1、培养基对微生物的选择利用（2012山东）34.(8分)【生物生物技术实践】辣椒素作为一种生物碱广泛用于食品保健、医药工业等领域。辣椒素的获得途径如图。（1）图中和分别表示辣椒组织培养中细胞的_和_过程。（2）图中培养外植体的培养基中常用的凝固剂是_。培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值_（填“高”或“低”）时，有利于芽的分化。对培养基彻底灭菌时，应采用的灭菌方法是_。（3）图中外植体的消毒所需酒精的体积分数是_。用酶解法将愈伤组织分离成单细胞时，常用的酶是_和纤维素酶。（4）提取辣椒素过程中，萃取加热时需安装冷凝回流装置，其目的是_。【答案】（1）脱分化(或去分化) ; 再分化（2）琼脂；
2、低； 高压蒸汽灭菌（3）70%； 果胶酶（4）防止有机溶剂的挥发【解析】（1）由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程称为脱分化，脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。（2）培养基中常用的凝固剂是琼脂。同时使用生长素和细胞分裂素时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向。生长素和细胞分裂素用量的比值低时，有利于芽的分化；反之则利于根的分化。培养基应用高压蒸汽灭菌锅灭菌。组织分离成单细胞所用的酶是果胶酶和纤维素酶。（4）用萃取法提取植物有效成分时，应在加热瓶口安装冷凝回流装置，目的是防止加热时有机溶剂挥发。【试题评价】本题以辣椒素为切入点，考查了植物
3、组织培养的过程，组织培养培养基的成分，植物激素对组织培养过程的影响，对外植体消毒的方法及萃取过程的注意事项等内容，基础性强，难度不大。（2012北京）5高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是A将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中B将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上C将转基因植物叶片接种到无菌培养基上D将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上【答案】C【解析】植物组织培养中的外植体必须在严格的无菌环境中进行培养，而且操作的各环节都要注意严格灭菌，必须无菌操作，C对；葡萄酒的制作原理是利用酵母菌无氧发酵时产生酒精，在无氧条件下，大部分微生物都不能生存，随着发酵的进行，酒精度
4、增大，也有杀菌的作用；而制作腐乳时，主要是将毛霉等微生物接种在豆腐上，此过程的加盐、加卤汤等操作均有一定的杀菌作用；选择培养基只能允许目的菌生长，会抑制其他杂菌生长，因此不是严格无菌操作时A、B、D选项的情况下比C选项的受影响要小。【试题点评】本题考查对传统发酵技术的应用、微生物的培养和植物培养技术中无菌操作的掌握。重点要求考生熟悉相应操作过程中的注意事项，这种类型的题目考查的内容相对固定，重点放在细节，难度中等。（2011重庆）2.下列有关细菌培养的叙述，正确的是A.在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌B.在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长C.向液体培养基中通人氧气能促进破
5、伤风杆菌的生长D.在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动【答案】D【解析】菌落是指单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，形成的一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，所以单个菌落中通常只有一种细菌；青霉素培养基往往是真菌选择培养基，在加青霉素的培养基中，往往是抑制细菌生长而促进真菌生长；破伤风杆菌的代谢类型属于异养厌氧型，向其培养基中通入氧气会抑制其生长（2011重庆）31. （16分）拟南芥是遗传学研究的模式植物，某突变体可用于验证相关的基因的功能。野生型拟南芥的种皮为深褐色（TT），某突变体的种皮为黄色（tt）,下图是利用该突变体验证油菜种皮颜色基因(Tn)功能的流程示意图。
6、（1）与拟南芥t基因的mRNA相比，若油菜Tn基因的mRNA中UGA变为，其末端序列成为“”，则Tn比多编码个氨基酸（起始密码子位置相同，、为终止密码子）。（）图中应为。若不能在含抗生素的培养基上生长，则原因是 .若的种皮颜色为 ，则说明油菜 基因与拟南芥T基因的功能相同。（3）假设该油菜Tn 基因连接到拟南芥染色体并替换其中一个t基因，则中进行减数分裂的细胞在联会时的基因型为 ；同时，的叶片卷曲（叶片正常对叶片卷曲为显性，且与种皮性状独立遗传），用它与种皮深褐色、叶片正常的双杂合体拟南芥杂交，其后代中所占比例最小的个体表现型为 ；取的茎尖培养成16颗植株，其性状通常 （填“不变”或“改变”）
7、。（4）所得的转基因拟南芥与野生型拟南芥 （填是或者不是）同一个物种。答案:本题以一个陌生的基因工程材料考查相关知识，包括基因的功能、遗传规律、基因工程操作步骤以及生物进化的物种鉴定。对题干信息的获取、理解以及对陌生材料的快速适应将是考生的最大障碍。（1）Ta基因的mRNA末端序列为“-AGCGCGACCAGACUCUAA”，它是t基因的mRNA的UGA变成了AGA，所以t基因的mRNA的末端序列应为“-AGCGCGACCUGA”。所以Ta基因比t基因编码的蛋白质中就多AGA和CUC对应的2个氨基酸。（2）目的基因与运载体（质粒）结合形成重组质粒；质粒上有抗生素kan抗性基因，导入了质粒或重组
8、质粒的农杆菌都能在含抗生素kan的培养基上生长；拟南芥T基因控制其种皮深褐色。（3）转基因拟南芥体细胞基因型为Tat,减数分裂细胞联会是已完成DNA复制，所以此时细胞中相应基因组成为TaTatt；假设控制拟南芥叶片形状的基因为B、b，则TatbbTtBb3/8深褐色正常、3/8深褐色卷曲、1/8黄色正常、1/8黄色卷曲；植物组织培养属于无性繁殖技术，其特点是保持亲本的一切性状。（4）转基因拟南芥与野生型拟南芥之间没有生殖隔离，属于同一物种。【答案】（1）2 （2）重组质粒（重组DNA分子）；重组质粒未导入；深褐色 （3）TaTatt黄色正常、黄色卷曲；不变“汉水丑生的生物同行” （4）是（20
9、11新课标）39【生物 选修1：生物技术实践】（15分）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出高效降解原油的菌株。回答问题：（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以 为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于 培养基。（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即 和 。（3）为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力 。（4）通常情况下，在微生物培养过程中实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、 和 。无菌技术要求实验操作应在酒精灯 附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。39. 【答案
10、】（1）原油 选择 （2）平板划线法 稀释涂布平板法 （3）强 （4）干热灭菌 高压蒸汽灭菌 火焰【解析】该同学筛选能降解原油的菌株，可以将样品稀释液置于以原油为唯一碳源的固体培养基中培养，该培养基功能上属于选择培养基。菌株的接种方法，常用的有两种：平板划线法和稀释涂布平板法。菌株分解周围的营养物质，出现分解圈，分解圈大说明该菌株的降解能力强。实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌；微生物的培养要求严格的无菌技术，操作时在酒精灯火焰附近进行，避免周围其他细菌的污染。（2011江苏）3下列与果酒、果醋和腐乳制作相关的叙述，正确的是A腐乳制作所需要的适宜温度最高B果醋发酵包括无氧发
11、酵和有氧发酵C使用的菌种分别是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌D使用的菌种都具有细胞壁、核糖体、DNA和RNA【答案】D（2011广东）28.（16分）人们使用含三丁基锡、三苯基锡等有机锡化合物的油漆涂于船只、海洋建筑物等的表面，有效防止了海洋生物附着生长。但近年来的研究发现油漆中的有机锡可释放入海，对多种生物造成毒害。有关该污染物的部分研究如下，请回答： （1）较低浓度的有机锡即能抑制软体动物雌性个体的雌性激素合成，这些雌性个体的繁殖功能有何变化？_。小鼠在食用含较高剂量三丁基锡的食物后胸腺萎缩。请推测其细胞免疫和体液免疫功能各有何变化？_。该污染物通过_的富集可能对鱼类、鸟类甚至人类造成危害。（2）
12、有机锡污染导致某海域一种鱼的种群年龄组成发生改变（如图12），请预测该种群数量的变化趋势。（3）某海域受有机锡污染后，部分海藻以及多种软体动物的生物量显著下降，个别物种消亡。而沙蚕等多毛纲动物变为优势类群。这是在_水平上研究的结果（4）以上资料表明，如果有机锡长期污染将会导致_下降，从而降低生态系统的_。若想探究海洋底泥中是否存在分解三丁基锡的细菌，以便用于今后的生态修复，筛选目标菌株的培养基成分为：蛋白胨、_、NaCl、H2O和琼脂。【答案】（1）繁殖功能下降 失去细胞免疫以及部分体液免疫 食物链 （2）由增长型变成衰退型，种群数量下降 （3）群落 （4）生物多样性 抵抗力稳定性 三丁基锡（
13、2011上海）36下列培养基中能有效分离联苯降解菌的是，原因是。A培养基（g/L）：某生长因子2.0，（NH4）2SO4 2.0，K2HPO4 3.0，MgSO4 1.0，pH7.4，多聚联苯50mL汉B培养基（g/L）：牛肉膏10.0，蛋白胨20.0，葡萄糖20.0，NaCl 5.0，pH7.4C培养基（g/L）：某生长因子2.0，淀粉20.0，NH4NO3 2.5，MgCl 20.5，K2HPO4 3.0，多聚联苯50mL，pH7.4，进一步研究发现，不同的金属离子对联苯水解酶的活性有一定影响，结果见下表：【答案】A 该培养基中有多聚联苯为唯一碳源（2011上海）59若将上图所示X1、X2
14、、X3、X4四种质粒导入大肠杆菌，然后分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上。在这两种培养上均不能生长的大肠杆菌细胞类型有、。【答案】无质粒细胞 含X3的细胞（2011天津）8.（14分）絮凝性细菌分泌的具有絮凝活性的高分子化合物，能与石油污水中的悬浮颗粒和有机物等形成絮状沉淀，起到净化污水的作用。为进一步提高对石油污水的净化效果，将絮凝性细菌和石油降解菌融合，构建目的菌株。其流程图如下。据图回答：（1）溶菌酶的作用是_。（2）PEG的作用是_。（3）经处理后，在再生培养基上，未融合的A、B难以生长。图中AB融合菌能生长和繁殖的原因是_。（4）目的菌株的筛选：筛选既能分泌具有絮凝活性的化合
15、物，又能在含有_的培养基上生长的AB融合菌，选择效果最好的作为目的菌株。（5）为探究目的菌株不同发酵时间发酵液的絮凝效果，将目的菌株进行发酵培养，定时取发酵液，加入石油污水中：同时设置_为对照组。经搅拌、静置各3分钟后，分别测定上层水样的石油浓度和COD值（COD值越高表示有机物污染程度越高）,计算石油去除率和COD去除率，结果如下图。（6）目的菌的种群增长曲线是_型。在4044小时，发酵液对石油污水的净化效果最好，其原因是_。【答案】（1）分解细胞壁（2）诱导原生质体融合（3）两亲本失活部位不同，融合后活性部位互补（4）石油（5）不加发酵液的石油污水（6）S 此期间，目的菌及产生的絮凝活性高
16、分子化合物的含量高（2011山东）34.（8分）（生物生物技术实验）研究发现柚皮精油和乳酸菌素（小分子蛋白质）均有抑菌作用，两者的提取及应用如图所示。（1）柚皮易焦糊，宜采用_法提取柚皮精油，该过程得到的糊状液体可通过_除去其中的固体杂质。（2）筛选乳酸菌A时可选用平板划线法或_接种。对新配制的培养基灭菌时所用的设备是_。实验前需对超净工作台进行_处理。（3）培养基中的尿素可为乳酸菌A生长提供_。电泳法纯化乳酸菌素时，若分离带电荷相同的蛋白质，则其分子量越大，电泳速度_。（4）抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的_来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效
17、果。【答案】（1）压榨 过滤（2）稀释涂布平板法 高压蒸汽灭菌锅 紫外线消毒（3）碳源和氮源 越慢（4）大小（2009宁夏）40.【生物选修1生物技术实践】（15分） （1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑_、_和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、_、_等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。 （2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行_（消毒、灭菌）；操作者的双手需进行清洗和_；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_。 （3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近
18、实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_。 （4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的_。 （5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_。 （6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及培养物必须经过_处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。【答案】（1）温度 酸碱度 易培养 生活周期短 （2）灭菌 消毒 损伤DNA的结构 （3）比例合适 （4）鉴定(或分类) （5）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生. （6）灭菌【解析】（1）大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类
19、型容易选择、易培养、生活周期短等优点，培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件。（2）灭菌使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,所以对培养基和培养皿进行灭菌,消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物, 操作者的双手需要进行清洗和消毒, 紫外线能使蛋白质变性，还能损伤DNA的结构.（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养,应保证样品稀释的比例适合.（4）对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的鉴定.（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检
20、测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生.（6）因为有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，并可能导致肠管出现严重症状，使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。（2009上海）39.（9分）氯苯化合物是重要的有机化工原料，因其不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案（图1）筛选出能高效降解氯苯的微生物SP1菌，培养基配方如表1. （1）配制号固体培养基时，除添加号液体培养基成分外，还应添加1%的_。（2）培养基配制时，灭菌与调PH的先后顺序是_。（3）从用途上来说，号培养基和号
21、培养基分别属于_培养基和_培养基。在号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是_。（4）在营养缺乏或环境恶劣时，SP1的菌体会变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为_。（5）将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的号培养液中培养，得到生长曲线（如图2）。从图2可知SP1菌在_培养条件下最早停止生长，其原因是_。【答案】（1）琼脂 （2）先调PH，后灭菌 （3）通用 选择 硝酸铵（4）芽孢 （5）20mg/L氯苯 硝酸最早耗尽（2008山东）34.(8分)【生物生物技术实践】科学家发现家蝇体内存在一种抗菌活性蛋白。这种蛋白质具有极强的抗菌能力，受到研究者重视。（3）分别在加入和未加入该抗菌蛋白的培养基中接种
22、等量菌液。培养一定时间后，比较两种培养基中菌落的 ，确定该蛋白质的抗菌效果。【答案】(3)数量 （2008广东）38(生物技术实践，10分)苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，为土壤样品。请回答下列问题： （2）为对照，微生物在中不生长，在中生长，与培养基的主要区别在于 ；使用 法可以在上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时为什么进行倒置培养?【答案】（2）与培养基的主要区别在于的培养基没有加入苯酚作为碳源，培养基的中加入苯酚作为碳源。使用
23、释涂布平板法或平板划线法可以在（6）上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时要倒置培养，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基。（2008天津）31、（16分）莠去津是一种含氮的有机化合物，它是广泛使用的除草剂之一。莠去津的作用机理之一是阻断光反应中的电子传递过程，影响NADP+形成，进而影响在中进行光合作用的暗反应过程，最终抑制杂草生长。从使用莠去津农田中，选到了能遗传的耐莠去津杂草，将它与敏感型植株杂交，结果见下表：杂交亲本后代中耐药型植株比例（%）后代中敏感型植株比例（%）耐药型敏感型1000敏感型耐药型0100由表推断，控制该耐药性状的基因位于。莠去津在土壤中不易降解，为修复被其污
24、染的土壤，按下面程序选育能降解莠去津的细菌（目的菌）。已知莠去津在水中溶解度低，含过量莠去津的固体培养基不透明。据图回答：由于莠去津的作用，在长期使用莠去津的土壤中可能含有目的菌。OA瓶B瓶C瓶乙类细菌丙类细菌甲类细菌最大密度下图是AC瓶中三类细菌的最大密度柱形图，由图推断，从A瓶到C瓶液体培养的目的是；甲类细菌密度迅速降低的主要原因是；从A瓶中应选择细菌生长处于期的菌液加入到B瓶中，培养效果会更好。在固体培养基中，无透明菌落利用的氮源主要是；有透明带菌落利用的氮源主要是，据此可筛选出目的菌。【答案】 NADPH叶绿体基质 细胞质中 自然选择初步选择能降解莠去津的细菌（目的菌）并提高其密度培养
25、液中缺少甲类细菌可利用的氮源或（和）有氧条件抑制了甲类细菌的生长对数 氮气莠去津（2007宁夏）32生物选考题（15分）A生物选修I生物技术实践某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。（5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐_细菌，这种培养基被称为_。【答案】（5）盐（或NaCl），选择性培养基（2007新课标广东卷）40（生物技术实践，15分）为了实现燃料供应来源多样化，发展长期替代化石燃料的产品如燃料酒精、生物柴油、沼气等已经列入我国未来10年的发展计划。广东省是我国甘蔗主产区之一。甘蔗是
26、一种高光效的C3植物，单位面积产量很高，种植面积日益扩大， 目前已成为南方地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗 榨汁（蔗糖） 酵母发酵 蒸馏 成品（燃料酒精）。请根据上述材料，回答下列问题：（1）简述甘蔗大规模快速繁殖技术的过程。（2）具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。步骤2：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意 和 ，加琼脂后灭菌，制成固体平板。步骤3：将紫外照射后的菌液稀释涂布平板。步骤4：根据 筛选
27、出突变菌。（3）上述步骤2、3和4的依据分别是 。（4）利用获得的突变菌和蔗汁进行酒精发酵实验，除了将培养基灭菌、保持空间洁净外，发酵过程中防止外来杂菌入侵还有哪些可行方法?（列举两种）（5）甘蔗榨汁以后还有大量的蔗渣废弃物，主要成分为木质素、纤维素和半纤维素，但是酵母菌无法直接利用，原因是其 。请提出解决该问题的方法。（列举两种方法）【答案】（15分）（1）选取甘蔗外植体，通过诱导脱分化产生愈伤组织，然后通过调整植物激素比例，再分化形成芽和根，获得大量试管苗（或通过诱导大量形成胚状体，制成人工种子，适宜条件下萌发长成幼苗）。（2）添加高浓度蔗糖（葡萄糖）；调低pH；是否能在选择培养基上生长。
28、（3）提供高糖和酸性的筛选环境；获得单菌落；能生长代表该菌落具有耐高糖和耐酸的特性。（4）利用突变菌的耐酸特性，降低培养基的pH，达到抑菌的目的；利用突变菌的耐高糖特性，通过高渗环境达到抑菌目的；保持厌氧环境，达到抑菌目的；在培养基中添加一些抑制物如特殊的抗生素，达到抑菌目的。（5）缺乏相应分解酶系（或缺乏纤维素酶和半纤维素酶）。在酵母菌中转入分解酶系相关基因；利用酶或微生物分解蔗渣；利用物理和化学方法分解蔗渣；将酵母菌与其他能分解蔗渣的微生物混合发酵。【立意】综合考查考生对生物技术实践模块中的植物组织培养、特殊微生物的筛选及应用、酶的应用以及PCR技术的基本操作和应用等内容的掌握；理论联系实际，针对生物学问题进行初步研究，设计实验路线，对实验结果和现象进行正确的分析与判断，综合运用所学知识解决实际问题的能力。
