1、 传统发酵技术与发酵工程的应用42014广东卷 下列叙述错误的是()A酵母菌在无氧条件下利用葡萄汁产生酒精B醋酸菌在无氧条件下利用乙醇产生醋酸C泡菜腌制利用了乳酸菌的乳酸发酵D腐乳制作利用了毛霉等微生物的蛋白酶和脂肪酶4B解析 酵母菌是异养兼性厌氧型生物，在无氧条件下利用葡萄汁可产生酒精和二氧化碳，A项正确。用醋酸菌酿醋时需要持续通气，即利用醋酸菌的有氧呼吸，不是无氧呼吸，B项错误。泡菜腌制原理是利用乳酸菌无氧呼吸产生乳酸，C项正确。 腐乳制作利用了青霉、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉，毛霉等微生物通过产生的蛋白酶和脂肪酶起作用，D项正确。242014江苏卷 (多选)某同学设计了如图所示
2、的发酵装置，下列有关叙述正确的是()A该装置可阻止空气进入，用于果酒发酵B该装置便于果酒发酵中产生的气体排出C去除弯管中的水，该装置可满足果醋发酵时底层发酵液中大量醋酸菌的呼吸D去除弯管中的水后，该装置与巴斯德的鹅颈瓶作用相似24ABD解析 图示弯管的水可以有效地阻止外来空气和杂菌，制造出密闭空间用于果酒发酵，A项正确。图示导管插在液面之外可用于排出发酵过程产生的气体，B项正确。醋酸菌为好氧菌，弯管去除水后有适量气体进入，利于醋酸菌在液体中上层发酵，底层液体中缺氧不利于醋酸菌发酵，C项错误。弯管去除水后有适量气体弯曲进入，类似巴斯德的鹅颈瓶作用，既能导气又能防止杂菌污染，D项正确。302014
3、海南卷 生物选修1：生物技术实践已知泡菜中亚硝酸盐含量与泡制时间有关。为了测定不同泡制天数泡菜中亚硝酸盐的含量，某同学设计了一个实验，实验材料、试剂及用具包括：刻度移液管、比色管、不同浓度的亚硝酸钠标准溶液、亚硝酸盐的显色剂、不同泡制天数的泡菜滤液等。回答相关问题：(1)请完善下列实验步骤。标准管的制备：用_和显色剂制成颜色深浅不同的系列标准管。样品管的制备：用刻度移液管分别吸取一定量的_，加到不同的比色管中，然后在各个比色管中加入等量的显色剂进行显色，得到样品管。将每个_分别与系列标准管进行比较，找出与样品管颜色深浅_的标准管，该管中亚硝酸钠含量即代表样品管中亚硝酸盐含量，记录各样品管亚硝酸
4、盐的含量。(2)下图表示的是泡菜中_趋势。(3)泡菜制作过程中产酸的细菌主要是_(填“醋酸杆菌”或“乳酸菌”)。30(1)亚硝酸钠标准溶液 不同泡制天数的泡菜滤液样品管最相近(其他合理答案也可)(2)亚硝酸盐含量随泡制时间的变化(其他合理答案也可)(3)乳酸菌解析 (1)在亚硝酸盐的含量测定中，可利用亚硝酸盐与显色剂发生颜色反应，根据颜色的深浅可确定亚硝酸盐含量的多少。用不同浓度的亚硝酸钠标准溶液与显色剂可制成颜色深浅不同的系列标准管，不同颜色深浅对应的亚硝酸钠浓度是已知的；用不同泡制天数的泡菜滤液与显色剂反应，制备一系列的样品管，将样品管的颜色与标准管进行颜色比对，找到与样品管颜色深浅最接近
5、的标准管，所对应的亚硝酸钠浓度即可代表样品管中的亚硝酸盐含量。(2)图示曲线横轴为时间，纵轴为亚硝酸盐含量，则该曲线表示泡菜中亚硝酸盐含量随发酵时间的变化趋势。(3)泡菜制作的原理是乳酸发酵，产酸的细菌主要是乳酸菌。 微生物的类型、营养和代谢102014四川卷 有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示。21*cnjy*com甲乙(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、_四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是_。(2)与微生物培养基相比，植物组织培养的培
6、养基常需添加生长素和_，这些植物激素一般需要事先单独配制成_保存备用。(3)纯化菌株时，通常使用的划线工具是_。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有_。(4)为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是_，该实验设计是否合理？为什么？_。10(1)氮源和无机盐只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长繁殖(2)细胞分裂素母液(3)接种环接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始(4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质不合理，缺少空白对照解析 本题考查
7、微生物的培养和分离及植物的组织培养。(1)微生物需要的营养物质主要有碳源、氮源、水和无机盐四类；选择培养基是允许特定种类微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基，碳源为微生物需要的四类营养物质中的一种，缺少时，微生物不能生长和繁殖，而只以苯磺隆作为唯一碳源，只有能利用苯磺隆的微生物才能正常生长和繁殖。(2)植物激素中的生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素；植物组织培养的培养基，在实验室一般配制成母液，在4 条件下保存备用。(3)平板划线法是通过接种环在固体培养基上连续划线接种的方法；第二划线区域的第一条线上无菌落，产生的失误可能是划线时接种环灼烧未冷却，菌种被杀
8、死，或者是划线时未从第一区域的末端开始，接种环未接触到菌种。(4)从图示可知，加入了蛋白酶后测定苯磺隆降解率，而蛋白酶专一性分解蛋白质，可推知该实验作出的假设是目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质；实验需要空白对照，来确定加入蛋白酶后对苯磺隆降解情况的影响。【21cnj*y.co*m】302014江苏卷 为了获得胡萝卜素产品，某小组开展了产胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。请回答下列问题：(1)实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是_；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该_。(2)为了筛选出酵母菌，培养基中添加了青霉素，其目的是_。(3)上图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙、丙指示的依次是_。(
9、填序号)安全阀、放气阀、压力表 放气阀、安全阀、压力表安全阀、放气阀、温度表 放气阀、安全阀、温度表(4)为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在3块相同平板上划线，结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原因是_。(5)为增加胡萝卜素提取量，在研磨酵母细胞时，添加石英砂的目的是_；研磨时_(填“需要”或“不需要”)添加CaCO3，理由是_。www.21-cn-30(1)干热灭菌和湿热灭菌(高压蒸汽灭菌) 用牛皮纸(报纸)包扎器皿(2)抑制细菌(放线菌)生长(3)(4)接种环温度过高，菌被杀死(5)有助于研磨充分不需要胡萝卜素较耐酸解析 (1)培养皿常用的灭菌方法是干热灭菌和湿热灭菌，在灭
10、菌前应用牛皮纸(报纸)包扎器皿，灭菌结束后，牛皮纸能阻止空气中的微生物再次污染玻璃器皿。(2)青霉素是广谱性抗生素，能有效杀死细菌和放线菌，可选择性培养真菌。(3)对照高压灭菌锅的构造，图示中甲是安全阀，乙是放气阀，丙是压力表。(4)接种前接种环应灼烧灭菌后取样，一块平板的各划线区均未见菌落说明可能是接种环温度过高，菌被杀死，接种环未能把活菌取至平板培养基上。(5)研磨细胞时添加石英砂有利于细胞研磨得更加充分；由于胡萝卜素耐酸不易被破坏，故无需添加CaCO3。 微生物的培养与应用42014全国卷 某同学在三种条件下培养大肠杆菌，这三种条件是：以葡萄糖为碳源的培养基，不断补充培养基，及时去除代谢
11、产物以葡萄糖为碳源的培养基，不补充培养基，不去除代谢产物以葡萄糖和乳糖为碳源的培养基，不补充培养基，不去除代谢产物21世纪*教育网根据培养结果绘制的一段时间内菌体数的对数随时间变化的趋势图如下：甲乙丙假设三种培养基中初始总糖量相等，则三种条件依次对应的趋势图是()A甲、乙、丙B乙、丙、甲C丙、甲、乙 D丙、乙、甲4C解析 本题考查微生物生长的有关知识。属于比较理想的培养条件，因此菌体数增长的趋势近似于“J”型曲线，即丙曲线；条件下，随着葡萄糖的不断减少，有害代谢产物的不断积累，活菌数会出现下降趋势，与甲曲线相符；在以葡萄糖和乳糖为碳源的培养基上培养大肠杆菌，开始时大肠杆菌只能利用葡萄糖而不能利
12、用乳糖，只有当葡萄糖被消耗完毕以后，大肠杆菌才开始利用乳糖，与乙曲线相符，故C项正确。39 2014新课标全国卷 生物选修1：生物技术实践 植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题：【21世纪教育网】(1)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由3种组分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将_分解成_。(2)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时，CR可与纤维素形成_色复合物。用含有CR的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的_。(3)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基(成分见下表)：酵母膏无机盐淀粉纤维素
13、粉琼脂CR溶液水培养基甲培养基乙注：“”表示有，“”表示无。据表判断，培养基甲_(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是_；培养基乙_(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是_。39(1)纤维二糖葡萄糖(2)红透明圈(3)不能液体培养基不能用于分离单菌落不能培养基中没有纤维素，不会形成CR纤维素红色复合物，即使出现单菌落也不能确定其为纤维素分解菌解析 (1)纤维素酶是一种复合酶，该酶是由C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶3种组分组成，前两种酶可将纤维素分解为纤维二糖，葡萄糖苷酶可将纤维二糖分解为葡萄糖。(2)刚果红可与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色
14、复合物便无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。21cnjycom(3)生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用，只有在纤维素含量丰富的环境中纤维素分解菌才会发挥作用。纤维素分解菌选择培养基属于液体培养基。纤维素分解菌鉴别培养基属于固体培养基，要分离和鉴别纤维素分解菌，都需要以纤维素为主要碳源的培养基，培养基乙不具有选择的作用。【出处：21教育名师】392014新课标全国卷 生物选修1：生物技术实践为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：21*cnjy*com(1)该小组采用稀释涂
15、布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白干板先行培养了一段时间，这样做的目的是_；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为_。(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过_灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_。(3)示意图A和B中，_表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。AB(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：
16、振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中_的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高_的利用率。21教育网39(1)检测培养基平板灭菌是否合格3.8107(2)灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3)B(4)溶解氧营养物质解析 (1)为了确定培养基的灭菌是否合格，微生物学实验一般会设置空白对照：随机取若干灭菌后的不接种的培养基在相同条件下培养一段时间，观察培养基上是否有菌落生成，若无菌落生成说明灭菌合格；利用平板菌落计数法的计算公式估算水样中的活菌数： M(稀释倍数)1003.8107/L。(2)接种时接种环需要灼烧灭菌；在第二次及以后每次划线时，总
17、是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是通过划线次数的增加，使每次划线时菌体的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。21教育名师原创作品(3)由题图可知，B图菌落分布相对均匀，应为稀释涂布平板法接种的结果。(4)振荡培养可以增加液体培养基的氧气含量，促进好氧型微生物的生长，另外振荡培养还可以使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率。102014四川卷 有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示。甲乙(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、_四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆
18、作为唯一碳源，其原因是_。(2)与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和_，这些植物激素一般需要事先单独配制成_保存备用。(3)纯化菌株时，通常使用的划线工具是_。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有_。(4)为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是_，该实验设计是否合理？为什么？_。10(1)氮源和无机盐只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长繁殖(2)细胞分裂素母液(3)接种环接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始(4
19、)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质不合理，缺少空白对照解析 本题考查微生物的培养和分离及植物的组织培养。(1)微生物需要的营养物质主要有碳源、氮源、水和无机盐四类；选择培养基是允许特定种类微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长的培养基，碳源为微生物需要的四类营养物质中的一种，缺少时，微生物不能生长和繁殖，而只以苯磺隆作为唯一碳源，只有能利用苯磺隆的微生物才能正常生长和繁殖。(2)植物激素中的生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素；植物组织培养的培养基，在实验室一般配制成母液，在4 条件下保存备用。(3)平板划线法是通过接种环在固体培养基上连续划线接种的方法；第二划线区域
20、的第一条线上无菌落，产生的失误可能是划线时接种环灼烧未冷却，菌种被杀死，或者是划线时未从第一区域的末端开始，接种环未接触到菌种。(4)从图示可知，加入了蛋白酶后测定苯磺隆降解率，而蛋白酶专一性分解蛋白质，可推知该实验作出的假设是目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质；实验需要空白对照，来确定加入蛋白酶后对苯磺隆降解情况的影响。172014浙江卷 下面是关于固定化酶和细菌培养实验的问题。请回答：(1)某兴趣小组欲利用固定化酶进行酶解淀粉的实验，分组见下表。组别固定化酶柱长度(cm)淀粉溶液的流速(mLmin1)甲100.3乙100.5丙150.3丁150.5将吸附了淀粉酶的石英砂装入柱中后，需用蒸馏水
21、充分洗涤固定化酶柱，以除去_。按上表分组，将配制好的淀粉溶液加入到固定化酶柱中，然后取一定量的流出液进行KII2检测。若流出液呈红色，表明有_生成；若各组呈现的颜色有显著差异，则流出液中淀粉水解产物浓度最高的是_组。(2)下列关于上述固定化酶实验的叙述，错误的是()A固定化酶柱长度和淀粉溶液流速决定了酶柱中酶的含量B淀粉溶液流速过快会导致流出液中含有淀粉C各组实验所用的淀粉溶液浓度应相同D淀粉溶液的pH对实验结果有影响(3)现有一份污水样品，某兴趣小组欲检测其中的细菌数，进行以下实验。将一定量的污水样品进行浓度梯度稀释。取适量不同稀释度的稀释液，用_法分别接种于固体平面培养基上，经培养后进行计
22、数。该实验应注意，接种前，从盛有_的容器中将玻璃刮刀取出，放在酒精灯火焰上灼烧，冷却后待用；分组时，需用_作为对照。(4)在上述细菌培养实验中进行计数时，应计数的是接种了()A各个稀释度样品的培养基上的细菌数B合理稀释度样品的培养基上的细菌数C各个稀释度样品的培养基上的菌落数D合理稀释度样品的培养基上的菌落数17(1)未吸附的淀粉酶糊精丙(2)A(3)涂布分离70%酒精未接种的培养基(4)D解析 (1)用蒸馏水洗涤固定化酶柱的目的是洗掉未吸附的淀粉酶，防止产物中混有酶等物质；淀粉的产物可以是糊精，可以用KII2检测，呈现的颜色是红色；根据表格分析4组实验，如果反应时间越充分，则反应就越充分，流
23、出物中糊精的含量就越高，因丙组的固定化酶柱长度最长，淀粉溶液的流速也越低，所以它的流出物中糊精的含量最高。(2)酶柱长度和流速决定了反应时间的长短，A项错误。流速过快则反应不够充分，则流出液中含有淀粉，B项正确。实验的自变量是酶柱长度和流速，所以每组实验的淀粉浓度应相同，C项正确。pH大小会影响酶的活性，所以对实验结果会有影响，D项正确。(3)要检测污水中的细菌数，可采用稀释涂布分离法进行操作，操作过程需注意消毒和灭菌处理，实验中需要设计一个空白对照。www-2-1-cnjy-com(4)计数统计的是合理处理的稀释样品，计算其培养基上的菌落数，不是细菌数。302014江苏卷 为了获得胡萝卜素产
24、品，某小组开展了产胡萝卜素酵母的筛选与色素提取实验。请回答下列问题：(1)实验用的培养皿常用的两种灭菌方法是_；为了减少灭菌后器皿被污染，灭菌前应该_。(2)为了筛选出酵母菌，培养基中添加了青霉素，其目的是_。(3)上图是灭菌锅及其局部剖面示意图，图中甲、乙、丙指示的依次是_。(填序号)安全阀、放气阀、压力表 放气阀、安全阀、压力表安全阀、放气阀、温度表 放气阀、安全阀、温度表(4)为了将分离到的菌株纯化，挑取了菌落在3块相同平板上划线，结果其中一块平板的各划线区均未见菌生长，最可能的原因是_。(5)为增加胡萝卜素提取量，在研磨酵母细胞时，添加石英砂的目的是_；研磨时_(填“需要”或“不需要”
25、)添加CaCO3，理由是_。30(1)干热灭菌和湿热灭菌(高压蒸汽灭菌) 用牛皮纸(报纸)包扎器皿(2)抑制细菌(放线菌)生长(3)(4)接种环温度过高，菌被杀死(5)有助于研磨充分不需要胡萝卜素较耐酸解析 (1)培养皿常用的灭菌方法是干热灭菌和湿热灭菌，在灭菌前应用牛皮纸(报纸)包扎器皿，灭菌结束后，牛皮纸能阻止空气中的微生物再次污染玻璃器皿。(2)青霉素是广谱性抗生素，能有效杀死细菌和放线菌，可选择性培养真菌。(3)对照高压灭菌锅的构造，图示中甲是安全阀，乙是放气阀，丙是压力表。(4)接种前接种环应灼烧灭菌后取样，一块平板的各划线区均未见菌落说明可能是接种环温度过高，菌被杀死，接种环未能把
26、活菌取至平板培养基上。(5)研磨细胞时添加石英砂有利于细胞研磨得更加充分；由于胡萝卜素耐酸不易被破坏，故无需添加CaCO3。 酶的应用182014江苏卷 下列关于加酶洗衣粉的叙述，正确的是()A高温易使酶失活，因此冷水洗涤去污效果应该比温水好B洗衣粉中表面活性剂对碱性蛋白酶活性有一定的促进作用C在pH低于7.0的自来水中，碱性蛋白酶依然能起作用D洗衣粉中酶主要是通过快速分解溶在水里的污渍发挥作用18C解析 酶在适宜温度下活性更好，所以温水洗涤效果比冷水好，A项错误。洗衣粉中表面活性剂具有乳化、起泡或消泡以及增溶、分散、洗涤、防腐、抗静电等作用，对于酶的活性没有促进作用，B项错误。碱性蛋白酶适宜
27、pH是在碱性范围，自来水pH低于7.0时酶活性下降但依然能发挥作用，C项正确。洗衣粉中酶的作用是使难溶的大分子污渍快速分解为小分子可溶性物质从而达到去渍效果，D项错误。82014天津卷 嗜热土壤芽胞杆菌产生的葡萄糖苷酶(BglB)是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验：.利用大肠杆菌表达BglB酶(1)PCR扩增bglB基因时，选用_基因组DNA作模板。(2)下图为质粒限制酶酶切图谱。bglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入_和_不同限制酶的识别序列。注：图中限制酶的识别序列及切割形成的黏性末端均不
28、相同(3)大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为_。.温度对BglB酶活性的影响(4)据图1、2可知，80 保温30分钟后，BglB酶会_；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在_(单选)。A50 B60 C70 D80 图1温度对BglB酶活性的影响图2BglB酶的热稳定性注：酶的热稳定性是酶在一定温度下，保温一段时间后通过其活性的保持程度来反映的.利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。(5)与用诱变剂直接
29、处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获取热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中_(多选)。A仅针对bglB基因进行诱变BbglB基因产生了定向突变CbglB基因可快速累积突变DbglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变8(1)嗜热土壤芽胞杆菌(2)Nde BamH(3)转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶(4)失活B(5)A、C解析 (1)bglB基因存在于嗜热土壤芽胞杆菌基因组中，故应以该菌的基因组DNA为模板进行基因扩增。(2)目的基因与质粒进行重组时，需将目的基因插入到启动子和终止子之间，且应靠近启动子和终止子，结合示意图可知，应在扩增的bglB基因两端分别引
30、入Nde和BamH两种限制酶的识别序列。(3)该基因表达载体中含有bglB基因，可表达产生葡萄糖苷酶，其可分解纤维素，这样大肠杆菌就获得了分解纤维素的能力。(4)由图2可知，BglB酶在80 保温30分钟后，就会失活；由图1可知，当温度为6070 时，酶活性较高，而由图2可知70 时保温30分钟，酶活性开始减弱，而60 保温30分钟后酶活性基本不发生变化，由此可知为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好应控制在60 ，故选B。(5)在bglB基因扩增过程中加入诱变剂进行诱变处理，相比于诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌，针对性更强；基因突变是不定向的；由于PCR过程基因扩增即DNA复制快速进行
31、，发生突变后可进行快速积累，进而便于筛选；基因突变可能导致氨基酸数目的改变，如突变后的密码子变为终止密码子，可导致蛋白质合成提前终止，进而导致氨基酸数目变少。172014浙江卷 下面是关于固定化酶和细菌培养实验的问题。请回答：(1)某兴趣小组欲利用固定化酶进行酶解淀粉的实验，分组见下表。组别固定化酶柱长度(cm)淀粉溶液的流速(mLmin1)甲100.3乙100.5丙150.3丁150.5将吸附了淀粉酶的石英砂装入柱中后，需用蒸馏水充分洗涤固定化酶柱，以除去_。按上表分组，将配制好的淀粉溶液加入到固定化酶柱中，然后取一定量的流出液进行KII2检测。若流出液呈红色，表明有_生成；若各组呈现的颜色
32、有显著差异，则流出液中淀粉水解产物浓度最高的是_组。(2)下列关于上述固定化酶实验的叙述，错误的是()A固定化酶柱长度和淀粉溶液流速决定了酶柱中酶的含量B淀粉溶液流速过快会导致流出液中含有淀粉C各组实验所用的淀粉溶液浓度应相同D淀粉溶液的pH对实验结果有影响(3)现有一份污水样品，某兴趣小组欲检测其中的细菌数，进行以下实验。将一定量的污水样品进行浓度梯度稀释。取适量不同稀释度的稀释液，用_法分别接种于固体平面培养基上，经培养后进行计数。该实验应注意，接种前，从盛有_的容器中将玻璃刮刀取出，放在酒精灯火焰上灼烧，冷却后待用；分组时，需用_作为对照。(4)在上述细菌培养实验中进行计数时，应计数的是
33、接种了()A各个稀释度样品的培养基上的细菌数B合理稀释度样品的培养基上的细菌数C各个稀释度样品的培养基上的菌落数D合理稀释度样品的培养基上的菌落数17(1)未吸附的淀粉酶糊精丙(2)A(3)涂布分离70%酒精未接种的培养基(4)D解析 (1)用蒸馏水洗涤固定化酶柱的目的是洗掉未吸附的淀粉酶，防止产物中混有酶等物质；淀粉的产物可以是糊精，可以用KII2检测，呈现的颜色是红色；根据表格分析4组实验，如果反应时间越充分，则反应就越充分，流出物中糊精的含量就越高，因丙组的固定化酶柱长度最长，淀粉溶液的流速也越低，所以它的流出物中糊精的含量最高。(2)酶柱长度和流速决定了反应时间的长短，A项错误。流速过
34、快则反应不够充分，则流出液中含有淀粉，B项正确。实验的自变量是酶柱长度和流速，所以每组实验的淀粉浓度应相同，C项正确。pH大小会影响酶的活性，所以对实验结果会有影响，D项正确。(3)要检测污水中的细菌数，可采用稀释涂布分离法进行操作，操作过程需注意消毒和灭菌处理，实验中需要设计一个空白对照。(4)计数统计的是合理处理的稀释样品，计算其培养基上的菌落数，不是细菌数。 DNA的粗提取及蛋白质提取技术162014江苏卷 下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验叙述，错误的是()A酵母和菜花均可作为提取DNA的材料BDNA既溶于2 mol/L NaCl溶液也溶于蒸馏水C向鸡血细胞液中加蒸馏水搅拌，可见玻棒
35、上有白色絮状物DDNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热，冷却后变蓝16C解析 酵母和菜花都含DNA物质，都可用来提取DNA，A项正确。DNA在0.14 mol/L的NaCl溶液中溶解度最小，所以DNA在2 mol/L的NaCl溶液或者蒸馏水中都能溶解，B项正确。鸡血细胞加水搅拌，细胞吸水涨破释放出DNA，DNA存在于溶液中，C项错误。DNA与二苯胺在沸水浴条件下反应，冷却后变蓝，D项正确。 植物有效成分的提取42014四川卷 下列有关实验方法或检测试剂的叙述，正确的是()A用改良苯酚品红染色观察低温诱导的植物染色体数目变化B用健那绿和吡罗红染色观察DNA和RNA在细胞中的分布C用纸层析法提取菠菜绿
36、叶中的色素和鉴定胡萝卜素提取粗品D用标志重捕法调查田鼠种群密度及农田土壤小动物的丰富度4A解析 改良苯酚品红染液是观察细胞分裂时染色体形态的优良染色剂，可用于染色体数目的观察，A项正确。健那绿是活细胞中线粒体染色的专一性染料，B项错误。纸层析法可用来分离色素，而不能提取色素，C项错误。土壤小动物由于个体小，活动力强，不宜用标志重捕法，常用取样器取样的方法进行采集、调查，D项错误。 基因工程与蛋白质工程42014天津卷 为达到相应目的，必须通过分子检测的是()A携带链霉素抗性基因受体菌的筛选B产生抗人白细胞介素8抗体的杂交瘤细胞的筛选C转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定D21三体综合征的诊断4B解析
37、 可通过将受体菌接种在含链霉素的培养基中筛选携带链霉素抗性基因的受体菌，A项错误。抗人白细胞介素8抗体的杂交瘤细胞应通过抗原抗体杂交技术筛选产生，B项正确。在棉花田中人工放入害虫可检验转基因抗虫棉的抗虫效果，C项错误。可利用显微镜检测21三体综合征患者的染色体组成，D项错误。42014重庆卷 如图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下相关叙述，正确的是()A的构建需要限制性核酸内切酶和DNA聚合酶参与B侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到的染色体上C的染色体上若含抗虫基因，则就表现出抗虫性状D只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异4D解析 构建重组质粒需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶，
38、而不需要DNA聚合酶，A项错误。含重组Ti质粒的农杆菌侵染植物细胞后，重组Ti质粒的TDNA整合到受体细胞的染色体上，而不是重组Ti质粒整合到受体细胞的染色体上，B项错误。导入受体细胞的目的基因表达后，转基因植株方能表现出相应性状，若目的基因在受体细胞中不表达，转基因植株则不能表现出相应性状，C项错误。基因工程导致的生物变异是可遗传变异， D项正确。252014广东卷 (双选)利用基因工程技术生产羧酸酯酶(CarE)制剂的流程如图所示，下列叙述正确的是()A过程需使用逆转录酶B过程需使用解旋酶和PCR获取目的基因C过程使用的感受态细胞可用NaCl溶液制备D过程可利用DNA分子杂交鉴定目的基因是
39、否已导入受体细胞25AD解析 过程是以mRNA为模板合成DNA的过程，即逆转录过程，需要逆转录酶的催化，A项正确。过程表示利用PCR扩增目的基因，在PCR过程中不需要解旋酶解旋，通过控制温度来达到解旋的目的，B项错误。利用氯化钙处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞，C项错误。检测目的基因是否成功导入受体细胞的染色体DNA中，可以采用DNA分子杂交技术，D项正确。232014江苏卷 (多选)下列关于基因工程技术的叙述，错误的是()A切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6个核苷酸序列BPCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应C载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因D抗虫
40、基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达23ABC解析 限制酶的识别序列不都是6个核苷酸，比如基因工程中的BamH 酶识别序列为GATC，A项错误。PCR中温度的改变过程是：双链DNA在95 变性解旋，5055 退火使引物与DNA单链结合；6575 是耐热性DNA聚合酶的适宜温度，用于子链的延伸，B项错误。质粒常用抗生素抗性基因作为标记基因，C项错误。抗虫基因即使成功插入到植物细胞内，也可能由于基因选择性表达或者细胞内基因的互作等其他原因而不能正常表达，D项正确。8、2014天津卷 嗜热土壤芽胞杆菌产生的葡萄糖苷酶(BglB)是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了
41、以下试验：.利用大肠杆菌表达BglB酶(1)PCR扩增bglB基因时，选用_基因组DNA作模板。(2)下图为质粒限制酶酶切图谱。bglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入_和_不同限制酶的识别序列。注：图中限制酶的识别序列及切割形成的黏性末端均不相同(3)大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为_。.温度对BglB酶活性的影响(4)据图1、2可知，80 保温30分钟后，BglB酶会_；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在_(单选)。A50 B60 C70 D80 图1
42、温度对BglB酶活性的影响图2BglB酶的热稳定性注：酶的热稳定性是酶在一定温度下，保温一段时间后通过其活性的保持程度来反映的.利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。版权所有(5)与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获取热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中_(多选)。A仅针对bglB基因进行诱变BbglB基因产生了定向突变CbglB基因可快速累积突变DbglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变8(1)嗜热土壤芽胞杆菌(2)Nde
43、 BamH(3)转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶(4)失活B(5)A、C解析 (1)bglB基因存在于嗜热土壤芽胞杆菌基因组中，故应以该菌的基因组DNA为模板进行基因扩增。(2)目的基因与质粒进行重组时，需将目的基因插入到启动子和终止子之间，且应靠近启动子和终止子，结合示意图可知，应在扩增的bglB基因两端分别引入Nde和BamH两种限制酶的识别序列。(3)该基因表达载体中含有bglB基因，可表达产生葡萄糖苷酶，其可分解纤维素，这样大肠杆菌就获得了分解纤维素的能力。(4)由图2可知，BglB酶在80 保温30分钟后，就会失活；由图1可知，当温度为6070 时，酶活性较高，而由图2可知7
44、0 时保温30分钟，酶活性开始减弱，而60 保温30分钟后酶活性基本不发生变化，由此可知为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好应控制在60 ，故选B。(5)在bglB基因扩增过程中加入诱变剂进行诱变处理，相比于诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌，针对性更强；基因突变是不定向的；由于PCR过程基因扩增即DNA复制快速进行，发生突变后可进行快速积累，进而便于筛选；基因突变可能导致氨基酸数目的改变，如突变后的密码子变为终止密码子，可导致蛋白质合成提前终止，进而导致氨基酸数目变少。402014新课标全国卷 生物选修3：现代生物科技专题植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基因有关。若从该植物中获得该
45、耐旱基因，并将其转移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。回答下列问题：(1)理论上，基因组文库含有生物的_基因；而cDNA文库中含有生物的_基因。(2)若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中_出所需的耐旱基因。(3)将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物_的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株。要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的_，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的_是否得到提高。(4)假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为31时，则可推测该耐旱基因整合到了_(填“同
46、源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”)。2-1-c-n-j-y40(1)全部部分(2)筛选(3)乙表达产物耐旱性(4)同源染色体的一条上解析 (1)基因文库包括基因组文库和cDNA文库，基因组文库包含生物基因组的全部基因，cDNA文库是以mRNA反转录后构建的，只含有已经表达的基因，即部分基因。(2)从基因文库中获取目的基因需要进行筛选。(3)要提高植物乙的耐旱性，需要利用农杆菌转化法将耐旱基因导入植物乙的体细胞中。要确认目的基因是否表达，可检测是否产生了目的基因的表达产物，即耐旱的相关蛋白质；也可以通过个体的表现型来检测，即观察检测其耐旱性情况。(4)如果耐旱基因整合到同源染色体的两条
47、上，相当于耐旱纯合子，则子代将全部表现为耐旱，不会出现性状分离；如果耐旱基因整合到同源染色体的一条上，则转基因植株的基因型相当于杂合子，自交后代出现耐旱不耐旱31的性状分离比。362014山东卷 【生物现代生物科技专题】人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：(1)htPA基因与载体用_切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用_技术。(2)为获取更多的卵(母)细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其_。采集的精子需要经过_，才具备受精能力。【版权所有： 21教育】(3)将重组表达载体
48、导入受精卵常用的方法是_。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行_。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的_。(4)若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到_，说明目的基因成功表达。36(1)同种限制性核酸内切酶(或同种限制酶)DNA分子杂交(或核酸探针)(2)超数排卵获能(处理)(3)显微注射法性别鉴定全能性(4)htPA(或人组织纤溶酶原激活物)解析 (1)基因工程中，重组表达载体构建时，需用同种限制性核酸内切酶切割目的基因和载体，以得到相同的黏性末端便于连接。检测目的基因是否插入受体细胞DNA的常用方法是DNA分子杂交技术(或核酸探针技术)。(2
49、)胚胎工程中，对供体母羊通常注射促性腺激素以促使其超数排卵，从而获得更多的卵(母)细胞；采集的精子并不具备受精能力，需要在体外获能处理后，才具备该能力。(3)将重组表达载体导入动物细胞常用的方法是显微注射法。在胚胎移植前，需对胚胎进行性别鉴定以获得所需性别的子代个体。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，体现了早期胚胎细胞的全能性。(4)基因工程中，目的基因是否成功表达的标志是转基因生物是否产生了目的基因控制合成的蛋白质。33 2014福建卷 生物现代生物科技专题 Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术
50、流程如图：(1)步骤中，在核移植前应去除卵母细胞的_。(2)步骤中，重组胚胎培养到_期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。(3)步骤中，需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的_设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用Hind和Pst限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有_酶的酶切位点。21cnjy(4)为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的_，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。33(1)细胞核(2)囊胚(3)核苷酸序列Hind和Pst(4)蛋白质解析 (1)步骤是核移植过程，是将上皮
51、细胞的细胞核移植到去核卵母细胞。(2)重组胚胎培养到囊胚期，可从其内细胞团分离出 ES 细胞。(3)利用PCR技术扩增目的基因，其条件是模板DNA、据Rag2基因的核苷酸序列设计的引物、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶等，欲获得目的基因Rag2需要用Hind和Pst两种限制酶切割，所以选择的表达载体上应具有Hind和Pst酶的酶切位点。(4)检测Rag2 基因是否表达成功就需要检测有无Rag2基因表达产物，又据用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验，所以应提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质进行检测。312014海南卷 生物选修3：现代生物科技专题下图是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的
52、示意图。据图回答：(1)获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在_酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在_的作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的_序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的_序列，再通过化学方法合成所需基因。(2)利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有_、_、4种脱氧核糖核苷三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。(3)由A和载体B拼接形成的C通常称为_。(4)在基因工程中，常用Ca2处理D，其目的是_。31(1)逆转录DNA聚合酶氨基酸脱氧核苷酸(2)引物模板DNA(3
53、)重组DNA(其他合理答案也可) (4)提高受体细胞的转化率(其他合理答案也可)解析 (1)以A的mRNA为模板，在逆转录酶的催化作用下合成单链DNA，然后再以该单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下合成双链DNA；根据目标蛋白质的氨基酸序列，根据密码表可推测出相应的mRNA序列，然后根据碱基互补配对原则可推测出其DNA中的脱氧核苷酸序列，再通过化学方法利用DNA合成仪合成所需基因。(2)利用PCR扩增目的基因时，需要提供目的基因作为模板，添加引物来引导子链的形成，添加四种脱氧核糖核苷三磷酸(即dCTP、dATP、dGTP、dTTP)作为原料，耐热性的DNA聚合酶来催化子链的形成；扩增过程可
54、在PCR扩增仪中完成。(3)目的基因A和载体B拼接形成的C通常称为重组DNA。(4)基因工程中，常用Ca2处理细菌细胞，使之称为感受态细胞，有利于其吸收重组DNA分子，提高受体细胞的转化率。 植物细胞工程与植物的组织培养技术52014北京卷 在25 的实验条件下可顺利完成的是()A光合色素的提取与分离B用斐林(本尼迪特)试剂鉴定还原糖C大鼠神经细胞的培养D制备用于植物组织培养的固体培养基5A解析 光合色素的提取和分离实验在常温下进行，即在25 的条件可顺利完成，A项正确。用斐林试剂鉴定还原糖实验中需要水浴加热，才能出现砖红色沉淀，常温条件下不发生反应，B项错误。哺乳动物和人类神经细胞的培养的生
55、存环境温度是3537 ，C项错误。制备用于植物组织培养的固体培养基的温度一般是1822 ，D项错误。10 2014四川卷有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、乙所示。甲乙(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、_四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是_。(2)与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和_，这些植物激素一般需要事先单独配制成_保存备用。(3)纯化菌株时，通常使用的划线工具是_。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地
56、长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有_。(4)为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是_，该实验设计是否合理？为什么？_。10(1)氮源和无机盐只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长繁殖(2)细胞分裂素母液(3)接种环接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始(4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质不合理，缺少空白对照解析 本题考查微生物的培养和分离及植物的组织培养。(1)微生物需要的营养物质主要有碳源、氮源、水和无机盐四类；选择培养基是允许特定种类微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长的培
57、养基，碳源为微生物需要的四类营养物质中的一种，缺少时，微生物不能生长和繁殖，而只以苯磺隆作为唯一碳源，只有能利用苯磺隆的微生物才能正常生长和繁殖。(2)植物激素中的生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素；植物组织培养的培养基，在实验室一般配制成母液，在4 条件下保存备用。(3)平板划线法是通过接种环在固体培养基上连续划线接种的方法；第二划线区域的第一条线上无菌落，产生的失误可能是划线时接种环灼烧未冷却，菌种被杀死，或者是划线时未从第一区域的末端开始，接种环未接触到菌种。(4)从图示可知，加入了蛋白酶后测定苯磺隆降解率，而蛋白酶专一性分解蛋白质，可推知该实验作出的假设是目的
58、菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质；实验需要空白对照，来确定加入蛋白酶后对苯磺隆降解情况的影响。292014广东卷 铁皮石斛是我国名贵中药，生物碱是其有效成分之一。应用组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎(简称PLBs，类似愈伤组织)生产生物碱的实验流程如下：在固体培养基上，PLBs的重量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如图所示，请回答下列问题：(1)选用新生营养芽为外植体的原因是_，诱导外植体形成PLBs的过程称_。(2)与黑暗条件下相比，PLBs在光照条件下生长的优势体现在_，_，_。(3)脱落酸(ABA)能提高生物碱含量，但会抑制PLBs的生长。若采用液体培养，推测添加适量的ABA可提高生物碱产量
59、。同学们拟开展探究实验验证该推测，在设计实验方案时探讨了以下问题：ABA的浓度梯度设置和添加方式：设4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复。因ABA受热易分解，故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基_后按比例加入。实验进程和取样：实验50天完成，每10天取样，将样品(PLBs)称重(g/瓶)后再测定生物碱含量。如初始(第0天)数据已知，实验过程中还需测定的样品数为_。依所测定数据确定适宜的ABA浓度和培养时间：当某3个样品(重复样)的_时，其对应的ABA浓度为适宜浓度，对应的培养时间是适应培养时间。29(1)细胞分化程度低，容易诱导形成PLBs细胞的脱分化 (2)生长起始较快快速生长
60、时间较长PLBs产量较高(3)灭菌、冷却75PLBs重量和生物碱含量乘积的平均值最大解析 (1)选用新生营养芽为外植体的原因是细胞分裂旺盛、分化程度低、容易诱导形成PLBs；由于PLBs类似愈伤组织，诱导外植体形成PLBs的过程称脱分化。(2)据图可知，与黑暗条件下相比，PLBs在光照条件下的重量高，其生长的优势体现在光照有利于生长起始较快、快速生长时间较长、PLBs产量较高。(3)由于ABA受热易分解，所以各种液体培养基灭菌并冷却后才能按比例加入一定浓度的无菌ABA母液。分析图解可知，4个ABA处理组，1个空白对照组，共5组，50天每10天取样，需要取样5次，3次重复，即55375。故实验过
61、程中还需测定的样品数为75。PLBs(类似愈伤组织)重量与生物碱含量呈正相关，故当某3个样品(重复样)的生物碱平均含量最大时，即PLBs重量和生物碱含量乘积的平均值最大时，其对应的ABA浓度为适宜浓度，对应的培养时间是适宜培养时间。292014江苏卷 为了获得植物次生代谢产物，先用植物外植体获得愈伤组织，然后在液体培养基中悬浮培养。请回答下列问题：(1)外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为_。(2)在愈伤组织悬浮培养时，细胞干重、蔗糖浓度和pH的变化如图所示。细胞干重在12 d后下降的原因有_；培养液中蔗糖的作用是_、_。(3)多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体。二倍体愈伤组织
62、细胞经_处理，会产生染色体加倍的细胞。为检测愈伤组织细胞染色体数目，压片前常用纤维素酶和_酶解离愈伤组织。若愈伤组织细胞(2n)经诱导处理后，观察到染色体数为8n的细胞。合理的解释是_、_。(4)为了更好地获得次生代谢产物，生产中采用植物细胞的固定化技术，其原理与酵母细胞固定化类似。下列说法正确的有_(填序号)。选取旺盛生长的愈伤组织细胞包埋 必须在光照条件下培养培养过程中需通空气固定化后植物细胞生长会变慢29. (1)脱分化(2)蔗糖浓度下降，pH 降低提供能源调节渗透压(3)秋水仙素(低温)果胶经加倍到4n的细胞处于有丝分裂后期经加倍到8n 的细胞处于有丝分裂中期(4)解析 (1)植物组织
63、器官通常已分化，离体培养时必须先经过脱分化才能成为愈伤组织。(2)对照图示中212 d蔗糖浓度下降，细胞干重不断上升，说明愈伤组织悬浮培养时营养来自培养液，随着愈伤组织培养时间增长，蔗糖浓度越来越低，培养液pH也渐渐下降，不再利于愈伤组织生长，12 d后干重逐渐下降。培养液中的蔗糖可以作为愈伤组织的能源，也可以调节培养液的渗透压。(3)多倍体形成常用的方法是低温处理或者秋水仙素处理正在分裂的细胞，抑制其纺锤体形成从而使其染色体数目加倍。压片前用酶解法来解离愈伤组织，可以用纤维素酶和果胶酶。愈伤组织细胞(2n)诱导多倍体时，诱导后加倍为4n的体细胞，其在有丝分裂后期，着丝点分裂，染色体数暂时为8
64、n；或是诱导后加倍为8n的体细胞处在有丝分裂中期。(4)细胞个体大难以吸附和化学结合，宜用包埋法，正确；脱分化为愈伤组织过程是避光进行的，错误；植物细胞呼吸需要氧气，正确；细胞固定化后与培养液的接触面变小，营养吸收相对减少，生长会变慢，正确。 动物细胞工程与单克隆抗体52014北京卷 在25 的实验条件下可顺利完成的是()A光合色素的提取与分离B用斐林(本尼迪特)试剂鉴定还原糖C大鼠神经细胞的培养D制备用于植物组织培养的固体培养基5A解析 光合色素的提取和分离实验在常温下进行，即在25 的条件可顺利完成，A项正确。用斐林试剂鉴定还原糖实验中需要水浴加热，才能出现砖红色沉淀，常温条件下不发生反应
65、，B项错误。哺乳动物和人类神经细胞的培养的生存环境温度是3537 ，C项错误。制备用于植物组织培养的固体培养基的温度一般是1822 ，D项错误。42014天津卷 为达到相应目的，必须通过分子检测的是()A携带链霉素抗性基因受体菌的筛选B产生抗人白细胞介素8抗体的杂交瘤细胞的筛选C转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定D21三体综合征的诊断4B解析 可通过将受体菌接种在含链霉素的培养基中筛选携带链霉素抗性基因的受体菌，A项错误。抗人白细胞介素8抗体的杂交瘤细胞应通过抗原抗体杂交技术筛选产生，B项正确。在棉花田中人工放入害虫可检验转基因抗虫棉的抗虫效果，C项错误。可利用显微镜检测21三体综合征患者的染色体
66、组成，D项错误。32014浙江卷 下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是()A连续细胞系的细胞大多具有二倍体核型B某些癌细胞在合适条件下能逆转为正常细胞C由多个祖细胞培养形成的细胞群为一个克隆D未经克隆化培养的细胞系细胞具有相同的性状3B解析 本题考查的是动物细胞培养的过程。连续细胞系被认为是发生了转化的细胞系，大多数具有异倍体核型，A项错误。一般来说，癌细胞是不能逆转为正常细胞的，但在一些因素(如放射治疗)的作用下可使癌细胞恢复为正常细胞，B项正确。细胞克隆的基本要求是来源于单个细胞(一个共同的祖细胞)，不能来自多个细胞，C项错误。未经克隆化培养的细胞系细胞具有异质性，所以不是都具有相同的性状
67、，D项错误。40 2014新课标全国卷 生物选修3：现代生物科技专题 某研究者用抗原(A)分别免疫3只同种小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数)，结果如下图所示。若要制备杂交瘤细胞，需取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目40条)，并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(染色体数目60条)按一定比例加入试管中，再加入聚乙二醇诱导细胞融合，经筛选培养及抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。回答下列问题：(1)制备融合所需的B淋巴细胞时，所用免疫小鼠的血清抗体效价需达到16 000以上，则小鼠最少需要经过_次免疫后才
68、能有符合要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中，最适合用于制备B淋巴细胞的是_小鼠，理由是_。(2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有_，体系中出现多种类型细胞的原因是_。(3)杂交瘤细胞中有_个细胞核，染色体数目最多是_条。(4)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是_。40(1)四YY小鼠的血清抗体效价最高(2)B淋巴细胞相互融合形成的细胞、骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞细胞融合是随机的，且融合率达不到100%(3)1100(4)不能无限增殖解析 (1)据图分析，第四次免疫后小鼠Y的血清抗体效价达到 16 000 以上。达到要求后的
69、 X、Y、Z 这3只小鼠中，小鼠 Y 的 B 淋巴细胞产生抗体效价最高，最适合用于制备单克隆抗体。(2)融合体系中除了未融合的细胞和杂交瘤细胞之外，还有骨髓瘤细胞和 B 淋巴细胞的自身融合产物，由于细胞融合是随机的，且融合率达不到100%，故体系中会出现多种类型的细胞。(3)杂交瘤细胞形成后，由于核膜具有流动性，故小鼠的免疫B淋巴细胞细胞核与其骨髓瘤细胞细胞核会融合形成一个杂交的细胞核，因此染色体数目最多是100条。(4)未融合的 B 淋巴细胞经多次传代培养后，仍然是不能无限增殖的细胞，同时 B淋巴细胞不可能渡过原代培养和传代培养过程中的两次“危机”而达到细胞系水平。胚胎工程192014江苏卷
70、 杜泊羊以其生长速度快、肉质好等优点，被称为“钻石级”肉用绵羊。科研工作者通过胚胎工程快速繁殖杜泊羊的流程如下图所示，相关叙述正确的是()A为了获得更多的卵母细胞，需用雌激素对雌性杜泊羊进行处理B从卵巢中采集的卵母细胞可直接与获能的精子进行体外受精C为避免代孕绵羊对植入胚胎产生排斥反应，应注射免疫抑制剂D为了进一步扩大繁殖规模，可通过胚胎分割技术获得同卵双胎19D解析 胚胎工程中用促性腺激素来促使雌性个体超数排卵，A项错误。从卵巢中采集的卵母细胞为初级卵母细胞，需要培养至减数第二次分裂中期才能与获能的精子进行受精，B项错误。胚胎学原理中母体对外来胚胎没有排斥作用，故不需要注射免疫抑制剂，C项错
71、误。胚胎分割产生的胚胎遗传物质来源相同，分割产生的多个胚胎能用于扩大繁殖规模，如用胚胎分割技术获得同卵双胎，D项正确。36 2014山东卷 【生物现代生物科技专题】人组织纤溶酶原激活物(htPA)是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：(1)htPA基因与载体用_切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用_技术。(2)为获取更多的卵(母)细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其_。采集的精子需要经过_，才具备受精能力。(3)将重组表达载体导入受精卵常用的方法是_。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行_
72、。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的_。(4)若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到_，说明目的基因成功表达。36(1)同种限制性核酸内切酶(或同种限制酶)DNA分子杂交(或核酸探针)(2)超数排卵获能(处理)(3)显微注射法性别鉴定全能性(4)htPA(或人组织纤溶酶原激活物)解析 (1)基因工程中，重组表达载体构建时，需用同种限制性核酸内切酶切割目的基因和载体，以得到相同的黏性末端便于连接。检测目的基因是否插入受体细胞DNA的常用方法是DNA分子杂交技术(或核酸探针技术)。(2)胚胎工程中，对供体母羊通常注射促性腺激素以促使其超数排卵，从而获得更多的卵(母
73、)细胞；采集的精子并不具备受精能力，需要在体外获能处理后，才具备该能力。(3)将重组表达载体导入动物细胞常用的方法是显微注射法。在胚胎移植前，需对胚胎进行性别鉴定以获得所需性别的子代个体。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，体现了早期胚胎细胞的全能性。(4)基因工程中，目的基因是否成功表达的标志是转基因生物是否产生了目的基因控制合成的蛋白质。33 2014福建卷 生物现代生物科技专题 Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如图：(1)步骤中，在核移植前应去除卵母细胞的_。(2)步骤中，重组胚胎培养
74、到_期时，可从其内细胞团分离出ES细胞。(3)步骤中，需要构建含有Rag2基因的表达载体。可以根据Rag2基因的_设计引物，利用PCR技术扩增Rag2基因片段。用Hind和Pst限制酶分别在片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有_酶的酶切位点。(4)为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的_，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。33(1)细胞核(2)囊胚(3)核苷酸序列Hind和Pst(4)蛋白质解析 (1)步骤是核移植过程，是将上皮细胞的细胞核移植到去核卵母细胞。(2)重组胚胎培养到囊胚期，可从其内细胞团分离出 ES 细胞
75、。(3)利用PCR技术扩增目的基因，其条件是模板DNA、据Rag2基因的核苷酸序列设计的引物、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶等，欲获得目的基因Rag2需要用Hind和Pst两种限制酶切割，所以选择的表达载体上应具有Hind和Pst酶的酶切位点。(4)检测Rag2 基因是否表达成功就需要检测有无Rag2基因表达产物，又据用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验，所以应提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质进行检测。22014江苏卷 下列关于蛙胚胎发育过程的叙述，正确的是()A通过细胞分裂不断增加细胞数量，并在一定时期发生细胞分化B胚胎发育过程中细胞不断分裂，但不发生凋亡C随着细胞分裂次数的增加，蛙胚的有机
76、物总量不断增加D发育过程中蛙胚从环境中获得的氧气和营养物质逐渐增加2A解析 蛙受精卵经过细胞分裂形成早期胚胎，在早期胚胎发育过程中从囊胚期就开始出现分化，A项正确。胚胎发育过程中细胞不断分裂，但是到一定时期部分细胞就不再分裂而分化为有特定形态、结构及功能的细胞，行使功能一段时间后就会衰老和凋亡，B项错误。在胚胎发育的早期，有机物在不断分解为细胞分裂供能，所以有机物总量减少，C项错误。蛙胚胎发育过程中始终由卵黄提供营养，D项错误。生物技术的安全性和伦理问题2 2014重庆卷 生物技术安全性和伦理问题是社会关注的热点。下列叙述，错误的是()A应严格选择转基因植物的目的基因，避免产生对人类有害的物质
77、B当今社会的普遍观点是禁止克隆人的实验，但不反对治疗性克隆C反对设计试管婴儿的原因之一是有人滥用此技术选择性设计婴儿D生物武器是用微生物、毒素、干扰素及重组致病菌等来形成杀伤力2D解析 在应用基因工程技术培育转基因植物时，应避免选择可能产生对人类有害物质的目的基因，A项正确。在对克隆技术引发的伦理问题的争论中，普遍的观点是禁止克隆人的实验，但不反对治疗性克隆，B项正确。在对胚胎工程技术引发的伦理问题的争论中，反对设计试管婴儿的原因之一是可能有人滥用此技术选择性设计婴儿， C项正确。生物武器种类包括致病菌、病毒、基因重组的致病菌、生化毒剂等，不包括干扰素， 干扰素是动物细胞在受到某些病毒感染后分
78、泌的具有抗病毒功能的宿主特异性糖蛋白， D项错误。生态工程生物工程及技术综合35 2014山东卷 【生物生物技术实践】玉米是重要的粮食作物，经深加工可生产酒精、玉米胚芽油和果糖等。流程如下：(1)玉米秸秆中的纤维素经充分水解后的产物可被酵母菌利用发酵生产酒精。培养酵母菌时，该水解产物为酵母菌的生长提供_。发酵过程中检测酵母菌数量可采用_法或稀释涂布平板法计数。(2)玉米胚芽油不易挥发，宜选用_法或_法从玉米胚芽中提取。(3)玉米淀粉经酶解形成的葡萄糖可在葡萄糖异构酶的作用下转化成果糖。利用_技术可使葡萄糖异构酶重复利用，从而降低生产成本。(4)利用PCR技术扩增葡萄糖异构基因时，需用耐高温的_
79、催化。PCR一般要经历三十次以上的循环，每次循环包括变性、_和_三步。35(1)碳源显微镜直接计数(2)压榨萃取(两空可颠倒)(3)固定化酶(4)(Taq)DNA聚合酶(低温)复性(或退火) (中温)延伸解析 (1)纤维素经充分水解后的产物是葡萄糖，可为酵母菌的生长提供碳源。发酵过程中检测酵母菌的数量可采用显微镜直接计数法或稀释涂布平板法。(2)对于不易挥发的植物有效成分宜采用压榨法或萃取法提取。(3)固定化酶技术的优点之一是可反复使用，从而降低生产成本。(4)PCR技术的原理是体外DNA分子的复制，需用耐高温的DNA聚合酶催化，其步骤包括：变性、复性(或退火)和延伸三步。292014江苏卷
80、为了获得植物次生代谢产物，先用植物外植体获得愈伤组织，然后在液体培养基中悬浮培养。请回答下列问题：(1)外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为_。(2)在愈伤组织悬浮培养时，细胞干重、蔗糖浓度和pH的变化如图所示。细胞干重在12 d后下降的原因有_；培养液中蔗糖的作用是_、_。(3)多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体。二倍体愈伤组织细胞经_处理，会产生染色体加倍的细胞。为检测愈伤组织细胞染色体数目，压片前常用纤维素酶和_酶解离愈伤组织。若愈伤组织细胞(2n)经诱导处理后，观察到染色体数为8n的细胞。合理的解释是_、_。(4)为了更好地获得次生代谢产物，生产中采用植物细胞的固定化技
81、术，其原理与酵母细胞固定化类似。下列说法正确的有_(填序号)。选取旺盛生长的愈伤组织细胞包埋 必须在光照条件下培养培养过程中需通空气固定化后植物细胞生长会变慢29. (1)脱分化(2)蔗糖浓度下降，pH 降低提供能源调节渗透压(3)秋水仙素(低温)果胶经加倍到4n的细胞处于有丝分裂后期经加倍到8n 的细胞处于有丝分裂中期(4)解析 (1)植物组织器官通常已分化，离体培养时必须先经过脱分化才能成为愈伤组织。(2)对照图示中212 d蔗糖浓度下降，细胞干重不断上升，说明愈伤组织悬浮培养时营养来自培养液，随着愈伤组织培养时间增长，蔗糖浓度越来越低，培养液pH也渐渐下降，不再利于愈伤组织生长，12 d后干重逐渐下降。培养液中的蔗糖可以作为愈伤组织的能源，也可以调节培养液的渗透压。(3)多倍体形成常用的方法是低温处理或者秋水仙素处理正在分裂的细胞，抑制其纺锤体形成从而使其染色体数目加倍。压片前用酶解法来解离愈伤组织，可以用纤维素酶和果胶酶。愈伤组织细胞(2n)诱导多倍体时，诱导后加倍为4n的体细胞，其在有丝分裂后期，着丝点分裂，染色体数暂时为8n；或是诱导后加倍为8n的体细胞处在有丝分裂中期。(4)细胞个体大难以吸附和化学结合，宜用包埋法，正确；脱分化为愈伤组织过程是避光进行的，错误；植物细胞呼吸需要氧气，正确；细胞固定化后与培养液的接触面变小，营养吸收相对减少，生长会变慢，正确。
