1、课时跟踪检测（三）微生物的选择培养和计数一、选择题1分离土壤中尿素分解菌的实验操作中，错误的是()A土壤取样时要铲去表层土再取样B取土样的铁铲和装土样的信封在使用前均需灭菌C用添加了尿素作为氮源的肉汤培养基分离细菌D选取菌落数在30300之间的平板用于计数解析：选C土壤中的细菌绝大多数分布在距地表约38 cm的土壤层，因此土壤取样时要铲去表层土再取样，A正确；取土样的铁铲和装土样的信封在使用前均需灭菌，B正确；该培养基必须以尿素为唯一的氮源，不能使用添加了尿素作为氮源的肉汤培养基，C错误；选取菌落数在30300之间的平板用于计数，D正确。2(2020柳州月考)微生物的接种技术有很多，下列有关常
2、用的两种微生物接种方法的叙述，错误的是()A只能应用于固体培养基接种B都可以用于微生物的计数C接种培养后均可获得单菌落D接种用具都需进行严格灭菌解析：选B将微生物接种到固体培养基中的方法通常为平板划线法和稀释涂布平板法，A正确；稀释涂布平板法常用来进行微生物的计数，平板划线法常用来筛选分离微生物，B错误；两种接种方法都可以在培养基中形成单个菌落，C正确；为防止杂菌污染，接种工具需要灭菌后使用，D正确。3(2020德州期末)某同学将土壤浸出液涂布在选择培养基上分离出分解尿素的细菌，以下操作正确的是()A首先要用蒸馏水对土壤样液进行梯度稀释B利用菌落的特征即可筛选与鉴定出分解尿素的细菌C本实验应始
3、终保证无菌操作，否则会影响实验结果D在25 下选择培养34天即可获得分解尿素的细菌解析：选 C首先要用无菌水对土壤样液进行梯度稀释，A错误；鉴定分解尿素的细菌的方法是在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素，而利用菌落的特征只能初步识别和判断微生物的类型，B错误；筛选尿素分解菌的实验应始终保证无菌操作，否则会影响实验结果，C正确；本实验的流程是土壤取样样品的稀释将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的培养基上挑选能生长的菌落鉴定，当培养基上产生菌落后，该菌落还需要借助生物化学的方法进一步鉴定，才能确定其能够分解尿素，D错误。4(2020雅安期末)下列
4、说法错误的是()A因为土壤中各类微生物的数量不同，所以为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行分离B测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同C只有得到了3个或3个以上菌落数目在30300的平板，才说明系列稀释操作成功D牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落解析：选C土壤是微生物的天然培养基，土壤中各类微生物的数量不同，获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离，A正确；土壤中细菌总量高于土壤中能分解尿素的细菌的数量，所以测定土壤中细菌总量和能分解尿素的细菌数量，选用的稀释范围不同，B正确；稀释涂布平板法
5、进行计数时，得到了2个以上菌落数目在30300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，C错误；选择培养基的菌落数目明显小于牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落，D正确。5下列关于微生物培养和利用的叙述，错误的是()A利用稀释涂布平板法只能对微生物进行计数不能分离微生物B接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单菌落C以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可筛选和鉴别尿素分解菌D用稀释涂布平板法对微生物进行计数的估计值比实际值偏小解析：选A稀释涂布平板法既能分离微生物也能对微生物进行计数，在稀释涂布平板法计数时，选择“菌落数在30300的实验组平板进行计
6、数”以减少实验误差，A错误；接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单个菌落，B正确；尿素分解菌的氮源是尿素，其他不能利用尿素的细菌就不能生长，所以以尿素为唯一氮源的培养基上可以选择尿素分解菌，尿素分解菌可以将尿素分解为氨，使酚红指示剂变色，C正确；用稀释涂布平板法对微生物进行计数的估计值比实际值偏小，因为两个或多个微生物连在一起会长成一个菌落，D正确。6下列是关于检测土壤中细菌总数实验操作的叙述，错误的是()A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上C将实验组和对照组平板倒置，37 恒温
7、培养2448 hD确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数解析：选D对土壤微生物计数，使用的培养基应该是标准培养基，并要经过高压蒸汽灭菌处理；涂布时要对样本的溶液进行稀释，一般选取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各取0.1 mL进行涂布，为了检查平板培养基是否制备合格，同时把一培养基接种等量无菌水，作为空白对照；培养一段时间后，如果某一稀释倍数的平板上菌落个数在30300之间，即可把该组所有平板的菌落计数，然后取其平均值，计算出土壤细菌的总数。7下列关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的叙述，正确的是()A只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素B筛选分解尿素的细菌时
8、应以尿素作为培养基中的唯一营养物质C统计样品中的活菌数目一般用平板划线法D在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则表明筛选到了分解尿素的细菌解析：选A只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素；筛选分解尿素的细菌的实验中，利用的是以尿素为唯一氮源的培养基；统计样品中的活菌数目一般用稀释涂布平板法；在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红，就能初步判定该种细菌能够分解尿素。8(2020九江月考)下列关于微生物的培养和应用的叙述，正确的是()A配制培养基时应先调pH后灭菌B在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长C培养基中加入伊红美蓝试
9、剂，长出的菌落为大肠杆菌菌落D向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长解析：选A配制培养基时应先调pH后灭菌，A正确；青霉素能够干扰细菌细胞壁的合成，所以在培养基中加入青霉素可抑制细菌生长而促进真菌生长，B错误；伊红美蓝试剂属于鉴别培养基，而不是选择培养基，因此培养基中加入伊红美蓝试剂，长出的菌落不都是大肠杆菌菌落，其中黑色的菌落为大肠杆菌菌落，C错误；破伤风杆菌为厌氧菌，因此向液体培养基中通入氧气会抑制破伤风杆菌的生长，D错误。9(2020成都期末)下列根据相应实验现象分析得出的结论，错误的是()A牛肉膏蛋白胨空白对照培养基上没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染B牛肉膏蛋白胨培养基的菌
10、落数大于选择培养基，说明选择培养基有选择作用C稀释涂布平板法获得的培养基上菌落数小于30，说明可能是稀释的倍数太大D在接种大肠杆菌的培养基上观察到菌落有大有小，说明培养基已被杂菌污染解析：选D牛肉膏蛋白胨空白对照培养基上没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染，A正确；大多数微生物都能在牛肉膏蛋白胨培养基上生长，因此其不具有选择性，如果牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数大于选择培养基，说明选择培养基有选择作用，B正确；稀释涂布平板法获得的培养基上菌落数小于30，说明可能是稀释的倍数太大，C正确；在接种大肠杆菌的培养基上观察到菌落有大有小，培养基不一定被杂菌污染，可能是大肠杆菌菌落形成的时间不同，不能仅通
11、过菌落的大小判别微生物的种类，D错误。10(2020潍坊期末)为检测大肠杆菌对某种抗生素的敏感性进行实验，图示培养两天后所见结果(为加有不同浓度抗生素的圆纸片)。下列相关叙述正确的是()A接种用的方法是平板划线法B实验表明不同种的大肠杆菌对同一种抗生素敏感性不同C周围透明圈的大小差异可能与培养基的氮源不同有关D浸有无菌水的圆纸片在本实验中作为空白对照解析：选D该接种方法是稀释涂布平板法，A错误；据题意可知，培养基上抑菌圈的大小与该抗生素的浓度有关，根据单一变量原则，该实验无法说明不同种大肠杆菌对同种抗生素的敏感性不同，B错误；大肠杆菌为异养生物，同一平板的培养基中的含氮量是相同的，C错误；图中
12、浸有无菌水的圆纸片在本实验中作为空白对照，D正确。11(2020济南月考)如表为某微生物培养基的配方，下列有关说法正确的是()成分含量成分含量NaNO33 gFeSO40.01 gK2HPO41 g(CH2O)30 g琼脂15 gH2O1 000 mLMgSO47H2O0.5 g青霉素0.1万单位A按物理性质该培养基属于液体培养基B按用途该培养基属于选择培养基C按培养基成分该培养基属于天然培养基，所培养微生物的同化类型为异养型D该培养基可以用于筛选大肠杆菌解析：选B分析表格可知，本培养基中含有琼脂，按物理性质分属于固体培养基，A错误；该培养基中加入了青霉素，只有抗青霉素的微生物才能生长，因此按
13、用途分属于选择培养基，B正确；分析表格可知，该培养基是人工配制的培养基，本培养基配方中(CH2O)作为碳源，因此所培养的微生物同化作用的类型是异养型而不是自养型，C错误；大肠杆菌是细菌，青霉素可抑制细菌细胞壁的合成，因此在加入了青霉素的培养基中大肠杆菌不能生长，D错误。12某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物X。研究人员用化合物X、磷酸盐、镁盐以及一些微量元素配制成培养基，成功筛选到能高效降解化合物X的细菌(目的菌)，实验的主要步骤如图所示。下列有关叙述错误的是()A该培养基中化合物X可能既作碳源又作氮源B实验培养过程中进行振荡培养的主要目的是增大目的菌的浓度C实验操作过程中，
14、要注意防止外来杂菌污染D将固体培养基得到的目的菌重复多次上述实验的目的是对菌种进行“纯化”解析：选B磷酸盐、镁盐以及一些微量元素中不含C、N元素，由此可推测该培养基中化合物X可能既作碳源又作氮源，A正确；实验培养过程中进行振荡培养的主要目的是增加培养液中的溶氧量，满足微生物对氧气的需求，B错误；筛选微生物的过程中应注意防止外来杂菌污染，C正确；在以化合物X为唯一碳源的培养基中只有能降解化合物X的微生物才能生长繁殖，不能利用化合物X的微生物因缺乏碳源和氮源，无法生长繁殖，将固体培养基得到的目的菌重复多次上述实验的目的是对菌种进行“纯化”，D正确。二、非选择题13大肠杆菌是寄生于动物肠道中的细菌，
15、其代谢产物能与染料伊红美蓝反应，使菌落呈黑色。下面是其培养基配方，回答下列问题：成分蛋白胨乳糖琼脂蒸馏水含量10 g10 g2 g25 g1 000 mL20 mL13 mL(1)该培养基中，蛋白胨为大肠杆菌提供的主要营养有_和维生素。从物理性质来看，该培养基属于_培养基。(2)对该培养基进行灭菌时，可采用_法。在接种大肠杆菌前，需先将灭菌后的空白培养基放在恒温箱中培养一段时间，观察是否有菌落生成，其目的是_。(3)为检测严重污染水体中大肠杆菌的数量，将水样适当稀释后，取样涂布在上述平板培养基中，应选择颜色为_的菌落进行计数。该方法是通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数，其原理是_。(4
16、)除利用特定培养基选择鉴定某种细菌外，还可以依据_对细菌进行初步的鉴定和分类。解析：(1)该培养基中，蛋白胨为大肠杆菌提供的主要营养有碳源、氮源和维生素。从物理性质来看，该培养基加入琼脂作为凝固剂，因此属于固体培养基。(2)对该培养基进行灭菌时，可采用湿热灭菌法。在接种大肠杆菌前，需先将灭菌后的空白培养基放在恒温箱中培养一段时间，观察是否有菌落生成，其目的是检验培养基制备是否合格(或灭菌是否彻底)。(3)大肠杆菌的代谢产物能与染料伊红美蓝反应，使菌落呈黑色。为检测严重污染水体中大肠杆菌的数量，将水样适当稀释后，取样涂布在上述平板培养基中，应选择颜色为黑色的菌落进行计数。通过统计平板上的菌落数来
17、推测样品中的活菌数的原理是当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌。(4)除利用特定培养基选择鉴定某种细菌外，还可以依据菌落的形状、大小等特征对细菌进行初步的鉴定和分类。答案：(1)碳源、氮源固体(2)湿热灭菌检验培养基制备是否合格(或灭菌是否彻底)(3)黑色当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个活菌(4)菌落的形状、大小等特征14.(2020郑州月考)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过_灭菌。
18、(2)示意图A和B中，_表示的是用平板划线法接种培养后得到的结果。能够得到单菌落的是图示_。(3)图B的接种工具是_，如果图B中的菌种是某细菌，则一般稀释倍数为_倍。(4)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中细菌含量，将1 mL水样稀释100倍，在4个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，4个平板上的菌落数分别为29、39、38和37，据此可得出每升水样中的活菌数为_个。(5)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是振荡培养能提高培养液中_的含量，同时可使菌体与培养液充
19、分接触，提高营养物质的利用率。解析：(1)对接种环常用的灭菌方法是灼烧灭菌。(2)分析题图可知，A培养皿采用的接种方法是平板划线法，B培养皿采用的接种方法是稀释涂布平板法，这两种接种方法都可获得单菌落。(3)图B的接种方法是稀释涂布平板法，该方法所需的接种工具是涂布器；细菌的稀释倍数一般为104、105、106倍。(4)为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数，因此1 mL水样中的菌落数是(393837)30.11003.8104(个)，每升水样中的活菌数为3.81041033.8107(个)。(5)由题意可知，振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快，由此可以说明该细菌是需
20、氧菌，由于振荡培养提高了培养液中溶解氧的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高了营养物质的利用率，细菌生长速度加快。答案：(1)灼烧(2)AAB(3)涂布器104、105、106(4)3.8107(5)溶解氧15(2020南京期末)为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验。请回答下列问题：(1)配制好的培养基通常使用_法灭菌。步骤与步骤中培养基成分相比，最大的区别是步骤培养基中_。(2)同学甲进行步骤的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示。该同学的接种方法是_，出现图B结果可能的失误操作是_。(3)同学乙也按照同学甲的接种方法进行了步骤的
21、操作：将1 mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、58和57。据此可得出每升样品中的活菌数为_个。(4)步骤需要振荡培养，原因是_。(5)步骤后取样测定石油含量的目的是_。解析：(1)使用湿热灭菌法对培养基进行灭菌。步骤与步骤中培养基成分相比，最大的区别是步骤中使用的培养基内石油是唯一碳源。(2)根据图B所示平板经培养后的菌落分布可知，该同学的接种方法是稀释涂布平板法。平板上菌落聚集分布，出现这种结果可能的失误操作是涂布不均匀。(3)每升样品中的活菌数(565758)3101001 0005.7107(个)。(4)振荡可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率，并且提高培养液中(溶解)氧的含量。(5)为了筛选出分解石油能力最强的细菌，步骤后取样测定石油含量，选取石油含量最低的培养液中的菌种作为分解石油能力最强的菌株。答案：(1)湿热灭菌石油是唯一碳源(2)稀释涂布平板法涂布不均匀(3)5.7107(4)提高培养液中(溶解)氧的含量，通过振荡可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率(5)筛选出分解石油能力最强的细菌
