1、微生物的接种、分离、纯化与计数(建议用时：40分钟)题组一微生物接种和传代的无菌技术1下列关于菌种的接种和传代的说法错误的是()A低温、干燥、真空是菌种保存的重要条件B好氧微生物常用穿刺接种的方法C斜面接种是常用的菌种传代和低温下保存的方法D菌种的保存中要让微生物生长繁殖受抑制而不死亡B穿刺接种可将厌氧菌保护在培养基中，使其在培养基深处的厌氧环境下生长。2将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37 恒温箱的目的是()A对比观察培养基有没有被微生物利用B对比分析培养基是否被杂菌污染C没必要放入未接种的培养基D为了下次接种时再使用B对未接种的培养基进行培养，起到对照作用，可用来确定培养基是否被
2、杂菌污染。题组二微生物分离、纯化和培养的无菌技术3下列关于平板划线操作的叙述，错误的是()A每次划线前都要灼烧接种环B灼烧接种环后，要立即用接种环接种，防止杂菌污染接种环C要在酒精灯火焰旁进行D接种前，要将菌种试管口通过火焰B灼烧接种环后，将接种环伸入管内，让环端先接触培养基上未长菌的部位，使其冷却，然后轻轻挑取少量菌体，再进行接种。灼烧接种环后，不可立即用接种环接种，以免接种环温度过高，将菌种杀死。4在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。实验基本步骤如下：请回答下列有关问题：(1)配制培养基时，各成分含量确定的原则是_。不论何种培养基，在各
3、种成分都溶化后分装前，要进行的是_。(2)倒平板的适宜温度是50 左右，原因是_。待平板冷凝后，要将平板倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止_。(3)纯化菌株时，若使用稀释涂布平板法进行接种，应选择的涂布工具是图中的_；若使用平板划线法进行接种，应选择的接种工具是图中的_。ABCD(4)划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有_。(5)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及培养物必须经过_处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。解析(1)培养基中各成分含量要根据微生物的生长需
4、要来确定。微生物生长需要一定的pH，所以培养基装瓶前需要调节pH。(3)由图可知，A为接种环，B为涂布器，C为胶头滴管，D为接种针，故稀释平板法应选择的涂布工具是B，平板划线法应选择的接种工具是A。(4)由题意分析可知，造成此现象的原因可能有两个：一是接种环灼烧后未冷却，菌种接触到高温的接种环而死亡；二是划第二划线区域第一条线时未从第一区域末端开始。(5)有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，因此，使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。答案(1)所培养微生物对各营养成分的需要量调节pH(2)温度过高会烫手，过低培养基又会凝固皿盖上的水珠落入培养基，造成污染(3)B
5、A(4)接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始(5)灭菌题组三土壤中分解尿素的细菌的分离与计数5分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是()加尿素不加尿素加琼脂不加琼脂加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸盐不加硝酸盐ABCDC尿素和硝酸盐都能作为氮源，而培养尿素分解菌的培养基应是以尿素为唯一氮源的固体培养基，因此培养基中应不加硝酸盐，加入尿素和琼脂。葡萄糖作为碳源，也需要加入。6分离土壤中分解尿素菌的实验操作中，对于获得纯化的尿素分解菌的单菌落影响最大的是()A制备浸出液的土壤取自土壤的表层B涂布前涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌C牛肉膏蛋白胨培养基中添加尿素作为氮源D接种操作者的双手未用酒精棉进行
6、消毒C制备浸出液的土壤取自土壤的表层对纯化的尿素分解菌的单菌落影响不大，A不符合题意；涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌可能会造成污染，但对纯化的尿素分解菌的单菌落影响不大，B不符合题意；该培养基必须以尿素为唯一的氮源，不能使用牛肉膏蛋白胨培养基或在其中添加尿素作为氮源，该操作对实验影响最大，C符合题意；接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒，可能会造成污染，但对纯化的尿素分解菌的单菌落影响不大，D不符合题意。7土壤有“微生物的天然培养基”之称。下图是某同学分离和培养土壤中微生物的部分操作步骤和实验结果示意图。回答下列问题：(1)利用固体培养基培养土壤中的微生物时，除考虑各种营养条件外，还需要控制的培
7、养条件有_(至少写两点)等。接种前应该先检测固体培养基是否被污染，检测的具体方法是_。(2)图示中用平板划线法接种的操作顺序是AB_；以上操作步骤中存在明显错误的是_(用字母表示)，该操作的正确方法是_。解析(1)若用该培养基培养土壤中的微生物，除考虑各种营养条件外，还要考虑温度、pH、氧气、无菌和渗透压等条件。检测固体培养基是否被污染的方法是将未接种的培养基在适宜的环境中放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生。(2)图示是平板划线法接种操作示意图，其操作顺序是ABEDCF；为了防止杂菌污染，接种应该在酒精灯的火焰旁进行，因此以上操作中存在错误的步骤是C。答案(1)温度、pH、氧气、无菌将未
8、接种的培养基在适宜的环境中放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生(2)EDCFC在酒精灯的火焰旁划线8(2021山东烟台一模)分解尿素的细菌广泛存在于农田等土壤中，某生物实验小组尝试对分解尿素的细菌进行分离与计数，请回答下列问题：(1)分解尿素的细菌含有的酶是_，为筛选出能分解尿素的细菌，配制培养基时应以_作为唯一氮源，因此该培养基属于_培养基。(2)常用来统计样品中活菌数目的方法是_。(3)该小组对分解尿素的细菌进行计数时，在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，这样做的目的是_。将1 mL样液稀释104倍，在3个平板上分别涂布0.1 mL稀释液；经适当培养后，统计活菌数目，每
9、隔一个“时间间隔”统计一次菌落数目，最后选取_作为结果。如果3个平板的菌落数分别为39、42和45，据此可得出每毫升样液中活菌数为_。解析(1)分解尿素的细菌含有脲酶，要筛选出能分解尿素的细菌，应该用以尿素为唯一氮源的选择培养基。(2)接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可用于微生物计数。(3)该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，用于检测平板灭菌是否彻底。经适当培养后，统计活菌数目，每隔一个“时间间隔”统计一次菌落数目，最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。3个平板的菌落分别为39、42和45，据此可得出每毫升样液中活菌数(394245)30.11
10、044.2106。答案(1)脲酶尿素选择(2)稀释涂布平板法(3)检验平板灭菌是否彻底菌落数目稳定时的记录4.2106对微生物培养的接种步骤弄不清9下列有关平板划线操作的叙述，不正确的是()A第一次操作前灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物B每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种C在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液D划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境或感染操作者C平板划线法通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，以形成单菌落。因此，每次划线时，都应将接种环上原有的菌体杀死，划线时分散的菌体来自上次划线结束时的菌体。
