1、4 考点 2 2 3 随堂巩固达标检测 目录CONTENTS1 考点 1 第2讲 微生物的培养与应用 课时作业知能提升 考纲要求全国卷六年考题统计1.微生物的分离和培养2.培养基对微生物的选择作用3.某种微生物数量的测定2016卷T39,2016卷T39,2015卷T39(2)(3)，2014卷T39,2014卷T39,2013卷T39,2011T39微生物的实验室培养基础突破抓基础，自主学习1培养基(1)概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出供其生长繁殖的。(2)成分：一般都含有还要满足不同微生物生长对、特殊营养物质以及的要求(3)分类：按照物理性质可以分为和固体培养基。营养物质营养基质水
2、、碳源、氮源、无机盐pH氧气液体培养基2无菌技术(1)含义：培养微生物的操作中，所有的方法。(2)关键：防止外来杂菌的污染。(3)无菌技术的方法消毒、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、防止杂菌污染煮沸消毒法紫外线消毒法灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌高压蒸气灭菌3大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基过程：计算 溶化灭菌倒平板。(2)纯化大肠杆菌的原理：在培养基上将细菌稀释或分散成，形成单个菌落，此菌落是由一个细胞繁殖而来的子细胞群体。(3)微生物的常用接种方法：和稀释涂布平板法，接种过程仍然是操作。称量单个细胞平板划线法无菌4菌种的保存方法：(1)对于频繁使用的菌种，可以采用的方法。(2)对于
3、需要长期保存的菌种，可以采用的方法。临时保藏甘油管藏重难突破攻重难，名师点拨1消毒和灭菌的比较项目条件结果常用方法应用范围煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物 化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源 项目条件结果常用方法应用范围灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属工具灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子高压蒸汽灭菌法培养基及容器的灭菌2.纯化培养方法方法平板划线法稀释涂布平板法原理通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，
4、可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，即菌落将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落方法平板划线法稀释涂布平板法优点可以观察菌落特征，对混合菌进行分离可以计数，可以观察菌落特征缺点不能计数较麻烦，平板不干燥效果不好适用范围适用于好氧菌适用于厌氧菌和兼性厌氧菌特别提醒(1)分离微生物所用的选择培养基一定是固体培养基，因为菌落只能在固体培养基上形成。(2)平板划线法只适用于微生物的提纯，不适用于微生物的计数，并且在最后一次划线末端处的菌种最
5、纯，进行平板划线应注意如下操作：每次划线之前都需要灼烧接种环灭菌。灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。划线时最后一区域不要与第一区域相连。(3)倒平板的温度一般在 50 左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。(4)平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又防止皿盖上的水珠落入培养基，造成培养基污染。答案解析题型突破练题型，夯基提能1下列依次表示倒平板、接种的位置，以及划线法接种的路径示意图，其中错误的是()答案解析倒平板时，用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，防止空气中的杂菌污染，
6、A 正确；左手将培养皿打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，B 正确；不同区域内划线，而且每次转换划线角度后再进行划线，让菌种来源于上一次划线末端，C 正确；下次划线没有从上次划线末端开始，D 错误。1下列依次表示倒平板、接种的位置，以及划线法接种的路径示意图，其中错误的是()解析答案D倒平板时，用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，防止空气中的杂菌污染，A 正确；左手将培养皿打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，B 正确；不同区域内划线，而且每次转换划线角度后再进行划线，让菌种来源于上一次划
7、线末端，C 正确；下次划线没有从上次划线末端开始，D 错误。1下列依次表示倒平板、接种的位置，以及划线法接种的路径示意图，其中错误的是()答案解析2有关平板划线操作不正确的是()A将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红B接种环在平板上划线位置是随机的C在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰D最后将平板倒置，放入恒温箱中培养答案解析将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他的金属用具，直接在酒精灯火焰的燃烧层充分灼烧，可以迅速彻底地灭菌，A 正确；在平板划线时，要划 35 条平行线，而不是随机的，B 错误；在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰，C 正确；将平板倒置放在恒温箱培养，D
8、 正确。2有关平板划线操作不正确的是()A将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红B接种环在平板上划线位置是随机的C在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰D最后将平板倒置，放入恒温箱中培养解析答案B将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他的金属用具，直接在酒精灯火焰的燃烧层充分灼烧，可以迅速彻底地灭菌，A 正确；在平板划线时，要划 35 条平行线，而不是随机的，B 错误；在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰，C 正确；将平板倒置放在恒温箱培养，D 正确。2有关平板划线操作不正确的是()A将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红B接种环在平板上划线位置是随机的C在挑取菌种前和接种完毕
9、后均要将试管口通过火焰D最后将平板倒置，放入恒温箱中培养答案解析3(2017北京海淀模拟)用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时()都需要用固体培养基 都需要使用接种针进行接种 都需要在火焰旁进行接种 都可以用菌落数来计数活菌A BCD答案解析固体培养基上可以获得大肠杆菌的单菌落，正确；分离纯化大肠杆菌可使用接种环或涂布器进行划线法或涂布平板法接种，错误；在火焰旁会形成一个相对无菌区，在此处进行接种，可以避免杂菌感染，正确；平板划线法只能用来分离纯化获得单菌落，不能用来计数，错误。故答案选 B。3(2017北京海淀模拟)用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时()都需要用固体培养基 都需
10、要使用接种针进行接种 都需要在火焰旁进行接种 都可以用菌落数来计数活菌A BCD解析答案B固体培养基上可以获得大肠杆菌的单菌落，正确；分离纯化大肠杆菌可使用接种环或涂布器进行划线法或涂布平板法接种，错误；在火焰旁会形成一个相对无菌区，在此处进行接种，可以避免杂菌感染，正确；平板划线法只能用来分离纯化获得单菌落，不能用来计数，错误。故答案选 B。3(2017北京海淀模拟)用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时()都需要用固体培养基 都需要使用接种针进行接种 都需要在火焰旁进行接种 都可以用菌落数来计数活菌A BCD4(2017湖南岳阳质检)无菌操作是微生物接种技术的关键。传统发酵技术和微生物
11、分离、纯化、应用过程及植物组织培养和动物细胞培养过程中，均要无菌操作。回答下列相关问题：(1)消毒和灭菌是两个不同的概念，灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力。消毒仅指杀死一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害。下列哪些事物适用于消毒处理_。皮肤 饮用水 牛奶 注射器 培养皿 接种环 培养基 果汁 酱油 手术刀A BCD以上全部(2)如图是利用_法进行大肠杆菌接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。为达到这一目的，操作上应注意：每次划线前要_；冷却后从上一区划线_开始划；首尾区_。(3)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对固体培养基应采用的检测方法是
12、_，观察培养基上是否有菌落产生。(4)有位同学在家制作泡菜时，为避免杂菌污染而向泡菜坛中加入了青霉素，结果发酵失败，原因可能是_。解析：(1)应采用消毒，应采用灭菌，故选 A。(2)微生物实验室培养的关键在于防止杂菌污染，题图是采用平板划线法接种，需要注意的是连续划线时，每次划线前要灼烧接种环，同时划线结束首尾不能相连。(3)检测培养基是否被污染，对固体培养基应采用的检测方法是将未接种(或接种等量无菌水)的培养基在适宜的温度下放置适当时间，观察培养基上是否有菌落产生。(4)制作泡菜时，为避免杂菌污染而向泡菜坛中加入了青霉素结果发酵失败，原因可能是青霉素杀死了乳酸菌。答案：(1)A(2)平板划线
13、 灼烧接种环 末端 不连接(不重叠)(3)将未接种(或接种等量无菌水)的培养基在适宜的温度下放置适当时间(4)青霉素杀死了乳酸菌 微生物的分离与计数基础突破抓基础，自主学习1土壤中分解尿素的细菌的分离与计数菌种筛选 使用以为唯一氮源的选择培养基分离方法实验流程土壤取样 培养与观察细菌的计数菌种鉴定以尿素为唯一氮源的培养基中加入指示剂尿素稀释涂布平板法样品稀释酚红2.分解纤维素的微生物的分离重难突破攻重难，名师点拨1筛选微生物的两个实例比较比较项目土壤中分解尿素的细菌的分离分解纤维素的微生物的分离方法利用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行选择培养利用纤维素为唯一碳源的选择培养基进行选择培养比较项目
14、土壤中分解尿素的细菌的分离分解纤维素的微生物的分离原理只有分解尿素的细菌能够合成脲酶，才能在以尿素为唯一氮源的培养基上生长因为培养基中含有丰富的纤维素，因此能够分解纤维素的微生物具有更多的生存机会而大量繁殖鉴定在培养基中加入酚红指示剂，指示剂变红说明尿素被分解，从而说明菌落中的菌体为分解尿素的细菌刚果红染色法，菌落周围出现红色消失的透明圈，该菌落为分解纤维素的微生物的菌落特别提醒 筛选微生物的三种方法(1)单菌落挑取法：利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体平板培养基表面，直接根据微生物菌落的特征利用单菌落挑取的方法获得目的微生物。(2)选择培养法：利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接获
15、得目的微生物。(3)鉴定培养法：利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物。2微生物计数的两种方法比较项目间接计数法(稀释涂布平板法)直接计数法(显微计数法)原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量比较项目间接计数法(稀释涂布平板法)直接计数法(显微计数法)公式每克样品中的菌落数：(CV)MC：某稀释度下平板上生长的平均菌落数；V：涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M：稀释倍数每毫升原液所含细菌
16、数：每小格平均细菌数40010 000稀释倍数缺点当两个或多个菌体连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落不能区分细胞死活结果比实际值偏小比实际值偏大3.设置对照和重复比较项目对照重复目的排除非测试因素对实验结果的影响排除偶然因素对实验结果的影响实例空白对照：确定培养基制作是否合格同一稀释度涂布至少 3 个平板特别提醒“选择菌落数在 30300 的平板”的两个提醒(1)只得到 1 个菌落数在 30300 的平板是错误的，原因是不符合实验的重复原则，易受到偶然因素的影响。(2)得到 3 个或 3 个以上菌落数在 30300 的平板，也不一定正确，原因是如果不同平板间差异较大，如得到 3 个平板，菌
17、落数分别为 230、34、240，虽然菌落数均在“30300”，但由于 34 与另外两个平板差异较大，应找出原因并重新实验。题型突破练题型，夯基提能1(2017江西宜春模拟)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。下列叙述错误的一项是()A在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以原油为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于选择培养基B无菌技术要求实验操作应在酒精灯火焰附近进行，以避免周围环境中微生物的污染C为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈小说明该菌株的降解能力强D通常情况下，在微生物培养过程
18、中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌解析：欲筛选出能降解原油的菌株，培养基中应只含有原油而无其他碳源，这类培养基属于选择培养基，A 正确；无菌操作要求在整个实验过程中操作都在酒精灯火焰附近进行，以避免周围微生物的污染，B 正确；为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈越大说明该菌株的降解能力越强，C 错误；实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌(如接种环)、干热灭菌(如培养皿)、高压蒸汽灭菌(如培养基)等，D 正确。答案：C2(2014高考新课标全国卷)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1)该
19、小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_；然后，将 1 mL 水样稀释 100 倍，在 3 个平板上用涂布法分别接入 0.1 mL稀释液；经适当培养后，3 个平板上的菌落数分别为 39、38 和 37。据此可得出每升水样中的活菌数为_。(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过_灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_。(3)示意图 A 和 B 中，_表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静
20、置培养，另一部分进行振荡培养，结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中_的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高_的利用率。解析：(1)取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，可依据是否产生菌落确定培养基的灭菌效果是否理想。由样品中菌株数计算公式：(CV)M 知：1 mL水样中菌株数为(380.1)1003.8104，故每升水样中的活菌数为 3.8107。(2)利用接种环接种时，接种环需灼烧灭菌。利用平板划线法分离细菌时，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始，可以将聚集的菌体逐步稀释以便得到单个菌落。(3)稀释涂布平板法是用涂布器将
21、菌液均匀涂布在培养基表面，故培养后产生的菌落应随机分布在培养基表面，即 B 表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。(4)液体培养基通过振荡可提高溶氧量，同时使菌体与营养物质充分接触，提高营养物质的利用率，从而提高细菌的生长速度。答案：(1)检测培养基平板灭菌是否合格 3.8107(2)灼烧 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3)B(4)溶解氧 营养物质3(2017山西四校联考)高温淀粉酶在大规模工业生产中是极为重要的酶制剂。研究者从热泉中筛选出了能高效产生高温淀粉酶的嗜热菌。其筛选过程如图所示。(1)进行过程的目的是_嗜热菌培养液；过程所使用的接种方法是_。(2)、号培养基配制和灭
22、菌时，灭菌与调节 pH 的先后顺序是_；对培养基常用_方法进行灭菌。对于空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_，如果要检测灭菌是否彻底，可以采用的方法是：将灭菌过的培养基在适宜的温度下放置一段时间，_。(3)部分嗜热菌在号培养基上生长时可释放_分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈；应挑出透明圈_(填“大”或“小”)的菌落，接种到号培养基。解析：(1)分析题图可知，过程是梯度稀释，目的是对样品进行稀释；过程是用稀释涂布平板法进行接种。(2)培养基配制和灭菌时应先调节pH，然后再进行灭菌，如果先灭菌再调节 pH 时，又会污染培养基；紫外线对 DNA 分子有损伤作用，且
23、能使蛋白质变性，所以常用来作为对空气的灭菌的方法；检测灭菌效果的方法就是将灭菌过的培养基在适宜的温度下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生。(3)能分解淀粉的嗜热菌在号培养基上生长时可释放淀粉酶，分解培养基中的淀粉，在菌落周围形成透明圈，透明圈越大淀粉酶的活性越强，所以要从中挑出透明圈大的菌落，接种到号培养基上。答案：(1)稀释 稀释涂布平板法(2)先调节 pH，后灭菌 高压蒸汽灭菌 损伤 DNA 的结构 观察培养基上是否有菌落产生(3)淀粉酶 大 练小题提速度判断下列说法是否正确1培养基分装到培养皿后进行灭菌。()2从有机废水中分离分解有机物的微生物时，接种后的培养皿须放在光照培养箱中培
24、养。()3无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。()4对细菌进行计数只能采用稀释涂布平板法，而不能用平板划线法。()5分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低。()6刚果红可以与纤维素形成透明复合物，所以可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。()7刚果红染色法只能在培养微生物的时候加入刚果红。()练真题明方向1(2016高考全国卷)空气中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。某研究小组欲用平板收集教室空气中的微生物，以了解教室内不同高度空气中微生物的分布情况。实验步骤如下：配制培养基(成分：牛肉膏、蛋
25、白胨、NaCl、X、H2O)；制作无菌平板；设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；将各组平板置于 37 恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落的平均数。回答下列问题：(1)该培养基中微生物所需的氮来源于_。若要完成步骤，该培养基中的成分 X 通常是_。(2)步骤中，实验组的操作是_。(3)若在某次调查中，某一实验组平板上菌落平均数为 36 个/平板，而空白对照组的一个平板上出现了 6 个菌落，这种结果说明在此次调查中出现了_现象。若将 30(即 366)个/平板作为本组菌落数的平均值，该做法_(填“正确”或“不正确”)。解析：(1)牛肉膏和蛋白胨中均含有氮元素，因此微生物所需的氮来源于牛
26、肉膏和蛋白胨。若要完成步骤，需要进行倒平板操作，用到的是固体培养基，所以培养基中要有琼脂。(2)该实验的空白对照组为不进行处理的无菌平板，实验组的操作为将各无菌平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露相同时间。(3)若空白对照组的平板上出现了菌落，说明实验过程中出现了污染现象。空白对照组的一个平板上出现了 6 个菌落，导致实验变量不唯一，不能确定实验组平板上的菌落是否仅由教室内不同高度空气中的微生物形成，因此不能求出实验组的菌落平均数。答案：(1)牛肉膏、蛋白胨 琼脂(2)将各实验组平板分别放置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间(3)污染 不正确2(2016高考全国卷)某同学用新鲜的
27、泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用_对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是_。(2)推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有_和_。分离纯化时应挑选出_的菌落作为候选菌。(3)乳酸菌在20 长期保存时，菌液中常需要加入一定量的_(填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”)。解析：(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释，这样既可避免杂菌污染，又可将乳酸菌分散成单个细胞，以便在培养基表面形成单个菌落。(2)乳酸的积累影响乳酸菌的增殖，加入
28、碳酸钙可以中和乳酸菌代谢(无氧呼吸)过程中产生的乳酸，另外，乳酸和碳酸钙反应，进而导致碳酸钙分解形成透明圈，有利于乳酸菌的鉴别和分离。(3)对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。在 3 mL 的甘油瓶中，装入 1 mL 甘油后灭菌。将 1 mL 培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在20 的冷冻箱中保存。答案：(1)无菌水 泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落(2)鉴别乳酸菌 中和产生的乳酸(或酸)具有透明圈(3)甘油3(2014高考新课标全国卷)植物秸秆中的纤维素可被某些微生物分解。回答下列问题：(1)分解秸秆中纤维素的微生物能分泌纤维素酶，该酶是由 3 种组
29、分组成的复合酶，其中的葡萄糖苷酶可将_分解成_。(2)在含纤维素的培养基中加入刚果红(CR)时，CR 可与纤维素形成_色复合物。用含有 CR 的该种培养基培养纤维素分解菌时，培养基上会出现以该菌的菌落为中心的_。(3)为从富含纤维素的土壤中分离获得纤维素分解菌的单菌落，某同学设计了甲、乙两种培养基(成分如表)：酵母膏无机盐淀粉纤维素粉琼脂CR 溶液水培养基甲培养基乙注：“”表示有，“”表示无。据表判断，培养基甲_(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是_；培养基乙_(填“能”或“不能”)用于分离和鉴别纤维素分解菌，原因是_。解析：(1)纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三
30、种组分：C1酶、CX 酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，葡萄糖苷酶将纤维二糖分解成葡萄糖。(2)刚果红可与纤维素形成红色复合物，但并不与水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。用含有刚果红的纤维素培养基培养纤维素分解菌时，由于纤维素被分解，红色复合物无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。(3)培养基甲未使用琼脂，为液体培养基，不能用于分离单菌落。同时含有纤维素和刚果红(CR)的培养基才能分离和鉴别纤维素分解菌。答案：(1)纤维二糖 葡萄糖(2)红 透明圈(3)不能 液体培养基不能用于分离单菌落 不能 培养基中没有纤维素，不会形成 CR纤维素红色复合物，即使出现单菌落
31、也不能确定其为纤维素分解菌4(2013高考新课标全国卷)临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用_法或_法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。(2)取该单菌落适当稀释，用_法接种于固体培养基表面，在 37 培养箱中培养 24 h，使其均匀生长，布满平板。(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有 A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含 A 的滤纸片周围出现透明圈，说明
32、该致病菌对抗生素 A_；含B 的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素 B_；含 C 的滤纸片周围的透明圈比含 A 的小，说明_；含 D 的滤纸片周围的透明圈也比含 A 的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素 D 的_。(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素_。解析：(1)将细菌接种到固体培养基上的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。(2)由(1)获取的致病菌单菌落，经过适当稀释，用涂布法接种至固体培养基表面进一步培养。(3)在检测致病菌对抗生素的敏感性实验中，若含 A种抗生素的滤纸片周围出现透明圈，说明周围的致病菌死亡，该致病菌对
33、 A种抗生素敏感；若含 B 种抗生素的滤纸片周围没有出现透明圈，说明致病菌对 B 种抗生素不敏感；若含 C 种抗生素的滤纸片周围的透明圈比含 A 的小，说明该致病菌对 C 的敏感性比对 A 的弱；若含 D 种抗生素的滤纸片周围透明圈也比含 A 的小，说明 A、B、C、D 四种抗生素的杀菌效果最显著的为 A。透明圈中出现的菌落为耐药菌。(4)根据(3)中分析，为达到抗菌目的最好选用抗生素 A。答案：(1)划线 稀释涂布(或涂布)(2)涂布(3)敏感 不敏感 该致病菌对 C 的敏感性比对 A 的弱 耐药菌(4)A填网络串线索填充：灭菌平板划线法选择培养基间接计数法(活菌计数法)课时 跟踪检测 本课内容结束
