1、课时作业(三十九)第39讲微生物的培养与应用1下列有关微生物营养物质的叙述，正确的是()A是碳源的物质不可能同时是氮源B碳源都能提供能量C除水以外的无机物只能提供无机盐D无机氮源也能提供能量2下列为某同学在培养金黄色葡萄球菌实验中的部分操作步骤，其中正确的是()A培养基中蛋白胨、牛肉膏溶化后，直接补充蒸馏水至100 mLB用1 mol/L NaOH调试pH，使pH为5.06.0C加压至98 kPa之前，要彻底排出锅内的冷空气D将接种环放在酒精灯上灼烧，灭菌后立即伸入菌种试管内挑取少量菌种3某同学在101、102、103倍稀释液的平均菌落数为2 760、295和46，则菌落总数(个/mL)为()
2、A2.76104B2.95104C4.6104 D3.7751044(双选)分离纤维素分解菌的实验过程中操作有误的是()A经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上B富集培养这一步可省略，但培养纤维素分解菌少C经稀释培养后，用苏丹红染色D对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上5产生标准菌落的最初数目和培养基分别是()A同种少数细菌，液体培养基B许多细菌，液体培养基C同种少数细菌，固体培养基D许多细菌，固体培养基6用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时()可以用相同的培养基都需要使用接种针进行接种都需要在火焰旁进行接种都可以用来计数活菌ABCD7通过选择培养基可以从混杂的
3、微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌。利用上述方法不能从混杂的微生物群体中分别分离出()A大肠杆菌 B霉菌 C放线菌 D固氮细菌82011淮阴模拟某校生物兴趣小组制订计划从牛粪中筛选出纤维素分解菌，要制备选择培养基，关于选择培养正确的叙述是()A可以增加纤维素分解菌的浓度B可以减少纤维素分解菌的浓度C所用培养基是固体培养基D选择培养不可以省略，但可以重复操作92011揭阳模拟下列关于微生物分离和培养的有关叙述，错误的是()A微生物培养前，需对培养基进行消毒B测定土壤样品中的细
4、菌数目，常用菌落计数法C分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度D分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源10“筛选”是分离和培养生物新类型常用的手段，下列有关技术中不能筛选成功的是()A在全营养的培养基中，筛选大肠杆菌B在尿素固体培养基中，筛选能够分解尿素的微生物C用纤维素为唯一碳源的培养基，筛选能够分解纤维素的微生物D在培养基中加入不同浓度的氯化钠，筛选抗盐突变体植物112012江门模拟 (双选)不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是()A氮源物质为该微生物提供必要的氮素B碳源物质也是该微生物的能源物质C无机盐
5、是该微生物不可缺少的营养物质D水不是该微生物的营养要素之一12(双选)下列有关土壤微生物的培养和分离的叙述，正确的是()A土壤的称取和土壤溶液的稀释都应该在火焰旁操作B用于培养的培养基均必需含有碳源、氮源、无机盐和水C在适宜条件下培养，某培养基上的大肠杆菌将呈“S”型增长D平板划线法一般划五个区域，要先将菌液稀释成5个不同浓度梯度 13.塑料袋造成的“白色污染”早已成为地球公害，塑料袋的自然分解需要201000年不等。2008年7月3日加拿大媒体报道：16岁的高中生丹尼尔伯德从土壤中找到了一类假单胞杆菌，能将聚乙烯塑料的自然降解过程缩短至3个月，而且分解产物只有水和二氧化碳。伯德也因此被誉为“
6、塑料袋的克星”。以下是伯德寻找到聚乙烯降解菌的大致过程。请回答：图K391(1)根据你的生活经验推测，伯德这项研究的“土壤样品”最可能取自于_。(2)图中“”表示对土壤悬浮液进行一系列的_，目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞。从而能在号培养基表面形成单个_。(3)号培养基属于_培养基，其作用是使目的菌能“脱颖而出”。如图采用的接种方法为_。使用号培养基的目的是使目的菌数目增多，培养基中必须包含水、无机盐、_等基本营养成分。从物理性质来看，号培养基中不能添加_。(4)为避免杂菌污染培养物和环境，植物组织培养和微生物培养的培养基在接种前和完成实验后都要进行_；接种时要在_操作。 14.尿素是
7、一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，下列是从土壤中分离分解尿素细菌的有关问题，请分析回答：图K392(1)上图是利用_法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步_分散到培养基的表面。(2)如果要对培养的菌落进行纯化，在培养基上划线操作中，操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环，目的是对接种环进行_。(3)下表是一种培养基配方： 成分KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O葡萄糖尿素琼脂 含量1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g15.0 g 配制培养基的操作步骤是()a调节pHb计算c溶化d称量e灭菌Aabcde Be
8、bdcaCbdcae Dbdcea该培养基属于_培养基(多选)。A液体B固体C鉴定D选择E天然使用该培养基的目的是_。在培养基中加入_指示剂，可初步鉴定出该种细菌能分解尿素。(4)在进行分离分解尿素细菌的实验中，A同学从培养基筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有_。(多选)A由于土样不同 B由于培养基污染 C由于操作失误 D没有设置对照15饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙等物质，很难被动物吸收利用，还影响对其他营养物质的利用。若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以吸收利用的磷酸盐等。以下是科研人员从作物根部土壤中分离产植酸酶的
9、菌株的过程示意图。请分析作答。图K393(1)培养基中除了添加植酸钙以外，应含有_、_、水、无机盐等基本营养物质。(2)为防止杂菌污染，要对培养基和培养皿等进行_，而且须将接种后的培养皿呈_状态放置。(3)接种以前进行的一系列操作，目的是在培养皿表面形成_。根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的_就能大致推测出样品中的活菌数。(4)由于植酸钙的不溶解性，使培养基中形成白色浑浊。产植酸酶的菌株会水解植酸钙，菌落的周围将形成透明的区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶。实验结果显示AE五种菌株中，_是产植酸酶的理想菌株。(5)获得目的菌以后，若要用于植酸酶的生产，还需
10、要进行_。162012韶关月考某实验小组欲从土壤中筛选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，设计实验步骤如下，请给予合理的补充。(1)采样与培养：将采集的土样混匀后称取1 g，置于经过灭菌处理的_(填“固体”或“液体”)培养基中，28 振荡培养。(2)接种与选择：为避免培养液中菌体浓度过高，需将培养液进行_处理。之后，将菌液涂布接种于以_为唯一碳源的固体培养基上，30 条件下培养。为避免污染，需将培养皿呈_状态放置。此外，为排除其他因素的影响，提高实验可信度，本步骤需设计_作为空白对照。(3)筛选与纯化：将适量的碘液滴加在平板中的菌落周围，如果菌落周围的现象是_，则说明此种菌能够_。从平板中挑取实验效果明
11、显的目的菌株，采用_法接种于新的培养基平板，可对菌株进行进一步的纯化。课时作业(三十九)1D解析 A、B选项的表达不完整。有的碳源只能是碳源，如CO2，有的碳源可以同时是氮源，如NH4HCO3，有的碳源可以同时是能源，如葡萄糖，有的碳源可以同时是氮源和能源，如蛋白胨。C选项中，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样，如CO2为自养微生物的碳源，NaHCO3可作为自养微生物的碳源和无机盐，而NaCl则只能提供无机盐。D选项中，无机氮源提供能量的情况是存在的，如NH3可以为硝化细菌提供能量和氮源。2C解析 A选项应该先加水，后加热溶化，否则培养基会被烧焦；B选项用1 mol/L NaOH调试pH是正
12、确的，但金黄色葡萄球菌是细菌，本实验应把pH调为7.47.6；C选项加压至98 kPa之前，要彻底排出锅内的冷空气，是为了使高压锅能够在很短的时间内达到较高的温度，使锅内充满水蒸气，并使水蒸气分子运动达到尽可能快的速度，穿透各微生物菌体及芽孢等；D选项接种环放在酒精灯上灼烧灭菌是应该的，但不能立即伸入菌种试管内，这样会烫死菌种。3D解析 菌落计数法，注意是计算不同稀释度的平均菌落数。首先选择平均菌落数在30300之间的，当只有一个稀释倍的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落乘以稀释倍数即为该样品的细菌总数；若有两个稀释倍的平均菌落数均在30300之间，则按两者菌落总数之比值来决定，若比值小于
13、2应采取两者的平均数，若大于2，则取其中较小的菌落总数。本题295、46在30300之间，46103与295102比值为1.6。应取二者平均数(46103295102)23.775104。若所有稀释倍数的菌落数均不在30300之间，则应以最接近300或30的平均菌落乘以稀释倍数。4AC解析 经选择培养后，再经稀释，才能将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上；富集培养可省略；经稀释培养后，用刚果红染色，设置对照能证明经富集培养的确得到了欲分离的微生物。5C解析 在液体培养基中生活的细菌，无论是一个还是许多，肉眼都是不可见的。在固体培养基上的细菌，当数目较少时也是不可见的。当固体培养基上有许多细菌
14、并且集中在较小范围时，肉眼可见。而菌落是一个细菌或几个细菌的子细胞群体，形成于固体培养基上，有一定的形态结构，所以肉眼可见。同种细菌形成的菌落，形态结构是相同的。如果有许多细菌形成的菌落，就不可能有比较标准的形态，因为这许多细菌第一不可能是同一种细菌，第二不可能在培养基的同一个点上。6C解析 平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基；平板划线法采用接种环进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作；纯化时，要进行无菌操作，需要在火焰旁接种，避免空气中的微生物混入培养基；平板划线法一般用于分离而不是计数。7A解析 根据题意，固氮细菌的生长不需要从培养基上获得氮源，可在缺乏氮源的培养基上正常生长
15、；加入青霉素的培养基上不能生长细菌和放线菌，则可收获霉菌和酵母菌；加入酚的培养基使细菌和霉菌不能正常生长，而放线菌却能利用酚作原料合成自身的产物。8A解析 选择培养基是根据某种微生物对特定营养成分的“嗜好”，专门在该培养基中加入该营养物，使其成为一种加富培养基，目的是增加该微生物的浓度，如纤维素分解菌的选择培养基，属于液体培养基，可增大菌体与营养物的接触，选择培养可省略，但培养的菌体可能较少，也可以重复操作。9A解析 微生物培养前，需对培养基进行灭菌，而不是消毒；测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法而一般不用活菌计数；分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度以便能从中选择出菌落数在303
16、00间的平板进行计数；分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源。10A解析 筛选微生物应该用选择培养基。选择培养基的含义是：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进需要的微生物的生长，目的是从众多微生物中分离所需要的微生物。在全营养的培养基中，达不到筛选大肠杆菌的目的。11BD解析 本题考查微生物的营养要素以及理解应用能力、判断能力。CO2可为自养型微生物提供碳源，但不能提供能源。水也是该微生物的营养要素之一。12AC解析 土壤微生物有多种，在提取和培养时，土壤的称取和土壤溶液的稀释都应该在火焰旁操作；配制培养基时，要根据不同的微生物特点配制，自养型可不添加碳源
17、，固氮菌可不添加氮源；适宜条件下，某培养基上的大肠杆菌还是会受到空间和资源的限制，只能呈“S”型增长；平板划线法是通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面的。涂布平板法则要进行一系列的梯度稀释。13(1)垃圾场(2)梯度稀释菌落(3)选择稀释涂布平板法碳源和氮源凝固剂(或琼脂)(4)高压蒸汽灭菌酒精灯火焰旁解析 本题考查微生物培养，属于考纲规定的理解运用层次。 (1)要分离出能分解特定物质的目的菌，应该在富含该物质的场所取土，一般垃圾场塑料袋较多。(2)从“目的是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞”可推知，土壤悬浮液应进行一系列浓度梯度的稀释。在培养皿中可得
18、到由单个细菌形成的菌落。(3)号培养基能筛选出分解聚乙烯塑料的目的菌，所以号培养基从功能上属于选择培养基。图中接种的方法经历多次浓度稀释，所以接种方法为稀释涂布平板法。号培养基的目的是使目的菌数目增多，即扩大培养，所以培养基中除了水和无机盐外，还应加入氮源和碳源等营养成分。一般扩大培养用的是液体培养基，所以不能添加凝固剂(或琼脂)。(4)培养基在接种前要用高压蒸汽进行灭菌，完成实验后为了防止杂菌污染，还要用高压蒸汽进行灭菌，并且接种时为了防止空气的杂菌污染培养基，应在酒精灯火焰旁进行。14(1)平板划线稀释(2)灭菌(3)D BD筛选出能分解尿素的细菌酚红(4)ABC解析 (1)根据图示可知接
19、种的方法为平板划线法，操作上应注意每次划线前要灼烧，冷却后从上一区划线末端开始划 首尾区不重叠。(2)灼烧接种环，目的是对接种环进行灭菌。(3)根据教材可知制备培养基的操作顺序：bdcea；该培养基属于固体培养基，也属于选择培养基；使用该培养基的目的是筛选出能分解尿素的细菌；在培养基中加入酚红指示剂，可初步鉴定出该种细菌能分解尿素。(4)A同学的实验结果产生的原因可能有：由于土样不同，由于培养基污染，由于操作失误。15(1) 碳源氮源 (2)(高压蒸汽)灭菌倒置 (3)单个菌落菌落数(4)E (5)扩大培养解析 (1)从土壤中分离培养植酸酶的菌株的过程中，培养基中加入植酸钙，以抑制不需要的微生
20、物的生长，促进所需要的微生物的生长需要，此外还要充足的碳源和氮源等营养物质。实验的灭菌一般有：灼烧灭菌(接种环、接种针或其他金属用具)、干热灭菌(玻璃器皿和金属用具等)、高压蒸气灭菌(培养基和培养皿)。(2)将接种后的培养皿制平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的温度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(3)当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。(4)根据题干提供的信息，E菌落的周围形成特别透明的区域，是产植酸酶的理想菌株。(5)获得目的菌以后，若要用于植酸酶的生产，还需要进行扩大培养。16(1)液体(2)系列稀释(或“梯度稀释”)淀粉倒置未接种的空白培养基(或“接种等量无菌水的培养基”)(3)出现透明圈分泌淀粉酶使淀粉发生水解平板划线解析 (1)因为后面要进行涂布，所以应该用液体培养基来培养。(2)减小培养液菌体浓度一般用稀释法。由于题目要求选出能分泌淀粉酶的芽孢杆菌，所以培养基就应只以淀粉为碳源。倒置可以减少培养基受污染，为排除其他因素影响，需要设置未接种的空白的培养基作对照组。(3)淀粉被水解，培养基会出现透明圈的现象。用平板划线法来培养，可进一步纯化菌种。
