1、考点35微生物的培养技术及应用第一关小题自助餐自选狂刷题组一刷基础小卷固知识12022甘肃兰州一中高三试题平板冷却凝固后要将平板倒置，其目的是()A利于大肠杆菌的生长B防止空气进入C利于培养基的冷却D防止皿盖冷却水落入培养基造成污染2经典模拟下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是()成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊红美蓝蒸馏水含量10 g10 g2 g0.4 g0.065 g1 000 mLA.从物理性质看，该培养基属于液体培养基；从用途看，该培养基属于选择培养基B该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨C该培养基缺少提供生长因子的物质D该培养基调节合适的pH后就可以接种使用
2、3经典模拟微生物培养过程中，要十分重视无菌操作。现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，以防止杂菌污染。请分析下列操作中错误的是()煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢接种操作要在酒精灯火焰附近进行无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌培养基要进行高压蒸汽灭菌加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌ABCD42022四川乐山四校联考某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验，实验过程包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察与计数。下列与此实验相关问题的叙述中，正确的是()A实验用过的带菌培养基经过加热后才能倒掉B.利用平板划线法对细菌进行
3、分离、纯化并计数C.观察细菌培养的实验时，最好是在另一平板上接种清水作为对照实验D培养基中含有的蛋白胨、淀粉可分别为细菌培养提供氮源和碳源52022安徽省黄山市高三 “八校联考”蓝白斑筛选是基因工程中筛选重组目的基因常用的一种方法，表现为培养基上出现蓝白颜色的菌落，可以颜色为依据直接筛选重组菌。用于筛选的菌为半乳糖苷酶缺陷型菌株，这种宿主菌中编码半乳糖苷酶的部分缺失，不具有生物活性。用于蓝白斑筛选的质粒载体一般含有抗性基因和将宿主菌半乳糖苷酶缺失部分补全的序列，在这段序列中还含有多个限制性酶切位点，便于插入目的基因。半乳糖苷酶能够作用于一种无色化合物Xgal，使其变成蓝色物质。回答下列问题：(
4、1)玻璃和金属材质的实验器材利用_方法灭菌。(2)培养基灭菌后，需要冷却到_左右时，才能倒平板。倒平板后，平板冷凝要将平板倒置，其原因是_。(3)为防止杂菌污染，培养基中要添加_。蓝白斑筛选能成功，是因为培养基中添加了_。(4)最终培养基出现的白色的菌落是()A目的基因和载体结合B只含目的基因C只含载体(5)若需要长期保存该菌种，可采用的方法是_。题组二刷提升小卷培素养62022湖北襄阳市模拟下列有关细菌培养的叙述，正确的是()A不同细菌的菌落特征一般相同B在培养基中加入青霉素可促进细菌生长C用液体培养基培养破伤风杆菌的过程中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长D培养醋酸杆菌时，往培养液中通入氧气可
5、以促进菌体快速增殖72022辽宁沈阳市模拟下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是()A微生物培养基中并不都必须添加碳源或氮源B.倒平板时，应将打开的培养皿皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧D实验结束后，带菌的培养基必须经灭菌处理后才能倒掉82022天津市高三二模为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验。同学甲进行过程的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示。下列叙述错误的是()A步骤与步骤中培养基成分的最大区别是步骤的培养基中石油是唯一碳源B步骤振荡培养的目的是提高培养液溶氧量，同时使菌体与培养液充分
6、接触C图B培养基的结果可能是由于涂布不均匀造成的D步骤后取样测定石油含量的目的是筛选出能分解石油的细菌92022湖北襄阳市一模巴氏杀菌乳是以生牛(羊)乳为原料，经巴氏杀菌等工序制得的液体产品，杀灭了牛奶中有害菌群的同时也保存了营养物质和纯正口感。据国家标准每毫升合格巴氏杀菌乳中细菌总数不得超过50 000个。某兴趣小组进行了新鲜牛奶合适的消毒温度的探究，相关实验操作不合理的是()A配制牛肉膏蛋白胨培养基并在121 、100 kPa 条件下处理1530 minB将等量的新鲜牛奶分别置于60 、70 、 80 、 90 恒温水浴锅中处理30 minC.对处理后的牛奶进行梯度稀释后，利用涂布法接种平
7、板并在37下培养24 hD统计培养基上全部菌落数，以菌落数最少组的处理温度作为牛奶最适消毒温度10某同学从植物中提取了W物质，并研究其抑菌效果。在平板中央处打孔后加入提取物W，在适宜条件下培养一段时间测量抑菌圈的大小并计算抑菌圈平均增幅速率，实验方法和结果如下图所示。据图分析下列说法错误的是()A将一定量菌液与冷却后的灭菌培养基混匀并倒平板可得到试验菌平板B在平板上打孔的钢管需要灼烧灭菌，目的是防止微生物污染平板C提取物W在培养基中扩散，加入提取物W后的2小时可获得最佳抑菌效果D菌体浓度、提取物W的浓度和扩散时间会对抑菌圈直径的大小造成影响题组三刷专项小卷提考能112022阜新市高三模拟(不定
8、项选择)下列关于无菌操作的叙述正确的是()A对培养皿中的菌株进行稀释时，盛有无菌水的试管仅消毒处理，会造成杂菌污染B.加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌C.利用组织培养技术繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒D接种时灼烧接种环后立刻对菌种划线122021江苏苏州市三模(不定项选择)自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2的细菌，将玉米种子用自身固氮菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如图。以下叙述正确的是()A.步骤土样应取自当地深层土壤；步骤将土壤悬浮液稀释了1 000倍B自生固氮菌是自养型生物，不可用血细胞计
9、数板来计数土壤悬浮液中的菌体数C步骤需充分振荡20 min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中D步骤所用的接种工具是涂布器，该选择培养基的特点是不添加氮源132022江苏盐城市高三模拟(不定项选择)乳链菌肽对许多革兰氏阳性菌，尤其是对引起食品腐败的细菌具有强烈的抑制作用，研究人员从新鲜牛奶中获得多株产乳链菌肽的菌株，筛选并纯化菌株。为了解乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式是抑制细菌生长、溶菌性杀死细菌(细胞破裂)还是非溶菌性杀死细菌，科研人员将乳链菌肽加入革兰氏阳性菌菌液中，随着发酵时间的延长，检测革兰氏阳性菌的活菌数、除去菌体的上清液中核酸含量，实验结果如图所示。下列叙述正确的是()
10、A制备培养基时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量氯化钠，以维持渗透压B.纯化的菌株临时保藏需要先接种到试管的固体斜面培养基上在合适的温度下培养，长成菌落后放入4冰箱中保藏C以上实验表明乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式为抑制细菌生长D口服乳链菌肽，不会改变人体肠道中的正常菌群，也不会进入内环境，推测可能的原因是被消化道中蛋白酶所降解而被人体消化14(不定项选择)漆酶属于木质降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述正确的是()A生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品B筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶
11、的菌落C在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化D斜面培养基中含有大量营养物，可在常温下长期保存菌株15(不定项选择)做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述不正确的是()A高压灭菌加热结束后，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C为了防止污染，接种环经灼烧灭菌后应趁热快速挑取菌落D用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上16(不定项选择)秸秆还田可增加土壤肥力，缓解环境污染。为分离分解纤维素的微生物菌种，实现废物的资源化利用，研究人员设计了“土壤取样选择培养梯度稀释涂布平板挑选菌株”的实验流程。下列叙述正确的是()A.配制培养
12、基时，应在高压蒸汽灭菌之后调节pHB选择培养时，应使用纤维素为唯一碳源的培养基C进行梯度稀释时，应在酒精灯火焰旁完成各种操作D挑选菌株后，应将使用过的培养基进行灭菌后再丢弃题组四刷真题小卷登顶峰172021天津卷下列操作能达到灭菌目的的是()A用免洗酒精凝胶擦手B制作泡菜前用开水烫洗容器C在火焰上灼烧接种环D防疫期间用石炭酸喷洒教室182021浙江6月选考下列关于原生质体和细胞计数的叙述，错误的是()A测定植物原生质体的密度时，可用血细胞计数板B红墨水不能进入活细胞，可用于检测细胞的存活状态并计数C涂布分离法和划线分离法均能得到单菌落，都可用于细胞计数D酵母菌在液体培养基中培养一段时间后，可用
13、比浊计测定其密度192021山东卷解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是()A甲菌属于解脂菌B实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源C可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比D该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力202021北京卷人体皮肤表面存在着多种微生物，某同学拟从中分离出葡萄球菌。下述操作不正确的是()A对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌B使用无菌棉拭子从皮肤表面取样C用取样后的棉拭子在固体培养基上涂布D观
14、察菌落的形态和颜色等进行初步判断212021山东卷含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是()A.乙菌的运动能力比甲菌强B为不影响菌的运动需选用液体培养基C该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量D.穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染222020浙江7月下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是()A利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物B配
15、制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pHC酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒D适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化第二关大题自助餐自选精做题组一等级考试题专项练12021湖南卷大熊猫是我国特有的珍稀野生动物，每只成年大熊猫每日进食竹子量可达1238 kg。大熊猫可利用竹子中8%的纤维素和27%的半纤维素。研究人员从大熊猫粪便和土壤中筛选纤维素分解菌。回答下列问题：(1)纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即_。为筛选纤维素分解菌，将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以_为唯一碳源的固体培养基上进行培养，该培养基从功能上分类属于_培养基。(2)配制的培养基必须进行灭菌处理，目的是
16、_。检测固体培养基灭菌效果的常用方法是_。(3)简要写出测定大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数的实验思路_。(4)为高效降解农业秸秆废弃物，研究人员利用从土壤中筛选获得的3株纤维素分解菌，在37条件下进行玉米秸秆降解实验，结果如表所示。在该条件下纤维素酶活力最高的是菌株_，理由是_。菌株秸秆总重(g)秸秆残重(g)秸秆失重(%)纤维素降解率(%)A2.001.5124.5016.14B2.001.5323.5014.92C2.001.4229.0023.322.2021浙江1月，节选回答下列(一)小题：(一)某环保公司从淤泥中分离到一种高效降解富营养化污水污染物的细菌菌株，制备了固定化菌株。(
17、1)从淤泥中分离细菌时常用划线分离法或_法，两种方法均能在固体培养基上形成_。对分离的菌株进行诱变、_和鉴定，从而获得能高效降解富营养化污水污染物的菌株。该菌株只能在添加了特定成分X的培养基上繁殖。32021广东卷中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜(甘蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖)为原料，在实验室发酵生产PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整体利用价值。工艺流程如图。回答下列问题：(1)为提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液体培养基中将蔗糖作为_，并不断提高其浓度，经多次传代培养(指培养一段时间后，将部分培养物转入新配的培养基中继续培养)以获得目标菌株
18、。培养过程中定期取样并用_的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况。此外，选育优良菌株的方法还有_等。(答出两种方法即可)(2)基于菌株H嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统，其培养基盐浓度设为60 g/L，pH为10，菌株H可正常持续发酵60 d以上。该系统不需要灭菌的原因是_。(答出两点即可)(3)研究人员在工厂进行扩大培养，在适宜的营养物浓度、温度、pH条件下发酵，结果发现发酵液中菌株H细胞增殖和PHA产量均未达到预期，并产生了少量乙醇等物质，说明发酵条件中_可能是高密度培养的限制因素。(4)菌株H还能通过分解餐厨垃圾(主要含蛋白质、淀粉、油脂等)来生产PHA，
19、说明其能分泌_。42021浙江6月，节选回答下列(一)小题：(一)回答与甘蔗醋制作有关的问题：(1)为了获得酿造甘蔗醋的高产菌株，以自然发酵的甘蔗渣为材料进行筛选。首先配制醋酸菌选择培养基：将适量的葡萄糖、KH2PO4、MgSO4溶解并定容，调节 pH，再高压蒸汽灭菌，经_后加入3%体积的无水乙醇。然后将 10 g 自然发酵的甘蔗渣加入选择培养基，振荡培养 24 h。用_将少量上述培养液涂布到含 CaCO3的分离培养基上，在30培养48 h。再挑取分离培养基上具有_的单菌落若干，分别接种到与分离培养基成分相同的_培养基上培养24 h 后，置于4冰箱中保存。(2)优良产酸菌种筛选。将冰箱保存的菌
20、种分别接入选择培养基，培养一段时间后，取合适接种量的菌液在30、150 r/min 条件下振荡培养。持续培养至培养液中醋酸浓度不再上升，或者培养液中_含量达到最低时，发酵结束。筛选得到的优良菌种除了产酸量高外，还应有_(答出 2点即可)等特点。52020江苏卷产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：(1)常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是_(填编号)。编号物品培养基接种环培养皿涂布器灭菌方法高压蒸汽火焰灼烧干热臭氧(2)称取1.0 g某土壤样品，转入99 mL无菌水中，制备成菌悬液，经_后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.
21、1 mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌_个。(3)为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行_育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以_为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径_的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。(4)在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株_进行后续相关研究，理由是_。62018江苏卷，31酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵
22、母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题：(1)配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的_，及时对培养基进行分装，并进行_灭菌。(2)取步骤中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤中将温度约_(在25 、50 或80 中选择)的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。(3)挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤所示进行划线。下列叙述合理的有_。a为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌b划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落
23、c挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量d可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株(4)步骤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和_供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1 000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用2516型血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，理论上_色细胞的个数应不少于_，才能达到每毫升3109个活细胞的预期密度。题组二科学探究类专项练72022广西北海市模拟某研究小组发现类产碱假单胞菌对黄脊竹蝗有较强的感染力，并可引起其发病死亡，该小组成员以此展开实验探究。回答下列问题：(1)用来培养类产碱假单胞菌的培养基为牛肉膏蛋白胨培养基
24、，在此培养基中，为微生物提供碳源的物质是_。培养基配制时，灭菌和调pH的先后顺序为_。对培养基进行灭菌所用的仪器是_。(2)在培养类产碱假单胞菌的过程中，培养皿应倒置培养，其原因是_。(3)进行实验时，若要频繁使用类产碱假单胞菌，可以采用_方法对其进行保存，这种方法的缺点是_。(4)研究发现：黄脊竹蝗幼虫在自然状态下感染类产碱假单胞菌后，于24小时后开始死亡，72小时达到死亡高峰，染病后出现行动迟缓，伴有轻微痉挛的现象。为验证此菌是蝗虫致死的原因，该研究小组成员从病死虫尸中提取并分离得到该菌，并用该菌_，观察到的现象是_。82021金太阳大联考褐煤碳化程度低、易挥发、易自燃，易污染环境，不利于
25、储存和远距离运输。利用微生物处理对褐煤进行气、液转化降解，形成清洁、经济有效的能源物质，对保护环境及油气安全供应有着重要意义。回答下列相关问题：(1)为了筛选到能高效降解褐煤的细菌，应选择的采集样本的场所为_；筛选时采用的培养基应该以_为唯一碳源，可用_法接种。(2)研究者利用营养肉汁琼脂培养基(如下)进行实验，拟从4种备选细菌中筛选出对某地褐煤降解效率高的菌种。蛋白胨氯化钠牛肉浸取物琼脂蒸馏水5.0g5.0g3.0g15.0g1.0LpH值调至7营养肉汁琼脂培养基中，蛋白胨的作用是_，琼脂的作用是_。完成筛选的实验思路：在适宜条件下分别培养等量的4种备选细菌，分别加入_，一段时间后_。920
26、22吉林长春市高三模拟2021年6月1日起，江浙沪Starbucks所有门店将全面试用Foopak生物可降解饮品杯。该饮品杯经填埋处理后，能被微生物经分解作用完全降解，可替代传统塑料及普通部分降解饮品杯，从而避免“白色污染”。回答下列问题：(1)从填埋Foopak 生物可降解饮品杯的土壤中分离 Foopak 分解菌时，应先从土壤取样，并接种在液体培养基上进行选择培养，目的是_；再将选择后的样品进行梯度稀释，_接种到固体培养基上，需进行梯度稀释的原因是_。(2)在整个分离过程中无杂菌污染，培养基上出现多种菌落特征，最可能的原因是_。(3)在测定培养液中Foopak分解菌的数量时，需至少做三个重复
27、实验。做重复实验的目的是_，做重复实验的方法是_。102022广东高三模拟苹果醋是当下流行的风味饮品，是苹果汁经发酵后，再添加适量苹果汁等原料而制成的饮品。苹果醋中的乙酸有软化血管、降低血压，能有效预防高血压和心脑血管疾病。下图是苹果醋饮品的工厂生产过程图。回答下列有关问题： (1)得到果醋醪液需要经过两次发酵，发酵需要的发酵条件是_(写出 2 点)。 (2)苹果醋含有较高浓度的乙酸，能够引起_，导致细菌死亡，使得大多数微生物不能生长繁殖，但市场保质期内的苹果醋饮品有时会发生“变质”问题。某同学分析出现“变质”的原因可能如下： 可能在灌装或包装过程中无菌操作不够规范，引起了耐酸性细菌污染； 两
28、次无菌操作采用_，虽然使得饮品风味口感保持不变，但不能杀死耐热性微生物； 苹果浓缩汁中出现了食品污染常见的某种杆菌，在不利条件下形成芽孢或孢子，在条件适宜时其大量繁殖，引起变质。112022黑龙江佳木斯市模拟谷氨酸钠是味精的主要成分，工业生产中常用谷氨酸棒状杆菌发酵生产谷氨酸。下表是生物兴趣小组探究发酵条件对微生物数量和产物生产的影响。组别发酵条件谷氨酸棒状杆菌繁殖速率单个菌体产谷氨酸量第一组通入无菌空气C/N31较慢较多第二组通入无菌空气C/N41较快较少请分析回答下列问题：(1)谷氨酸棒状杆菌发酵的培养基中主要营养物质有_，该培养基是一种_培养基。(2)得到谷氨酸棒状杆菌数目可采用的计数方
29、法是_，用该方法计数过程：取第二组的100倍的稀释液滴加到计数板(由2516400个小室组成，容纳液体总体积为0.1 mm3)共有菌体42个，则1 mL的第二组发酵液中有菌体_个。(3)由上述探究可知，要通过发酵得到大量谷氨酸，需首先不断向发酵液中通入_，将碳氮比设为_培养一段时间，然后将发酵液中碳氮比改为_继续培养。122022辽宁高三模拟大肠杆菌是一类引起人和幼畜腹泻的重要病原菌，可通过食物和水源等途径传染。某生物兴趣小组欲从某患病犊牛粪便中检测大肠杆菌的数量，并分离培养及鉴定。请回答下列问题。(1)取10 g新鲜的犊牛粪便按图示方法分离大肠杆菌，通过统计平板上的菌落数，可推测出样品中大约
30、含有的活菌数，其原理是_。若按照图中平板上的菌落数来计算，每克犊牛粪便中活菌数应为_。(2)分离出的大肠杆菌可通过图中两种接种方法进一步纯化，A所示的方法应如何使菌液在培养基上均匀分布？_；B所示的接种方法中用到的接种用具应如何灭菌？_。(3)接种好的培养基放入恒温箱中应倒置培养，这样做是为了_。为检测培养基的制备是否合格，应该怎么做_。(4)兴趣小组进一步采用滤膜法测定犊牛饮用水中大肠杆菌的数量，过滤器滤膜的孔径需_(填“大于”或“小于”)大肠杆菌的直径，先将1 000 mL饮用水进行过滤，再将滤膜转移到_培养基上，最后培养基置于适宜条件下培养，得到_(填颜色)的菌落，根据菌落数可判断大肠杆
31、菌的数量。(5)某位兴趣小组的同学用未经稀释的菌液涂布平板，结果培养基上被菌铺满，他把沾有噬菌体的小纸片放在该培养基上继续培养，结果如图，请推测出现透明圈的原因是_。考点35微生物的培养技术及应用第一关小题自助餐自选狂刷1D平板冷却凝固后将平板倒置是为了防止皿盖冷却水落入培养基后造成污染，D正确；此操作不是利于大肠杆菌的生长，A错误；空气仍然可以进入到平板中，B错误；倒置对于培养基冷却没有太大影响，C错误。2B分析表中成分可知，该培养基中没有凝固剂，为液体培养基，该培养基的营养成分齐全，但存在伊红、美蓝等鉴别物质，属于鉴别培养基，A错误；该培养基中的蛋白胨既是唯一的氮源，也是碳源，而葡萄糖是绝
32、大多数生物最常利用的碳源，B正确；该培养基中存在的无机盐和蛋白胨中的某些物质可以看作是生长因子，C错误；对培养基调节完pH后还要进行灭菌处理等操作才能使用，D错误。3D无菌操作包括消毒和灭菌。需进行消毒处理的有植物的外植体及操作人员的双手等，需进行灭菌的有器皿、培养基、添加剂(指示剂或染色剂)等。煮沸可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢，属于消毒；为防止空气中杂菌的污染，接种时要在酒精灯火焰附近进行；家庭制作葡萄酒时所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能灭菌；培养基常用高压蒸汽灭菌。故操作错误。4D实验用过的带菌培养基要经高压蒸汽灭菌后才能倒掉，以免污染环境，A错误；应利用稀释涂布平板法对细
33、菌进行分离、纯化并计数，B错误；要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种无菌水作为对照进行实验，C错误；培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了氮源和碳源，D正确。5答案：(1)干热灭菌(2)50防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染(3)抗生素Xgal(4)A(5)甘油管藏法解析：(1)玻璃和金属材质的实验器材可用干热灭菌的方法进行灭菌。(2)培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时才能倒平板。倒平板后，平板冷凝要将平板倒置，这样做可防止皿盖上的冷凝水落入培养基而造成污染。(3)为防止杂菌污染，培养基中要添加抗生素。半乳糖苷酶能够作用于一种无色化合物Xgal，使其变成蓝色物质，蓝白
34、斑筛选能成功，是因为培养基中添加了Xgal。(4)由于用于蓝白斑筛选的质粒载体一般含有抗性基因和将宿主菌半乳糖苷酶缺失部分补全的序列，因此最终培养基中出现的白色的菌落是目的基因和载体结合的菌落，故选A。(5)若需要长期保存该菌种，可采用的方法是甘油管藏法。6D不同细菌的菌落特征一般不同，因此可以依据菌落的特征进行菌种的鉴定，A错误；细菌对抗生素敏感，在培养基中加入青霉素可抑制细菌而促进真菌生长，B错误；破伤风杆菌是严格厌氧型细菌，向液体培养基中通入氧气能抑制破伤风杆菌的生长，C错误；醋酸杆菌属于好氧型细菌，因此在培养醋酸杆菌时，向培养液中通入氧气促进其有氧呼吸，有利于菌体快速增殖，D正确。7B
35、有些微生物可以利用空气中的无机碳源或无机氮源，故微生物培养基中并不都必须添加碳源或氮源，A正确；倒平板时，应将培养皿皿盖打开一条缝，若放到一边，容易造成杂菌污染，B错误；接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌，C正确；实验结束后，带菌的培养基必须经灭菌处理后才能倒掉，以免污染环境或操作者，D正确。8D该实验的目的是为了分离和纯化高效分解石油的细菌，因此步骤与步骤中培养基成分相比，最大的区别是石油是唯一碳源，A正确；步骤需要振荡培养，原因是提高培养液中(溶解)氧的含量，通过振荡可使菌体与培养液充分接触，提高营养物质的利用率，B正确；图B采用的接种方法是稀释涂布平板法，出现图B结果(菌落分
36、布不均匀)可能的操作失误是涂布不均匀，C正确；步骤后取样测定石油含量的目的是筛选出分解石油能力最强的细菌，D错误。9D配制的牛肉膏蛋白胨培养基需使用高压蒸汽灭菌法灭菌，即在121、100 kPa条件下处理1530 min，将培养基彻底灭菌，以避免培养基上的微生物影响实验结果，A正确；新鲜牛奶应使用巴氏消毒法消毒，为了探究新鲜牛奶合适的消毒温度，可将等量的新鲜牛奶分别置于60、70、80、90恒温水浴锅中处理30 min，并检测不同温度处理下的牛奶中微生物的数量进行比较，B正确；若要统计消毒后的牛奶中微生物的数量，可用稀释涂布平板法接种，所以可对处理后的牛奶进行梯度稀释后，利用涂布法接种平板并在
37、37下培养24 h，C正确；由于温度过高会破坏牛奶中的营养成分，所以菌落数最少的组对应的温度不一定是最适的消毒温度，因为还需要考虑牛奶的营养价值不被破坏，D错误。10C菌液中含有试验菌，将一定量菌液与冷却后的灭菌培养基混匀并倒平板可得到试验菌平板，A正确；在平板上打孔时，需要防止打孔的钢管上可能存在的微生物污染平板，因此在平板上打孔的钢管需要灼烧灭菌，B正确；抑菌圈的大小与抑菌效果呈正相关，提取物W在培养基中扩散，加入提取物W后的2小时，抑菌圈的直径没有达到最大值，说明还没有获得最佳抑菌效果，C错误；试验菌的数量随菌体浓度的增加而增多，W物质的分子数量随提取物W的浓度的增加而增多，抑菌圈直径的
38、大小随着提取物W扩散时间的延长而增大，因此菌体浓度、提取物W的浓度和扩散时间都会对抑菌圈直径的大小造成影响，D正确。11AC对培养皿中的菌株进行稀释时，盛有无菌水的试管仅消毒处理，不能彻底消灭杂菌，会造成杂菌污染，A正确；指示剂和染料中可能混有微生物，为了防止杂菌污染，加入培养基中的指示剂和染料需要灭菌，B错误；利用组织培养技术无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒，以避免被杂菌污染，C正确；接种时灼烧接种环之后，要冷却后再对菌种划线，以免温度太高杀死菌种，D错误。12CD自生固氮菌是需氧型生物，步骤土样应取自表层的土壤，步骤中的稀释梯度分别为10，100，1 000倍，所以土壤悬浮液稀释了
39、1 000倍，A错误；自生固氮菌是异养型生物，计数方法是稀释涂布平板法，B错误；步骤需充分振荡20 min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中，C正确；步骤所用的接种工具是涂布器，该选择培养基的特点是不添加氮源，利用的是空气中的氮气，D正确。13ABD氯化钠属于无机盐，无机盐在培养基中具有调节和维持微生物细胞的渗透压和pH的作用，故制备培养基时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量氯化钠，以维持渗透压，A正确；纯化的菌株临时保藏需要先接种到试管的固体斜面培养基上在合适的温度下培养，长成菌落后放入4冰箱中保藏，B正确；由分析可知，曲线3在加入乳链菌肽后活菌数降为零，这说明是非溶菌性
40、杀死细菌，C错误；口服乳链菌肽，不会改变人体肠道中的正常菌群，也不会进入内环境，由此推测可能的原因是被消化道中蛋白酶所降解而被人体消化，D正确。14BC漆酶降解“木质”，则漆酶菌株多存在于“木质”丰富的场所，故生活污水中含有大量微生物，但不一定含有产漆酶的菌株，A错误；筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落，B正确；在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化，C正确；斜面培养基中含有大量营养物，不能在常温下长期保存菌株，D错误。15ABC高压灭菌加热结束后，让其自然冷却后再慢慢打开排气阀以排除余气，然后才能开盖取物，A错误；倒平板时左手拿培养皿，右手拿锥形瓶，左手将培养
41、皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，倒入培养基后立即盖上培养皿皿盖，B错误；灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种，C错误；皿底的标记不会因为盖子混淆而混淆，D正确。16BCD配制培养基时，应在高压蒸汽灭菌之前调节pH，避免灭菌之后调pH造成杂菌污染，A错误；选择培养时，为分离分解纤维素的微生物菌种，应使用纤维素为唯一碳源的培养基，B正确；进行梯度稀释时，为了无菌操作，应在酒精灯火焰旁完成各种操作，C正确；挑选菌株后，为了防止造成污染，应将使用过的培养基进行灭菌后再丢弃，D正确。17C用免洗酒精凝胶擦手属于消毒，A错误；制作泡菜前用开水烫洗容器属于消毒过程，B错误；在火焰上灼烧接种
42、环能达到灭菌目的，C正确；防疫期间用石炭酸喷洒教室，属于消毒，D错误。18C可用血细胞计数板对原生质体进行计数，A正确；活细胞的细胞膜具有选择透过性，红墨水中的色素分子不能透过细胞膜，当细胞死亡后，细胞膜失去选择透过性，红墨水中的色素分子能进入细胞，所以可用红墨水检测细胞的存活状态并计数，B正确；划线分离法不能用于细胞计数，C错误；酵母细胞的密度与浑浊度指标存在一定的数量关系，所以酵母菌在液体培养基中培养一段时间后，可用比浊计测定其密度，D正确。19B根据题干信息“甲菌菌落周围呈现深蓝色”，说明甲可以分泌脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色，因此甲菌属于解脂菌，A
43、正确；乙菌落周围没有出现深蓝色，说明乙菌落不能产生脂肪酶，不能利用脂肪为其供能，但乙菌落也可以在培养基上生存，说明该培养基不是以脂肪为唯一碳源，B错误；可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比，更加直观，C正确；可以利用该平板来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力，观察指标以菌落周围深蓝色圈的大小为依据，D正确。20C为避免杂菌污染干扰，需对配制的培养基进行高压蒸汽灭菌，A正确；葡萄球菌需从人体皮肤的微生物中分离，为避免杂菌污染，故需要使用无菌棉拭子从皮肤表面取样，B正确；棉拭子上的微生物需要用平板划线法在培养基上进行接种，C错误；根据微生物在固体平板培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜
44、色等特征进行鉴别，D正确。21B由题图可知，乙菌的运动能力比甲菌强，A正确；实验所用培养基应为固体培养基，B错误；硫化氢与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀，该实验只能对甲、乙菌能否产生硫化氢进行定性分析，并不能比较出两种菌产生硫化氢的量，C正确；穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌污染，D正确。22A利用尿素固体培养基筛选尿素分解菌时，尿素固体培养基并不直接杀死其他微生物，而是其他微生物不能以尿素为氮源，无法在尿素固体培养基中存活，A错误；不同的微生物生长所需的最适pH不同，如细菌适宜生活在中性偏碱环境，霉菌适宜生活在中性偏酸环境，因此配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH，B正确；利用糯米酿
45、酒需要先进行糖化，酵母菌不能直接利用淀粉进行发酵，C正确；醋化醋杆菌的发酵底物为一定浓度的酒水混合物，适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化，D正确。第二关大题自助餐自选精做1答案：(1)C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶纤维素选择(2)为了杀死培养基中的所有微生物(微生物和芽孢、孢子)不接种培养(或空白培养)(3)将大熊猫新鲜粪便样液稀释适当倍数后，取0.1 mL涂布到若干个平板(每个稀释度至少涂布三个平板)，对菌落数在30300的平板进行计数，则可根据公式推测大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数(4)C接种C菌株后秸秆失重最多，纤维素降解率最大解析：(1)纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，
46、即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。为筛选纤维素分解菌，将大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以纤维素为唯一碳源的固体培养基上进行培养；培养基从功能上分类可分为选择培养基和鉴别培养基，故该培养基从功能上分类属于选择培养基。(2)配制培养基常用高压蒸汽灭菌，即将培养基置于压力100 kPa、温度121 条件下维持1530分钟，目的是为了杀死培养基中的所有微生物(微生物和芽孢、孢子)。为检测灭菌效果可对培养基进行空白培养，即将未接种的培养基在适宜条件下培养一段时间
47、，若在适宜条件下培养无菌落出现，说明培养基灭菌彻底，否则说明培养基灭菌不彻底。(3)为测定大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数，常采用稀释涂布平板法，在适宜的条件下对大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌进行纯化并计数时，对照组应该涂布等量的无菌水。将大熊猫新鲜粪便样液稀释适当倍数后，取0.1 mL涂布到若干个平板(每个稀释度至少涂布三个平板)，对菌落数在30300的平板进行计数，则可根据公式推测大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数。(4)测定酶活力时可以用单位时间内、单位体积中反应物的减少量或产物的增加量来表示。由表格可知，在适宜的条件下，C菌株在相同的温度和时间下，秸秆失重最多，纤维素降解率最大，说明该
48、菌株的纤维素分解菌产生的纤维素酶活力最大。2答案：(一)(1)涂布分离单菌落筛选解析：(1)分离纯化细菌最常用的方法是划线分离法或涂布分离法，两种方法均能在固体培养基上形成单菌落。为了获得能高效降解富营养化污水污染物的菌株，还需对分离的菌株进行诱变处理，再经筛选和鉴定。3答案：(1)唯一碳源血细胞计数板计数诱变育种、基因工程育种(2)盐浓度为60 g/L的条件下，其他杂菌因失水过多而死亡；pH为10的条件下，其他杂菌的酶变性失活，生长繁殖受抑制(3)氧气(O2或溶解氧)(4)蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等解析：(1)根据题意分析，该实验的目的是提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，结合微生物的代谢需
49、求，其液体培养基应该以蔗糖作为唯一碳源。并不断提高其浓度，经多次传代培养(指培养一段时间后，将部分培养物转入新配的培养基中继续培养)以获得目标菌株。培养过程中定期取样并用血细胞计数板计数的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况。此外，选育优良菌株的方法还有诱变育种、基因工程育种等。(2)已知，菌株H具有嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，因此当培养基盐浓度为60 g/L，pH为10时，菌株H可正常持续发酵60 d以上，而盐浓度为60 g/L的条件下，其他杂菌因失水过多而死亡；pH为10的条件下，其他杂菌的酶变性失活，生长繁殖受抑制，故该系统不需要灭菌。(3)分析题意，扩大培养时，营养物浓度、温度、pH等条
50、件适宜，而发酵液中菌株H细胞增殖和PHA产量均未达到预期，并产生了少量乙醇等物质，说明发酵条件中氧气不足，使菌种进行无氧呼吸产生乙醇，即氧气(O2或溶解氧)是限制高密度培养的重要因素。(4)根据酶的专一性可知，菌株H之所以能通过分解主要含蛋白质、淀粉、油脂等的餐厨垃圾来生产PHA，说明其能分泌蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等。4答案：(1)冷却玻璃刮刀较大透明圈斜面(2)乙醇耐酒精度高、耐酸高解析：(一)(1)高压蒸汽灭菌刚结束时，培养基温度较高，要等培养基冷却后再加入3%体积的无水乙醇。涂布分离法可用于单菌落分离，使用玻璃刮刀将待分离的菌液涂布到分离培养基的整个平面上。醋酸菌发酵产生的醋酸会使培养基
51、中的CaCO3分解，形成透明圈。菌落小，透明圈大，代表着高产醋酸菌。菌种的贮存方法：在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再用划线法接种在斜面培养基上，培养24 h后，置于4冰箱中保存。(2)醋酸发酵结束的标志：产物不再增加(醋酸浓度不再上升)或原料消耗到最低值(乙醇含量达到最低)。优质菌种不仅要求产酸高，还要耐高酸，同时还要耐酒精(原料)等特点。5答案：(1)(2)梯度稀释4.6105(或460 000)(3)诱变脂肪(或油脂)较大(4)B该菌株增殖速度快，单细胞蛋白产量高；降解脂肪能力强，净化效果好解析：(1)涂布器一般用干热灭菌法或灼烧灭菌法进行灭菌。(2)99 mL无菌水中加入1.0 g土
52、壤制成的菌悬液为100 mL，取稀释10倍后的菌悬液0.1 mL涂布平板，平板上的平均菌落数为46，则每克土壤约含酵母菌460.1101004.6105(个)。(3)辐射可以提高基因突变的频率，利用射线辐照进行的育种为诱变育种。本实验的目的是筛选产脂肪酶的菌株，所用的培养基应该以脂肪(或油脂)为唯一碳源；最终形成的菌落直径越大，形成该菌落的菌株分解脂肪(或油脂)的能力越强，生产脂肪酶的能力也越大。(4)由图可知，相对于菌株A，菌株B的增殖速度更快，降解脂肪能力更强；根据题干信息“在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白”可进一步推知菌株B处理含油废水时可得到更多的单细胞蛋白，故菌株B更适合作为后
53、续研究的材料。6答案：(1)pH高压蒸汽(2)50 (3)a、b、d(4)氧气无30解析：(1)配制培养基的操作步骤为称量溶化定容调pH培养基的分装包扎灭菌，因此微生物的培养基配制好后应该先调节pH，再分装。常见的灭菌方法有：干热灭菌、高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌。培养基适宜用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。(2)在步骤中，待培养基冷却至50 左右时进行倒平板。(3)在划线过程中，接种针、接种环使用前都必须灭菌，以防止杂菌污染，a正确；划线时应避免划破培养基表面，否则将不能形成正常菌落，b正确；该实验的目的是获得利用工业废甲醇作为碳源的酵母菌，不需要测定酵母菌中的甲醇含量，c错误；培养基中的甲醇浓度越高，此
54、种培养基中得以生存的酵母菌利用甲醇的能力越强，因此可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，可获得甲醇高耐受株，d正确。(4)酵母菌通过有氧呼吸大量繁殖，因此为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和氧气供应；台盼蓝是大分子物质，不能将活细胞染色，再根据2516型的血球计数板：1毫升悬液中待测标本(菌体)总数80小方格内菌体数/80400104稀释倍数。而台盼蓝与菌液等体积加入，因此要达到每毫升3109个活细胞的预期密度，理论上无色细胞数应该不少于(3109)(1 000210440080)30个。7答案：(1)牛肉膏、蛋白胨先调pH，后灭菌高压蒸汽灭菌锅(2)防止皿盖上凝结的水珠滴落到培养
55、基上造成污染(3)临时保藏保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异(4)感染生理状况良好的黄脊竹蝗幼虫感染后的幼虫出现行动迟缓，伴有轻微痉挛现象解析：(1)牛肉膏、蛋白胨培养基，为微生物提供碳源的是牛肉膏和蛋白胨；配制培养基需要先调节pH，再灭菌，以防止调节pH过程中引入杂菌；灭菌的方法是高压蒸汽灭菌法，所以需要用到高压蒸汽灭菌锅。(2)为了防止皿盖上凝结的水珠滴落到培养基上造成污染，所以培养皿应倒置培养。(3)频繁使用类产碱假单胞菌，可以采用临时保藏的方法保存；该方法保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。(4)为证明类产碱假单胞菌是蝗虫致死的原因，需要从病死虫尸中提取并分离得到该菌，并用
56、该菌感染生理状况良好的黄脊竹蝗幼虫，如果感染后的幼虫出现行动迟缓，伴有轻微痉挛现象，即可证明。8答案：(1)褐煤煤区褐煤平板划线(或稀释涂布平板)(2)为细菌生长提供氮源、碳源和维生素用作凝固剂适量且等量取自某地的褐煤(煤浆)分别测定褐煤(煤浆)的降解率解析：(1)褐煤煤区存在能高效降解褐煤的细菌的可能性较大，因而易于筛选到能高效降解褐煤的细菌；筛选时采用的培养基应该以褐煤为唯一碳源，微生物接种常用平板划线法或稀释涂布平板法。(2)营养肉汁琼脂培养基中，蛋白胨能为细菌生长提供氮源、碳源和维生素，琼脂的作用是用作凝固剂。筛选的实验思路：在适宜条件下分别培养等量的4种备选细菌，分别加入适量且等量取
57、自某地的褐煤(煤浆)，一段时间后分别测定褐煤(煤浆)的降解率。9答案：(1)增加Foopak分解菌的数量涂布选择培养后的菌液中Foopak分解菌的浓度较大，直接涂布很难分离得到单个菌落(2)Foopak分解菌的种类较多(3)排除偶然因素产生的误差对实验结果的影响将一定浓度的菌液分别涂布在三个平板中解析：(1)从填埋Foopak生物可降解饮品杯的土壤中分离Foopak分解菌时，应先从土壤取样，并接种在液体培养基上进行选择培养，目的是增加Foopak分解菌的数量。经过选择培养后，Foopak分解菌的浓度较大，直接进行涂布接种难以分离得到单个菌落，因此先进行梯度稀释再涂布接种到固体培养基上。(2)若
58、在整个分离过程中无杂菌污染，培养基上出现多种菌落特征，则最可能的原因是Foopak分解菌的种类较多，形成不同的菌落。(3)在测定培养液中Foopak分解菌的数量时，需至少做三个重复实验，起相互对照的作用，其目的是排除偶然因素产生的误差对实验结果的影响。进行重复实验时，需要将一定浓度的菌液分别涂布在三个平板中。10答案：(1)通入氧气或空气、3035(2)细菌蛋白质变性、细菌失水巴氏消毒法解析：(1)发酵为经中间发酵液成为果醋醪液的过程，该过程主要利用醋酸菌的发酵作用，醋酸菌为好氧菌，故制作时需要不断通入氧气，且其适宜温度是3035。(2)苹果醋中有较高浓度的乙酸，可能引起细菌蛋白质变性(高温、
59、强酸、强碱等均可能引起)，也可能因为渗透压高而引起细菌细胞失水，而导致细菌死亡；市场保质期内的苹果醋饮品有时会发生“变质”问题，原因可能有：在灌装或包装过程中无菌操作不够规范；两次无菌操作采用巴氏消毒法(温度较低，适用于一些不耐高温的液体如牛奶)；苹果浓缩汁中出现了食品污染常见的某种杆菌。11答案：(1)碳源、氮源、水和无机盐液体(2)显微镜直接计数法4.2107(3)无菌空气4131解析：(1)微生物的培养基中的主要营养成分包括碳源、氮源、水和无机盐等。实验时所用培养基除了能为谷氨酸棒状杆菌提供碳源和氮源外，还能提供水和无机盐等。工业生产中利用谷氨酸棒状杆菌发酵生产谷氨酸，使用的培养基为液体
60、培养基。(2)谷氨酸棒状杆菌等微生物的计数可以使用显微镜直接计数法。根据题意可知，共有谷氨酸棒状杆菌42个，并且谷氨酸棒状杆菌样品稀释了100倍，因此上述1 mL谷氨酸棒状杆菌样品中约有菌体42(0.1103)1004.2107个。(3)由表格可知，要发酵得到大量谷氨酸，需首先不断向发酵液中通入无菌空气；将碳氮比设为41培养一段时间，使得谷氨酸棒状杆菌大量繁殖，然后再将发酵液中碳氮比改为31继续培养，该比例有利于谷氨酸棒状杆菌产生谷氨酸。12答案：(1)当样品稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌2.8106(2)用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面将接种环通过
61、酒精灯外焰灼烧灭菌(3)防止冷凝水倒流污染培养基，同时保持培养基中的水分取一个未接种(接种0.1 mL的无菌水)的培养基放入恒温箱中培养，观察是否有菌落产生(4)小于伊红美蓝黑色(5)噬菌体侵染滤纸片周围的大肠杆菌使之裂解，形成以滤纸片为中心的透明圈解析：(1)据图可知，图中所用方法为稀释涂布平板法，该方法的原理是当样品稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌；据图可知，图中的样品稀释了103倍，取0.1 mL样品后得到28个菌落，故每克犊牛粪便中活菌数应为280.1103102.8106个。(2)A所示方法为稀释涂布平板法，为使菌落分布均匀，应用涂布器将菌液均
62、匀涂布在培养基表面；B所示方法为平板划线法，所用灭菌方法为将接种环通过酒精灯外焰灼烧灭菌。(3)为防止冷凝水倒流污染培养基，同时保持培养基中的水分，接种好的培养基应倒置；为检测培养基的制备是否合格，可取一个未接种(接种0.1 mL的无菌水)的培养基放入恒温箱中培养，观察是否有菌落产生：若无菌落产生，即说明培养基制备是合格的。(4)滤膜法是检测水样中大肠杆菌的方法，将一定量水样注入已灭菌的微孔薄膜的滤器中，经过抽滤，细菌被截留在滤膜上，故过滤器滤膜的孔径需小于大肠杆菌的直径；将滤膜贴于伊红美蓝培养基上，伊红美蓝和大肠杆菌反应产生黑色，故得到的黑色菌落经统计可判断大肠杆菌数目。(5)噬菌体是病毒，专门寄生在大肠杆菌体内，故噬菌体侵染滤纸片周围的大肠杆菌使之裂解，形成以滤纸片为中心的透明圈。
