1、大板块练生物技术实践1下面是关于微生物的培养和研究的一些问题，请回答：(1)观察这些微生物的菌落所用的培养基类型是_。培养基中不加入_可以选择培养自养型微生物。(2)微生物接种最常用的方法有_。其中即可分离又可计数活菌的接种方法是_，原因是_。(3)分离分解尿素的细菌时，培养基中需加入_指示剂。而分离分解纤维素的细菌时，在培养基中需加入_染料来筛选。解析：(1)菌落是指单个微生物在固体培养基上经过繁殖形成的肉眼可见的子细胞群体；自养微生物可以利用CO2合成有机物，所以在培养时不需要添加碳源。(2)常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法；利用稀释涂布平板法可以进行计数；原因是当样品的稀
2、释度足够高时，培养基表面的一个菌落就来源于稀释液中的一个活菌。(3)鉴别分解尿素的微生物需要加入酚红指示剂；分解纤维素的微生物用刚果红染料染色。答案：(1)固体培养基有机碳源(2)平板划线法、稀释涂布平板法稀释涂布平板法当样品的稀释度足够高时，培养基表面的一个菌落就来源于稀释液中的一个活菌(3)酚红刚果红2酿酒酵母普遍应用于白酒、红酒、啤酒和果汁饮料的生产，其生物合成过程会形成多种多样的代谢产物，从而对食品风味产生重要影响。以下是从酒曲样品中分离出酵母菌的过程：处理酒曲样品过滤系列稀释至102107选择适宜稀释度涂布固体培养基28 下培养48 h挑取典型菌落镜检菌种鉴定菌种保藏。请回答下列有关
3、问题：(1)制备固体培养基时，采用_法灭菌1520 min。(2)通过稀释涂布平板法可以统计样品中活菌的数目。为保证结果准确，一般选择的稀释浓度要保证涂布后在培养基表面形成_。涂布平板操作时应在_附近进行。(3)菌种鉴定后要进行菌种保藏，具体方法是将菌种接种于固体斜面培养基上，28 培养后，将试管于4 的冰箱保存。这种方法保存的时间不长，菌种容易_。若想长期保藏，可以采用_的方法，放在_的冷冻箱中保存。(4)酵母菌常用于制作葡萄酒，酒精发酵时一般将温度控制在_，常用_检测发酵后是否有酒精产生。解析：(1)对培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌。(2)通过稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目时，为保证
4、结果准确，一般选择的稀释浓度要保证涂布后在培养基表面形成单菌落。涂布平板操作时为防止杂菌污染，应在酒精灯火焰附近进行。(3)将菌种接种于固体斜面培养基上，28 培养后，将试管于4 的冰箱保存。这种方法是临时保藏法，其保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。若想长期保藏，可以采用甘油管藏的方法，放在20 的冷冻箱中保存。(4)酵母菌常用于制作葡萄酒，酒精发酵时一般将温度控制在1825 ，常用酸性重铬酸钾溶液检测发酵后是否有酒精产生。答案：(1)高压蒸汽灭菌(2)单个菌落酒精灯火焰(3)被污染或产生变异甘油管藏20 (4)1825 酸性重铬酸钾3回答下列有关果胶酶生产及固定化应用的问题：(1)菌
5、种筛选：为了获得高产果胶酶的菌株，用射线处理一些霉菌后，稀释并接种在以低浓度果胶为唯一碳源的培养基中培养，此培养基的pH要求_。(2)菌种鉴定：通过在固体培养基上观察_，实现菌种的鉴定。(3)果胶酶的固定化：取磁性壳聚糖微球固体颗粒，加入果胶酶溶液，30 条件下振荡1 h后装柱，反应柱使用后要用蒸馏水洗涤，然后放置于4 冰箱中保存。上述固定化果胶酶的方法属于_。(4)果胶酶活力测定：以1 g果胶酶单位时间催化产生的主要产物_的量计算酶的活性。已知3,5二硝基水杨酸与果胶水解主要产物共热，能产生棕红色的氨基化合物，在一定范围内产物的量和反应液颜色深浅成正比，可用_法测定产物的量。(5)由霉菌发酵
6、生产的果胶酶是食品加工业中使用量较大的酶制剂之一，若通过固定化霉菌细胞生产果胶酶，在配制海藻酸钠溶液时，要注意_，否则可能出现焦糊。固定化细胞技术一般采用包埋法固定化，原因是_。某果胶酶高产菌株产生的果胶酶为分子量不同的多种酶复合物，可以采取_法将这些酶在保持活性下进行有效分离。解析：(1)结合分析可知，为了从霉菌中获得高产果胶酶的菌株，对霉菌用射线处理后，需要将其稀释并接种在以低浓度果胶为唯一碳源的培养基中培养，由于霉菌需要在酸性条件下繁殖，所以实验中需要将该培养基的pH调为酸性。(2)鉴定菌种需要根据菌落的固有特征来鉴定。所以通常将微生物接种在固体培养基上待其长出菌落后再观察菌落的形态特征
7、进行鉴定。(3)果胶酶的固定化：取磁性壳聚糖微球固体颗粒，加入果胶酶溶液，30 条件下振荡1 h后装柱，反应柱使用后要用蒸馏水洗涤，然后放置于4 冰箱中保存。该方法利用磁性微球固体颗粒的强吸附性实现了对果胶酶的固定，因此该固定化果胶酶的方法属于吸附法。(4)结合纤维素酶的活性测定原理可知，果胶酶活性测定通常以1 g果胶酶单位时间催化产生的主要产物半乳糖醛酸的量计算酶的活性。根据3,5二硝基水杨酸与果胶水解主要产物半乳糖醛酸共热，能产生棕红色的氨基化合物，并且在一定范围内产物的量和反应液颜色深浅成正比的原理，可用比色法测定产物的量。(5)固定化霉菌细胞生产果胶酶需要用固定化细胞技术，在配制海藻酸
8、钠溶液时，为了避免出现焦糊，需要在加热时用小火或间断加热。因为细胞体积大，不易从包埋材料中漏出，因此可用包埋法固定细胞。由于果胶酶包含分子量不同的多种酶复合物，因此可根据分子量的不同，采取凝胶色谱法将这些分子量不同的酶在保持活性下进行有效分离。答案：(1)酸性(2)菌落的形态特征(3)吸附法(4)半乳糖醛酸比色(5)加热时用小火或间断加热细胞体积大，不易从包埋材料中漏出凝胶色谱4中国茶文化源远流长，茶的种类以色泽(或制作工艺)分为绿茶、红茶、乌龙茶、白茶等不同品种。请回答：(1)绿茶是不经发酵制成的茶。在制作绿茶的工艺中，有一道工序是迅速将温度提高到70 左右，目的是_，从而保证茶叶鲜绿的颜色
9、。(2)从茶籽中提取用于食用的茶油一般最好采用_法，茶饮料所用的胡萝卜素通常采用_法从胡萝卜中提取，以下最适合用于作为胡萝卜素提取溶剂的是_，理由是_。提取剂石油醚乙酸乙酯乙醚苯沸点90120 77 35 80 (3)茶饮料所用的茉莉油的提取流程如下：苿莉花水过程A油水混合物油层分离与粗提取加无水硫酸钠过滤茉莉油。过程A表示_，为了提高水油分层效果，可向水油混合物中加入_，向粗提精油中加入无水硫酸钠的目的是_。解析：(1)高温条件下可以使酶变性失去活性，从而防止色素被分解，保证茶叶鲜绿的颜色。(2)提取茶油类似于从菜籽中提取食用油，所以最好采用压榨法；而胡萝卜素的提取通常用萃取法；萃取时较高的温度可以提高胡萝卜素在萃取剂中的溶解度，由于石油醚沸点最高，在加热萃取时不易挥发，所以石油醚最适宜用作萃取剂。(3)过程A表示水蒸气蒸馏的过程；为了提高水油分层的效果，可向混合物中加入氯化钠；为了除去油层中的水分，可以向精油中加入无水硫酸钠。答案：(1)通过高温使酶变性失活(2)压榨萃取石油醚石油醚的沸点最高，在加热萃取时不易挥发，所以石油醚最适宜用作萃取剂(3)水蒸气蒸馏氯化钠除去油层中的水分
