1、第四节 基因工程简介一 基因工程的基本内容教学目的1 基因工程的概念（A：知道）。2 基因操作的工具和基本步骤（A：知道）。重点和难点1 教学重点基因操作的工具和基本步骤。2 教学难点（1） 限制性内切酶和运载体的作用。（2） 提取目的基因的方法和目的基因导入受体细胞的途径。教学过程【板书】 基因工程的概念 基因的剪刀限制性内切酶 基因操作的工具 基因的针线DNA连接酶基因工程 基因的运输工具运载体的基本内容 提取目的基因 基因操作的 目的基因与运载体结合 基本步骤 将目的基因导入受体细胞 目的基因的表达与检测【注解】一、概念：基因拼接技术或DNA重组技术,是在生物体外对，通过对DNA分子进行
2、人工“剪切”和“拼接”，对生物有基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。二、操作工具（一）基因的剪刀限制性内切酶主要存在于微生物体内，一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子。切开的带有几个伸出核苷酸的DNA单链切口，被称为黏性末端。（二）基因的针线DNA连接酶黏性末端的氢键可以重新形成，但DNA“骨架”末端的连接要靠DNA连接酶（三）运输工具动载体 能够在宿主细胞内复制并稳定地保存；具有多个限制酶切位点，以便与外1具备条件 源基因连接 具有某些标记基因，便于进行筛选2举例：质粒、噬菌体和动、
3、植物病毒等3质粒：最常用的运载体，存在于细菌和酵母菌，是很小的环状DNA。它的存在与否对宿主细胞的生存没有决定性作用，但质粒的复制只能在宿主细胞内完成。三、操作步骤 直接分离基因：鸟枪法（操作简单、具有一定的盲目性）（一）提取目的基因 反转录法人工合成基因 人工合成法（由已知的氨基酸序列mRNA序列 基因的核苷酸序列以单核苷酸为原料合成目的基因（二）目的基因与运载体结合（用同种限制酶切割目的基因和质粒，让两者形成重组质粒）（三）将目的基因导入受体细胞1常用的受体细胞有：大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等2若用细菌作受体细胞，为便于导入，常用氯化钙处理细菌细胞（四）目的基因的表
4、达和检测【同类题库】基因工程的概念（A：知道）科学家们经过多年努力，创立了新兴生物技术基因工程，实施该工程的最终目的是（B）A定向提取生物体的DNA分子 B定向地对DNA分子进行人工“剪切”C在生物体外对DNA分子进行改造 D定向地改造生物的遗传性状工程菌是指（C）A用物理或化学方法诱发菌类自身某些基因得到高效表达的菌类细胞株系B用遗传工程的方法，把相同种类不同株系的菌类通过杂交得到的新细胞株系C用基因工程的方法，使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系D从自然界中选取能迅速增殖的菌类基因操作的工具和基本步骤（A：知道）下列关于基因工程的叙述正确的是（D）ADNA连接酶能使两个粘性末瑞之间的碱基结
5、合B限制性内切酶的切口一定是GAATTC的碱基序列C质粒是基因工程中唯一用作运载目的基因的工具D对目的基因进行大量复制的过程可称为分子“克隆”有关基因工程的叙述，正确的是（B）A限制性内切酶只在获得目的基因时才用 B蛋白质的结构可以为合成目的基因提供资料C质粒都可以作为运载体D重组质粒的形成在细胞内完成基因工的操作步骤：使目的基因与运载体相结合将目的基因导入受体细胞检测目的基因的表达是否符合特定性状要求提取目的基因，正确的操作顺序是（C）A B C D下列有关基因工程技术的叙述，正确的是（C）A重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体B所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列C选
6、用细菌为重组质粒受体细胞是因为质粒易进入细菌细胞且繁殖快D只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达有关基因工程的叙述正确的是（D）A限制性内切酶只在获得目的基因是才用 B重组质粒的形成在细胞内完成C质粒都可作运载体 D蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料实施基因工程第一步的一种方法是把所需的基因从供体细胞内分离出来，这要利用限制性内切酶。一种限制性内切酶能识别DNA分子中的GAATTC顺序，且点在G和A之间，这是应用了酶的（B）A高效性 B专一性 C多样性 D催化活性受外界条件影响基因工程技术中的目的基因主要来源于（A）A自然界现存生物体内的基因 B自然突变产生的新基因C人工诱变产生的新基因
7、 D科学家在实验室人工合成的基因（多选）下列属于获取目的基因的方法是（ACD）A鸟枪法 B转录法 C反转录法 D根据已知的氨基酸序列合成直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”，但是该方法有一些缺点。下列关于其缺点的叙述中错误的是（D）A操作复杂 B工作量大C很多时候不能直接用于基因的扩增和表达 D盲目性强用“鸟枪法”提取目的基因的步骤为（C）用特定的限制性内切酶切取特定的DNA片断 用限制性内切酶将供体细胞DNA切成许多片断 将许多DNA片断分别载入运载体 选取目的基因片断载入运载体 通过运载体分别转入不同的受体细胞 让供体DNA片断在受体细胞内大量繁殖 找出带有目的基因的细胞，并分离出目的基因
8、A B C D在基因工程中,切割运载体和含有目的基因的DNA片段中,需使用（A）A同种限制酶 B两种限制酶 C同种连接酶 D两种连接酶下列关于限制酶的说法不正确的是（A）A限制酶广泛存在于各种生物中，微生物中很少分布B一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸系列C不同的限制酶切割DNA的切点不同D限制酶的作用是用来提取目的基因下图所示限制酶切割某DNA分子的过程，从图中可以知道，该酶能识别的碱基序列及切点是（C）A、 CTTAAG，切点在C和T之间 BCTTAAG，切点在G和A之间CGAATTC，切点在G和A 之间 DGAATTC，切点在C和T之间右图是用DNA测序仪测出的某人DNA片段的碱基排列顺
9、序。下列四幅图是DNA测序仪测出的另外四人DNA片段的碱基排列顺序，请认真比较这四幅图，其中与右图碱基排列顺序最相似的是（C）限制性内切酶能识别特定的DNA序列并进行剪切，不同的限制性内切酶可以对不同的核苷酸序列进行剪切。现以3种不同的限制性内切酶（A、B、C）对一62Kb大小的线状DNA进行剪切后。用凝胶电泳分离各核酸片段，实验结果如图所示：请问：可正确表示3种不同的限制性内切酶在DNA片段上的切点位置的是（D）DNA连接酶的重要功能是（D）ADNA复制时母链与子链之间形成氢键 B黏性末端之间形成氢键C两条DNA 末端之间形成氢键 DABC都不正确DNA连接酶的连接作用部位是（B）A配对的碱
10、基与碱基之间 B脱氧核糖与磷酸基之间C脱氧核糖与碱基之间 D磷酸基与碱基之间在基因工程中用来修饰改造生物基因的工具是（A）A限制酶和连接酶 B限制酶和水解酶 C限制酶和运载体 D连接酶和运载体控制细菌的抗药性、固氮、抗生素合成等性状的基因位于（C）A核区DNA中 B线粒体中 C质粒中 D叶绿体中质粒是基因工程最常用的运载体，它的主要特点是（C）能自主复制 不能自主复制 结构很小 蛋白质 环状RNA 环状DNA 能“友好”的借居A B C D下列关于质粒的叙述，正确的是（A）A质粒是细菌细胞质中能自我复制的小型环状DNA 分子B质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器C质粒只有在侵入宿主细胞
11、后在宿主细胞内复制D细菌质粒的复制过程一定是在宿主细胞外独立进行不属于质粒被选为基因运载体的理由是（D）A能复制 B有多个限制酶切点 C具有标记基因 D它是环状DNA质粒是基因工程中最常用的运载体，下列关与质粒的叙述中错误的是（）A质粒的存在对宿主细胞的生存没有决定性的作用B它存在于许多细菌以及酵母菌等生物中C作为运载体的质粒都应含有标记基因D质粒可以在细菌内进行复制，是细菌生存所必须的 下列哪项不是基因工程中经常使用的用来运载目的基因的载体（D）A细菌质粒 B噬菌体 C动植物病毒 D细菌核区的DNA基因工程中使用的运载体是（A）A病毒的DNA B细菌核区的DNA C植物的DNA D动物的DN
12、A下列哪项叙述不是运载体必须具备的条件（B）A具有某些标记基因 B决定宿主细胞的生存 C能够在宿主细胞中复制 D有多个限制酶切点要想将目的基因与运载体连接起来，在基因操作中应选用（B）A只需DNA连接酶 B同一种限制酶和DNA连接酶 C只需限制酶 D不同的限制酶和DNA连接酶基因工程中科学家常采用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，原因是（A）A繁殖速度快 B遗传物质含量少、简单 C结构简单、操作方便 D性状稳定、变异少基因工程常用的受体细胞有（D）大肠杆菌 枯草杆菌 支原体 动植物细胞A B C D在将重组的DNA分子转移到受体细胞的过程中，如果运载体是质粒受体细胞是细菌，一般用何种药剂处理，
13、以增大细胞壁的通透性而使重组质粒容易进入受体细胞？（B）A秋水仙素 B氯化钙 C龙胆紫 D氢氧化钠有关基因工程的叙述正确的是（A）A蛋白质的结构可以为目的基因的获得提供帮助 B质粒可以作为运载体C限制性内切酶只在目的基因获得时才使用 D重组质粒的形成是在受体细胞内完成的人们将苏云金杆菌中的抗虫基因导入棉花细胞中，培育成功抗虫棉。这个过程中利用的主要原理是（C）A基因突变、DNARNA蛋白质 B基因重组、DNARNA蛋白质C基因工程、DNARNA蛋白质 D染色体变异、DNARNA蛋白质基因工程中常用的受体细胞有细菌动物细胞植物细胞，如果生产上需要获得人类所需的基因产物，则受体细胞一般为（）A B
14、 C D用某些细菌或病毒作为运载体，除它们具备三个基本条件外，还与它们所具有的哪个特点有关（B）A个体微小、结构简单 B较强的侵染能力C不具有染色体 DNA D化学成分比较简单一般来讲，基因工程整个操作过程成功的标志是（D）A目的基因与运载体的成功结合 B目的基因被成功导入受体细胞C目的基因在受体细胞中被成功检测到 D目的基因在受体细胞中的表达具有标记基因是作为运载体的必须具备的条件之一，该条件的具备是有利于下列哪个项目的达成（C）A便于与目的基因的结合 B便于目的基因的导入C便于目的基因的检测 D便于目的基因的表达很多微生物被应用于基因工程，从分子水平分析，进行基因工程的主要理论依据是（）A
15、微生物的繁殖速度快，适应性强，种类多，分布广B微生物都含有核糖体，翻译过程都共用一套密码子C不同生物的DNA均有相同的核苷酸组成D微生物的结构简单，容易大量合成目的基因，并能导入高等生物的细胞1976年，美国的H.Boyer教授首次将人的生长激素释放抑制因子的基因转入大肠杆菌并获得了表达，这是人类第一次获得转基因产物。其中的“表达”是指该基因在大肠杆菌体内（C）A进行了复制 B能随大肠杆菌的繁殖传递给后代C能合成生长激素释放抑制因子 D能合成人的生长激素基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的是（C）A人工合成目的基因 B目的基因与运载体结合 C
16、将目的基因导入受体细胞 D目的基因的检测和表达有关基因工程的叙述正确的是（D）A限制酶只在获得目的基因时才用 B重组质粒的形成是在细胞质内完成的C质粒都可作为运载体 D蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料科学家经过多年的努力，创立了一种新兴的生物技术基因工程，实施该工程的最终目的是（D）A定向提取生物体的DNA分子 B定向地对DNA分子进行人工“剪切”C在生物体外对DNA分子进行改造 D定向改造生物体的遗传性状下列关于限制酶的说法不正确的是（A）A限制酶广泛存在于各种生物中，微生物中很少分布B一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列C不同的限制酶切割DNA的切点不同D限制酶的作用是用来提取目的基
17、因下列哪项不是运载体必须具备的条件（B）A具有某些标记基因 B决定宿主细胞的生存C能够在宿主细胞内复制 D有多个限制酶切点应用基因工程技术诊断的过程中必须使用基因探针才能达到检测疾病的目的。这里的基因探针是指（B）A用于检测疾病的医疗器械 B用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子C合成珠蛋白的DNA D合成苯丙羟化酶的DNA片段有关基因工程的成果和应用的说法正确的是（D）A用基因工程方法培育的抗虫植物也能抗病毒B基因工程在畜牧业上应用的主要目的是培养体型巨大品质优良的动物C任何一种假单孢杆菌都能分解四种石油成分，所以假单孢杆菌是“超级菌”D基因工程在农业上的应用主要是培育高产稳产品质优良各
18、具有抗逆性的农作物科学家通过基因工程培育抗虫棉时，需要从苏云金芽孢杆菌中提取出抗虫基因，放入棉花的细胞中与棉花的DNA结合起来并发挥作用，请回答下列有关问题：（1）从苏云金芽孢杆菌中切割抗虫基因所用的工具是 ，此工具主要存在于 中，其特点是 。（2）苏云金芽孢杆菌一个DNA分子上有许多基因，获得抗虫基因常采用的方法是鸟枪法。具体做法是：用 酶将苏云金芽孢杆菌的 切成许多片断，然后将这些片段 ，再通过 转入不同的受体细胞，让他们在各个受体细胞中大量 ，从中找到含有目的基因的细胞，再用一定的方法把 分离出来。（1）限制性内切酶；微生物；只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子（
19、2）限制性内切；DNA；分别载入运载体；运载体；复制（扩增）；带有目的基因的DNA片段近年来，棉铃虫在我国大面积爆发，每年的经济损失达100亿元以上，对此我国科学工作者研究发现一种生活在棉铃虫消化道内的苏云金杆菌能分泌一种毒蛋白可使棉铃虫致死，而此毒蛋白对人畜无害。而后，我国科技工作者成功地将毒蛋白基因棉花植株内并成功实现表达。该抗虫棉品种在1998年推广后取得了很好的经济效益。请据此回答下列问题：（1）害虫抗药性的增强是 的结果。（2）培育抗虫棉新品应用了 技术，该过程中，所用的基因“剪刀”是 ，基因的“针线”是 ，基因的“运输工具”是 。（3）将毒蛋白基因转入棉花植株内的操作步骤是： ；
20、； ； ；（4）“转基因抗虫棉”抗害虫的遗传信息的传递过程可表示为： ；（5）该技术除了取得经济效益外，在环境保护方面的作用表现为： 。（1）自然选择（2）基因工程；限制性内切酶；DNA连接酶；运载体（3）毒蛋白基因的获得毒蛋白基因与运载体结合将毒蛋白基因导入受体细胞毒蛋白基因表达与检测（4）毒蛋白基因mRNA毒蛋白（5）不使用农药、不污染环境【学科内综合】在应用基因工程方法培育抗虫棉的过程中，抗虫棉基因的获取可通过哪种方式或途径（D）A使用PCR技术 B通过反转录法形成C以单核苷酸为原料合成 D准确无误地从供体细胞中直接分离在遗传学研究中，常用信使RNA进行基因的克隆(即形成许多完全相同的D
21、NA)，这种快速克隆基因的步骤依次是(B)转录 DNA复制 逆转录 翻译A B C D下列关于各种酶作用的叙述，正确的是(BD)A唾液淀粉酶与淀粉相结合，使淀粉分解成葡萄糖BRNA聚合酶能与基因的特定位点结合，催化遗传信息的转录C一种DNA限制酶能识别多种核苷酸序列，切割出多种目的基因D胰蛋白酶能作用于离体的动物组织，使其分散成单个细胞科学家用纳米技术制造出一种“生物导弹”，可以携带DNA分子。把它注射入组织中，通过细胞的内吞作用进入细胞内，DNA被释放出来，进入到细胞核内，最终整合到染色体上，成为细胞基因组的一部分，DNA整合到染色体上属于（B）A基因突变 B基因重组 C基因互换 D染色体变
22、异（多选）不同生物之间能进行转基因并能获得基因产物，其理论依据有（ABC）A组成这些生物的DNA分子的空间结构与化学成分相一致B组成这些生物的DNA分子都遵循碱基互补配对原则C这些生物在基因表达时共用一套遗传密码子D这些生物的基因结构都是相同的目前转基因工和可以（D）A打破地理隔离但不能打破生殖隔离 B打破生殖隔离但不能打破地理隔离C完全突破地理隔离和生殖隔离 D部分突破地理隔离和生殖隔离20世纪，美国科学家将人的生长激素基因转移到小鼠体内，得到了超级小鼠，此转基因技术的受体细胞是（C）A卵细胞 B去核卵细胞 C受精卵细胞 D乳腺上皮细胞（多选）基因工程中，需要进行碱基互补配对的步骤有（ABD
23、）A人工合成目的基因 B目的基因与运载体相结合C将目的基因导入受体细胞 D目的基因的检测与表达培育生产高产的青霉素菌株的方法是（C）A细胞工程 B基因工程 C人工诱变 D人工诱变、基因工程控制大肠杆菌的主要性状的基因、大肠杆菌的抗药基因、控制酵母菌主要性状的基因分别位于（A）质粒上 核区DNA上 染色体DNA上A B C D 下列有关基因工程技术的应用中，对人类不利的是（C）A制造工程菌用于药品生产 B创造超级菌分解石油、DDTC重组DNA诱发受体细胞基因突变 D导入外源基因替换缺陷基因下列说法正确的是（D）ADNA连接酶最初是从人体细胞中发现的 B限制酶的切口一定是GAATTC 碱基序列C质
24、粒是基因工程中唯一用作运载目的基因的载体D利用运载体在宿主细胞内对目的基因进行大量复制的过程可称为“克隆”基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的步骤中，不进行碱基互补配对的是（C）A人工合成目的基因 B目的基因与运载体结合 C将目的基因导入受体细胞 D目的基因的检测和表达通过基因工程育种与其他育种方法相比较，其突出的优点是（A）A能够定向地改造生物 B育种周期短C操作过程简单 D技术要求和生产成本低番茄在运输和贮藏过程中，由于过早成熟而易腐烂。应用基因工程技术，通过抑制某种促进果实成熟激素的合成，可使番茄贮藏时间延长，培育成耐贮藏的番茄新品种。这种转基因番茄已于1993年在美
25、国上市，请回答：（1）促进果实是成熟的重要激素是 。（2）在培育转基因番茄的操作中，所用的基因的剪刀是 ，基因的针线是 ，基因的运输工具是 。（3）与杂交育种、诱变育种相比，通过基因工程来培育新品种的主要优点是 、 、 。（1）乙烯（2）限制性内切酶；DNA连接酶；运载体（3）目的性强、育种周期短、克服远缘杂交的不亲和障碍干扰素是治疗癌症的重要物质。人血液中每升只能提取0.05mg干扰素，因而其价格昂贵，平民百姓用不起。但美国有一家公司用遗传工程方法合成了价格低廉、药性一样的干扰素。其具体做法是：（1）从人的淋巴细胞中提取能指导干扰素合成的 ，并使之与一种叫质粒的DNA结合，然后移植到酵母菌内
26、，从而让酵母菌来 。（2）酵母菌能用 方式繁殖，速度很快，所以能在较短的时间内大量生产 。利用这种方法不仅产量高，并且成本较低。（3）科学家陈炬在这方面也做出了突出贡献，它成功地把人的干扰素基因加接到了烟草的DNA分子上，其物质基础和结构基础是 。（4）烟草具有了抗病毒能力，这表明烟草体内产生了 ，由此可见，烟草和人体合成蛋白质的方式是 ，从进化的角度来考虑，证明了人和植物起源于 。（1）干扰素基因；合成干扰素（2）出芽生殖；干扰素（3）人与烟草的遗传物质均为DNA，且具有相同的结构（4）抗病毒干扰素；相同的（或共用一套遗传密码）；共同的原始祖先干扰素是治疗癌症的重要药物，它必须从血液中提取，
27、每升人血中只能提取005微克，所以价格昂贵。现在美国加利福尼亚的基因公司用生物技术来生产干扰素。请分析后回答以下问题（1）从人的淋巴细胞中提取出 ，使它同细菌质粒相结合，然后移植到酵母菌体内，酵母菌能以 方式进行生殖，速度快，能大量生产出干扰素。（2）青年科学家陈炬成功地把人的干扰素基因移植到烟草的DNA分子上，使烟草获得了抗病毒的能力。请分析，人的基因之所以能移植成功，其物质基础是 。烟草有抗病毒的能力，这表明烟草体内产生了干扰素，这个事实说明人和烟草共有 ，蛋白质的合成方式为 。（3）蛋白质是由多种氨基酸通过肽键结合而成的高分子化合物。如果一个多肽的分子式为C45H56O13N8，已知将它
28、彻底水解后只得到四种氨基酸，则该多肽化合物为 肽。青年科学家陈大炬成功地把人的抗病毒干扰素基因“嫁接”到烟草的DNA分子上，使烟草获得了抗病毒能力。请分析回答：（1）人的基因之所以能嫁接到植物体内，原因是： 。（2）烟草有抗病毒能力，表明烟草体内产生了 ，这个事实说明：人和植物可以共同拥有相同的 。（3）烟草DNA分子被“嫁接”上或“切割”掉某个基因，实际上并不影响遗传信息的表达功能。这说明 。（4）基因工程技术在很多方面得到了广泛应用，但任何技术都存在正、负两方面的影响，你认为该技术的负面影响有哪些？ 。（1）人与植物体的DNA具有相同的化学组成和空间结构（2）抗病毒干扰素；基因（3）基因是
29、遗传物质结构和功能的基本单位（4）对生态环境的影响方面：用于改良作物的抗不良环境的基因误引入杂草，就将难以控制杂草的蔓延；安全性问题：用基因工程生产的产品，特别是农产品，对人体可能有不良影响。合理即可将人的抗病毒干扰素基因“嫁接”到烟草的DNA分子中，可使烟草获得抗病毒的能力，形成转基因产品。试分析回答：（1）烟草转基因产品的获得属于 。A基因工程 B细胞工程 C微生物工程 D酶工程（2）人的基因之所以能接到植物体中去，原因是 。（3）烟草具有抗病毒能力，说明烟草体内产生 。（4）不同生物间基因移植成功，说明生物共有一套 ，从进化的角度看，这些生物具有 。（5）烟草DNA分子被“嫁接”上或“切
30、割”掉某个基因，实际并不影响遗传信息的表达功能。这说明 。（6）该工程用于实践，将给农业、医药等诸多领域带来革命，目前已取得许多成就，请你例举你所知道的或你所设想应用该工程的三个具体实例。（7）有人认为，转基因产品也是一把双刃剑，有如水能载舟，也能覆舟，甚至可能带来灾难性的后果，你是否支持这一观点？如果支持，请你举出一个可能出现灾难性后果的实例。（1）A（2）人与植物DNA分子组成成分相同（3）抗病毒干扰素（4）遗传密码；共同的原始祖先（5）基因是遗传物质的结构和功能的基本单位（6）将抗病毒基因嫁接到水稻中。形成抗病毒水稻新品种；将人的血型基因移入猪体内，培育能产生人血的猪；将干扰素基因移入细
31、菌体内，培育出能产生干扰素的细菌。（7）用于改良作物抗不良环境的基因误引入杂草，就将难以控制杂草的蔓延。下图是将人的生长激素基因导入细菌B内制造“工程菌”的示意图，所用载体为质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌B以后，其上的基因能得到表达。请回答下列问题：（1）人工获得目的基因的途径一般有哪两条？ 。（2）重组质粒通常是在体外完成，必须用到的工具酶为 。如何将目的基因和质粒相结合形成重组质粒（重组DNA分子）？ 。（3）目前把重组质粒导入受体细胞时，效率还不高；导入完成后得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒，有的导入的是普通质粒A，只有少数导入的是重组质粒
32、。此处可以通过如下步骤来鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重给质粒：将得到的细菌涂布在一个含有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的就是导入了质粒A或重组质粒，反之则没有。使用这种方法鉴别的原因是 。（4）若把通过鉴定证明导入普通质粒A或重组质粒的细菌放在含有四环素的培养基上培养，会发生的现象是 。原因是 。（5）导入细菌B细胞中的目的基因成功表达的标志是什么？ 。（1）从供体细胞DNA中直接分离基因；人工合成基因（2）限制性内切酶；用某种限制酶切割质粒，用同种限制酶切获目的基因将目的基因与质粒及DNA连接酶混合获取重组质粒（3）普通质粒和重组质粒均含有抗氨苄青霉素基因，其表达产物能分解青霉素（4）有
33、的能生长，有的不能生长； 普通质粒上有抗四环素基因，重组质粒上的该基因由于目的基因的插入而被破坏。（5）合成人的生长激素下图为DNA测序仪显示的某真核生物DNA片段一条链的碱基排列顺序图片。其中图1的碱基排列顺序已经解读，其顺序是：GGTTATGCGT，请解读图2并依据图2作答。(1)图2显示的碱基排列顺序是 。(2)该DNA片段中(+C)(T+G)= 。(3)该基因片段控制多肽合成时必须经过 和 两个过程。(4)该基因片段控制合成的多肽中有氨基酸 个。(5)某人用35S 标记含该片段的噬菌体，让其在不含35S的细菌中繁殖3代，含有35S标记的DNA所占比例为 ，原因是 。(1)GATGCGT
34、TCG (2)l (3)转录 翻译 (4)3 (5)0 “S能标记蛋白质不能标记DNA(或噬菌体洲A不含有S)质粒是基因工程中常用的运载体，存在于许多细菌及酵母菌等生物中。 请根据原理和材料用具，设计实验选择运载体质粒，明确质粒的抗菌素基因所控的抗菌素类别。 实验原理：作为运载体的质粒，须有标记基因，这一标记基因可以是抗菌素抗性基因，故凡有抗菌素抗性的细菌，其质粒可选作运载体。 材料用具：青霉素、10万单位mL四环素溶液、菌种试管、灭菌的含细菌培养基的培养皿、酒精灯、接种环、一次性注射器、蒸馏水、恒温箱等。 方法步骤： 第一步：取三个含细菌培养基的培养皿并标1、2、3号，在酒精灯旁，用三支注射
35、器分别注入1ml蒸馏水、青霉素液、四环素液，并使之在整个培养基表面分布均匀。 第二步： ， 。 第三步： ， 。预期结果： ， ， ， 。第二步：将接种环在酒精灯上灼烧，并在酒精灯火焰旁接种，并对三个培养皿分别接种；第三步：将接种后的三个培养皿放人37恒温箱24小时。 预期结果：1号培养皿中正常生长，2、3号培养皿中细菌能存活者说明有抗性基因，反之则无；2、3号中仅2号存活，说明该细菌有青霉素抗性基因；2、3号中仅3号存活，说明该细菌有四环素抗性基因；2、3号中都能存活，说明该菌质粒上有两种抗菌素基因。科学家用基因工程的方法，用大肠杆菌生产小鼠的-珠蛋白，必需经过以下几个基本的步骤：(1)提取
36、目的基因。从(何生物) 的细胞内提取 分子，并用一种 切割其分子，以获取目的基因；同时提取具有抗四环素标记基因的大肠杆菌的 作为运载体。(2)目的基因与运载体结合。(3)将目的基因导入 细胞。(4)目的基因的检测。将上述大肠杆菌放到加有 的培养基上，死亡的大肠杆菌中有没有目的基因 ？(1)小鼠 DNA 限制酶(或限制性内切酶) 质粒(3)受体(或大肠杆菌)(4)四环素 没有PCR技术是把某一DNA片段在体外酶的作用下，合成许许多多相同片段的一种方法，利用它能快速而特异地扩增任何要求的目的基因或DNA分子片段，电泳技术则是在外电场作用下，利用分子携带的净电荷不同，把待测分子的混合物放在一定的介质
37、(如琼脂糖凝胶)中进行分离和分析的实验技术，利用它可分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质和作亲子法学鉴定下图中14是电泳装置及相应电泳结果。请回答：(1)叶绿体色素提取所采用的纸层析法与电泳相比，前者使用的介质是电泳过程中分子的迁移速率除与本身所带的净电荷的多少有关外，你认为还受什么因素的影响? (至少列出一种)(2)PCR技术模拟了DNA合成的环境和条件，扩增过程所需要的基本条件是 ，所遵循的原则是 。(3)图3是把含有21个氨基酸的多肽进行水解，得到的氨基酸混合物进行电泳的结果，故可推测该多肽是由 种氨基酸构成的。(4)图4通过提取某小孩和其母亲，以及待测定四位男性的DNA，分别由
38、酶处理后，生成含有若干DNA片段，并已进行扩增得到的混合物，然后进行电泳所得到的一组DNA指纹图谱，请分析：最可能是该小孩亲生父亲的是 ，判断理由是 。(1)层析液(1分) 分子大小(电场大小)(1分) (2)模板、原料，酶、能量(2分) 碱基互补配对原则(1分) (3)6(1分) (4)F2 (1分) 该小孩的DNA片段和F2最接近(1分)豇豆对多种害虫具有抗虫能力，根本原因是豇豆体内具有胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI基因)。科学家将其转移到水稻体内后，却发现效果不理想，主要原因是CpTI蛋白质的积累量不足。经过在体外对CpTI基因进行了修饰后，CPTI蛋白质在水稻中的积累量就得到了提高。修饰和表达过程如下图所示：请根据以上材料，回答下列问题：(1)CpTI基因是该基因工程中的 基因，“信号肽，序列及“内质网滞留信号”序列的基本组成单位是 。在过程中，首先要用 酶切开，暴露出 ，再用 酶连接。(2)在该基因工程中，供体细胞是 ，受体细胞是 。(3)过程称为 。(4)检测修饰后的CpTI基因是否表达的最好方法是 。（1）目的 四种脱氧核苷酸 限制性内切酶 黏性末端（2）虹豆细胞 水稻细胞（3）转录（4）让多种害虫吞食水稻叶片
