1、19701970年，有两位科学家做了年，有两位科学家做了一个一个人人鼠细胞融鼠细胞融合合的实验，以证明细胞膜上的蛋白质分子是运的实验，以证明细胞膜上的蛋白质分子是运动的。那么，如何实现人动的。那么，如何实现人鼠细胞的融合，以鼠细胞的融合，以及动物细胞融合后还有什么用途呢？及动物细胞融合后还有什么用途呢？两个细胞正在融合受精作用2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体学习目标一：动物细胞融合（细胞杂交）1、概念：2、结果：形成单核的杂交细胞3、原理：细胞膜的流动性4、诱导方法物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒（最常用）“22个或多个动物细胞个或多个动物细胞”“1”1
2、”、“杂交单核细胞杂交单核细胞”思考：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话病毒会感染细胞，导致疾病。灭活丧失感染性，但保留融合活性。用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程：细胞核细胞核灭活病毒颗粒灭活病毒颗粒细胞核细胞核杂交单核细胞5、过程：动物细胞动物细胞AA动物细胞动物细胞BB诱导，融合诱导，融合（膜、质、（膜、质、核核融合）融合）11个完整的杂个完整的杂交细胞交细胞ABAB6、意义：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段；为制造单克隆抗体开辟了新途径。突破了有性杂
3、交方法的局限，使远缘杂交成为可能。7、应用：强调：效应B淋巴细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞抗体：能够与抗原发生特异抗体：能够与抗原发生特异性结合的性结合的免疫球蛋白免疫球蛋白。效应效应BB细胞细胞(浆细胞）浆细胞）记忆记忆BB细胞细胞学习目标二：单克隆抗体学习目标二：单克隆抗体BB淋巴细胞淋巴细胞增殖分化增殖分化受抗原刺激受抗原刺激能产生抗体的细胞是能产生抗体的细胞是浆浆细胞（即效应细胞（即效应BB细胞）。细胞）。抗体的传统生产方法:抗原抗原反复注射动物反复注射动物从动物的从动物的血清血清中分离抗体中分离抗体该法制备抗体的缺点：该法制备抗体的缺点：产量低、纯度低，且抗
4、产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度体的特异性差、灵敏度低。低。单克隆抗体（杂交瘤技术）读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念人们发现，动物在免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。单克隆抗体：单个B细胞克隆产生的化学性质单一、特异性强的抗体。资料分析提示1：对B细胞进行细胞培养可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。学习目标二：单克隆抗体一个一个BB淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分
5、泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术动物细胞融合技术单克隆单克隆抗体抗体既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体，又能大量增殖的细胞又能大量增殖的细胞1975年英国科学家米尔斯坦米尔斯坦和和柯勒柯勒的实验的实验BBBB、BB瘤瘤、瘤瘤瘤瘤（BB、瘤）、瘤）（一选）（一选）选选择性培养基择性培养基：只有只有杂交瘤杂交瘤细胞细胞才能存才能存活活获得产生相应获得产生相应抗体的抗体的BB细胞细胞（二选）：（二选）：选能产生所需选能产生所需专一抗体的杂专一抗体的杂交瘤细胞交瘤细胞体外培养体外培养小鼠腹腔内培养
6、小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：杂交瘤细胞特点：既能产生特异性既能产生特异性抗体，又能大量抗体，又能大量增殖。增殖。单克隆抗体制备过程注射抗原注射抗原效应效应BB淋淋巴细胞巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合、细胞融合、筛选筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选筛选，继续培养，继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔单克隆抗体思考：思考：此此过程利用的过程利用的原理和技术有哪些？原理和技术有哪些？免疫原理免疫原理细胞融合技术细胞融合技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术 22、该方案能达到预期效果吗？为什么？、该方
7、案能达到预期效果吗？为什么？44、图中、图中BB为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,_,又能又能_。11、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_33、AA是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,_,该细胞能够产生该细胞能够产生_55、CC过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段，其培养两个阶段，其中中_代以内的的细胞属于细胞株。代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体制备单克隆抗体BB细胞细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限
8、增殖原代原代传代传代5050BB体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AACC11、下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆、下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案菌抗体的实验方案3、单克隆抗体的应用：单克隆抗体的优点：单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、可大量制备特异性强、灵敏度高、可大量制备应应用于用于运载药物：制成运载药物：制成“生物导弹生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗治疗疾病：主要用于癌症治疗既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量
9、。作为诊断试剂作为诊断试剂（最广泛的用途）（最广泛的用途）：准确识别各种抗原物质，并特异性结合准确识别各种抗原物质，并特异性结合优点：优点：准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速“生物导弹生物导弹”单克隆抗体药物单克隆抗体药物获得杂种植株获得杂种植株用途用途诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导导原生质体融合原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物植物细胞全能性细胞全能性动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目原理原理比较植物体细胞杂交、动物
10、细胞融合获得杂种细胞获得杂种细胞、制备单克隆抗体制备单克隆抗体离心、电激、离心、电激、振动、振动、聚乙二醇聚乙二醇离心、电激、离心、电激、振动、振动、聚乙二醇聚乙二醇灭活病毒灭活病毒小结:三个重点过程三个“一”一个诱导动物细胞融合的新方法 灭活病毒一个新细胞 杂交瘤细胞一个优势 单克隆抗体特异性强、灵敏度高、可大量制备的优势动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程细胞核移植过程P55：1、植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。1、在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A、结果是相同的B、杂种细胞的形成过程基本相同C、操作过程中酶的作用相同D、诱导融合的手段相同B22、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和BB淋巴细淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是：胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是：淋巴细胞 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 小鼠骨髓瘤细胞 BB淋巴细胞自身融合细胞 淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞杂交瘤细胞AA、BB、CC、DD、C
