1、宫颈癌患者治疗前后 Tie-2 和 Ang-2 的表达水平及其对预后的预测价值任莹丛玲华何喻方来福摘要 目的 探討宫颈癌患者治疗前后 Tie-2 和 Ang-2 的表达水平及其对预后的预测价值。方法 对 2015 年 1 月2016 年 5 月我院诊治的 72 例宫颈癌患者回顾性分析，并选择同时期、同年龄段的体检人群 110 例作为对照组，比较宫颈癌患者治疗前后 Tie-2 和 Ang-2 的表达水平，分析死亡与生存患者临床资料间的差异，应用多因素 Cox 回归模型探究影响宫颈癌患者预后的独立危险因素，并应用受试者工作特征曲线评估对预后的预测价值。结果 宫颈癌患者治疗前血清与组织 Tie-2（
2、P=0.000）的表达水平均显著高于对照组，宫颈癌患者治疗前血清 Ang-2 水平显著高于对照组（P=0.000）;治疗后，宫颈癌患者的血清Tie-2 和 Ang-2 的表达水平显著低于治疗前（P=0.000，0.002）。在为期 24 个月的随访中，共发生全因死亡 31 例，死亡组的临床分期（P=0.000）、治疗后血清 Ang-2（P=0.000）和 Tie-2 水平（P=0.049）明显高于生存组。多因素 Cox 回归分析显示，治疗后 Ang-2 水平是影响宫颈癌患者预后的独立危险因素（P=0.000），临床分期期是宫颈癌患者预后的独立保护因素（P=0.006）。治疗后血清 Ang-2
3、水平预测宫颈癌患者预后的AUC 明显高于临床分期和 Tie-2（P=0.000），其最佳截点为1.22 ng/mL，敏感性和特异性分别为 87.10%和 92.68%。结论 宫颈癌患者 Tie-2 和 Ang-2 的血清和组织表达水平较高，治疗后血清 Ang-2 水平是影响预后的独立危险因素，并对预后具有较高的预测价值。关键词 血管生成素-2;Tie-2;宫颈癌;表达;预后中图分类号 R737.7文献标识码 A文章编号1673-9701（2020）07-0006-05Expression levels of Tie-2 and Ang-2 in patients with cervical c
4、ancerbefore and after treatment and their predictive value for prognosisREN YingCONG LinghuaHE YuFANG LaifuDepartment of Pathology，Yinzhou Peoples Hospital of Ningbo City，Ningbo315040，ChinaAbstract Objective To explore the expression levels of Tie-2 and Ang-2in the patients with cervical cancer befo
5、re and after treatment and theirpredictive value for prognosis.Methods Seventy-two patients with cervicalcancer treated in our hospital from January 2015 to May 2016 were analyzedretrospectively，and 110 people of the same age receiving healthy checkup inthe same period were selected as controls.The
6、expression levels of Tie-2 andAng-2 in the patients with cervical cancer before and after treatment werecompared，and the differences in clinical date between the death and thesurvival patients were analyzed.The multivariate Cox regression model wasapplied to test the independent risk factors affecti
7、ng the prognosis ofpatients with cervical cancer，and the receiver operating characteristiccurve was applied to evaluate the predictive value for prognosis.Results Theserum and tissue expression levels of Tie-2（P=0.000）inthe patients withcervical cancer before treatment were significantly higher than
8、 those in thecontrol group，and the serum Ang-2 level of the patients with cervical cancerbefore treatment was significantly higher than that in the control group（P=0.000）.The serum expression levels of Tie-2 and Ang-2 in the patientswith cervical cancer after treatment were significantly decreased c
9、omparedwith those before treatment（P=0.000，0.002）.During the 24-month follow-up，31 all-cause deaths were detected.The clinical stage（P=0.000），andpost-treatment serum Ang-2（P=0.000）and Tie-2（P=0.049）levels in thedeath group were significantly higher than those in the survival group.It wasfound by Mul
10、tivariate Cox regression analysis that the Ang-2 level was anindependent risk factor for the prognosis of the patients with cervical cancerafter treatment（P=0.000）and that the clinical stage II was an independentprotective factor for the prognosis of the patients with cervical cancer（P=0.006）.The AU
11、C of the Ang-2 level predicting the prognosis of thepatients with cervical cancer was significantly higher than that of theclinical stage and Tie-2 after treatment（P=0.000），of which the optimalcut-off point was 1.22 ng/mL，and the sensitivity and specificity were87.10%and 92.68%，respectively.Conclusi
12、on The serum and tissue expressionlevels of Tie-2 and Ang-2 in the patients with cervical cancer are relativelyhigh.The serum Ang-2 level after treatment is an independent risk factor forprognosis and has a high predictive value for prognosis.Key words Ang-2;Tie-2;Cervical cancer;Expression;Prognosi
13、s宫颈癌是常见的女性生殖系统肿瘤，且随着性开放和社会发展，我国宫颈癌的发病率较以往明显升高。早期宫颈癌表现多不典型，患者就诊和确诊时多已失去手术指征，因而具有较高的病死率（每年全世界有 26 万人死于宫颈癌）1。新生血管的生成是肿瘤发生、发展和转移的主要机制之一，也是影响患者预后的重要因素，其中，影响血管生成的相关因子是目前肿瘤早期诊断、治疗和预后评估的研究热点2。研究发现，血管生成素-2（Angiogenin，Ang-2）及其酪氨酸受体 Tie-2 参与了血管生成和血管重塑过程，且在不同病情的宫颈癌患者中有不同表达水平，可能与治疗疗效和预后有一定的相关性3，但对于患者远期预后的预测价值尚不十
14、分明确。为此，我院对 72 例宫颈癌患者进行了一项回顾性研究，现报道如下。1 资料与方法1.1 一般资料回顾性分析 2015 年 1 月2016 年 5 月我院诊治的宫颈癌患者，纳入标准：临床及病理检查符合宫颈癌诊断与治疗指南（第 4 版）4中宫颈癌的诊断;预后分期期;均于我院行宫颈癌根治术治疗及术后辅助化疗;新发患者，无前期治疗干扰。排除标准：无法耐受相关治疗而中途终止治疗的患者;患者依从性较差，无法配合随访工作者。共纳入 72 例患者，年龄 3166 岁，平均（53.134.09）岁，期 18 例，期41 例，期 13 例;此外，选择 110 例经病理学检测排除恶性肿瘤的健康体检患者，两组
15、患者的一般资料比较无统计学差异（P0.05）。见表 1。1.2 治疗方案根据宫颈癌及癌前病变规范化诊疗指南5，预后分期为的宫颈癌患者均推荐行术后辅助化疗。其中，临床期患者行单纯 FU 类药物化疗;临床期实施以 5-FU为基础联合铂类的方案化疗，期患者实施以 5-FU 联合铂类化疗联合治疗。1.3 免疫组化检查1.3.1 组织芯片制备由高年资病理医师重判每例的 HE 切片，在相应癌组织和周围正常组织各取 3 个区域，取样针直径 1.5 mm，设计 78 点阵，共 56 位点，组织芯间距3.0 mm。52恒温烤箱融蜡，4冰箱存放备用。1.3.2 免疫组化检查采用组织芯片系统（Quick-Ray，U
16、T06，UNITMA，Korea）进行分析。组织芯片切片经二甲苯脱蜡、乙醇脱二甲苯、水化。加热 pH6.0 柠檬酸缓冲液至98并行抗原修复 12 min 后分别滴加一抗 Tie-2（ab13585，美国 Abcam）和 Ang-2 抗体（ab78106，Abcam，美国 Abcam），二抗为通用型 IgG 抗体-HRP 多聚体，室温或 37孵育 30 min。染色情况由 2 名高年资病理医师分别评估，表达量值由 X-tile 软件程序（Rimm Lab，Yale University，New Haven，CT，USA）进行定量测量。1.3.3 血清学检查分别于治疗前和治疗完成后抽患者的静脉血样
17、 3 mL，离心后取血清待测。将患者的血清样本统一标号，使用 Ang-和 Tie-2 相应酶联免疫吸附法试剂盒（日本 IBL 生产，购自深圳科润达生物）及配套试剂，根据说明操作，将标准样品和测试样品使用自动酶标仪（雷杜 RT-500）进行定量测定。1.4 观察指标比较宫颈癌患者治疗前后 Tie-2 和 Ang-2 的表达水平，分析预后良好与预后不佳患者临床资料间的差异，应用多因素 Cox 回归模型研究影响宫颈癌患者预后的独立危险因素，并应用受试者工作特征曲线评估对预后的预测价值。1.5 随访根据病案信息每 2 个月对患者进行一次随访，终点事件为全因死亡。随访时间为 24个月，随访截止于 201
18、8 年 6 月 1 日。预后不及定义为在随访期间死亡。1.6 统计学方法数据处理采用 SPSS 25.0 软件，计数资料以n（%）表示，分类变量的组间比较采用2 检验，等级变量采用秩和检验;计量资料以均数标准差表示，多组间比较采用方差分析，两组比较采用 SNK 法。多因素 Cox 回归分析探究危险因素，并采用 Logrank 检验计算风险比（Hazard ratio，HR）。当 P0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1 对照组和宫颈癌患者血清与组织 Tie-2 和 Ang-2 的表达水平比较宫颈癌患者治疗前血清与组织 Tie-2（t=9.288，23.737，P=0.000）的表达水平均
19、显著高于对照组，宫颈癌患者治疗前血清与组织 Ang-2 水平显著高于对照组（t=22.882、25.476，P=0.000）;治疗后，宫颈癌患者的血清 Tie-2 和 Ang-2 的表达水平显著低于治疗前（t=14.988、3.497，P=0.000、0.002），见表 2。手术和放化疗后完全缓解的患者找不到病灶，故而无法取样和检测，因此未比较治疗后组织 Ang-2 和 Tie-2 表达水平。2.2 宫颈癌不同预后患者的临床资料比较在为期 24 个月的随访中，共发生全因死亡 31 例，死亡组的临床分期（Z=4.027，P=0.000）、治療后血清 Ang-2（t=3.820，P=0.000）和
20、 Tie-2 水平（t=2.030，P=0.049）明显高于生存组。见表 3。2.3 影响宫颈癌患者预后的多因素 Cox 回归分析多因素 Cox 回归分析显示，治疗后 Ang-2 水平是影响宫颈癌患者预后的独立危险因素（HR=28.959，P=0.000），临床分期期是宫颈癌患者预后的独立保护因素（HR=0.174，P=0.006）。见表 4。2.4 不同指标预测宫颈癌患者预后的 ROC 曲线应用治疗后血清 Ang-2 水平预测宫颈癌患者预后的 AUC 明显高于临床分期和 Tie-2（Z=4.282，5.062，P=0.000，0.000），其最佳截点为1.22 ng/mL，敏感性和特异性分别
21、为 87.10%和 92.68%，见图 1、表 5。3 讨论全球宫颈癌的发病率从 1980 年的 37.8 万例/年增加到 2012 年的 52.8 万例/年，我国是宫颈癌高发地区之一6。尽管基于宫颈细胞学和 HPV 检测的宫颈筛查方案可以有效降低宫颈癌的发病率，但由于患者社会、宗教和心理因素的影响，我国高危女性接受标准化筛查的比例还较低，导致较大比例的宫颈癌患者就诊时已出现周围或远处转移，生存情况和生活质量均较低7。血管的生成对肿瘤进展至关重要，血管生成相关的标志物在多种肿瘤中的高表达及其作用通路得到了大量研究证实8，并已显示出作为治疗中晚期的治疗靶标的巨大前景9。人 Ang 及其受体 Ti
22、e 系统主要由三种分泌型配体（Ang-1、Ang-2 和 Ang-4）和两种酪氨酸激酶受体（Tie-1 和 Tie-2）组成10，以上三种 Ang 可以直接与 Tie-2 结合并导致Tie-2 的磷酸化和多聚化，从而引发下游信号传导并调节血管重塑和成熟11。Ang-1 和Ang-4 广泛表达于人类静息脉管系统的内皮细胞，具有维持血管成熟和稳定的作用;而Ang-2 在血管重塑和血管生成期间在内皮细胞中表达，并介导血管的重塑和外向型生长12。本研究通过对 72 例宫颈癌患者及 110 例对照组宫颈组织和血清 Ang-2 與 Tie-表达 2水平进行分析，结果显示，与对照组相比，宫颈癌患者在治疗前后
23、的组织和血清 Ang-2 与Tie-2 水平明显升高，这显示，宫颈癌患者的肿瘤组织及外周血中存在较高的 Ang-2 与Tie-2 表达。肿瘤的血管生成不仅涉及既往存在的血管生长，也与新生血管的出现等生理过程密切相关，这其中，血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）和 Ang-2 等在内的影响血管生成的调节因素起到了重要作用13。目前基于 VEGF的相关机制已有大量研究证实，其相关生物制剂也在临床治疗中得到了一定应用。与 VEGF促进原有血管内皮生长的作用不同，血管生成素（Ang）家族在血管形成、成熟、修复和通透性的调节中均起到了重要作用
24、，并且与癌细胞侵袭和转移密切相关14。作为 Ang 家族中作用效果最强的 Ang-2，具有极强的破坏原有血管结构并增强内皮细胞对 VEGF 敏感性的作用15。还有研究显示，除了 VEGF 和 Ang-2 的共同表达促进了新的血管产生之外，Ang-2 还可以在不依赖 VEGF 的条件下促进血管内皮细胞的迁移和增殖，从而促进血管重塑以及转移区域血管生成16，这一作用被认为与 Ang-2 与其血管内皮特异性酪氨酸受体Tie-2 有关17。而本研究还显示，治疗后宫颈癌患者的血清 Ang-2 与 Tie-2 表达水平均出现了显著下降，但仍高于对照组，可见手术联合化疗治疗可以较为明显地降低患者 Ang-2
25、 及其受体Tie-2 的表达水平，但患者治疗后仍有一定程度的高表达状态，这可能是患者发生远期转移和预后不良的重要因素。通过对治疗后患者进行为期 24 个月的随访，共发生死亡事件 31 例，而对比死亡组与生存组患者的相关临床资料，结果显示，死亡组具有更高的临床分期和治疗后血清 Ang-2水平，且多因素 Cox 回归分析显示，治疗后血清 Ang-2 水平是预后的独立危险因素，而期患者的预后明显优于其他患者。分析与 Tie-2 相比，Ang-2 与治疗后预后具有更高的相关性的原因，可能与 Ang-1/Ang-2 表达平衡失调18，以及 Ang-2 可以通过与内皮细胞、间充质细胞和肿瘤细胞上的整联蛋白
26、直接作用而发挥 Tie-2 非依赖性生物学效应有关19。尽管目前宫颈癌相关手术和化疗研究已取得一定进展，但对于患者治疗后的预后评估尚无较好的定量指标。本研究通过应用 ROC 曲线对不同指标预测宫颈癌患者治疗后的生存情况进行分析，结果显示，治疗后血清 Ang-2 水平预测宫颈癌患者预后的 AUC 明显高于临床分期和 Tie-2，以最佳截点（1.22 ng/mL）预测患者 2 年生存的敏感性和特异性分别为 87.10%和 92.68%。临床研究表明，肿瘤血管密度与各种实体瘤患者的不良预后之间存在直接相关性，而治疗后仍高表达的 Ang-2 可以加速新生血管生成，并促进残留肿瘤组织的生长、扩散和远处转
27、移，这也为应用治疗后 Ang-2 水平预测预后提供了理论依据。这与Li P 等20应用血清 Ang-2 水平预测乳腺癌患者预后的研究结论较为一致，而 Diaz-Sanchez A 等21使用血清 Ang-2 水平预测肝癌的侵袭力的研究也取得了较好的效果。综上所述，宫颈癌患者 Tie-2 和 Ang-2 的血清和组织表达水平较高，治疗后血清 Ang-2 水平是影响宫颈癌患者预后的独立危险因素，并对患者的预后具有较高的预测价值。参考文献1 王临虹，赵更力.中国子宫颈癌综合防控指南J.中国妇幼健康研究，2018，29（1）：1-3.2 Jayson GC，Kerbel R，Ellis LM，et a
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