1、第40讲微生物的培养与应用考纲明细1.微生物的分离和培养2.某种微生物数量的测定3.培养基对微生物的选择作用4.利用微生物发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用知识自主梳理一微生物的实验室培养1培养基(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。(2)营养成分：水、碳源、氮源、无机盐四类营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。(3)培养基的分类按物理状态分类培养基种类特点用途液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂(如琼脂)观察微生物的运动、分类鉴定固体培养基加凝固剂(如琼脂)微生物分离、鉴定，活菌计数，菌种保藏按化
2、学成分分类培养基种类特点用途天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成)微生物的分类、鉴定按功能分类种类制备方法原理用途举例选择培养基培养基中加入某些化学物质依据某些微生物对某些物质的特殊需求或抗性而设计从众多微生物中分离所需的微生物加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌鉴别培养基培养基中加入某种指示剂或化学药品产生特定的颜色或其他变化鉴别不同种类的微生物用伊红美蓝培养基鉴别大肠杆菌为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？提示在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此
3、可以起到“浓缩”的作用。2无菌技术(1)含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。(2)关键：防止外来杂菌的入侵。(3)不同对象的无菌操作方法(连线)答案、b、a、3大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基操作步骤倒平板的方法及注意事项a请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙乙甲丁。b乙中的灭菌方法是灼烧灭菌。c丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。1倒平板操作为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。2平板冷凝后，为什么要将平板倒置？提示平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基
4、表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(2)纯化大肠杆菌的两种方法1)平板划线法概念：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。注意事项：a灼烧接种环第一次划线每次划线之前划线结束目的杀死接种环上原有的微生物杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，使每次划线菌种数目减少杀死接种环上残存的菌种，避免污染环境和感染操作者b灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。c第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细
5、菌繁殖而来的菌落。d划线时最后一区不要与第一区相连。e划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。2)稀释涂布平板法概念：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。操作过程(3)菌种的保存方法对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。二土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1筛选菌株(1)自然界中目的菌株筛选的依据：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。(2)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。(3)选择培养基
6、：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。2统计菌落数目(1)常用方法：稀释涂布平板法。(2)统计依据当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。(3)活菌计算方法：每克样品中的菌株数(CV)M其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。(4)其他方法：还可利用显微镜直接计数。3设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度，例如为了排除培养基被杂菌污染的可能性，需以未接
7、种细菌的培养基培养作为空白对照。除设置对照组外，设置重复组的作用是什么？应如何设置重复组？提示设置重复组的作用是为排除偶然因素对实验结果的干扰；在每一稀释度下宜设置3个平板作重复组，选择菌落数均在30300且数目相差不大的三个平板，用“平均值”代入计数公式予以计算菌落数。4实验设计项目内容实验原理能合成脲酶的细菌才能分解尿素配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌实验流程土壤取样(富含有机质)配制土壤溶液和制备培养基样品梯度稀释涂布平板与培养菌落观察鉴定方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养分解尿素的细菌原理：细菌分解尿素的反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解
8、成了氨，其会使培养基的碱性增强，pH升高5结果分析与评价内容结论分析是否有杂菌污染空白对照组培养基上无菌落生长未被杂菌污染选择培养基是否具有筛选作用牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显多于选择培养基上的菌落数目选择培养基具有筛选作用样品的稀释操作如果得到了2个或2个以上菌落数在30300的平板操作成功重复组的结果若选取的是同一种土样，统计的结果应该接近三分解纤维素的微生物的分离1纤维素酶(1)纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶三种组分。(2)作用：纤维素纤维二糖葡萄糖。2纤维素分解菌的筛选(1)方法：刚果红染色法。 (3)培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。(
9、4)实验流程土壤取样：富含纤维素的环境选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的浓度梯度稀释：制备系列稀释液涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落(5)分离纤维素分解菌所用的两种培养基比较分离纤维素分解菌的实验中先用选择培养基，再用鉴别培养基。选择培养基为液体培养基，以纤维素作为碳源和能源的微生物可以正常生长，而其他绝大多数微生物不能正常生长。鉴别培养基含琼脂，为固体培养基，细菌可在培养基上形成肉眼可见的菌落。刚果红染色法应用的就是鉴别培养基。考点题型突破考点1微生物的纯化培养技术题型一 无菌技术1(2019上海高三模拟)微生物培养过程中消毒和灭菌环节非常重
10、要，以下灭菌或消毒方法不正确的是()ABCD仪器或试剂固体培养基接种环(针)菌种稀释液滴管消毒或灭菌方法高温高压火焰灼烧紫外光照射酒精消毒答案C解析固体培养基应该用高压蒸汽灭菌，A正确；接种环应该采用灼烧灭菌，B正确；菌种稀释液不需要灭菌或消毒操作，C错误；滴管应该用酒精消毒，D正确。2(2018全国卷)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具_(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_。(3)密闭空间内的空气可采用
11、紫外线照射消毒，其原因是紫外线能_，在照射前，适量喷洒_，可强化消毒效果。(4)水厂供应的自来水通常是经过_(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是_。答案(1)可以(2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少(3)破坏DNA结构消毒液(4)氯气(5)未将锅内冷空气排尽解析(1)能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等可以放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)煮沸消毒法即在100 煮沸56 min可以杀死微生物细胞和一部分芽孢；巴氏消毒法即在7075 煮30 min或
12、在80 煮15 min，可以杀死微生物，并且保证营养物质不被破坏。因此，与煮沸消毒法相比，牛奶消毒常采用的巴氏消毒法或高温瞬时消毒法的优点是在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少。(3)因紫外线能破坏DNA结构，所以密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒。在照射前，适量喷洒消毒液，可强化消毒效果。(4)通常乙醇消毒有气味，影响水质，不适宜消毒自来水；高锰酸钾本身有颜色，消毒后溶液呈紫红色，无法使用；因此水厂供应的自来水通常是经过氯气消毒的。(5)采用高压蒸汽灭菌时，锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排除后才能将锅密闭。如果未将锅内冷空气排尽，则会出现压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温
13、度的现象。 全面比较消毒和灭菌手段结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源紫外线消毒法接种室、接种箱或超净工作台灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属用具高压蒸汽灭菌法培养基及容器题型二 微生物的纯化技术3用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养，相关叙述正确的是()A牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供糖和维生素两种营养物质B牛肉膏蛋白胨培养基需经高压蒸汽灭菌后调节pHC倒平板操作的最后将平板倒置，可以使培
14、养基表面的水分更好地挥发D可以在低温条件下采用斜面保藏法长期保存大肠杆菌菌种答案C解析牛肉膏和蛋白胨可为大肠杆菌生长提供碳源、氮源和维生素等营养物质，A错误；牛肉膏蛋白胨培养基应先调pH再经高压蒸汽灭菌，B错误；倒平板操作中，待平板冷却凝固后将平板倒过来放置，一方面可防止水蒸气倒流污染培养基，另一方面可以使培养基表面的水分更好地挥发，C正确；长期保存大肠杆菌菌种，需要用甘油管藏法在20 的冷冻箱中保存，D错误。4(2019四川高三月考)下列根据相应实验现象分析得出的结论，错误的是()A牛肉膏蛋白胨空白对照培养基上没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染B牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数大于选择培养基，
15、说明选择培养基有选择作用C稀释涂布平板法获得的培养基上菌落数小于30，说明可能是稀释的倍数太大D在接种大肠杆菌的培养基上观察到菌落有大有小，说明培养基已被杂菌污染答案D解析牛肉膏蛋白胨培养基不具有选择性，如果牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数大于选择培养基，说明选择培养基有选择作用，B正确；在接种大肠杆菌的培养基上观察到菌落有大有小，培养基不一定被杂菌污染，可能是大肠杆菌菌落形成的时间不一，不能仅通过菌落的大小判别不同种类的微生物，D错误。5(2017江苏高考)苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问
16、题：(1)酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有_。(2)将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐_，以达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步_，以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加_。(3)如图为连续划线法示意图，在图中_(填图中序号)区域更易获得单菌落。(4)采用比色测定法(使用苯酚显色剂)检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中15号比色管的苯酚浓度应分别为_。管号123456苯酚浓度(mg/L)1如果废水为50 mg/L苯酚溶液，降解后约有2
17、1%的苯酚残留，则需将残留液稀释_(填序号：51020)倍后，再进行比色。答案(1)蛋白胨、苯酚(2)增加稀释涂布凝固剂(3)(4)0、0.2、0.4、0.6、0.8解析(1)分析富集培养基的成分可知，培养基中蛋白胨、苯酚中含C，可作为碳源。(2)在接种培养时，随转接次数的增加，应逐渐增加培养基中苯酚(碳源)的含量，以达到富集酚降解菌的目的。若接种培养后平板中菌落过于密集，应继续稀释涂布，以降低平板上菌落密度，便于菌落计数与分离。稀释涂布时所用的培养基为固体培养基，制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加琼脂等物质作为凝固剂。(3)利用连续划线法接种时，越在最后划线区域，菌落的密度越
18、小，越容易获得单菌落，所以，图中区域更易获得单菌落。(4)根据表中6号比色管中苯酚浓度为1 mg/L可以推知，15号比色管的苯酚浓度应分别为0 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L、0.6 mg/L、0.8 mg/L。根据题意，废水为50 mg/L苯酚溶液，降解后约有21%的苯酚残留，即苯酚残留液浓度为10.5 mg/L，要使稀释后的苯酚残留液浓度介于01 mg/L之间，需将残留液稀释20倍左右，再进行比色。 两种纯化细菌的方法的比较比较项目平板划线法稀释涂布平板法图示关键操作接种环在固体培养基表面连续划线一系列的梯度稀释涂布平板法操作注意事项每次划线前后均需灼烧接种环稀释度要足够高，
19、为确保实验成功可以增加稀释度的范围菌体获取在具有所需显著菌落特征的区域菌落中挑取菌体从适宜的稀释度的平板上的菌落中挑取菌体优点可以根据菌落的特点获得某种微生物的单细胞菌落既可以获得单细胞菌落，又能对微生物计数缺点不能对微生物计数操作复杂，需要涂布多个平板考点,2)微生物的筛选与计数题型一 培养基的成分及配制1(2019上海高三模拟)下表为某培养基配方，下列叙述正确的是()牛肉膏蛋白胨乳糖蔗糖琼脂5 g10 g5 g5 g2 gK2HPO4伊红美蓝蒸馏水pH2 g0.4 g0.065 g10007.2A提供碳源的只有蔗糖B该培养基中需加入生长因子C牛肉膏、蛋白胨均可提供氮源D该培养基可特定培养自
20、生固氮菌答案C解析牛肉膏、蛋白胨均可用于提供碳源和氮源，A错误，C正确；该培养基中含有的牛肉膏、蛋白胨中含有生长因子，因此培养基不需加入生长因子，B错误；该培养基含有含氮有机物，不能特定培养自生固氮菌，D错误。2(2019甘肃武威十八中高三月考)关于培养基的配制说法不正确的是()A在配制培养乳酸杆菌的培养基时，需加入维生素B微生物的适应性强，配制培养基时可以不考虑pHC虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有碳源、氮源、水和无机盐D配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例答案B解析培养基除需要满足碳源、氮源、水和无机盐几种营养物质外，还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求，如培
21、养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，A正确，B错误；虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有碳源、氮源、水和无机盐，C正确；不同微生物的生长对各种营养物质的需求不同，配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例，D正确。3(2019甘肃武威十八中高三月考)鉴别培养基是根据微生物的代谢特点在培养基中加入一些物质配制而成的，这些物质是()A指示剂或化学药品 B青霉素或琼脂C高浓度食盐 D维生素或指示剂答案A解析鉴别培养基的原理是：在培养基中加入某种试剂或化学药品，依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征，从而鉴别不同种类的微生物，A正确。4选择培养基是根据某一种或
22、某一类微生物的特殊营养要求或一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的培养基分别为()A伊红美蓝培养基、含青霉素的培养基B含青霉素的培养基、含氨的无机培养基C含氨的无机培养基、含青霉素的培养基D含青霉素的培养基、伊红美蓝培养基答案B解析酵母菌是真菌，通常可以用含青霉素的培养基进行选择培养，因为青霉素能抑制细菌生长，但不能抑制真菌生长；硝化细菌为自养型生物，能够利用氨转变为亚硝酸所释放的能量，把无机物转变为有机物以维持自身生命活动，利用含氨的无机培养基可进行选择培养。 1.选择培养基的作用原理(1)在培养基中加入
23、某种化学物质，如加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。这里的加入是在满足基本所需培养成分的基础上加入。(2)改变培养基中的营养成分，如缺乏氮源时可以分离出固氮微生物；以石油作为唯一碳源时，可以分离出能消除石油污染的微生物。(3)改变微生物的培养条件，如将培养基放在高温环境中可以得到耐高温的微生物。2培养基的配制原则(1)目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。(2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。(3)pH要适宜：细菌为6.57.5，放线菌为7.58.5，真菌为5.06.0，培养不同微生物所需的pH不同。3培养基中营养
24、物质的确定方法不同种类的微生物代谢特点不同，因此对培养基中营养物质的需求也不同。如：(1)自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。(2)异养型微生物所需的营养物质主要是有机物(即碳源)，必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。题型二 微生物的筛选与计数5欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中不正确的是()A将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释B同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板C可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照D用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌答案D解析为防止土壤
25、浸出液浓度过高，不能获得单菌落，要将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释，A正确；同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板，防止偶然因素对实验结果的影响，B正确；可以将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照，以判断培养基灭菌是否彻底，C正确；可筛选出分解尿素的细菌的培养基是以尿素为唯一氮源的选择培养基，加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解纤维素的细菌，D错误。6下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是()A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上C将实验组和对照组平板倒置，37 恒
26、温培养2448小时D确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数答案D解析检测土壤中细菌总数，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上，将实验组和对照组平板倒置，37 恒温培养2448小时，在确定对照组无菌后，选择菌落数在30300的一组平板为代表进行计数，D错误，A、B、C正确。7(2018全国卷)将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。回答下列问题：(1)M培养基若用于真菌的筛选，则培养基中
27、应加入链霉素以抑制_的生长，加入了链霉素的培养基属于_培养基。(2)M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有_(答出两点即可)。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有_(答出两点即可)。(3)若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是_，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是_。(4)甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149，取平均值133；乙同学涂布了3个平板，
28、统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是_。答案(1)细菌选择(2)碳源、无机盐蛋白质、核酸(3)碘液淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈(4)乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差解析(1)链霉素是一种抗生素，可以抑制细菌的生长，加入了链霉素的培养基能筛选出真菌，该培养基属于选择培养基。(2)微生物生长需要多种营养物质，除氮源外，还需要碳源、无机盐、水以及特殊营养物质等。氮元素是蛋白质和核酸等生物大分子的组成元素，因此氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有蛋白质和核酸
29、。(3)淀粉遇碘液会变成蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈，可根据透明圈来筛选产淀粉酶的微生物。(4)乙同学结果不合理，因为1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差，不能简单的用其平均数计算得到最终结果。 微生物的筛选与鉴别方法(1)微生物的筛选方法单菌落挑取法利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体培养基表面，直接根据微生物菌落的特征利用单菌落挑取的方法获得目的微生物选择培养法利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接获得目的微生物鉴定培养法利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物(2)微生物的鉴别方法菌落特征鉴别法根据微生物在固体培养基表面形成的
30、菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别指示剂鉴别法如培养基中加入酚红指示剂，培养某种微生物后，培养基变红说明该种微生物能够分解尿素染色鉴别法如利用刚果红染色法，根据培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈来鉴别分解纤维素的微生物方向真题体验1.(2019全国卷)回答下列与细菌培养相关的问题。(1)在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是_(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是_。硝化细菌在没有碳源的培养基上_(填“能够”或“不能”)生长，原因是_。(2)用平板培养细菌时一般需要将平板_(填“倒置”或“正
31、置”)。(3)单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是_。(4)有些使用后的培养基在丢弃前需要经过_处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。答案(1)蛋白胨不同细菌生长繁殖所需的最适pH不同能够硝化细菌可以利用空气中的CO2作为碳源(2)倒置(3)在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征(4)灭菌解析(1)蛋白胨中含有碳元素和氮元素，可为细菌生长提供碳源和氮源，葡萄糖只能提供碳源，NaNO3只能提供氮源。不同细菌生长繁殖所需要的最适pH不同，制备培养基时要根据所培养细菌种类的不同来调节pH。硝化细菌是自养生物
32、，可通过化能合成作用利用空气中的CO2合成有机物，所以在没有碳源的培养基上也能生长。(2)用平板培养细菌时，一般将平板倒置，防止水滴倒流到培养基中造成污染。(3)在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征，因此研究人员可根据菌落的这些特征初步区分微生物的种类。(4)消毒仅杀死物体表面或内部的部分微生物，灭菌可杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。使用后的培养基丢弃前要进行灭菌处理，防止其中的微生物感染操作者或污染环境。2(2018全国卷)回答下列与酵母菌有关的问题：(1)分离培养酵母菌通常使用_(填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“麦芽汁琼脂”)培养基，该培养基应采用_灭菌法灭菌。
33、若将酵母菌划线接种在平板上，培养一段时间后会观察到菌落，菌落的含义是_。(2)酵母菌液体培养时，若通入氧气，可促进_(填“菌体快速增殖”“乙醇产生”或“乳酸产生”)；若进行厌氧培养，可促进_(填“菌体快速增殖”“乙醇产生”或“乳酸产生”)。(3)制作面包时，为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌，酵母菌引起面包松软的原因是_。答案(1)麦芽汁琼脂高压蒸汽由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体(2)菌体快速增殖乙醇产生(3)酵母菌分解葡萄糖会产生CO2，CO2使面包松软解析(1)麦芽汁琼脂培养基的碳氮含量比较高，而且含糖量高，更适合酵母菌，该培养基应采用高压蒸汽灭菌法灭菌。若将酵母菌划线
34、接种在平板上，培养一段时间后可观察到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。(2)酵母菌液体培养时，若通入氧气，进行有氧呼吸产生H2O和CO2，释放能量多，细胞增殖快；若进行厌氧培养，进行无氧呼吸，产生酒精和CO2，释放能量少，增殖慢。(3)制作面包时，在面粉中添加一定量的酵母菌，因酵母菌可以分解面粉中的葡萄糖，产生二氧化碳，二氧化碳是气体，遇热膨胀而形成小孔，使得面包松软多孔。3(2017全国卷)某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：(1)有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生_。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳
35、源，原因是_。但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是_(答出两点即可)。(2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择_(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素NH4NO3”)作为氮源，不选择其他两组的原因是_。(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有_(答出两点即可)。答案(1)脲酶分解尿素的细菌是异养生物，不能利用CO2来合成有机物为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料(2)尿素其他两组都含有NH4NO3，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用(3)为细菌生长提供无机营养，作为缓冲剂保持
36、细胞生长过程中pH稳定解析(1)有些细菌能分解尿素是因为这些细菌能产生脲酶，将尿素分解成CO2和NH3。能分解尿素的细菌是异养生物，不能利用CO2作为碳源合成有机物，但这些细菌可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是作为能源物质氧化分解为细胞生命活动提供能量，为其他有机物的合成提供原料。(2)为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择尿素作为唯一氮源，这样只有能分解尿素的细菌才能在培养基上生存。若选择“NH4NO3”或“尿素NH4NO3”作为氮源，能分解尿素的细菌和不能分解尿素的细菌都能利用NH4NO3，不能起到筛选作用。(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，它们可以为细菌生长提供无机营养；同时，KH2PO4和Na2HPO4还可以作为缓冲剂保持细胞生长过程中pH稳定。
