1、【学习目标】了解培养基的基础知识，进行微生物培养和无菌技术的操作。【重点难点】 重点：无菌技术的操作难点：无菌技术的操作【自主学习】 一、培养基1概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其 的营养基质叫培养基。可分为 培养基和 培养基。 2营养构成：各种培养基一般都含有 、 、 和 ，此外还要满足微生物生长对 、 以及 的要求。 3培养乳酸杆菌时需在培养基中添加 、培养霉菌时需将培养基PH调至 、培养细菌时需将PH调至 、培养厌氧微生物则需提供 条件。【补充1】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要
2、用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。 二、无菌技术：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题： (一)获得纯净培养物的关键是 ，具体操作如下： 1对实验操作的 、操作者的 和 进行 。2将用于微生物培养的 、 和 等器具进行灭菌。 3为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行。4实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 周围的 相接触。 (二)消毒和灭菌1消毒是指 。常用的方法有 、 、 消毒法。2灭菌是指 。常用的方法有： 、 、 灭菌。分别适用于那些用具？实验操作-大肠杆菌的纯化培养：本实验所用的培养基是 ，本实验可
3、分成 和 两个阶段进行。一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是： 、 、 、 、 。2 倒平板：待培养基冷却至 左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：二、纯化大肠杆菌 微生物接种：最常用的是 法和 法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。 1平板划线法是 的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。其操作步骤是： 最后灼烧接种环的目的是？ 在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？2稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将 进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。系列稀释操作：结果分析与评价1培养未接种培养基的作用是什么？，
4、若有菌落形成，说明什么？2 在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落颜色？形态？3 培养12h和24h后的菌落大小？；菌落分布位置？原因？【问题生成】 同学们，通过你的自主学习，你还有哪些疑惑，请把问题填写在下面【师生互动、问题探讨】1、从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？思考2无菌技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是什么？2、利用干热灭菌箱对玻璃器皿灭菌时物品不能摆得太挤，目的是什么？3、在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？4、牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？5、锥形瓶的瓶口通过火焰的目
5、的是什么？6、倒平板的目的是什么？7、若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？8、配制斜面培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？9、在某培养基上出现了3种特征不同的菌落是什么原因？10、频繁使用的菌种利用什么法保存？长期保存菌种的方法是什么？【课堂小结与反思】【自我检测】1、下列关于微生物营养的说法，正确的是 ( )A同一种物质不可能既作碳源又作氮源 B凡是碳源都能提供能量c除水以外的无机物仅提供无机盐 D无机氮源也能提供能量2、细菌培养过程中分别采用了高压蒸气、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌 A接种针、手、培养基 B高压锅、手、接种
6、针 C培养基、手、接种针 D接种针、手、高压锅3、以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是 A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放人烧杯 C待培养基冷却至50左右时进行倒平板D待平板冷却凝固约510 min后将平板倒过来放置4、下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是A.防止杂菌污染 .B培养基和发酵设备都必须灭菌C.消灭杂菌 D.灭菌必须在接种前5制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是( )A计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B计算、称量、溶化、倒平板、灭菌C计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D计算、称量、灭菌、溶化、倒平板6有关倒平板的操作错误的是( )A
7、将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 B使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰c将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上 D等待平板冷却凝固后需要倒过来放置7有关平板划线操作正确的是( ) A使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞c将沾有菌种的接种环迅速伸人平板内，划三至五条平行线即可D最后将平板倒置，放人培养箱中培养8有关稀释涂布平板法，叙述错误的是( ) A首先将菌液进行一系列的梯度稀释B然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面C再放在适宜条件下培养 D结果都可在培养基表面形成单个的菌落9涂布平板操作需要用到( )A接种环、滴管、酒精灯 B接种环、移液管、酒精灯C涂布器、移液管、酒精灯 D涂布器、接种环、酒精灯10将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37恒温箱的目的是( )A对比观察培养基有没有被微生物利用 B对比分析培养基是否被杂菌污染C没必要放人未接种的培养基 D为了下次接种时再使用16平板冷却凝后要将平板倒置，其意义是（ ）A利于大肠杆菌的接种 B防止杂菌污染 C利于培养的冷却 D 防止皿盖冷却水倒流入培养基
