1、第1章 发酵工程 第3节 发酵工程及其应用 从社会中来 青霉素是世界上第一个应用于临床的抗生素。早期科学家只能从青霉菌中提取少量青霉素，它的价格贵如金。随着高产菌种的选育、发酵技术的发展等，青霉素步入了产业化生产的道路。如今，一瓶规格160万单位的青霉素注射剂的价格只要1元左右。那么，在工业上，青霉素究竟是怎样生产的呢？2024/5/24选育高产菌种 扩大培养 配制培养基 灭菌 接种 发酵罐内发酵 分离、提纯产物 获得产品 一、发酵工程的基本环节 1.选育菌种（1）目的：获得_ 性状优良的菌种（2）菌种来源：从自然界中筛选、_或_。诱变育种 基因工程育种（3）实例：筛选产酸量高的黑曲霉用来生产
2、柠檬酸；使用基因工程改造的啤酒酵母，加速发酵、缩短生产周期；思考讨论：某镇特产一种美酒，以下是对该镇环境的描述：四面环山，地势低洼，气候炎热，具有独特的微生物种群，因为与外界的空气对流循环较缓慢，所以微生物种群较稳定。这对你理解发酵工程中菌种选育的重要性有什么启示？优良的菌种不仅具有健壮，不易退化，其发酵产品的产量高、质量稳定等优点，它往往还会赋予发酵产品独特的风味，因此菌种选育环节在很大程度上决定了生物发酵产物的成败。2.扩大培养（1）目的：获得_ 更多的菌种（2）原因：工业发酵罐的体积一般为几十到几百立方米，接入的菌种总体积需要几立方米到几十立方米。所以，在发酵之前还需要对菌种进行扩大培养
3、。3.配制培养基：在菌种确定之后，要_制备培养基。在生产实践中，培养基的配方要经过_才能确定。4.灭菌：选择原料 反复试验（1）灭菌原因：发酵工程种所用的菌种大多是_，一旦有杂菌污染，可能导致_。单一菌种 产量大大降低（2）_ 都必须经过严格的灭菌；培养基和发酵设备 5.接种：将_的菌种投放到_ _中 发酵罐 扩大培养后 6.发酵罐内发酵 发酵工程的中心环节（1）要求：发酵过程中，要_培养液中_、_等，以_；要及时添加_，要严格控制_、_和_等发酵条件；随时检测 微生物数量 产物浓度 了解发酵进程 必需的营养物质 温度 pH 溶氧量（2）严格控制发酵条件的原因：环境条件不仅会影响微生物的生长繁
4、殖，而且影响微生物代谢物的形成；严格控制发酵条件，有利于使发酵全过程处于最佳状态（3）不同发酵条件的影响实例谷氨酸发酵 在_和_条件下会积累谷氨酸；在_条件下则容易生成谷氨酰胺和N-乙酰谷胺酰胺；中性 弱碱性 酸性 电动机 排气管 pH计 冷却水排出口 冷却夹层 发酵液 搅拌叶轮 生物传感器装置 空气入口 放料管 阀门 培养物或营养物质的加入口 观察孔 取样管 温度传感器和控制装置 冷却水进入口（4）现代发酵工程使用的发酵罐的优点 均有_，能对发酵过程中的温度、pH、溶氧量、罐压、通气量、搅拌、泡沫和营养等进行_和_，还可以进行_，使发酵全过程处于_；计算机控制系统 监测 控制 反馈控制 最佳
5、状态 7.分离、提纯产物 方法：发酵产品是微生物细胞本身时，可在发酵结束之后，采用_、_等方法将菌体_和_；发酵产品是代谢物时，可_ _采取_ _的_、_和_措施来获得产品；过滤 沉淀 分离 干燥 根据产物的性质 适当 提取 分离 纯化 8.获得产品：啤酒 味精 1.微生物菌种资源丰富，选择发酵工程用的菌种时，需要考虑哪些因素？在低成本的培养基上能迅速生长繁殖；生产所需代谢物的产量高；发酵条件易控制；菌种不易变异，退化等。2.怎样对发酵条件进行调控以满足微生物的生长需要？反复试验确定培养基的配方；对培养基和发酵设备进行严格的灭菌；随时检测培养液中微生物的数量、产物浓度等；及时添加必需的营养组分
6、；严格控制温度、pH和溶氧量等发酵条件，使用计算机控制系统对各种条件进行监测和控制，以及反馈控制【思考讨论】3.在产物分离和提纯方面，发酵工程与传统发酵技术相比有哪些改进之处？传统发酵技术获得的产物一般不是单一的组分，而是成分复杂的混合物，很多时候不会再对产物进行分离和提纯处理，或者仅采用简单的沉淀、过滤等方法来分离提纯产物。发酵工程中使用的分离和提纯产物的方法较多。在产物的初分离阶段，常采用沉淀、萃取、膜分离、吸附或离子交换等方法；在进一步纯化阶段，会采用液相层析法、结晶法等方法。发酵工程产物无论是代谢物还是菌体本身，都需要进行质量检查，合格后才能成为正式产品 4.在进行发酵生产时,排出的气
7、体和废弃培养液等能直接排放到外界环境中吗?为什么？不能；因为在进行发酵生产时，微生物及其代谢物中都可能含有危害环境的物质。为了减少或避免污染物的产生和排放，实现清洁生产，应该对排出的气体和废气培养液进行二次清洁或灭菌处理。二、发酵工程的应用（一）发酵工程的优点：生产条件温和；原料来源丰富且价格低廉；产物专一；废弃物对环境的污染小和容易处理；因此，发酵工程在食品工业、医药工业、农牧业等许多领域得到了广泛的应用，形成了规模庞大的发酵工业。1.在食品工业上的应用（1）生产传统的发酵食品 实例1 生产酱油大豆 黑曲霉 蛋白质水解成小分子的肽和氨基酸 淋洗、调制 酱油 实例2 酿酒谷物或水果 酿酒酵母
8、酒类（二）发酵工程的应用 啤酒的工业化生产流程 啤酒的工业化流程完成酵母菌的繁殖，大部分糖的分解和代谢物的生成。主发酵结束后，发酵液还不适合饮用，要在低温、密闭的环境下储存一段时间进行后发酵，这样才能形成澄清、成熟的啤酒。发芽焙烤碾磨糖化蒸煮发酵主发酵冷却 消毒终止后发酵过滤 1.与传统的手工发酵相比，在下面啤酒的发酵生产过程中，哪些工程手段使啤酒的产量和质量明显提高?菌种的选育、对原材料的处理、发酵过程的控制、产品的消毒等，都有助于提高啤酒的产量和品质。2.现在市面上流行一种“精酿”啤酒，它的制作工艺与普通啤酒有所不同，如一般不添加食品添加剂、不进行过滤和消毒处理等。有人认为饮用“精酿”啤酒
9、比饮用“工业”啤酒更健康，你怎么看待这个问题？“精酿”啤酒是小规模酿造产品，发酵时间长、产量低和价格高，却依然有着市场需求，我们如何辩证地看待大规模生产与小规模制作？应该辩证地看待这一产品。一方面，这类产品具有多样化的特点，能够满足一些人对独特口感的需求，或者满足一些人的时尚追求。另方面，这类产品是手工作坊式生产的，存在啤酒品质不稳定、价格昂贵的问题。增加食物的营养，改善食品的口味、色泽和品质，延长食品的保存期（2）生产食品添加剂 食品添加剂的作用：实例1柠檬酸柠檬酸是一种食品酸度调节剂；可以通过黑曲霉的发酵制得；实例2味精由谷氨酸棒状杆菌发酵可以得到谷氨酸；谷氨酸经过一系列处理就能制成味精；
10、常见的食品添加剂添加剂类型 举例 酸度调节剂 L-苹果酸、柠檬酸、乳酸 增味剂 5-肌苷酸二钠、谷氨酸钠 着色剂 -胡萝卜素、红曲黄色素 增稠剂 黄原胶、-环状糊精、结冷胶 防腐剂 乳酸链球菌素、溶菌酶（3）生产酶制剂 常见酶制剂-淀粉酶、-淀粉酶、果胶酶、氨基肽酶、脂肪酶酶制剂应用 食品的直接生产、改进生产工艺、简化生产过程、改善产品的品质和口味、延长食品储存期和提高产品产量等；酶制剂来源少数由动植物生产；绝大多数通过发酵工程生产；2.在医药工业上的应用（1）采用基因工程的方法，将植物或动物的基因转移到微生物中，获得具有某种药物生产能力的微生物 实例：利用经过基因改造的微生物生产生长激素释放
11、抑制激素；利用基因工程改造的微生物生产疫苗。将病原体的某个或某几个抗原基因转入适当的微生物细胞，获得的表达产物就可以作为疫苗使用。如某种乙肝疫苗的生产。（2）直接对菌种进行改造，再通过发酵技术大量生产所需要的产品 实例：青霉素高产菌株的培育 利用微生物生产过去只能从植物中分离提取的紫杉醇、青蒿素前体等化合物；3.在农牧业上的应用（1）生产微生物肥料 微生物肥料的种类：根瘤菌肥、固氮菌肥微生物肥料的作用：生物肥料利用了微生物在代谢过程中产生的有机酸、生物活性物质等来增进土壤肥力，改良土壤结构，促进植株生长；有的微生物肥料可以抑制土壤中病原微生物的生长，从而减少病害的发生.（2）生产微生物农药 微
12、生物农药的作用机理：利用微生物或其代谢物来防治病虫害实例：苏云金杆菌 防治80多种农林虫害。白僵菌 防治玉米螟、松毛虫等虫害。井冈霉素（一种放线菌产生的抗生素）防治水稻枯纹病。防治类型：生物防治（3）生产微生物饲料 原理：微生物含有丰富的蛋白质，且繁殖速度快实例1单细胞蛋白 以淀粉或纤维素的水解液、制糖工业的废液等为原料，通过发酵获得了大量的微生物菌体，即单细胞蛋白；单细胞蛋白应用：单细胞蛋白生产过程：食品添加剂、微生物饲料；单细胞蛋白成分：不仅含有丰富的蛋白质，还含有糖类、脂质和维生素等物质 实例2-乳酸菌在青贮饲料中添加乳酸菌，可以提高饲料的品质，使饲料保鲜，动物食用后还能提高免疫力。4.
13、在其他方面的应用（1）解决资源短缺与环境污染问题 随着对纤维素水解研究的不断深入，利用纤维废料发酵生产酒精、乙烯等能源物质已取得成功（2）将极端微生物应用于生产实践 自然界中还存在着一定数量的极端微生物，它们能在极端恶劣的环境（高温、高压、高盐和低温等环境）中正常生活。极端微生物：举例：嗜热菌、嗜盐菌可以用来生产洗涤剂嗜低温菌有助于提高热敏性产品的产量。食品工业 医药工业 生产传统发酵食品 农牧业 其他方面 生产食品添加剂 发酵工程应用 生产酶制剂 采用基因工程的方法，将植物或动物的基因转移到微生物中，获得具有某种药物生产能力的微生物。直接对菌种进行改造，再通过发酵技术大量生产所需要的产品。生
14、产微生物肥料 生产微生物农药 生产微生物饲料 解决资源短缺与环境污染问题 将极端微生物应用于生产实践【课堂小结】(1)生产柠檬酸需要筛选产酸量高的乳酸菌()(2)谷氨酸的发酵生产需在强碱性条件下进行()(3)谷氨酸的发酵生产在酸性条件下容易形成谷氨酰胺和N乙酰谷氨酰胺()(4)现代发酵工程中所用的菌种大多是复合菌种以提高生产效率()【基础过关】(5)发酵工程生产条件温和、原料来源丰富，但废弃物对环境污染很大，不易处理。()(6)目前的酶制剂全部是微生物发酵生产的。()(7)现在已经可以通过微生物生产紫杉醇。()(8)单细胞蛋白指通过发酵而获得的微生物菌体。()二、拓展应用 1.在青霉素的发酵生
15、产过程中，人们遇到了两个问题。请你运用所学知识或查阅资料，并发挥想象力，提出解决这些问题的思路。(1)青霉素发酵是高耗氧过程，如何能够保证在发酵过程中给微生物持续高效地供氧呢？(提示：血红蛋口具有携带O2的能力)可以用基因工程的方法，将血红蛋白基因转入青霉素生产菌来提高菌体对氧的吸收和利用率。(2)在发酵过程中，总有头孢霉素产生。人们通过对青霉素生产菌代谢途径的研究发现，在青霉素与头孢霉素的合成过程中，它们有一个共同的前体，这个前体经过两种不同酶的作用分别合成两个产物。如何改造青霉素生产菌使其只生产青霉素或者只生产头孢霉素呢？可以对两种酶的基因进行改造或敲除其中一种酶的基因，从而使青霉素生产菌
16、只生产一种产物。2.通过微生物发酵，可以将粮食(如玉米、小麦等)及各种植物纤维加工成燃料乙醇；将燃 料乙醇和普通汽油按一定比例混配，就形成了目前在我国多地广泛使用的乙醇汽油。乙醇汽油的环保性令人称道。调査显示，使用乙醇汽油与使用普通汽油相比，排放到空气中的NO2、CO等均有不同程度下降。有人认为燃料乙醇“可再生”；但也有人认为，生产燃料乙醇需要消耗大量粮食,会增加粮食短缺的风险。请你尝试通过查阅资料,评估这一风险，并说明在生产时应如何规避这一风险。在生产燃料乙醇时，为了规避这一风险，应该使用陈化粮食(如陈化的稻谷等)或者非粮食生物材料(如秸秆等)。使用陈化粮食来生产燃料乙醇，还有利于防止问题粮
17、食流入市场。复习与提高 1.某化工厂为了处理排出污水中的一种有害的、难以降解的有机化合物A，其研究团队用化合物A、磷酸盐、镁盐和微量元素等配制了培养基，成功地筛选出能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如下图所示，请分析冋答问题。(1)在培养基中加入化合物A的目的是_，这种培养基属于_培养基 (2)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量 _ 的培养液，接入新的培养液中连 续培养，使目的菌数量_(3)若要研究目的菌的生长规律，可挑取单个菌落进行液体培养，再采用_方法进行计数。请你预测目的菌的种群数量会发生怎样的变化。筛选出可以降解化合物A的微生物 选择 显著降低 扩增 细菌计数板计
18、数 S型增长(4)将目的菌用于环境保护实践时，还有哪些问题需要解决？目的菌能否在自然环境中大量生长繁殖、是否会产生对环境有害的代谢物、降解化合物A后是否会产生二次污染等问题都需要研究清楚后，才能进行实践。(5)有人提出，可以通过改造细菌的基因来获得能够降解化合物A的细菌，请分析这种方法是否可行。可行。这是后面将要学习的基因工程的基本思路。2.某个高温日，某校三位高中学生相约去吃冰激凌，之后两人都出现腹泻现象，于是他们怀疑冰激凌中的大肠杆菌含量超标。老师建议他们利用学过的有关微生物培养的知识对此冰激凌进行检测。经过一番资料查阅，他们提出了如下实验设计思路。立即去卖冰激凌的小店再买一个同样品牌的同
19、种冰激凌；配制伊红一亚甲蓝琼脂培养基(该培养基可用来鉴别大肠杆菌，生长在此培养基上的大肠杆菌菌落呈深紫色，并有金属光泽)、灭菌、倒平板；取10 mL刚融化的冰激凌作为原液，然后进行梯度稀释，稀释倍数为1 x 101 X105；取每个浓度的冰激凌液各0.1mL，用涂布平板法进行接种，每个浓度涂3个平板，一共培养18个平板；在适宜温度下培养48 h,统计菌落数目。(1)请你从下面几个角度对这三位同学的思路进行评议。他们只打算对一个冰激凌进行检测，理由是：两个人吃过冰激凌后，都拉肚子了，所以 再检测一个就足以说明问题。你同意这样的观点吗？为什么？不同意。只检测一个冰激凌数据太少，不能排除偶然因素的影
20、响。有没有必要对冰激凌原液进行梯度稀释？为什么？【提示：我国卫生部门规定的饮用水标 准是：1 mL自来水中细菌总数不可以超过100个(37培养24h),1 000 mL自来水中大肠杆菌菌 落数不能超过3个(37培养48 h)没有必要。根据国家的标准，自来水中的大肠杆菌数目应该是非常少的。即使冰激凌中大肠杆菌数目超标了，也不可能很离谱，如果进行梯度稀释，最后培养出来的菌落数可能不在计数要求的范围内，从而导致结果误差大。并不是所有的细菌检测培养都需要进行梯度稀释，而是要根据实际情况来确定培养方案。他们认为，在用该方法统计菌落数目时不需要设计对照组，所以只准备培养18个平板。你认为在这项检测中是否需
21、要对照组？为什么？需要设置对照组。严格来说，应该设置两组对照组。一组为阴性对照组，不进行涂布或者用无菌水涂布平板；另一组为阳性对照组，涂布大肠杆菌。前者可以说明培养基是否被污染，后者可以说明该培养基能否培养出大肠杆菌。(2)下图所示为4种菌落分布图，一般不能由涂布平板法得到的是 _ B(3)在完善实验设计思路后，三位同学进行 了实验。培养结果显示，除了深紫色菌落，还有其他菌落存在，这说明了什么？如果以菌落数代表样品中的大肠杆菌数量，则统计结果比实际值是偏多还是偏少？为什么？说明冰激凌中不仅有大肠杆菌，还有其他细菌或真菌等。统计结果比实际值偏少。因为有些菌落可能会重叠，统计时容易将其误认为是一个菌落，并且这种计数方法统计的是活菌的数目。(4)如果实验结果显示，检测的冰激凌中大 肠杆菌含挝超标了。接下来他们应该做什么？应该马上去小店告知店主这批冰激凌不能再卖了；还要告知食品卫生管理部门，以对这批冰激凌的来源进行追踪调查。
