为稀释涂布平板法。(2)根据题干信息，辣椒红素属于类胡萝卜素类色素，因此采用萃取法提取，萃取的效率主要取决于萃取剂的性质和用量，同时还受原料颗粒的大小、含水量的影响。(3)有机溶剂为易燃物，直接使用明火加热容易引起燃烧、爆炸，提取过程应采用水浴加热。为了防止加热时有机溶剂挥发，还要在加热瓶口安装回流冷凝装置。为了达到理想的效果，应该从冷凝装置下端加入自来水，有利于冷凝回流。答案：(1)调pH高压蒸汽稀释涂布平板法(2)萃取性质(3)水浴回流冷凝下端9某市卫生委发布的卫生监测信息显示该市有15家美容美发场所的毛巾、理发(美容)用具大肠杆菌严重超标。
53、如图甲为大肠杆菌含量检测操作简图，图乙为伊红美蓝培养基配方。回答下列相关问题：(1)图甲中滤膜的孔径应_(填“大于”或“小于”)大肠杆菌。受此启发，对某些不耐高温的试剂可以怎样除菌？_。(2)配制图乙中的基础培养基时，除了水分、无机盐以外，还应加入_(一种营养成分)，以及_。待各成分都溶化后和分装前，要进行的是_和灭菌，对培养基进行灭菌的常用器具是_。倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要目的是_。伊红美蓝培养基上生长的大肠杆菌菌落呈现深紫色，从功能上划分，该培养基属于_培养基。(3)用平板划线法分离样液中的大肠杆菌，操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始
54、划线的目的是_。要检测样液中的大肠杆菌含量，取25 cm2毛巾样本，加5 mL蒸馏水，浸润半小时，然后在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL样液；在37 的培养箱中放置48 h,3个平板上的深紫色菌落数分别为49、48和47。据此可得出25 cm2毛巾样液中的活菌数为_个。解析：(1)图甲中滤膜的孔径应小于大肠杆菌，滤膜过滤才能获得大肠杆菌，对不耐高温的试剂除菌时无法用高压蒸汽灭菌法，可以用滤膜过滤达到除菌目的。(2)配制图乙中的基础培养基时，除了水分、无机盐以外，还应加入氮源以及琼脂。配制的培养基在溶化后和分装前需要先进行调pH和灭菌。高压蒸汽灭菌法常用高压蒸汽灭菌锅对培养基等进行灭菌。倒平板时待平板冷凝后将平板倒置的主要原因是防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染。从功能上划分，伊红美蓝培养基属于鉴别培养基。(3)接种环灼烧灭菌后，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线的目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌的菌落呈深紫色，据题意可知，25 cm2毛巾样本中的活菌数为(494847)30.152.4103。答案：(1)小于用滤膜过滤除菌(2)氮源琼脂调整pH高压蒸汽灭菌锅防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染鉴别(3)将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落2.4103
