1、非常“组合4”主观题模拟真演练(五)12020四川省绵阳市高三四模科学家Burton等将人的抗体编码基因体外克隆后，插入噬菌体中并转染大肠杆菌得到工程菌。目的基因在工程菌中进行表达，获得了具有高度免疫活性的人抗体，该项技术被称为噬菌体抗体库技术。回答下列相关问题：(1)提取人的抗体编码基因时，若限制酶切出的DNA片段是平末端，则需要用_酶进行连接。若要在短时间内获得较多的抗体编码基因，可以利用PCR技术扩增DNA，扩增目的基因时需要加入两种引物，其原因是_。(2)运用逆转录法获得的抗体编码基因，只是该基因的_序列，需要插入载体的_之间才能进行转录。(3)大肠杆菌常常被用作基因工程的受体菌，其主
2、要优点是_(答出两点即可)。(4)将重组DNA分子导入大肠杆菌细胞时，一般不需要用CaCl2处理大肠杆菌以制备感受态细胞，其原因是_。22020四川省成都市蓉城名校联盟高三联考CART细胞疗法是通过设计CAR基因，并导入癌症患者的T细胞中，使其转化为CART细胞，CART细胞膜上的CAR蛋白与癌细胞表面抗原特异结合后，激活CART细胞使其增殖、分化，从而实现对癌细胞的特异性杀伤和记忆，主要过程如下图。请回答：(1)过程中，需要先要用_切割不同的DNA片段形成黏性末端，再利用_连接形成CAR基因。(2)将CAR基因导入患者T细胞前，必须先完成过程，一是因为CAR基因片段小，在细胞中容易丟失；二是
3、因为缺少_，CAR基因在T细胞中不能复制。(3)完成过程常用方法是_。此外，还可以先将CAR基因整合到逆转录病毒载体中，再利用病毒的_特性导入并将CAR基因整合到T细胞的_上。(4)根据图示，CART细胞对癌细胞的特异性杀伤主要取决于CAR蛋白_区。CART细胞疗法具有持久性是因为CART细胞能够在体内_。32020河南省新乡市高三第二次模拟请回答下列有关基因工程和生物技术安全性的问题：(1)霍拉纳(H.G.Khorana)用实验证实了尼伦伯格提出的遗传密码的存在，不仅使人们认识到自然界中从微生物到人类共用一套_，而且为基因的分离和合成等提供了理论依据。钱嘉韵是第一个成功分离出耐高温DNA聚合
4、酶的中国台湾科学家，该酶的发现为基因工程中_技术的发明提供了前提条件。(2)检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因，可以采用DNA分子杂交技术，即将转基因生物的基因组DNA提取出来，在含有目的基因的DNA片段上用_等作标记，以此作为探针，使探针与基因组DNA杂交，如果显示出_，就表明目的基因已插入受体的染色体DNA中。(3)日前科学家已在牛和山羊等动物乳腺生物反应器中表达出了抗凝血酶、血清白蛋白、生长激素和a抗胰蛋白酶等重要医药产品。在用转基因动物生产药用蛋白时，需要先将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的_等调控组件重组在一起，通过_等法，导入哺乳动物的受精卵中。(4)部分公众认为转基因农作物可
5、能会对生物多样性构成威胁，根据所学的生物学知识，列举两个理由，减轻或消除他们的担忧：_。42020辽宁省高三第一次模拟胶原蛋白广泛应用于医学、化妆品、化工原料等领域，科研人员开展了利用家蚕生产人胶原蛋白的研究。请回答下列问题：(1)家蚕核型多角体病毒(BmNPV)专性寄生于鳞翅目昆虫，将人胶原蛋白基因与_重组后，构建_。体外克隆目的基因的方法是_。(2)BmNPV的pl0基因是极强的启动子，将目的基因连接在pl0基因的下游，目的是_。目的基因与pl0基因连接时，断裂与连接的化学键都是_。(3)重组BmNPV感染家蚕幼虫后，在幼虫淋巴液中提取蛋白质，用_的方法检测目的基因是否成功表达。相比于大肠
6、杆菌，选择家蚕作为人胶原蛋白的生物反应器，其优点是_。非常“组合4”主观题模拟真演练(五)1(1)T4DNA连接DNA聚合酶只能从3端延伸DNA链，用两种引物才能确保DNA的两条链同时被扩增(2)编码区启动子和终止子(3)大肠杆菌结构简单、遗传物质相对较少、繁殖速度快(4)噬菌体可以侵染大肠杆菌，将重组DNA分子注入大肠杆菌解析：(1)限制酶切出的DNA片段若是平末端，需要用T4DNA连接酶进行连接。由于DNA聚合酶不能从头合成DNA，而只能从3端延伸DNA链，只有用两种引物引导才能确保DNA的两条链同时被扩增，所以利用PCR技术扩增目的基因时需要加入两种引物。(2)由于转录时只有目的基因编码
7、区的信息传递到了mRNA上，所以运用逆转录法获得的抗体编码基因，只是该基因的编码区序列，不含基因转录的调控序列，故上述抗体编码基因需要插入载体的启动子和终止子之间才能进行转录。(3)大肠杆菌具有结构简单、遗传物质相对较少、繁殖速度快等优点，常被用作基因工程的受体菌。(4)在噬菌体抗体库的构建过程中，理论上可以不利用Ca2处理大肠杆菌，依据是噬菌体可以侵染大肠杆菌，将重组DNA分子注入大肠杆菌。2(1)限制性核酸内切酶(限制酶)DNA连接酶(2)复制原点(3)显微注射侵染染色体DNA(4)胞外结合形成记忆细胞解析：根据题意可得，CAR T细胞疗法实际为通过基因工程改变患者T细胞的基因，使其能够产
8、生CAR蛋白以特异性杀伤癌细胞。过程表示获取目的基因，过程表示获得重组DNA分子，过程表示将重组DNA分子转入受体细胞；过程表示对癌细胞的特异性杀伤和记忆。(1)过程获取目的基因时，需要的工具酶为限制性核酸内切酶和DNA连接酶，用限制性核酸内切酶切割不同的DNA片段，再利用DNA连接酶形成CAR基因；(2)基因的复制需要复制原点，过程获得的CAR基因不包含复制原点，所以需要与pCDH质粒结合，由pCDH质粒提供复制原点；(3)受体细胞为动物细胞时，常用的将重组DNA分子导入受体细胞的方式为显微注射法；病毒为寄生生物，因此可利用病毒的侵染性将CAR基因整合到受体细胞染色体的DNA上；(4)根据题
9、图分析，CAR T细胞对癌细胞的特异性杀伤是通过与癌细胞特异性结合再使癌细胞裂解，故起主要作用的是CAR蛋白的胞外结合区，CAR T细胞疗法具有持久性是因为CAR T细胞与细胞免疫相似，能够在体内形成记忆细胞。3(1)遗传密码PCR(2)放射性同位素杂交带(3)启动子显微注射(4)转基因农作物与其他种类的植物存在生殖隔离，很难与其他植物发生杂交；许多农作物的花粉传播距离有限、花粉存活时间有限解析：(1)从微生物到人类共用一套遗传密码，耐高温DNA聚合酶的发现为基因工程中PCR技术的发明提供了前提条件；(2)DNA分子杂交技术，即在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作标记，以此作为探针，
10、使探针与基因组DNA杂交，如果显示出杂交带，就表明目的基因已插入受体细胞染色体的DNA中；(3)在用转基因动物生产药用蛋白时，需要先将药用蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子调控组件重组在一起，使药用蛋白基因可以和乳腺蛋白基因一起表达；目的基因导入动物细胞一般通过显微注射等方法；(4)转基因农作物会对生物多样性构成威胁较小，原因有：转基因农作物与其他种类的植物存在生殖隔离，很难与其他植物发生杂交；许多农作物的花粉传播距离有限、花粉存活时间有限等。转基因的农作物难以将目的基因扩散开来。4(1)BmNPV基因基因表达载体PCR技术(2)使目的基因在pl0基因的驱动下高效表达磷酸二酯键(3)抗原抗体杂交家
11、蚕细胞的内质网和高尔基体会对人胶原蛋白进行加工使表达的胶原蛋白与人的胶原蛋白的结构和功能相似解析：(1)因为BmNPV专性寄生于鳞翅目昆虫，故将目的基因与BmNPV基因重组，构建基因表达载体，更有利于将目的基因导入家蚕细胞。PCR是指在体外复制特定的DNA片段，可在短时间内大量扩增目的基因。(2)启动子位于基因的首端，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录。将目的基因与运载体连接时，限制酶和DNA连接酶作用的都是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。(3)检测目的基因是否翻译成蛋白质，可用抗原抗体杂交的方法。大肠杆菌为原核细胞，家蚕为真核生物，家蚕细胞中的内质网和高尔基体会对人胶原蛋白进行加工，与人体内表达的蛋白质结构和功能更相似。
