1、考纲要求1.大肠杆菌的培养和分离(加试)。2.分离以尿素为氮源的微生物(加试)。3.果汁中的果胶和果胶酶(加试)。4.淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测(加试)。考点一微生物的利用一、大肠杆菌的培养和分离1大肠杆菌(1)特性：大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧(代谢类型)的肠道杆菌，在肠道中一般对人无害，但若进入人的泌尿系统，就会对人体产生危害。(2)用途：是基因工程技术中被广泛采用的工具。2细菌的培养和分离(1)细菌的繁殖：以分裂方式繁殖，分裂速度很快，约20 min分裂一次。(2)培养的方法：需要将已有细菌的培养物转移到新的培养基中，一般用接种环(工具)转移带菌的培养物。(3)细菌分离的方法与
2、特点分离方法特点划线分离法操作简单涂布分离法操作复杂，单菌落更易分开3.消毒和灭菌的区别项目条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子)煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外线或化学药物消毒法灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌4.大肠杆菌的培养和分离实验(1)实验内容：将大肠杆菌扩大培养和划线分离，即用LB液体培养基扩大培养大肠杆菌，培养后再在LB固体平面培养基上划线进行分离，随后培养基上就会形成一个个单独的菌落。(2)实验步骤培养基灭菌倒平板接种划线分离培养观察50 mL LB液体
3、培养基和50 mL LB固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌将培养基分别倒入4个灭菌后的培养皿中，水平放置，使之形成平面在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养12 h用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线，盖好培养皿培养皿倒置(盖在下面)，放在37 恒温培养箱中培养1224 h后，可看到划线的末端出现不连续的单个菌落(3)大肠杆菌分离的用途：单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。二、分离以尿素为氮源的微生物1菌种特点含有脲酶，可以通过降解尿素作为其生长的氮源。2培养基用以尿素为唯一氮源的培养基培养，以LB全营养培养基
4、为对照。3实验原理(1)筛选以尿素为氮源的微生物，可使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养选择。(2)细菌合成的脲酶能将尿素分解成NH3，致使pH升高，使酚红指示剂变红。4实验步骤制备培养基：将已灭菌的LB固体培养基和尿素固体培养基分别倒入两个培养皿中，摇匀，平放至凝固制备细菌悬液：用1 g土样配制不同浓度的细菌悬液用涂布分离法分离细菌：将不同浓度的土壤稀释液分别加入到有LB培养基和尿素培养基的培养皿中，并用玻璃刮刀涂布到整个平面上培养：将培养皿倒置，在37 恒温箱中培养2448 h观察：培养基中菌落数量5反应的鉴定在配制培养基时，加入指示剂酚红，培养时细菌将尿素分解产生碱性的氨，使培养基上
5、菌落周围出现红色的环带。思考诊断1从有机废水中分离分解有机物的微生物时，接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养()提示异养微生物不需要光照。2消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害()3下图中甲为划线分离法中最重要的环节，乙为操作的结果：(1)每一次划线后都要将接种环灼烧()(2)除第一次划线外，每一次划线的起点都是第一次划线的末端()提示平板划线时除第一次划线外，每一次划线的起点都是上一次划线的末端，而不是第一次。4筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源()5分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低()提示应为升高。1培养基的
6、配制及划线分离操作的注意事项(1)配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的注意事项倒平板的适宜温度是60 左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(2)划线分离操作的注意事项第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环。灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。划线时最后一区域不要与第一区域相连。划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。2几种消毒和灭菌方法及其适用范围类型适用范围操作方法消毒方法煮沸消毒法日常生活100 煮沸56 min巴氏消毒法不耐高温的液体7075煮30 min或80 煮15
7、 min化学药剂生活活体、水源等擦拭如用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源等紫外线房间、仪器设备紫外线照射30 min灭菌方法灼烧接种工具、接种时用的试管口或瓶口等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属用具等物品放入干热灭菌箱，160170 加热12 h高压蒸汽灭菌培养基、培养皿等，生产和实验室常用高压蒸汽灭菌锅内，100 kPa，温度121 ，1530 min3.接种微生物的两种常用方法比较比较划线分离法涂布分离法工具接种环玻璃刮刀原理通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个
8、细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群体，即菌落将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个菌落4.分离以尿素为氮源的微生物的注意事项(1)培养基中的酸碱指示剂产生颜色变化(变红)，标志着存在脲酶分解尿素的作用，从而证明这一菌株能以尿素为氮源。红色环状区域的大小代表脲酶活性的强弱和含量的多少。红色区域越大，表明菌株利用尿素的能力越强。(2)本实验中配制固体培养基时应选用琼脂糖而不能选用琼脂作凝固剂。这是由于琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物。如果用琼脂固化
9、培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养基上产生大量以非尿素为氮源的细菌，不利于以尿素为氮源的细菌的筛选。(3)由于尿素在高温下会分解，所以对尿素溶液的灭菌要采用G6玻璃漏斗过滤的方法。并且应在基本培养基经高压蒸汽灭菌后，冷却至60 时再加入。(4)土样应从有哺乳动物排泄物的地方取得，这是由于动物排泄物中有一定量的尿素，在这些土壤中一般含有较多的分解尿素的细菌。题型一大肠杆菌的培养和分离1下图为“大肠杆菌的培养和分离”实验的基本流程，请回答下列问题(1)A过程配制的是通用细菌培养基，称为_培养基。配制时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持_。对培养基
10、酸碱度的调节，应该在B过程的_(填“前面”或“后面”)。(2)D过程与C过程相比，培养基中增加的物质是_，E过程所需的温度是_。(3)D过程后，一个菌体便会形成一个_，这种分离方法是_的通用方法，也是筛选特定菌株的最简便方法之一。(4)植物组织培养时，先配制MS培养基，再加入一定比例的植物激素，当生长素相对较多时，可促进_。(5)植物组织培养和微生物培养都需要无菌操作，下列不适宜用高压蒸汽灭菌的是()A接种环和镊子B三角瓶和广口瓶C发芽培养基和生根培养基D用于培养的幼茎和幼芽答案(1)LB液体渗透压前面(2)琼脂4 (3)(单)菌落消除污染杂菌(或纯化菌种)(4)生根(5)D解析(1)LB液体
11、培养基是通用的细菌培养基，LB固体平面培养基则用于划线分离形成单菌落。氯化钠的作用是维持培养基的渗透压。调节好酸碱度后才能进行灭菌，若灭菌后再进行酸碱度调节，又会产生新的污染。(2)在液体培养基的基础上加入一定量的琼脂可形成固体培养基。菌种应置于4 C冰箱中保存。(3)通过划线分离后，一个菌体就会繁殖出一个菌落。(4)植物组织培养中生长素相对较多时，有利于生根，而细胞分裂素相对较多时，则有利于生芽。(5)高压蒸汽灭菌常用于培养基、培养器材等的灭菌，而用于培养的幼茎和幼芽则不能进行任何灭菌操作，否则会导致细胞死亡。2检验饮用水的细菌含量是有效监控疾病发生的必要措施。请回答下列与检验饮用水有关的问
12、题：(1)要测定饮用水中大肠杆菌的数量，常采用_法，通常将水样进行一系列的梯度_，然后将上述的水样用玻璃刮刀分别涂布到_的表面进行培养，记录菌落数量。用该方法统计样本菌落数时_(填“是”或“否”)需要对照组。原因是：_。(2)下面所示的四种菌落分布图中，不可能由上述方法得到的是_。(3)大肠杆菌的培养条件是无菌，培养基配制时需加入氯化钠，以维持_。配制培养基时先_后_。A调节pH B. 灭菌C消毒 D调节温度答案(1)涂布分离稀释LB固体培养基是需要判断培养基使用之前是否被杂菌污染(培养基灭菌是否合格)(2)D(3)渗透压AB题型二分离以尿素为氮源的微生物3请回答微生物培养和分离的有关问题：(
13、1)欲从土壤中分离出能利用尿素的细菌：以_为唯一氮源且加入了_指示剂的培养基，用_法分离细菌。若培养基平板上有菌落存活且颜色变_，则说明分离成功。(2)分离以尿素为氮源的细菌和分离大肠杆菌都使用了LB培养基，其成分_。A前者含琼脂，后者不含琼脂和琼脂糖B两者都含有琼脂C前者含有琼脂糖，后者不含琼脂糖但含琼脂D两者都不含琼脂和琼脂糖答案(1)尿素酚红涂布分离(或涂布)红(2)C解析(1)分离能利用尿素的细菌，只需以尿素为唯一氮源，加酚红作指示剂，采用涂布分离法分离细菌，只要培养基中的指示剂变红，标志着存在脲酶水解尿素的反应，证明菌株可以以尿素为氮源。(2)分离以尿素为氮源的细菌所用培养基应含有琼
14、脂糖，而分离大肠杆菌所用培养基则不含琼脂糖而含琼脂。4要获得能够分泌脲酶的细菌的菌种，某生物兴趣小组的同学设计了以下培养和筛选的途径：(1)获得菌种：要获得较多的能够分泌脲酶的细菌，最好取525 cm处的浅层土样，说明这类细菌的细胞呼吸方式为_，在生态系统中属于_(成分)。(2)将土样加入无菌水中配制成悬液，并配制如图所示的培养基，其中尿素在培养基中必须是作为保证微生物生长的唯一_。向培养基中添加尿素的方法是待其他成分灭菌冷却后，加入尿素溶液，而该尿素溶液要事先用_过滤，使之无菌。从物理性质看，该培养基属于_。葡萄糖：0.05 gNaCl：0.24 gK2HPO4：0.24 g琼脂糖：1.0
15、g酚红：0.5 g水：30 mL尿素：20 mL(含2 g脲)(3)利用酚酞指示剂可检测出细菌是否能分泌脲酶，原理是脲酶能使_，结果菌落周围培养基呈红色。(4)为获取能分泌脲酶的单菌落，必须将土壤样液进行稀释，并取少量稀释土壤液用_接种于培养基上，培养皿在培养箱中培养时必须倒置，原因是_。(5)若要分离土壤中的尿素分解菌，对于采集和处理土壤样品，下列叙述错误的是()A最好选择在肥沃湿润、动物排泄物多的土壤中取样B采集的土样需经高温灭菌后，才可以用于制取土壤稀释液C制备土壤稀释液时，要用无菌水D用于制备土壤稀释液的各种器具要经过灭菌答案(1)需氧呼吸分解者(2)氮源G6玻璃漏斗固体培养基(3)培
16、养基中的尿素分解为NH3，使周围的pH升高(4)涂布分离法防止冷凝后的水珠从皿盖上落入培养基，造成污染(5)B考点二酶的应用一、果汁中的果胶和果胶酶1果胶(1)果胶是植物细胞壁的主要成分，它由半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯组成。(2)果胶与果汁加工：果胶不仅影响出汁率，还会使果汁浑浊。2果胶酶(1)来源：黑曲霉、苹果青霉等。(2)组成：果胶酶并不是特指某一种酶，而是分解果胶的一类酶的总称，主要包括果胶酶和果胶甲酯酶。(3)作用：将果胶分解成可溶性的分子，使出汁率提高，也使浑浊的果汁变得澄清。3探究利用苹果或山楂匀浆制作果汁的最佳条件的实验(1)实验原理果胶半乳糖醛酸半乳糖醛酸甲酯。果胶酶的活性受温
17、度(或pH)的影响，处于最适温度(或pH)时活性最高。果肉的出汁率、果汁的澄清度与果胶酶的活性大小成正比。果胶不溶于乙醇。(2)实验流程设计二、淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测1淀粉酶的固定化(1)固定化酶概念：将水溶性的酶用物理或化学的方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂。方法：吸附法、共价偶联法、交联法和包埋法等。(2)淀粉酶的固定化淀粉酶作用的最适条件：最适pH为5.57.5；最适温度为5075_。方法：吸附法。淀粉的水解作用淀粉糊精麦芽糖葡萄糖遇碘显蓝色遇碘显红色遇碘不显色2淀粉水解的测定实验固定淀粉酶滴管滴加淀粉溶液加KII2溶液观察洗涤几天后重复实验。3淀粉酶
18、固定化实验过程固定化淀粉酶，装入注射器中以0.3 mL/min的流速滴加淀粉溶液过柱流出5 mL淀粉溶液后接收0.5 mL流出液滴加KII2溶液，观察颜色，用水稀释1倍后再观察颜色以10倍柱体积的蒸馏水洗涤固定化柱，放置在4 冰箱中，几天后重复实验思考诊断1将果胶酶用于果胶生产，既能提高果肉的出汁率又能提高果汁的澄清度()2酶的活性受温度、pH和酶用量等因素的影响()提示酶用量不影响酶的活性。3果胶起着将植物细胞粘合在一起的作用，它溶于乙醇()提示果胶不溶于乙醇。4用固定化淀粉酶进行淀粉水解实验时不需考虑温度()提示温度影响酶的活性。5固定化淀粉酶可永久使用()提示固定化酶能够连续使用，但不是
19、永久使用。6淀粉酶固定化实验结束后，将固定化柱放在常温下即可()提示固定化柱低温保存。1探究影响果胶酶活性因素实验的相关分析(1)实验原则：遵循单一变量原则、对照原则，严格控制变量，尽量减少无关变量的影响。(2)实验原理：果胶酶活性受温度、pH或酶抑制剂的影响，在最适温度或pH时，其活性最高，果肉的出汁率、果汁的澄清度都与果胶酶的活性大小呈正相关。(3)三个实验的变量分析实验名称(目的)自变量因变量注意事项探究温度对果胶酶活性的影响温度果汁量(澄清度)底物和酶在混合时的温度是相同的；温度梯度越小，实验结构越精确；苹果泥和果胶酶的用量在各个试管中应相同pH应为最适pH探究pH对果胶酶活性的影响p
20、H果汁量(澄清度)温度应为最适温度；pH梯度可用NaOH和盐酸调节；用玻璃棒搅拌使反应充分进行探究果胶酶的用量果胶酶的用量果汁量(澄清度)制备苹果匀浆后迅速加热，使苹果浆中果胶酶变性；温度、pH应为最适温度和最适pH且保持不变2.酶的固定化方法及适用对象名称原理图示包埋法将微生物细胞均匀地包埋在不溶于水的多孔性载体中共价偶联法利用共价键、离子键将酶分子或细胞相互结合，或将其结合到载体上吸附法通过物理吸附作用，把酶固定在纤维素、琼脂糖、多孔玻璃或离子交换树脂等载体上题型一果汁中的果胶和果胶酶1下列有关果胶酶及果胶酶实验探究的叙述，正确的是()A探究果胶酶的用量时，pH、温度不影响实验结果B果胶酶
21、包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和葡萄糖异构酶等C探究温度对果胶酶活性的影响时，温度、苹果泥、果胶酶的用量及反应时间等都是自变量D可以用相同时间内过滤得到的果汁体积来确定果胶酶的用量答案D解析探究果胶酶的用量时，pH、温度会影响实验结果；葡萄糖异构酶不属于果胶酶的成分；探究温度对果胶酶活性的影响实验中，温度为单一变量，其他因素保持不变。2某同学为探究温度对果胶酶活性的影响，在不同温度条件下，将等量的果胶酶加入到等量的苹果泥中，在反应同样时间后，再将反应液过滤同样时间，用量筒测定滤出苹果汁的体积。下列曲线图能正确反映实验结果的是()答案B解析果胶酶在0 时活性较低，但也能催化苹果泥形成果汁，果汁
22、量不为0；随着温度升高，果胶酶的活性先升高后下降，果汁量也是先升高后降低。正确的应是B曲线。题型二淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测直接使用酶和固定化酶的比较比较项目直接使用酶固定化酶制作方法吸附法、共价偶联法、交联法、包埋法等是否需要营养物质否否酶的种类一种或多种一种催化反应单一或多种单一反应底物各种物质(大分子、小分子)各种物质(大分子、小分子)缺点对环境条件非常敏感，易失活；难回收，成本高，影响产品质量不利于催化一系列反应优点催化效率高、耗能低、低污染既能与反应底物接触，又能与产物分离；可以重复使用3.下列关于固定化酶的说法，错误的是()A固定化酶的不足之处是不能催化一系列反应B固定化酶
23、可再次利用，降低了生产成本C固定后的酶既能与反应物接触，又能与反应物分离D固定化酶易溶于水答案D解析由于酶具有专一性，因此固定化酶不能催化一系列反应，A项正确；固定化酶可反复利用，降低了生产成本，B项正确；固定后的酶既能与反应物接触，又能与反应物分离，C项正确；固定化酶不易溶于水，易与反应物分离，D项错误。4(2015舟山中学测试)某校学生尝试用琼脂作载体，用包埋法固定淀粉酶来探究固定化酶的催化效果。实验结果见下表(假设加入试管中的固定化淀粉酶量与普通淀粉酶量相同)。实验表明1号试管中淀粉未被水解，最可能的原因是()1号试管2号试管固定化淀粉酶普通淀粉酶淀粉溶液60 保温5 min，取出冷却至
24、室温，滴加碘碘化钾溶液现象变蓝不变蓝A.实验中的温度过高，导致固定化淀粉酶失去活性B淀粉是大分子物质，难以通过琼脂与淀粉酶接触C水浴保温时间过短，固定化淀粉酶未将淀粉水解D实验程序出现错误，试管中应先加入碘碘化钾溶液后保温答案B解析由于固定化酶是用包埋法固定的，而淀粉是大分子物质，它不能通过琼脂与酶充分接触，导致淀粉不能被水解而遇碘碘化钾溶液呈现蓝色。探高考练模拟1(2016温州中学期末测试)下图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1、2、3、4、5。下列操作方法正确的是()A操作前要将接种环放在火焰旁灭菌B划线操作须在火焰上进行C在5区域中才有可能得到所需菌落D在1、2、3、4、5区域中划线
25、前后都要对接种环进行灭菌答案D解析操作前要将接种环放在火焰上灼烧灭菌，A项错误；划线操作须在火焰旁进行，B项错误；在5区域中最有可能得到所需菌落，C项错误；在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环进行灭菌，D项正确。2(2016鲁迅中学期末测试)下列关于“探究果胶酶最适用量的实验”的叙述，错误的是()A配制不同浓度的果胶酶溶液，并在各组中加入等量的该溶液B实验温度为无关变量，要在相同的适宜温度条件下进行实验C用玻璃棒搅拌加酶的果泥，搅拌时间可以不相同D调节pH，使各组中的pH相同而且处于适宜状态答案C解析在探究果胶酶最适用量的实验中，果胶酶量为自变量，通过配制不同浓度的果胶酶溶液来控制；
26、实验温度、搅拌时间、pH为无关变量，需要控制等量、适宜，A、B、D项正确，C项错误。3(2016温州中学测试)探究温度对果胶酶活性影响的实验中，得到如下实验结果。据此分析其中不正确的是()温度()3035404550556065707580果汁量(mL)3.54.68.610.912.311.710.15.43.94.85.6A.实验过程中应先将苹果泥和果胶酶分别调节到对应温度后再混合B为了实验结果的科学性，各组混合处理时间和过滤果汁时间均应相同C应在5055 设置更细温度梯度进行实验，探究果胶酶的最适温度D该实验结果表明高温能使果胶酶失活，但高温也可能促进果胶分解答案C解析实验过程中应先将苹
27、果泥和果胶酶分别调节到对应温度后再混合，A项正确；为了实验结果的科学性和控制单一变量，各组混合处理时间和过滤果汁时间均应相同，B项正确；实验中的温度梯度跨度较大，要想确定最适温度，需要设置更细温度梯度进行实验，分析数据可知，应该在4555 设置更细温度梯度进行实验，探究果胶酶的最适温度，C项错误；高温可以使酶失活，由表格数据可以看出，高温也可能促进果胶分解，D项正确。4在细菌培养过程中，下列有关操作正确的是()A涂布器用火焰灼烧进行灭菌B培养基分别装到培养皿后进行灭菌C倒平板和取菌液都必须要在酒精灯火焰旁进行D分离得到的菌落应先接种在平板上，培养24 h后，置于4 冰箱保存答案C解析涂布器应该
28、用高压蒸汽灭菌，A项错误；培养基应该先灭菌后分装，B项错误；倒平板和取菌液都必须要在酒精灯火焰旁进行，以防止杂菌污染，C项正确；分离得到的菌落应先接种于斜面上，置于37 的恒温箱培养24 h后，再置于4 冰箱保存，D项错误。5(2014浙江自选，17节选)(1)现有一份污水样品，某兴趣小组欲检测其中的细菌数，进行以下实验。将一定量的污水样品进行浓度梯度稀释。取适量不同稀释度的稀释液，用_法分别接种于固体平面培养基上，经培养后进行计数。该实验应注意，接种前，从盛有_的容器中将玻璃刮刀取出，放在酒精灯火焰上灼烧，冷却后待用；分组时，需用_作为对照。(2)在上述细菌培养实验中进行计数时，应计数的是接
29、种了()A各个稀释度样品的培养基上的细菌数B合理稀释度样品的培养基上的细菌数C各个稀释度样品的培养基上的菌落数D合理稀释度样品的培养基上的菌落数答案(1)涂布分离70%酒精未接种的培养基(2)D解析(1)细菌的分离与计数常用涂布分离法，即用玻璃刮刀将一定体积的稀释液涂布到固体平面培养基上。玻璃刮刀在使用前需进行灭菌处理，即将其浸入体积分数为70%的酒精中，随后取出放在酒精灯火焰上灼烧，冷却后待用。为排除其他因素的影响，提高实验的可信度，实验中要设置空白对照。(2)将菌液涂布到固体平面培养基上后，倒置放在恒温箱中培养，培养一段时间后，统计菌落数。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，
30、来源于样品稀释液中的一个活菌，这样通过统计菌落数就可估算出待测样品的细菌数目，所以要选择合理稀释度样品的培养基上的菌落数。专题强化练一、选择题1下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是()A步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行B步骤中，待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖C步骤中，每次划线前后都需对接种环进行灼烧处理D划线接种结束后，将图平板倒置后放入培养箱中培养答案B解析由图可知，步骤是倒平板，步骤是用接种环蘸取菌液，步骤是进行平板划线，步骤是培养。步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行，防止被杂菌污染，A项正确；倒完平板后应立即盖上培养皿盖，冷却后将平板倒过来放置，B项错
31、误；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落，C项正确；划线接种结束后，将平板倒置放入培养箱中培养，有利于培养基表面的水分更好地挥发和防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，D项正确。2(2016舟山中学期末测试)下列有关微生物培养的叙述中，不正确的是()A获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染B单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法C培养基都必须使用高压蒸汽灭菌法灭菌D倒置平板防止培养皿盖上的冷凝水滴落答案C解析微生物培养中获得纯净培养物的关键是防止杂菌
32、污染，A项正确；通常可以采用涂布分离法或划线分离法进行单菌落的分离，以消除污染的杂菌，B项正确；培养基通常可以进行高压蒸汽灭菌，但对于培养基中有高温易分解的成分，就不能用此方法，如培养基中的尿素等物质，C项错误；倒平板后需要将培养皿倒置，以防止培养基蒸发冷凝成的水滴入培养基而造成污染，D项正确。3(2015普陀中学期末测试)在分解尿素的细菌的分离和鉴定中，对先后用到的两种培养基的叙述正确的是()A加入酚红指示剂作为选择培养基，再加入唯一碳源作为鉴别培养基B加入唯一氮源作为鉴别培养基，再加入酚红指示剂作为选择培养基C加入唯一氮源作为选择培养基，再加入酚红指示剂作为鉴别培养基D加入酚红指示剂作为选
33、择培养基，再加入唯一碳源作为鉴别培养基答案C解析能合成脲酶的细菌才能分解尿素。配制以尿素为唯一氮源的培养基，能够生长的细菌就是能分解尿素的细菌；细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。4(2015绍兴中学期末测试)下列关于果胶酶作用的叙述，错误的是()A分解水果细胞壁中的果胶，从而瓦解细胞壁B可将果胶分解成半乳糖醛酸，使果汁变清C分解水果细胞壁中的纤维素和果胶D可使果汁榨取变得容易，提高出汁率答案C解析果胶酶可将果胶分解为半乳糖醛酸，从而使果汁榨取的时候比较容易，并使果汁变清。要分解纤维
34、素，需要纤维素酶。5在用果胶酶处理苹果泥时，为了使果胶酶能够充分地催化反应，应采取的措施是()A加大苹果泥用量B加大果胶酶用量C进一步提高温度D用玻璃棒不时地搅拌反应混合物答案D解析在用果胶酶处理苹果泥时，若让果胶酶充分发生反应，则需扩大果胶酶和苹果泥的接触面积，尽量使果胶酶和苹果泥充分接触，因此可用玻璃棒不时地搅拌反应混合物。对苹果泥用量、酶量及反应所需的温度和pH的调整，在一定范围内只能增大反应速度，而不能使果胶酶充分地催化反应。6(2015宁波鄞州中学期末测试)下图为某同学探究温度对果胶酶活性的影响的实验操作流程图，下列叙述错误的是()底物酶液在所控制温度下处理一段时间底物与酶混合在所需
35、温度下保温一段时间检测A底物为苹果泥，酶液为果胶酶溶液B底物与酶混合前的同温处理可以取消C实验的自变量为底物与酶混合后的温度D检测的是果汁的体积或果汁的澄清度答案B解析探究温度对酶活性的影响的实验步骤：取10支试管，5支放入等量的苹果泥，另5支中放入等量果胶酶；将盛苹果泥和果胶酶的试管分别放在5个温度梯度下进行保温；一段时间后，再将酶加入对应温度下的苹果泥中；观察试管中浑浊程度的变化情况或果汁的澄清度。二、非选择题7现从土壤中分离以尿素为氮源的细菌，实验过程如下图所示：请回答：(1)欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，将土壤用_进行一系列的梯度稀释，同一浓度的土壤稀释液应至少涂布_个平板，通常以
36、每个培养皿中有_个以内的单菌落的那一组稀释倍数为最合适。(2)接种后的培养皿_于37 的恒温箱中培养。若培养基中存在含脲酶的细菌，其菌落周围会出现_，这是由于尿素被分解产生氨气，遇培养基中的_产生的颜色变化，从而证明这一菌株能以尿素为氮源。(3)分离能利用尿素的细菌时所用的培养基成分上最主要的特点是_。(4)下列操作需要在酒精灯火焰旁进行的是_(多选)。A称取葡萄糖、琼脂糖等培养基成分B倒平板C涂布平板D微生物的培养(5)与LB全营养培养基上的菌落数相比，尿素培养基上只有少数菌落的原因是_。答案(1)无菌水320(2)倒置红色环带酚红指示剂(3)以尿素作为唯一氮源的(固体)培养基(4)BC(5
37、)土壤中能利用尿素的细菌在土壤菌群中只占极少数8有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境，研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离能降解苯磺隆菌株的实验过程如下图所示。请回答问题：(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、_、 _四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是_。(2)纯化菌株时，通常使用的划线工具是_。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是_。 (3)若要检测土样中的细菌含量，应采用_法。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做的目的是_。答案(1)氮源无机盐只有能利用苯磺隆的微生物能正
38、常生长和繁殖(2)接种环将聚集的菌体逐步减少以便获得单个菌落(3)涂布分离检测培养基平板灭菌是否合格解析(1)微生物生长所需要的主要营养物质包括：碳源、氮源、水和无机盐。使用选择培养基是因为选择培养基上只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长和繁殖，同时又能抑制或阻止其他微生物的生长。(2)划线分离法接种时常使用接种环划线。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是将聚集的菌体逐步减少以便获得单个菌落。(3)涂布分离法常常用来进行微生物的分离和计数。为检验培养基平板灭菌是否合格，常常需要在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养一段时间，观察有无菌落形成，若没有菌落形成
39、则表明培养基灭菌合格，否则不合格。9(2016金丽衢十校联考)下表是3组生物实验培养基。请回答下列问题：组别培养基a无机盐、蔗糖、维生素和甘氨酸等有机物、水、琼脂b葡萄糖、NaCl、K2HPO4、尿素、酚红、水、琼脂糖c蛋白胨、酵母提取物、NaCl、水、琼脂(1)分离以尿素为氮源的细菌应选用培养基_。在含有脲酶的细菌菌落周围会出现_，这是由于尿素被分解产生的_使pH升高，酚红指示剂产生颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力_。(2)用培养基a进行植物组织培养，则培养基中还需加入_。一般先用_(填“发芽”或“生根”)培养基进行培养，使之长出较多的丛状苗，
40、然后将丛状苗分株培养。(3)生产上利用黑曲霉或苹果青霉来提取果胶酶，在用果胶酶水解果胶的实验中，下列说法正确的是_。A实验后滴加酒精的目的是增加果胶酶的活性B沸水浴加热后果胶酶的活性随着温度的下降逐渐恢复C间歇搅拌2030 min的目的是让果胶酶与果胶充分接触D选用黑曲霉提取液是因为果胶酶只能在生物细胞内起催化作用答案(1)b红色环带氨越强(2)植物激素(植物生长调节剂)发芽(3)C解析(1)分离以尿素为氮源的细菌应选用以尿素为唯一氮源并添加酚红指示剂的培养基。分解尿素的微生物可产生脲酶，脲酶可催化尿素分解产生氨，使酚红指示剂变红，从而在菌落周围形成红色环带，形成的红色环带越大，表明该菌株利用
41、尿素的能力越强。(2)植物组织培养所需的MS培养基需加入植物激素。培养过程中一般先用发芽培养基进行培养，使之长出较多的丛状苗，然后将丛状苗分株培养，诱导生根。(3)在用果胶酶水解果胶的实验中，实验操作后滴加酒精的目的是检验实验过程中果胶是否被水解；沸水浴加热后果胶酶会失去活性；只要条件适宜，果胶酶在细胞内外均可发挥催化作用。10(2016温州中学检测)在果汁生产中需用到果胶酶，某课题研究小组为了探究果胶酶的某些特性，进行了如下实验：(1)实验方法：请将图1中所示的操作进行排序：_。(2)实验结果：对照组与实验组进行了相同时间的实验，结果如图2中曲线甲所示：图2中自变量是温度，除此之外还可用 _
42、表示。A酶的浓度 B苹果泥的量C水的加入量 DpH图2中的纵坐标还可用_来表示。实验步骤中，在果胶酶和苹果泥混合前，将二者分装在不同试管中并进行恒温的目的是_。实验小组改变了实验条件后重复做实验，得到曲线乙，苹果汁的澄清度最高点对应的横坐标是同一位置的原因是_。引起曲线乙下移的原因是_(至少答出两条)。答案(1)a、c、d、b(2)D苹果汁的体积保证底物和酶在混合时的温度是相同的同一种酶的最适温度是一定的，不会因酶的浓度、底物量的不同而改变pH、酶的浓度和苹果泥的量等因素不同解析(1)实验顺序：准备水果泥和配制果胶酶水果泥和果胶酶分别水浴保温水果泥和果胶酶混合保温过滤果汁后用量筒计量。(2)果
43、胶酶的活性受温度、pH等条件的影响，而与底物的量、酶的浓度和水的加入量没有关系；每一种酶都有一个最适温度和最适pH，且该值恒定。衡量实验结果的指标有两个：一个是苹果汁的体积，另一个是苹果汁的澄清度。为了保证实验在相应温度下进行，必须使酶和底物分别保温达到要求后再混合。在相同温度条件下，pH、酶的浓度和底物浓度也会改变反应速率。11请回答下列问题：(1)在工业生产中，为提高酶的使用率和产品纯度，一般需要将酶进行固定化处理。利用石英砂固定淀粉酶的方法属于_。A吸附法 B偶联法C交联法 D包埋法(2)一定浓度的淀粉溶液流过淀粉酶固定化柱后，被水解成_，遇碘显_色。(3)淀粉酶可以通过枯草杆菌发酵生产
44、，以下是利用诱变育种方法培育获得产生较多淀粉酶的菌株的主要实验步骤。(原理：菌株生长过程中可释放淀粉酶分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈。)第一步：将枯草杆菌接种到_培养基上进行扩大培养。第二步：将枯草杆菌分成两组，A组用_处理，B组不处理(作对照)。第三步：制备多个含淀粉的固体培养基。第四步：将A、B组分别稀释后，分别在含淀粉的固体培养基上利用_法分离，适宜条件下培养得到单菌落。第五步：观察A、B组各菌落周围的_。实验结果预期：根据诱发突变率低的特点，预期_。根据诱发突变不定向性的特点，预期_。答案(1)A(2)糊精红(3)液体诱变剂涂布透明圈大小A组中多数菌落周围的透明圈与B组差异不
45、显著A组有少数菌落周围的透明圈比B组明显小，有少数比B组明显大(或A组透明圈大小不一，B组较一致)解析石英砂固定淀粉酶的方法为吸附法；淀粉流经淀粉酶固定化柱后，被水解为糊精，遇碘呈红色；获得诱变菌株需进行诱变剂处理，通过实验组与对照组培养基中菌落周围透明圈的大小可确认淀粉分解的程度。12(2016宁波1月期末测试)石油烃是环境的重要污染源。为了筛选出具有强分解石油烃能力的微生物，进行了一系列操作，请回答下列问题：(1)分解石油烃的微生物一般要从土壤中分离，获取土壤样品的取样地点最好选在_。(2)微生物实验室采用_法对培养基进行灭菌处理。A干热灭菌 B过滤灭菌C灼烧灭菌 D高压蒸汽灭菌(3)下图
46、为获取土壤样品后的培养研究过程：为了能有效地分离出分解石油烃的微生物，过程所用培养基的成分的特点是_，从而有利于分解石油烃的微生物的生长。(4)对进行接种常采用的两种方法分别是_和_。(5)若发现在中无法区分菌落，可以将图中取出的菌液_。(6)若实验室为分离纯化优良菌种进行了如下操作，排序最合理的是_。A BC D(7)整个微生物的分离和培养的操作，一定要注意在_条件下进行。答案(1)石油污染明显处(2)D(3)以石油烃为唯一碳源(4)划线分离法涂布分离法(5)进行(梯度)稀释(6)B(7)无菌解析(1)分解石油烃的微生物在石油污染明显处分布较多。(2)微生物实验室常用高压蒸汽灭菌法对培养基灭菌。(3)实验过程中，过程所用培养基应用石油烃作为唯一碳源，以抑制其他种类微生物的生长，从而分离出以石油烃为碳源的微生物。(4)对微生物的分离实验中，常用划线分离法或涂布分离法进行接种。(5)若发现在中无法区分菌落，可能是菌液中细菌浓度太高，可进行梯度稀释处理后再进行接种。(6)图示为用划线分离法进行接种分离。接种过程中应先在酒精灯火焰上灼烧接种环后，蘸取菌液进行接种，整个操作在酒精灯火焰旁进行，接种结束后还须在酒精灯上灼烧接种环。(7)为避免污染，整个微生物的分离和培养的操作，一定要注意在无菌条件下进行。
