1、专题十五生物技术实践考向预测1.近五年的考题中，对微生物的分离和培养的考查尤为突出，侧重考查微生物的培养、分离、计数、无菌技术等基本知识，对传统发酵技术的发酵原理、制作流程等的考查频度也在不断提高。对植物组织培养、胡萝卜素的提取仅进行了两次考查，前者侧重考查营养条件及有关植物激素的作用等；后者侧重考查胡萝卜素的萃取剂的选择等。2本专题以非选择题的形式考查。常借助某一特定的微生物的分离和培养考查微生物的营养、接种方法等；对于生物技术在食品加工中的应用，常借助发酵实例考查，填充内容多为教材中一些结论性语句等。植物组织培养技术、植物有效成分的提取的考查也多以教材基础知识为主。3考纲新变化：（1）删去
2、了”植物组织培养”，增加了“某种微生物数量的测定”，将“利用微生物进行发酵来生产特定的产物” 改为“利用微生物进行发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用”。2018年备考时应特别关注这些变化，在备考时，可以从以下几个方面来把握： (1)掌握大肠杆菌的纯化原理、主要方法及菌种的保存方法。 (2)认真分析教材中两个微生物分离与计数的实例，并掌握微生物的筛选及技术方法。 (3)利用比较法归纳总结并掌握常见传统发酵技术的原理、流程及影响因素等。 (4)列表比较玫瑰精油、橘皮精油及胡萝卜素的提取方法、原理、实验步骤等异同。1.知识框架知识与技巧的梳理考点一 微生物的培养、分离与计数1. 消毒和灭
3、菌的比较2. 平板划线法每次灼烧的目的3. 纯化微生物的接种方法项目平板划线法稀释涂布平板法原理通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子胞群体,即菌落将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个的菌落优点可以观察菌落特征,对混合菌进行分离可以计数,可以观察菌落特征缺点不能计数吸收量较少,较麻烦,平板不干燥效果不好,容易蔓延4. 选择培养基与鉴别培养基的比较
4、例1. 某研究小组的同学用所学的微生物的实验室培养的方法进行“变质牛奶中金黄色葡萄球菌的分离和计数实验”，部分实验处理和结果如图所示。(注：培养皿旁的数字代表菌落数目；实验条件适宜；实验操作规范等)请回答相关问题：(1)在实验室培养微生物，一方面需要为培养的微生物提供合适的_和_条件；另一方面需要确保无处不在的其他微生物无法混入。(2)据图，研究小组采用的是_法分离和计数金黄色葡萄球菌。由样品到4号试管的操作中，第一步，将分别盛有9 mL生理盐水的4支试管_，并编号14号；第二步，用移液管从样品中吸取1 mL牛奶，注入1号试管中，充分摇匀；第三步，重复第二步骤操作，以此类推。4号试管的稀释倍数
5、是_。(3)资料显示，金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10%15%NaCl肉汤中生长。本实验可配制含10%氯化钠的培养基，使之成为_培养基，以利于金黄色葡萄球菌生长，抑制或阻止其他微生物的生长。(4)在统计菌落数目时，需按照菌落计数的要求计数，以保证计数结果准确。据图可得出1 mL牛奶样品中金黄色葡萄球菌的活菌数为_个。【解析】(1)实验室培养微生物，既要为微生物提供营养和适宜温度等环境条件，还要防止被其他微生物污染。(2)图示所用的分离方法是稀释涂布平板法；图示中每一次稀释都稀释了10倍，因此4号试管的稀释倍数为104倍。(3)含有较高浓度NaCl的培养基属于选择培养基。(4)图示中2号试
6、管和4号试管稀释度下各有2个和1个培养皿，偶然性较大，应以3号试管稀释度的数据进行计算，即(323937)30.11033.6105个。【答案】(1)营养 环境 (2)稀释涂布平板 灭菌 104 (3)选择 (4)3.6105统计菌落数目方法的比较技巧方法(1)显微镜直接计数法原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。方法：用计数板计数。缺点：不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。计算公式：每克样品
7、中的菌株数(CV)M，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。操作：设置重复组，增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。考点二 传统发酵技术的应用5. 比较果酒、果醋、腐乳、泡菜的制作 项目内容果酒和果醋的制作腐乳的制作制作泡菜并检测亚硝酸盐含量作用菌种果酒:酵母菌果醋:醋酸菌毛霉乳酸菌原理(1)酵母菌在无氧条件下将葡萄糖氧化成乙醇(2)醋酸菌在有氧条件下将乙醇氧化为醋酸毛霉将蛋白质、脂肪分解成小分子有机物乳酸菌将糖转化为乳酸原料选择新鲜葡萄(或苹果)豆腐大白菜、花椰菜等新鲜干
8、净的蔬菜发酵条件果酒:前期需氧,后期不需氧果醋:一直需氧一直需氧无氧发酵温度果酒:1825果醋:30351518常温实验流程挑选葡萄榨汁 酒精发酵 醋酸发酵 果酒 果醋让豆腐上长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制制泡菜：选材 配制盐水加调味料,装坛发酵成品测亚硝酸盐含量:配制溶液制备标准显色液制备样品处理液比色例2. 将醋酸菌突变体中与耐酸有关的ALDH基因导入优良醋酸菌中，选育出高发酵速率、耐酸的醋酸菌，用于果醋生产。请分析回答下列问题：(1)对含有ALDH基因的DNA与质粒用同种限制酶切割后，通过_酶连接形成重组质粒。为获得耐酸的醋酸菌，用_法接种于含高浓度醋酸的培养基进行筛选。将筛选纯化的
9、菌种用_的方法长期保存。(2)下图表示温度、乙醇浓度对该醋酸菌产酸量的影响。醋酸菌能将乙醇转变为_，再将其转变为醋酸。研究不同酒精浓度下的最高产酸量时，最好把温度控制为_，如温度过高，醋酸菌代谢缓慢甚至死亡，原因是_。酒精发酵后通过出料口检测酒精浓度，将发酵液中酒精浓度调节到_左右才接种醋酸菌，较高的酒精浓度会使产酸量下降，不适宜接种，原因是_。(3)为检测发酵过程中醋酸菌数量，将1 mL发酵液稀释100倍后，分别取0.1 mL稀释菌液均匀涂布在4个平板上；经适当培养后，4个平板上的菌落数分别为24、139、140、141，据此可得出每毫升发酵液中的活菌数为_。【解析】(1)DNA连接酶作用是
10、连接两条DNA链；微生物接种常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法；甘油管藏的方法适合长期保存菌种。(2)由图1，可以看出在35，产酸量最多，因此温度应控制在35，温度过高，影响酶的活性，醋酸菌代谢缓慢甚至死亡；由图2，可以看出在乙醇浓度为4%时，产酸量最高高浓度的酒精会抑制醋酸菌的生长和代谢。(3)第1个平板的菌落数为24，与其他平板差别太大，可能由偶发因素引起的，应取菌落数目介于30300的计数，因此取后3个平板菌落数平均值为(139140141)/3140，那么1 mL发酵液活菌数目为140101001.4105。【答案】（1）DNA连接 平板划线(稀释涂布平板) 甘油管藏（2）乙醛 35
11、(3035) 温度过高，影响酶的活性(使酶失活) 4% (较)高浓度的酒精会抑制醋酸菌的生长和代谢 （3）1.4105考点二 植物有效成分的提取6. 植物有效成分的提取实例(1)玫瑰精油的提取注意：加入NaCl的目的是增加水层的密度，有利于玫瑰油与水分层。加入无水Na2SO4的目的是吸收精油中残留的水分。(2)橘皮精油的提取 注意：为了提高出油率，需要将柑橘皮干燥去水，并用石灰水浸泡，浸泡时间为10 h以上。橘皮要浸透，这样压榨时不会滑脱，且出油率高，过滤时不会堵塞筛眼。(3)胡萝卜素的提取 注意：原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等条件也能影响萃取效率。因此在萃取的过程中，要
12、先将胡萝卜进行粉碎和干燥，使之与萃取剂充分接触，提高溶解度。例3. 请回答下列与实验室提取芳香油有关的问题：(1)植物芳香油的提取可采用的方法有压榨法、_和_。(2)芳香油溶解性的特点是不溶于_，易溶于_，因此可用_作为提取剂来提取芳香油。(3)橘子果实含有芳香油，通常可用_作为材料提取芳香油，而且提取时往往选用新鲜的材料，理由是_。(4)对材料压榨后可得到糊状液体，为除去其中的固体物获得乳状液可采用的方法是_。(5)得到的乳状液加入氯化钠并放置一段时间后，芳香油将分布于液体的_层，原因是_。加入氯化钠的作用是_。(6)从乳状液中分离得到的芳香油中要加入无水硫酸钠，此试剂的作用是_。【解析】(
13、1)植物芳香油的提取可采用的方法有压榨法、蒸馏法、萃取法。(2)见答案。(3)一般采用新鲜的橘子皮来提取橘皮精油，因为新鲜的橘皮中含芳香油多。(4)除去液体中的固体常用方法是过滤。(5)芳香油密度比水小，且不溶于水，会浮在液体的表面。加入氯化钠会增加水层密度，使油和水分层。(6)无水硫酸钠可以吸收芳香油中残留的水分。【答案】(1)蒸馏法 萃取法(2)水 有机溶剂 有机溶剂(其他合理答案也可)(3)橘子皮 芳香油含量较高(4)过滤(其他合理答案也可)(5)上 油层的密度比水层小(其他合理答案也可) 增加水层密度，使油和水分层(6)吸收芳香油中残留的水分蒸馏法、压榨法和萃取法的分析方法技巧方法1.
14、水蒸气蒸馏法有水中蒸馏、水上蒸馏和水气蒸馏三种方法，应根据不同的原料选择不同的蒸馏方法。2.压榨法必须在常温条件下进行，否则会影响产物的产量和质量。3.萃取法就是根据相似相溶原理，根据不同物质的不同沸点来蒸发或分液。4.虽然三种方法的原理和操作过程不同，但都有过滤提纯这一环节。5.在实际生产中要根据原料特点的不同，采用适宜的提取方法。（45分钟）限时训练经典常规题1.（2017江苏卷）苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题:（1）酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚
15、和水，其中可作为碳源的有_。（2）将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐_。以达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步_，以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加_。（3）下图为连续划线法示意图，在图中_ （填图中序号）区域更易获得单菌落。 （4）采用比色测定法（使用苯酚显色剂）检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1 5号比色管的苯酚浓度应分别为_。管号123456苯酚浓度（mg/ L）1如果废水为50 mg/ L 苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，则需将残留液稀释_（填序号：5 10 20
16、）倍后，再进行比色。2.（2016天津卷）天津独流老醋历史悠久、独具风味，其生产工艺流程如下图。（1）在糖化阶段添加酶制剂需要控制反应温度，这是因为酶_。（2）在酒精发酵阶段，需添加酵母菌。在操作过程中,发酵罐先通气，后密闭。通气能提高_的数量，有利于密闭时获得更多的酒精产物。（3）在醋酸发酵阶段，独流老醋采用独特的分层固体发酵法，发酵30天。工艺如下。发酵过程中,定期取样测定醋酸杆菌密度变化,趋势如右图。据图分析，与颠倒前相比，B层醋酸杆菌密度变化的特点是 ，由此推测，B层醋酸杆菌密度变化的主要环境因素是_。乳酸含量高是独流老醋风味独特的重要成因。发酵过程中，发酵缸中_层醋醅有利于乳酸菌繁殖
17、，积累乳酸。成熟醋醅中乳酸菌的种类明显减少，主要原因是发酵后期营养物质消耗等环境因素的变化，加剧了不同种类乳酸菌的_，淘汰了部分乳酸菌种类。高频易错题 3（2017河北石家庄市级联考）-胡萝卜素可用来治疗夜盲症等疾病，也是常用的食用色素。下图为从酵母菌中提取胡萝卜素的基本过程：酵母菌A的筛选酵母菌A的培养菌体裂解离心沉淀萃取过滤浓缩胡萝卜素的鉴定（1）培养酵母菌的培养基中一般含有 等营养成分。要获得大量的酵母菌用于胡萝卜素的提取，应选择_培养基。筛选酵母菌A时，可采用稀释涂布平板法接种，涂布前的操作是_。（2）胡萝卜素萃取过程中,萃取的效率主要取决于 ；萃取过程宜采用 方式加热以防止温度过高；
18、萃取液浓缩前需进行过滤，其目的是 。（3）果酒的制作也离不开酵母菌，酒精发酵时一般要将温度控制在_，可用_检测酒精的产生与否。4（2018贵州黔东南州联考）农作物秸秆是宝贵的可再生资源，已有多种方案充分利用这类资源。回答下列问题：（1）秸秆粉碎翻压还田，就是把作物收获后的秸秆通过机械化粉碎、耕地、直接翻压在土壤里，这主要是利用土壤中的_（微生物）。（2）实验室鉴别此类微生物的方法是_法，一般用_（接种法）将该菌接种到鉴别培养基上，经过一段时间的培养后，在菌落的周围应该出现_。（3）纤维素可在微生物作用下转化为葡萄糖，可再接种_（微生物）进一步发酵生产酒精。之后还可以通过接种醋酸菌将酒精转化为醋
19、酸，在利用该微生物进行液体深层醋酸发酵时，对气体的需求情况是_。精准预测题5（2018四川绵阳南山中学）泡菜的制作容易受环境条件的影响，温度过高、食盐用量过低、腌制时间过短，均会造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。某研究小组以“测定泡菜腌制过程中亚硝酸盐含量的变化”为课题开展了如下研究。请分析回答：取3只泡菜坛，分别编号 A、B、C。向3只泡菜坛内分别加入调味料和 0.6 Kg 洗净的新鲜大白菜。向 A、B、C 三只泡菜坛内分别加入 2L 浓度依次为 10、20、30的食盐水。密封后置于相同的环境中发酵。测定亚硝酸盐的含量。在封坛前进行第一次测定，以后定期测定，并将测定的数据绘制成曲线图如下。
20、(1)实验中食盐水需煮沸并冷却后才可使用，原因是 。(2)若腌制一段时间后，泡菜的口味是酸而不咸，略带臭味，则最可能是图中曲线_测定的结果。理由是 。(3)测定亚硝酸盐的原理是：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成_色染料。用 和显色剂制成颜色深浅不同的系列标准管。用刻度移液管分别吸取一定量的 ，加到不同的比色管中，然后再加入等量的显色剂进行显色，得到样品管。将显色反应后的样品与已知浓度的标准显色液进行比较，估算泡菜中亚硝酸盐的含量。(4)某同学欲用新鲜的泡菜滤液分离纯化乳酸菌，需要对泡菜滤液进行系列梯度稀释。在系列梯度稀释操作中应该注意
21、的方面是 （至少答两个不同的方面）。6（2018江西抚州临川一中）某学匀小组同学为调查湖水中细菌的污染情况进行相关的实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。（1）该小组同学所用培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了_和_等营养物质。（2）配制培养基时在进行称量、溶解、定容后，还需进行的操作是_，对培养基进行灭菌，一般采用的方法是_。采用此方法灭菌的原因是 。（3）在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在_条件下进行。（4）图甲和图乙是两种接种方法培养后得到的菌落分布，图甲的接种方法是_，图乙的接种方法是_。（5）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平
22、板置于恒温箱中培养、培养的温度设定在_。要使该实验所得结果可靠，还应该实施的操作是_。【解题思路】本题考查微生物的分离和培养、培养基对微生物的选择作用等知识，要求学生识记培养基的成分、无菌技术中的灭菌方法和微生物培养的条件，掌握培养基的种类及功能和实验设计的原则，再规范答题，属于考纲识记层次的考查。微生物的培养基一般都要含有水、碳源、氮源、无机盐，如蛋白胨在培养基中主要作为氮源，淀粉在培养基中主要作为碳源。实验室的灭菌方法一般有灼烧灭菌（适合于接种工具的灭菌）、干热灭菌（适合于耐高温的、需要保持干燥的物品的灭菌）、高压蒸汽灭菌（适合于培养基等物体的灭菌）。（1）蛋白胨来源于动物原料，含有维生素
23、、糖和有机氮等营养物质，在培养基中主要作为氮源；淀粉是糖类，在培养基中主要作为碳源。（2）配制培养基时在进行称量、溶解、定容后，还需进行的操作是pH调整，对培养基的灭菌常采用高压蒸汽灭菌法，因为此方法既能杀死培养基中的芽孢和孢子，又不破坏培养基的营养成分。（3）微生物的分离和培养过程中，一定要注意无菌操作，防止杂菌污染。（4）接种方法主要有稀释涂布平板法和平板划线法，据图分析，图甲的接种方法是稀释涂布平板法，图乙的接种方法是平板划线法。（5）细菌的培养的最适温度是37，该实验还需要设置对照试验，即同时在另一平板上接种无菌水作为对照。参考答案1.【解题思路】(1)分析富集培养基的成分可知，培养基
24、中蛋白胨、苯酚中含C，可作为碳源。(2)转接的目的之一是富集降解苯酚能力强的酚降解菌，随转接次数增多，培养基中的苯酚含量应逐渐增加。若接种培养后平板中菌落过于密集，应继续稀释涂布，以降低平板上菌落密度，便于菌落计数与分离。稀释涂布时所用的培养基为固体培养基，制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加琼脂等物质作为凝固剂。(3)利用连续划线法接种时，越在最后划线区域，菌落的密度越小，越容易获得单菌落，所以，图中区域更易获得单菌落。(4)根据表中6号比色管中苯酚浓度为1 mg/L可以推知，15号比色管的苯酚浓度应分别为0 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L、0.6 mg/L、0.
25、8 mg/L。根据题意，废水为50 mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，要使稀释后的苯酚残留液浓度介于01 mg/L之间，需将残留液稀释20倍左右，再进行比色。【答案】(1)蛋白胨、苯酚(2)增加 稀释涂布 凝固剂(3) (4)0、0.2、0.4、0.6、0.8 2.【解题思路】（1）在糖化阶段添加酶制剂需要控制反应温度，原因是酶在最适温度条件下催化能力最强。（2）通气阶段可促进酵母菌的有氧呼吸，为酵母菌的繁殖提供能量，从而增加酵母菌数量。（3)据图分析,与颠倒前相比,B层醋酸杄菌在颠倒后密度变化的特点是先快速增长后趋于稳定。B层颠倒后,B层醋酸杆菌获得的氧气较为充足,环境中的营养物
26、质和pH也会影响酉酸杆菌的种群密度。乳酸菌为厌氧菌,颠倒前的B层和颠倒后的A层醋醅有利于乳酸菌的繁殖。发酵后期营养物质消耗等环境因素的变化,加剧了不同种类乳酸菌的竞争,淘汰了部分乳酸菌种类,使成熟酯醅中乳酸菌的种类明显减少。【答案】（1）在最适温度条件下催化能力最强（2）酵母菌（3）先快速增长后趋于稳定 氧气、营养物质、PH颠倒前的B层或颠倒后的A种间竞争（或竞争） 3【解题思路】本题考查了培养基、微生物的培养和纯化、提取胡萝卜素以及果酒制作方面的知识，要求考生能够识记微生物培养基的成分、功能，识记微生物纯化的方法，以及果酒制作的原理，难度不大，但要注意梳理所学知识。微生物培养基的成分一般均含
27、有碳源、氮源、无机盐、水等；萃取的效率主要取决于萃取剂的性质和使用量，同时还受到原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等条件的影响；萃取液浓缩前需进行过滤，以除去萃取液中的不溶物。（1）培养微生物的培养基中一般都含有碳源、氮源、水、无机盐等营养成分；液体培养基可用于大量培养微生物或工业生产，所以要获得大量的酵母菌用于胡萝卜素的提取，应选择液体培养基；采用稀释涂布平板法筛选酵母菌A时，涂布前的操作是将菌液进行一系列的梯度稀释。（2）胡萝卜素萃取过程中，萃取的效率主要取决于萃取剂的性质和使用量；萃取过程宜采用水浴方式加热以防止温度过高；萃取液浓缩前需进行过滤，其目的是除去萃取液中的不溶
28、物。（3）在果酒制作过程中，要将温度严格控制在1825；在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈灰绿色，所以可以用酸性重铬酸钾检测酒精的产生与否。【答案】（1）碳源、氮源、水、无机盐 液体 将菌液进行一系列的梯度稀释 （2）萃取剂的性质和使用量 水浴 除去萃取液中的不溶物 （3）1825 酸性重铬酸钾4【解题思路】农作物秸秆中主要含大量纤维素，需要纤维素分解菌才能将其分解；鉴别纤维素分解菌常用刚果红染色法，观察到平板培养基上菌落生长处出现透明圈即可确认。利用葡萄糖发酵产生酒精是通过酵母菌实现，产生的酒精进一步发酵产生醋酸，需要好氧型醋酸菌实现。（1）农作物秸秆中主要含大量纤维素，粉碎后，掩埋在土壤中
29、被分解，显然需要大量的纤维素分解菌的作用才能达到目的。（2）实验室常常用刚果红染色法鉴别纤维素分解菌。由于鉴别细菌通常是在平板的固体培养基表面，所以为了便于观察纤维素分解菌形成的透明圈，一般用稀释涂布平板法接种在这种培养基上，一段时间的培养后，在菌落生长处出现透明圈，即可确认该菌落属于纤维素分解菌。（3）纤维素水解变成葡萄糖，而酵母菌能将葡萄糖转化为酒精，所以完成酒精发酵需要接种酵母菌。之后，再接种醋酸菌，利用醋酸菌能将酒精转化为醋酸的原理，由于醋酸菌是好氧型菌，所以需要在发酵过程中不断通入（无菌）空气。【答案】（1）纤维素分解菌 （2）刚果红染色 稀释涂布平板法 透明圈 （3）酵母菌 不断通
30、入（无菌）空气5【解题思路】据图分析可知，三只泡菜坛内亚硝酸盐的含量变化的绝对数量虽然不同，但整体变化趋势却基本相同，三只泡菜坛中亚硝酸盐含量在同一时间达到最高峰，且一定时间后泡菜中的亚硝酸盐含量明显下降，可能与其中的微生物有关。（1）实验中食盐水需煮沸并冷却后才可使用，其中煮沸是为了杀灭杂菌和排除水中的氧气，冷却后使用是为了防止高温杀死乳酸菌等发酵微生物。（2）若腌制一段时间后，泡菜的口味是酸而不咸，略带臭味，可能是由于食盐水浓度低，杂菌多导致蔬菜变质发臭，蔬菜中硝酸盐会被微生物还原为亚硝酸盐导致亚硝酸盐含量高，对应图中的曲线1。（3）在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后
31、，与N-1萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料；用不同浓度亚硝酸钠标准溶液和显色剂制成颜色深浅不同的系列标准管，用刻度移液管分别吸取一定量的不同泡制天数的泡菜滤液，加到不同的比色管中，然后再加入等量的显色剂进行显色，得到样品管；将显色反应后的样品与已知浓度的标准显色液进行比较，估算泡菜中亚硝酸盐的含量。（4）在系列梯度稀释操作中应该注意的方面是，所用试管和移液管需要经过灭菌；移液管头不能接触任何物体，转移菌液等操作要在酒精灯火焰旁进行；等梯度稀释要求，下一稀释倍数的所取菌液由上一稀释倍数的菌液中吸取；移液管稀释菌液，吸吹三次（多次）使菌液与水充分混匀，每一个稀释度应该换用移液管。【答案】（1）
32、煮沸是为了杀灭杂菌和排除水中的氧气，冷却后使用是为了防止高温杀死乳酸菌等发酵微生物 （2）1 食盐水浓度低，杂菌多导致蔬菜变质发臭，蔬菜中硝酸盐会被微生物还原为亚硝酸盐导致亚硝酸盐含量高 （3）玫瑰红 不同浓度亚硝酸钠标准溶液 不同泡制天数的泡菜滤液 （4）1、所用试管和移液管需要经过灭菌；2、移液管头不能接触任何物体；3、转移菌液等操作要在酒精灯火焰旁进行；等梯度稀释要求：1、下一稀释倍数的所取菌液由上一稀释倍数的菌液中吸取，2、移液管稀释菌液，吸吹三次（多次）使菌液与水充分混匀，3、每一个稀释度应该换用移液管6【解题思路】本题考查微生物的分离和培养、培养基对微生物的选择作用等知识，要求学生
33、识记培养基的成分、无菌技术中的灭菌方法和微生物培养的条件，掌握培养基的种类及功能和实验设计的原则，再规范答题，属于考纲识记层次的考查。微生物的培养基一般都要含有水、碳源、氮源、无机盐，如蛋白胨在培养基中主要作为氮源，淀粉在培养基中主要作为碳源。实验室的灭菌方法一般有灼烧灭菌（适合于接种工具的灭菌）、干热灭菌（适合于耐高温的、需要保持干燥的物品的灭菌）、高压蒸汽灭菌（适合于培养基等物体的灭菌）。（1）蛋白胨来源于动物原料，含有维生素、糖和有机氮等营养物质，在培养基中主要作为氮源；淀粉是糖类，在培养基中主要作为碳源。（2）配制培养基时在进行称量、溶解、定容后，还需进行的操作是pH调整，对培养基的灭菌常采用高压蒸汽灭菌法，因为此方法既能杀死培养基中的芽孢和孢子，又不破坏培养基的营养成分。（3）微生物的分离和培养过程中，一定要注意无菌操作，防止杂菌污染。（4）接种方法主要有稀释涂布平板法和平板划线法，据图分析，图甲的接种方法是稀释涂布平板法，图乙的接种方法是平板划线法。（5）细菌的培养的最适温度是37，该实验还需要设置对照试验，即同时在另一平板上接种无菌水作为对照。【答案】（1）氮源 碳源 （2）pH调整 高压蒸汽灭菌 因为该方法既能杀死培养基中的芽孢和孢子，又不破坏培养基的营养成分 （3）无菌 （4）稀释涂布平板法 平板划线法 （5）37 同时在另一平板上接种无菌水作为对照
