1、2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体 温故而知新植物细胞杂交融合的原生质体AB 再生出细胞壁 植物细胞的融合 杂种细胞AB 杂种植株 脱分化 愈伤组织 再分化 植物组织培养 原生质体B 原生质体A 去 壁 去 壁 人 工 诱 导 植物细胞A 植物细胞B 一、动物细胞融合一、动物细胞融合1.概念：动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。2、动物细胞融合基本原理：与植物原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性3、诱导方式物理法：化学法：生物法：灭活的病毒电激、振动、离心聚乙二醇（PEG）例如：仙台病
2、毒（丧失感染性、保留抗原结构）注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞。、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理细胞融合的方法诱导方法用途获得杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞的全能性去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理（离心、振荡、电激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒、动物细胞融合技术的发展简史告诉我们：科学技术是不断发展的。那么，实现动物细胞融合有什么意义呢？打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；广泛应用多个学科领域；重要用途：利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。二、
3、单克隆抗体的制备 思考 将抗原注入动物体，然后从动物血清中提取抗体 人们获得抗体的传统方法是?传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？产量低、纯度低；而且制备抗体特异性差。1.B淋巴细胞受抗原刺激后，经过增殖和分化成为浆细胞可以产生特异性抗体。2.动物在免疫反应过程中，体内产生特异性抗体种类可达百万种以上，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。3.但每一个效应淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。分析：B淋巴细胞与抗体的关系 二、单克隆抗体的制备、单克隆抗体（概念）由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。那么，如何大量获得
4、化学性质单一、特异性强的抗体？（即单克隆抗体）在体外，一个淋巴细胞是不可能无限增殖的。一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖 杂交瘤细胞动物细胞培养技术、设计方案：动物细胞融合创始人：米尔斯坦单克隆抗体既能产生专一的特异性抗体，又能迅速大量繁殖获得能产生相应抗体的B淋巴细胞 动物细胞融合技术B、BB、B瘤、瘤瘤、瘤 细胞培养液小鼠腹水杂交瘤细胞 专一抗体检验阳性 未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有杂种细胞才能活1.动物特异性免疫2.分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,-Bn）3.细胞融合三种融
5、合方式:（BB;BG;GG）4.第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G-BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。）单克隆抗体的制备过程要点：5.第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“专一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。6.选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。7.提取单克隆抗体（细胞培养液中或小鼠腹水中提取）。（3）为何要进行两次筛选？（4）如何进行第2次筛选？培养在多孔培养板上，每孔只有
6、一个杂交瘤细胞。第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。问题强化：（1）本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理（2）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体 4、单克隆抗体的特点和应用 与常规抗体相比，单克隆抗体特异性强，灵敏度高，产量高，优越性十分明显。应用：特点：()诊断试剂：在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有准确，高效，简易、快速特点。()用于治疗疾病：主要用于癌症
7、治疗。()运载药物 （作为运载对应疾病的药物的“生物导弹“。）“生物导弹”单克隆抗体药物（单克隆抗体：导向作用，准确找到癌细胞位置。利用药物在原位杀死癌细胞。）下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案(4)、图中B为_过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能_,又能(1)、该实验方案的目的是_ _(3)、A是从小鼠的脾脏中取得_ _,该细胞能够产生_ 制备单克隆抗体B淋巴细胞 抗体细胞融合灭活病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC 4、下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案(5)、C过程指细胞培养，该过程包括_培养和_培养两个阶段，其中_代以内的的细胞属于细胞株。原代传代50 B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC
