1、课时作业38微生物的培养与应用时间：45分钟满分：100分一、选择题(每小题5分，共60分)1.下列关于微生物分离和培养的叙述，错误的是()A微生物培养前，需对培养基进行消毒B测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法C分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度D分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中的唯一氮源解析：微生物培养前，需对培养基进行灭菌，而不是消毒；测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法；分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度，以便能从中选择出菌落数在30300的平板进行计数；分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中的唯一氮源。答案：A2(2014合肥四校质检)下列有关培
2、养基和菌种鉴定的叙述不正确的是()A植物组织培养常用的是固体培养基B可利用固体培养基上菌落的特征来判断和鉴别细菌的类型C利用刚果红培养基上是否形成透明圈来筛选纤维素分解菌D在无氮培养基中加入酚红指示剂鉴定尿素分解菌解析：在只含有尿素作为氮源的培养基中加入酚红指示剂鉴定尿素分解菌。答案：D3(2014东城区检测)欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实验操作中不正确的是()A将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释B同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板C可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照D用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌解析：本题考查微生物的分离与培养，意在考查考生的实验分析
3、能力。为了获得单个菌落，应将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释，A正确；为了使结果更加准确，同一浓度的土壤稀释？至少要涂布3个平板进行重复实验，然后计算平均值，B正确；加入刚果红的培养基用来筛选纤维素分解菌，D错误。答案：D4无菌技术包括以下几个方面的叙述，其中错误的是()A对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌B将用于微生物培养的培养皿、接种用具和培养基等进行灭菌C为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行D实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触解析：无菌操作技术的第一方面是：对实验操作的空间，操作者的衣着和手进行清洁和消毒。第二、三、四方面分别是选项B、
4、C、D。答案：A5为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是()A对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法B临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上C临时保藏菌种容易被污染或产生变异D对于需要长期保存的菌种，可以采用低温4保藏的方法解析：对于需要长期保存的菌种，可采用甘油管藏法，即在3mL甘油瓶中加入1 mL甘油后灭菌，将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在20 的冷冻箱中保存。答案：D6有关平板划线操作的叙述不正确的是()A第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物B每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种
5、C在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液D划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者解析：纯化大肠杆菌的平板划线中，接种环取菌种前灼烧的目的是避免接种环可能存在的微生物污染培养物，以后每次划线前灼烧接种环为了杀死上次划线后残留的菌种，划线结束仍需灼烧接种环，是避免细菌污染环境和感染操作者，从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。答案：C7(2014衡阳模拟)下列关于大肠杆菌的培养中叙述不正确的是()A在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑pH、温度和渗透压等条件B在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养
6、基和培养皿进行消毒C若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的稀释度D使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃解析：本题主要考查微生物培养和无菌操作的相关知识。培养过程中，除营养条件要满足需要外，还要考虑温度、酸碱度和渗透压等条件是否适宜；灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，所以，对培养基和培养皿进行灭菌而不是消毒；使用稀释涂布平板法时要保证样品稀释比例合适，这样才会有更科学的数据；有的大肠杆菌会释放一种强烈的毒素，并可能导致肠管出现严重症状，所以使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢
7、弃，以防止培养物的扩散。答案：B8在对纤维素分解菌进行选择培养时用液体培养基的目的是()A用液体培养基可获得大量菌体B纤维素分解菌适宜在液体培养基上生长C用液体培养基可以充分利用培养基中的营养物质D用液体培养基可获得高纯度的纤维素分解菌解析：液体培养基有利于纤维素分解菌的生长和繁殖。答案：A9(2014西城模拟)下列关于微生物培养和利用的叙述不正确的是()A利用稀释涂布平板法只能分离微生物不能对微生物进行计数B接种时连续划线的目的是将聚集的菌种逐步稀释获得单菌落C以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌D用大白菜腌制泡菜的过程中亚硝酸盐含量变化是先增加后减少解析：接种划线可以将菌
8、体分散，最后得到单个菌体细胞，经过培养可以得到单个菌落；用稀释涂布平板法可以分离微生物也可以对微生物进行计数；在泡菜的腌制过程中，开始亚硝酸盐含量增加，10天后含量开始下降；以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌。答案：A10下列关于微生物的培养和分离的叙述中，不正确的是()A细菌能在液体培养基中以二分裂方式迅速扩增B噬菌体或大肠杆菌可在蛋白胨培养基中增殖C灭菌的目的是消灭与培养菌竞争的杂菌D稀释涂布法分散细菌得到单菌落的效果更好解析：细菌繁殖方式是二分裂方式，噬菌体是没有细胞结构的病毒，需要在活细胞中才能生活，在蛋白胨培养基中不能增殖；灭菌的目的是防止杂菌和培养菌发生竞争。答
9、案：B11.如图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1、2、3、4、5。下列操作方法正确的是()A操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌B划线操作须在火焰上进行C在5区域中才可以得到所需菌落D在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌解析：在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法是在火焰上灼烧，接种时划线操作是在火焰边进行。在5个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。答案：D12(2014合肥一检)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的下列操作中，不正确的是()A操作流程是计算、称量、溶化、灭菌和倒平板B将称好的牛肉膏连同称量纸一同倒入烧杯中再加水、去纸C灭菌后向牛肉膏蛋白
10、胨溶液中加2%琼脂，并使其溶解D将培养基冷却到约50 时，在酒精灯火焰附近倒平板解析：琼脂加入到牛肉膏蛋白胨溶液中，熔化后再灭菌。答案：C二、非选择题(共40分)13(14分)炭疽病是由炭疽杆菌引起的一种人畜共患传染病。炭疽杆菌两端截平、呈竹节状排列，菌落呈卷发状。对炭疽病疑似患者，可根据噬菌体的宿主专一性，通过实验确诊。(1)细菌培养：采集疑似患者的样本，分离培养，获得可疑菌落。(2)细菌鉴定：实验流程如图所示对配制的液体培养基等需采取_方法灭菌；实验所用液体培养基的碳源为_(填“无机碳”或“有机碳”)。挑选可疑菌落制片后，用_观察，可看到呈竹节状排列的杆菌。接种可疑菌后，35 培养24小时
11、，液体培养基变浑浊，原因是_，对照组试管中应加入_，与实验组同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组_(填“高”或“低”)，则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。对排除的疑似患者及易感人群，可接种炭疽杆菌疫苗，刺激机体产生相应抗体。与产生抗体相关的细胞除T细胞、B细胞外，还有_。解析：培养基应用高压蒸汽方法进行灭菌。炭疽杆菌同化类型为异养型，应选有机碳作为其碳源。微生物个体小，肉眼观察不到，必须借助显微镜才能观察到菌体特征。在液体培养基中，细菌大量繁殖会导致培养液变浑浊；该实验中实验变量为是否加入噬菌体，所以对照组除不加噬菌体外，其他处理都应该和实验组保持一致(即应加入不含噬
12、菌体的生理盐水)。噬菌体可破坏细菌细胞，从而使培养液变清。在特异性免疫过程中，吞噬细胞参与了对抗原的处理与呈递，浆细胞是直接产生抗体的细胞。答案：(2)高压蒸汽(100 kPa蒸汽)有机碳显微镜细菌大量繁殖等量生理盐水低吞噬细胞、浆细胞14(16分)为了探究土壤中的微生物对尿素是否有分解作用和，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。请分析回答问题：KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O葡萄糖尿素琼脂1.4 g2.1 g0.2 g1 g10 g15 g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000mL (1)简述土壤中可分解尿素的
13、细菌的鉴定方法及原理：_。(2)培养基中加入尿素的目的是筛选_，这种培养基属于_培养基。(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的_和_，实验中需要振荡培养，原因是_。(4)转入固体培养基时，常采用_接种，获得单菌落后继续筛选。(5)实验结束后，使用过的培养基应该进行_处理后，才能倒掉。解析：尿素是培养基中的唯一氮源，因此原则上只有能够利用尿素的微生物才能够在此培养基上生长。由于细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，pH升高，故在以尿素为唯一氮源的培养基中加入的酚红指示剂将变成红色；这种培养基属于选择培养基，可筛选目的菌；目的菌生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的尿素和葡萄糖；振荡培养的
14、目的是提供氧气；固体培养基培养时的接种方法常用稀释涂布平板法或平板划线法；倒掉培养基之前应对其进行灭菌处理。答案：(1)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，pH升高，使酚红指示剂变为红色(2)目的菌选择(3)尿素葡萄糖为目的菌提供氧气(4)稀释涂布平板法(或平板划线法)(5)灭菌15(10分)下面是探究如何从土壤中分离自生固氮菌与计数的实验，完成下列问题：(1)实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。将用表层土制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离开来。(2
15、)材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9 mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛90 mL无菌水的锥形瓶、恒温箱。(3)方法步骤：倒平板：分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，操作过程应在火焰旁。制备土壤稀释液：取土样10 g加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。用无菌吸管吸取上清液1 mL，转至9 mL的无菌水的大试管中，依次稀释到107稀释度。涂布：按照由107103稀释度的顺序分别吸取0.1 mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基一般应至少涂布_个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布1个平板。培养：放入恒温箱内，在2830 下培养34天。
16、细菌的计数：当菌落数目稳定时，选取菌落数为_的平板进行计数。如果测试的平均值为50，则每克样品中的菌落数是_(稀释度是105)。(4)预测结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基平板上的菌落数应多于无氮培养基上的数目。请说明原因_ _。解析：统计菌落数目的原则是：选出菌落数在30300的平板进行计数。根据计算方法“每克样品中的菌落数(CV)M”，则(500.1)1055107。无氮培养基里没有氮源，只允许固氮菌生存，属于选择培养基，可分离出土壤中的固氮菌。牛肉膏蛋白胨培养基营养全面，几乎允许土壤中所有菌类生存。答案：(3)3303005107(4)无氮培养基上能生存繁殖的仅是土壤中的固氮菌，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类生存
