1、基因工程专题主讲教师：毕诗秀【考试说明对基因工程部分的要求】基因工程（1）基因工程的诞生（2）基因工程的原理及技术（3）基因工程的应用（4）蛋白质工程1.下列叙述符合基因工程概念的是A. B 淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中含有B 淋巴细胞中的抗体基因B. 将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得能产生人干扰素的菌株C. 用紫外线照射青霉菌，使其DNA 发生改变，通过筛选获得青霉素高产菌株D. 自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA 整合到细菌DNA 上2.在已知某小片段基因碱基序列的情况下，获得该基因的最佳方法是A.用mRNA为模板逆转录合成DNA B.以4种脱氧核苷酸为原
2、料人工合成C.将供体DNA片段转入受体细胞中，再进一步筛选D.由蛋白质的氨基酸序列推测mRNA获取目的基因的方法有哪些？如何操作？适用对象？3天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是A提取矮牵牛蓝色花的mRNA，经逆转录获得互补的DNA，再扩增基因BB利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因BC利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞D将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞4. 下列关于转基因生物安全性的叙述，错误的是A. 种植转基因作物应与传统农业种植区
3、隔离B. 转基因作物被动物食用后，目的基因会转入动物体细胞中C. 种植转基因植物有可能因基因扩散而影响野生植物的遗传多样性D. 转基因植物的目的基因可能转入根系微生物5.下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：一个图1所示的质粒分子经Sma切割前后，分别含有 和 个游离的磷酸基团。若对图中质粒进行改造，插入的Sma酶切位点越多，质粒的热稳定性越 。用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma切割，原因是 。与只使用EcoR相比较，使用BamH和Hind两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 为了获取重组质粒，将
4、切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 酶。 重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在 的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。6请回答基因工程方面的有关问题：关于基因工程的工具构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图1中的 处，DNA连接酶作用于图1中的_处。（填序号）用限制酶EcoRV、Mbol单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图2（1 kb 即1000个碱基对），请画出质粒上EcoRV、Mbol的切割位点，并标出酶切位点之间的距离。利用PCR技术扩增目的基因PCR
5、过程需要_酶，作用于图3_步骤。如果延伸时间设置较长，在第 轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段，复制方式为_。如图4所示，箭头代表子代DNA的延伸方向，我们可以根据已知DNA序列复制未知DNA序列，TDNA片段基因序列已知，设计4段TDNA的引物A、B、C、D，引物的作用是_，如果利用PCR技术扩增TDNA片段，我们可选择_作为引物（填字母）；如果扩增未知基因可选择_作为引物（填字母）。 设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图5），请分别说明理由。 第1组： ；第2组： PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下图6的表
6、达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为 。 获得转基因植株在构建重组质粒时，应选用图中 限制酶对 进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入 。将转入抗旱基因的水稻细胞培育成完整的植株需要用 技术，该技术包括图7中 、 过程。7.黄曲霉毒素B1 （AFB1）存在于被黄曲霉菌污染的饲料中，它可以通过食物链进入动物体内并蓄积，引起癌变。某些微生物能表达AFB1解毒酶将该酶添加在饲料中可以降解AFB1，清除其毒性。 AFB1属于 类致癌因子。 AFB1能结合在DNA 的G 上使该位点受损伤变为G ，在DNA复制中，G 会与A配对。现有受损伤部位的序
7、列为，经两次复制后，该序列突变为 。 下图为采用基因工程技术生产AFB1解毒酶的流程图据图回答问题： 在甲、乙条件下培养含AFB1解毒酶基因的菌株经测定：甲菌液细胞密度小、细胞含解毒酶；乙菌液细胞密度大、细胞不含解毒酶。过程 应选择 菌液的细胞提取总RNA ，理由是_。 过程中，根据图示，可以看出与引物结合的模板是_。 检测酵母菌工程菌是否合成了AFB1解毒酶，应采用 方法。选取不含AFB1的饲料和某种实验动物为材料，探究该AFB1解毒酶在饲料中的解毒效果。实验设计及测定结果见下表，据表回答问题： 本实验的两个自变量，分别为 。 本实验中反映AFB1解毒酶的解毒效果的对照组是 。 经测定，某污染饲料中AFB1含量为100g/kg ，则每千克饲料应添加 克AFB1解毒酶解毒效果最好，同时节约了成本。 采用蛋白质工程进一步改造该酶的基本途径是：从提高酶的活性出发，设计预期的蛋白质结构，推测应有的氨基酸序列，找到相对应的 。
