1、选修一生物技术实践第4讲生物化学与分子生物学技术实践1. 下图是用除去DNA的滤液进行血红蛋白的提取和分离实验的装置，下列有关叙述不正确的是()A首先用图甲装置对滤液进行处理，其目的是去除相对分子质量较大的杂质B图乙装置的试管中收集到的液体中最先得到的是相对分子质量较大的蛋白质C用图乙装置分离血红蛋白时，待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每管收集5 mL，连续收集D图丙装置中电泳法分离提纯血红蛋白的原理是血红蛋白带有一定量的电荷，在电场的作用下向一极移动 解析用图甲装置对滤液进行处理，其目的是去除相对分子质量较小的杂质。图乙装置表示通过凝胶色谱法分离蛋白质的过程。蛋白质的相对分
2、子质量较大，被排阻在凝胶颗粒的外面，在颗粒之间迅速通过。答案A2.有关DNA粗提取的操作，正确的是(多选)()A.盛放鸡血细胞液的容器最好是塑料容器B.将鸡血细胞液与蒸馏水混合，用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，释放DNAC.向溶解DNA的烧杯中加蒸馏水的目的是漂洗DNAD.用漏斗和滤纸过滤析出的DNA，得到DNA粘稠物解析在DNA粗提取中用塑料容器可减少DNA吸附，有利于DNA的提取；将鸡血细胞液与蒸馏水混合，用玻璃棒沿一个方向快速搅拌，既能加速DNA释放，又可防止DNA断裂；向溶解DNA的烧杯中加蒸馏水的目的是稀释NaCl溶液使其降至0.14 mol/L，使DNA析出，从而获得DNA粗提取物；D
3、NA粗提取中通常用不同层数的纱布、漏斗、烧杯等进行过滤，第一次过滤所得粘稠物主要是细胞碎片等杂质，DNA主要存在于滤液中，第二次过滤所得粘稠物主要是DNA。答案AB3. 下图为胡萝卜素的纸层析结果示意图，属于标准样品的层析点的是()A BC D 解析标准样品中的色素种类单一，在滤纸上扩散的速度相同，因此只出现一个色素圆点。答案B4.请回答下列与菊花茎段组织培养实验操作有关的问题。(1)由于菊花茎段组织培养比较容易，故在配制MS固体培养基时，(必需添加、不必添加)植物激素。培养基配制完毕后，还需进行灭菌。(2)应选用生理状况好的菊花嫩枝茎段作为，这是因为其更容易被诱导_。(3)菊花茎段在接种前要
4、用适当浓度的溶液进行表面消毒。(4)接种前，工作台要用体积分数为70%的酒精擦拭一遍。之后，所有的接种操作都必须在旁进行，并且每次使用器械后，都需要用灭菌。(5)接种后的锥形瓶最好放在中培养。培养期间应注意事项主要有：定期、控制好，并每日给予适当时间光照。解析(1)菊花茎段自身能合成植物激素，因此培养基中不必添加植物激素，培养基配制完毕需进行高压蒸汽灭菌。(2)外植体的选择直接关系到实验的成败因此应选择容易被诱导脱分化和再分化的菊花嫩枝作为外植体。(3)为防止微生物污染，菊花茎段在接种前要用适当浓度的酒精和氯化汞溶液进行表面消毒。(4)为避免接种前、接种中污染外植体以及接种后污染环境，因此接种
5、前，工作台要用体积分数为70%的酒精擦拭一遍，接种过程中所有的接种操作都必须在酒精灯火焰旁进行，并且每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌。(5)外植体在培养过程中要保持无菌环境，控制好温度，并给予适当光照。答案(1)不必添加高压蒸汽(2)外植体脱分化和再分化(3)酒精和氯化汞(4)酒精灯火焰灼烧(5)无菌箱消毒培养温度5.如图为提取胡萝卜素的装置图，请据图回答下列问题。(1)的作用是_。(2)内加入的萃取液一般是，原料在加入前，一般要进行、处理。(3)该萃取过程采用的是水浴加热，其目的是_。(4)为了取得最佳萃取效果，萃取的时间应该(“长”或“短”)。解析图示装置为萃取装置，其中为冷凝管，其作
6、用是降温，以防止加热时有机溶剂挥发，是烧瓶，其内装有萃取剂，胡萝卜素的适宜萃取剂是石油醚，为防止有机溶剂明火加热时引起燃烧、爆炸，萃取时有必要采用水浴加热，而不用明火加热。答案(1)冷凝管降温，防止加热时有机溶剂挥发(2)烧瓶石油醚粉碎干燥(3)避免有机溶剂明火加热引起燃烧、爆炸(4)长6.在进行DNA亲子鉴定时，需大量的DNA。PCR技术(多聚酶链式反应)可以使样品DNA扩增，获得大量DNA克隆分子。该技术的原理是利用DNA的半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制(如图，图中黑色长方形是引物)。在很短的时间内将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。(1
7、)图中的变性、延伸分别是指_ _、_。(2)假设PCR反应中的DNA模板为P，第一轮循环的产物2个子代DNA为N1，第二轮的产物4个子代DNA为N2，N1、N2中分别含有模板DNA单链的DNA分别有个、个。若继续循环，该DNA片段共经过30次循环后能形成个DNA片段。(3)某样品DNA分子中共含3 000个碱基对，碱基数量满足：，若经5次循环，至少需要向试管中加入个腺嘌呤脱氧核苷酸。(不考虑引物所对应的片段)(4)若图为第一轮循环产生的产物。请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。解析(1)变性的实质是DNA双链解旋；延伸的实质是以DNA单链为模板，按照碱基互补配对原则合成子链的过程。(2
8、)由于PCR原理为DNA双链复制，其特点是半保留复制，所以无论复制几次，模板链一直存在于2个DNA分子中。DNA复制的数量变化是指数式增长方式。(3)由可知ATGC1122，所以A的比例为，在一个DNA分子中的数量为3 00021 000个，5次循环的DNA数为32个，所以以原料合成的DNA数相当于32131个，至少需腺嘌呤脱氧核苷酸为311 00031 000个。(4)画图的关键是注意引物A、B的位置和所对应的模板链。答案(1)模板DNA双链解旋形成单链在DNA聚合酶的作用下，原料脱氧核苷酸聚合形成新的DNA链(2)22230(3)31 000(4)如解析图7. 血红蛋白是人和其他脊椎动物红
9、细胞的主要组成成分，负责血液中O2和部分CO2的运输。请根据血红蛋白的提取和分离流程图回答问题。(1)将实验流程图补充完整：A为_，B为_。凝胶色谱法的基本原理是根据_分离蛋白质的有效方法。(2)洗涤红细胞的目的是去除_，洗涤次数过少，无法除去_；离心速率过快和时间过长会使_一同沉淀，达不到分离的效果。洗涤干净的标志是_。释放血红蛋白的过程中起作用的是_。(3)在洗脱过程中加入物质的量浓度为20 mmol/L的磷酸缓冲液(pH为7.0)的目的是_。如果红色区带_，说明色谱柱制作成功。 答案(1)血红蛋白的释放样品的加入和洗脱相对分子质量的大小(2)杂蛋白(血浆蛋白)血浆蛋白白细胞和淋巴细胞离心后的上清液中没有黄色蒸馏水和甲苯(3)准确模拟生物体内的生理环境，保持体外的pH和体内的一致均匀一致的移动
