1、第2讲 微生物的培养与应用课标导航3.1.1阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提3.1.2阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术3.1.3举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物3.1.4概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法3.1.5概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法一、微生物的实验室培养1培养基2无菌技术3大肠杆菌的纯化培养二、土壤中分解尿素的细菌的分离三、分解纤维素的微生物的分离1实验原理2实验流程基础微点练清1判断正误(1)培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利新
2、人教版选择性必修3 P14“概念检测”T1(1)()(2)消毒和灭菌的杀菌程度存在差异()新人教版选择性必修3 P14“概念检测”T1(2)(3)微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物新人教版选择性必修3 P14“概念检测”T1(3)()(4)消毒的原则是既能杀死材料表面的微生物，又要减少消毒剂对细胞的伤害()(5)无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌()(6)相对于未被污染的土壤，从被石油污染的土壤中更容易分离到石油降解菌()新人教版选择性必修3 P20“概念检测”T1(3)(7)用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高
3、，就可在培养基表面形成单个菌落()2下列有关微生物培养的叙述，错误的是()A测定土壤样品中的细菌数目，常用稀释涂布平板法进行菌落计数B在对微生物进行培养前，需要对微生物和培养基进行灭菌C酵母菌发酵过程产生的酒精，对其他微生物生长有一定的抑制作用D分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源解析：选B在对微生物进行培养前，需要对培养基进行灭菌，不能对所培养的微生物进行灭菌。3(新人教版选择性必修3 P20“概念检测”T2)用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数，原因是()A菌落中的细菌数目是固定的B平板上的一个菌落就是一个细菌C通过此方法统
4、计的菌落数与活菌的实际数目相同D平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌解析：选D通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数，是因为平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌。4(新人教版选择性必修3 P14“拓展应用”T1(3)在进行微生物相关实验时，洗手后我们就能进行无菌操作了吗？操作时，我们可以采用什么方法避免手上微生物的污染？提示：并不是洗手后就可以进行无菌操作了，还要对手用温和的方法进行消毒，比如用75%的酒精擦拭双手。5回答下列微生物培养的问题：(1)如表是某培养液的成分及含量，该培养液培养的微生物同化作用类型是_；若用此培养液培养固氮微生物，则应除去的成分是_，
5、应加入的物质是_。编号成分(NH4)HCO3KH2PO4CaSO4FeCl2维生素水含量0.5 g3.0 g0.5 g0.5 g少许1 000 mL(2)下表为牛肉膏蛋白胨培养基的成分列表，据此回答：成分牛肉膏蛋白胨NaClH2O含量0.5 g1 g0.5 g100 mL牛肉膏、蛋白胨在培养基中的作用是提供_、_、_等营养。要用表中所给材料配制观察细菌菌落状况的培养基，还需添加的成分是_。表中各成分含量确定的原则是_。培养基配制好后，分装前应进行的工作是_。从配制培养基直到培养完成，所采用的预防杂菌感染的方法是_、_、_等。(3)微生物接种的方法很多，最常用的是_和_。解析：(1)培养基中不含
6、有机碳源，可判断培养的生物同化作用类型为自养型；若用此培养液培养固氮微生物，则应除去氮源(NH4)HCO3，但需加入有机物提供碳源。(2)根据所培养微生物对各营养成分的需要量配制培养基的成分，若要观察细菌菌落状况需用固体培养基，还需添加琼脂；微生物培养时需对培养基、接种工具进行灭菌处理，并进行严格的无菌操作。(3)常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。答案：(1)自养型(NH4)HCO3(或)有机物(2)碳源氮源维生素(或磷酸盐等)琼脂(凝固剂)所培养微生物对各营养成分的需要量调整pH高压蒸汽灭菌灼烧接种环酒精棉擦手(或棉塞塞试管口、在火焰旁接种)(3)平板划线法稀释涂布平板法一、
7、培养基及微生物的纯化培养技术试考题查欠缺1(2020浙江选考)下列关于微生物培养及利用的叙述，错误的是()A利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物B配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pHC酵母菌不能直接利用糯米淀粉发酵得到糯米酒D适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化解析：选A利用尿素固体培养基筛选尿素分解菌时，尿素固体培养基并不直接杀死其他微生物，而是其他微生物不能以尿素为氮源，无法在尿素固体培养基中存活，A错误；不同的微生物生长所需的最适pH不同，如细菌适宜生活在中性偏碱环境，霉菌适宜生活在中性偏酸环境，因此配制培养基时应根据微生物的种类调整培养基的pH，B正确；
8、利用糯米酿酒需要先进行糖化，酵母菌不能直接利用淀粉进行发酵，C正确；醋化醋杆菌的发酵底物为一定浓度的酒水混合物，适宜浓度的酒精可使醋化醋杆菌活化，D正确。2(2020山东等级考)野生型大肠杆菌可以在基本培养基上生长，发生基因突变产生的氨基酸依赖型菌株需要在基本培养基上补充相应氨基酸才能生长。将甲硫氨酸依赖型菌株M和苏氨酸依赖型菌株N单独接种在基本培养基上时，均不会产生菌落。某同学实验过程中发现，将M、N菌株混合培养一段时间，充分稀释后再涂布到基本培养基上，培养后出现许多由单个细菌形成的菌落，将这些菌落分别接种到基本培养基上，培养后均有菌落出现。该同学对这些菌落出现原因的分析，不合理的是()A操
9、作过程中出现杂菌污染BM、N菌株互为对方提供所缺失的氨基酸C混合培养过程中，菌株获得了对方的遗传物质D混合培养过程中，菌株中已突变的基因再次发生突变解析：选B若操作过程中出现杂菌污染，则基本培养基上会有杂菌生长，从而出现菌落；若M、N菌株互为对方提供所缺失的氨基酸，则M、N菌株混合培养一段时间，培养基上会出现由单个细菌形成的菌落，但由于M、N菌株的遗传物质没有改变，将这些菌落分别接种到基本培养基上时，培养后不会再有菌落出现；若混合培养过程中，菌株获得了对方的遗传物质或菌株中已突变的基因再次发生突变，都会引起遗传物质改变，则混合培养一段时间，再分别接种到基本培养基上培养后，会有菌落出现。3(20
10、18全国卷)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具_(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_。(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能_。在照射前，适量喷洒_，可强化消毒效果。(4)水厂供应的自来水通常是经过_(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是_。解析：(1)干热灭菌是指将物品放入干热灭菌
11、箱内，在160170 条件下加热12 h。能耐高温、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等，可采用干热灭菌的方法。(2)巴氏消毒法是在7075 条件下煮30 min 或在80 条件下煮15 min，可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营养物质损失较少。(3)接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可以用紫外线照射30 min，紫外线能破坏微生物的DNA结构，从而杀死物体表面或空气中的微生物。在照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以强化消毒效果。(4)自来水通常是用氯气进行消毒的。(5)在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是
12、锅内原有的冷空气没有排尽。答案：(1)可以(2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少(3)破坏DNA结构消毒液(4)氯气(5)未将锅内冷空气排尽强知能补欠缺1培养基的配制原则、成分确定及种类(1)培养基的配制原则目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。pH要适宜：细菌为6.57.5，放线菌为7.58.5，真菌为5.06.0，培养不同微生物所需的pH不同。(2)培养基中营养物质的确定方法自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。异养型微生物所需的营养物质主要是有机物(即碳源)
13、，必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。(3)培养基的分类按物理状态分类培养基种类特点用途液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂(如琼脂)观察微生物的运动、分类鉴定固体培养基加凝固剂(如琼脂)微生物分离、鉴定，活菌计数，菌种保藏按功能分类种类制备方法原理用途举例选择培养基培养基中加入某些化学物质依据某些微生物对某些物质的特殊需求或抗性而设计从众多微生物中分离所需的微生物加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌鉴别培养基培养基中加入某种指示剂或化学药品产生特定的颜色或其他变化鉴别不同种类的微生物用伊红美蓝培养基鉴别大肠杆菌2.比较消毒和灭菌项目消毒灭
14、菌条件温和的物理或化学方法强烈的理化因素结果仅杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子常用方法煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂消毒法灼烧灭菌法干热灭菌法高压蒸汽灭菌法使用条件100 煮沸56 min80 煮15 min或在7075 煮30 min70%酒精、氯气等酒精灯火焰的外焰干热灭菌箱，160170 ，维持12 h高压蒸汽灭菌锅，恒温121 ，维持1530 min应用范围日常用品不耐高温的液体用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源接种工具玻璃器皿、金属工具培养基及容器练题点全过关1以下是制作酸奶的生物化学过程：将适宜的菌种接种到牛奶中，产生的乳酸使牛奶
15、蛋白凝聚形成浓稠的酸奶。酸奶的发酵剂中含有基本等量的两种细菌(保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌)。保加利亚乳杆菌在无氧条件下分解牛奶中的乳糖产生乳酸，还产生多肽酶，将牛奶蛋白分解成多肽和氨基酸；这些反应会刺激嗜热链球菌生长，产生二氧化碳和甲酸，使得发酵液的pH降低，这又会促进保加利亚乳杆菌的生长和代谢。(1)用于制作酸奶的牛奶原液首先必须进行高温处理，其目的是_，以保证接种后的正常发酵；操作者的双手需进行清洁和_；操作间内静止空气中的细菌可用物理方法_杀灭，也可以用化学试剂_(列出两种)进行消毒。(2)牛奶原料中不能含有抗生素，这是因为_。(3)发酵剂中的两种细菌之间的关系属于_。(4)包装的酸奶在
16、24 下保存，这样可使细菌存活但无活性，食用酸奶前不需要杀死细菌这是因为用于酸奶发酵的两种微生物_，且能抑制人体中的某些有害菌群，因此不必灭菌即可食用。解析：(1)用于制作酸奶的牛奶原液首先必须进行高温处理，其目的是灭菌，保证接种后的正常发酵；操作者的双手也需进行清洁和消毒；操作间内静止空气中的细菌可用物理方法紫外线杀灭，也可以用化学试剂食醋、苯酚、甲醛等进行消毒。(2)牛奶原料中不能含有抗生素，这是因为抗生素会抑制接种细菌的生长，使发酵受到抑制。(3)发酵剂中的两种细菌之间的关系属于共生。(4)包装的酸奶在24 下保存，这样可使细菌存活但无活性，食用酸奶前不需要杀死细菌这是因为用于酸奶发酵的
17、两种微生物对人体无害，且能抑制人体中的某些有害菌群，因此不必灭菌即可食用。答案：(1)灭菌消毒紫外线 食醋、苯酚、甲醛等(2)抗生素会抑制接种细菌的生长，使发酵受到抑制(3)共生(4)对人体无害2(2021年1月新高考8省联考广东卷)几丁质广泛存在于甲壳类动物的外壳、昆虫的外骨骼和真菌的细胞壁中。某些微生物能合成几丁质酶(胞外酶)，使几丁质降解为N乙酰氨基葡萄糖，然后进一步转化利用。科研人员试图从土壤中筛选出能高效降解几丁质的菌株，通过微生物培养获得几丁质酶，用于生物防治。回答下列问题：(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_为唯一碳源的固体选择性培养基上筛选目标菌株。(2)培养所筛选
18、出的目标菌株，计算各单菌落周围的“水解圈直径/菌落直径”的比值，比值大小反映了_。(3)科研人员筛选出了产几丁质酶的菌株A。将菌株A发酵产生的几丁质酶粗提液加入盛有马铃薯培养基的培养皿中，涂布均匀后分别接种4种病原真菌，以_代替几丁质酶粗提液作为对照，结果见下图，几丁质酶粗提液对_的抑菌效果最强(填入病原菌编号)。推测几丁质酶的抑菌机理是_。解析：(1)筛选过程中，将土壤样品稀释液接种于以几丁质为唯一碳源的选择性培养基上，在该培养基上只有可以利用几丁质的细菌可以生存，其他不能利用几丁质的微生物被淘汰而达到筛选的作用。(2)水解圈直径/菌落直径的比值可以反映水解能力的大小，水解圈直径/菌落直径的
19、比值越大，说明该菌降解几丁质能力越强，反之越弱。(3)对照组实验应满足单一变量原则，实验组添加几丁质酶粗提液，对照组加入不含几丁质酶粗提液的缓冲液，对4组实验进行观察比较，d组水解圈直径/菌落直径的比值最大，即抑制效果最强，几丁质是细菌细胞壁的组成成分，几丁质酶水解了几丁质导致细菌细胞壁不能合成，抑制了细菌的繁殖。答案：(1)几丁质(2)微生物的降解能力(3)不含几丁质酶粗提液的缓冲液d几丁质是细菌细胞壁的组成成分，几丁质酶水解了几丁质导致细菌细胞壁不能合成，抑制了细菌的繁殖二、微生物的筛选与计数试考题查欠缺1(2020全国卷)某种物质S(一种含有C、H、N的有机物)难以降解，会对环境造成污染
20、，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。回答下列问题：(1)实验时，盛有水或培养基的摇瓶通常采用_的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是_。甲、乙培养基均属于_培养基。(2)实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2107个/mL，若要在每个平板上涂布100 L稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释_倍。(3)在步骤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是_(答出1点即可)
21、。(4)若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，请写出主要实验步骤：_。(5)上述实验中，甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长提供4类营养物质，即_。解析：(1)实验过程中，对盛有水或培养基的摇瓶进行灭菌时，常采用高压蒸汽灭菌法。据题图分析可知，乙培养基为固体培养基，与甲培养基相比，其特有的组分Y应是凝固剂琼脂。甲、乙培养基均只允许能利用物质S作为氮源和碳源的微生物生长，因此均为选择培养基。(2)据题意可知，假设至少将摇瓶M中的菌液稀释X倍，才能保证稀释后的100 L菌液中细菌细胞数不超过200个，初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2107个/mL，则稀释之前100 L菌液中有210
22、6个细菌，可得2106(1/X)200，则X104，因此至少应将摇瓶M中的菌液稀释104倍。(3)在筛选过程中，若培养基中S浓度过高，可能会导致细胞失水，进而抑制菌株的生长。(4)将含有能降解S的细菌的淤泥加入无菌水中，进行适当稀释后，利用稀释涂布平板法，取适量的菌液涂布到乙培养基上，在适宜条件下进行培养，一段时间后，统计菌落数，即可估算出淤泥中能降解S的细菌细胞数。(5)本实验中，甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌生长提供的营养物质是水、碳源、氮源和无机盐。答案：(1)高压蒸汽灭菌琼脂选择(2)104(3)S的浓度超过某一值时会抑制菌株的生长(4)取淤泥加入无菌水中，涂布(或
23、稀释涂布)到乙培养基上，培养后计数(5)水、碳源、氮源和无机盐2(2019全国卷)物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌(目标菌)。回答下列问题。(1)要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是_。(2)在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落(如图所示)。如果要得到目标菌，应该选择_菌落进一步纯化，选择的依据是_。(3)土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即_。(
24、4)该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶(酶E)。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加含有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，C处滴加_，三处滴加量相同。一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，说明_；若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明_。解析：(1)物质W是一种含氮有机物，要分离能够降解物质W的细菌，需用以物质W为唯一氮源的选择培养基进行筛选。(2)由题图可知，甲菌落周围没有透明圈，说明甲菌不能降解物质W，乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解物质W，
25、若要得到目标菌，应选择乙菌落进一步纯化。(3)要鉴定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，则培养基中不能添加氮源，所以将甲、乙菌分别接种在无氮源的培养基上(其他条件相同且适宜)，若细菌能生长，则说明细菌能利用空气中的氮气作为氮源。(4)实验目的是比较天然酶和酶E降解物质W的能力，做实验时要设计空白对照实验，所以C处应滴加缓冲液。C处没有出现透明圈，说明缓冲液不能降解物质W，A、B处透明圈的出现说明物质W被降解，若两个透明圈直径大小相近，则说明酶E与天然酶降解物质W的能力相近。答案：(1)W(2)乙乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W(3)将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基上，若细菌能生长，则说
26、明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源(4)缓冲液缓冲液不能降解W酶E与天然酶降解W的能力相近强知能补欠缺1微生物的筛选与鉴别方法(1)微生物的筛选方法单菌落挑取法利用平板划线法或稀释涂布平板法接种到固体平板培养基表面，直接根据微生物菌落的特征利用单菌落挑取的方法获得目的微生物选择培养法利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接获得目的微生物鉴定培养法利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物(2)微生物的鉴别方法菌落特征鉴别法根据微生物在固体平板培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别指示剂鉴别法如培养基中加入酚红指示剂，培养某种微生物后，培养基变红，说
27、明该种微生物能够分解尿素染色鉴别法如利用刚果红染色法，根据培养基中出现以纤维素分解菌为中心的透明圈来筛选分解纤维素的微生物2平板划线法和稀释涂布平板法的比较比较项目平板划线法稀释涂布平板法关键操作接种环在固体平板培养基表面连续划线一系列的梯度稀释涂布平板法操作注意事项每次划线前后均需灼烧接种环稀释度要足够高，为确保实验成功可以增加稀释度的范围菌体获取在具有显著的菌落特征的区域菌落中挑取菌体从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体适用范围适用于好氧菌适用于厌氧菌和兼性厌氧菌优点可以根据菌落的特点获得某种微生物的单细胞菌落既可以获得单细胞菌落，又能对微生物计数缺点不能对微生物计数操作复杂，需要涂布多个
28、平板3统计菌落数目的两种方法比较项目间接计数法(稀释涂布平板法)直接计数法(显微计数法)原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量公式每克样品中的菌落数(CV)MC：某稀释度下平板上生长的平均菌落数；V：涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M：稀释倍数每毫升原液所含细菌数：每小格平均细菌数400104稀释倍数缺点当两个或多个菌体连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落不能区分细胞死活结果比实际值偏小比实际值偏大练题点全过关
29、1将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。回答下列问题：(1)M培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制_的生长，加入了链霉素的培养基属于_培养基。(2)M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有_(答出两点即可)。氮源进入细胞后，可参与合成的生物大分子有_(答出两点即可)。(3)若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产淀粉酶的微生物，加入的显色剂是_，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是_。(4)甲、乙两位
30、同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149，取平均值133；乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是_。解析：(1)链霉素是抗生素，可抑制细菌生长，故在M培养基中加入链霉素作为选择培养基，可筛选出真菌。(2)培养基中的营养成分一般包括碳源、氮源、水和无机盐等。细胞中含有氮元素的生物大分子有蛋白质、核酸等，故加入的氮源可参与以上物质的合成。(3)能产生淀粉酶的微生物可将淀粉水解成麦芽糖，淀粉遇碘液变蓝
31、，向加有淀粉的培养基中加入碘液后培养基呈现蓝色，产淀粉酶的菌落周围的淀粉被水解，形成透明圈，可根据透明圈的大小判断产生淀粉酶的多少。(4)统计菌落数时，一般选择菌落数在30300的平板进行计数，甲同学统计的3个平板中的菌落数在正常范围内且差距不大，比较准确；乙同学统计的3个平板中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差。答案：(1)细菌选择(2)碳源、无机盐蛋白质、核酸(3)碘液淀粉遇碘液显蓝色，产淀粉酶的菌落周围淀粉被水解，形成透明圈(4)乙同学的结果中，1个平板的计数结果与另2个相差悬殊，结果的重复性差2土壤中的产脲酶细菌在污水处理中具有巨大的应用前景，请回答下列问题：(1)从
32、土壤分离产脲酶细菌的过程中，培养基中高浓度尿素的作用是杀死_的微生物，并为产脲酶细菌提供_；除了营养物质外，培养基的配制还应控制_等条件(答出两点即可)。(2)采用稀释涂布平板法接种时，将聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个_。与分离真菌相比，分离产脲酶细菌的样品稀释度不同，原因是_。(3)初步筛选出的产脲酶细菌，在培养基中加入酚红指示剂，能对分离的菌种做进一步鉴定，其原理是_。解析：(1)由于绝大多数微生物不能利用尿素，所以高浓度尿素会杀死这些微生物。从土壤分离产脲酶细菌的过程中，培养基中高浓度尿素的作用是为了杀死不能耐受高浓度尿素的微生物，并为脲酶细菌提供氮源。除了有
33、碳源、氮源、水分和无机盐外，配制培养基还应控制培养基的pH、溶氧量等且要无菌。(2)采用稀释涂布平板法接种时，将聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落。分离不同的微生物时对样品的稀释度不同，主要是因为土壤中不同微生物的密度不同。(3)初步筛选出的产脲酶细菌，在培养基中加入酚红指示剂原理是：产脲酶细菌可以分解尿素，使培养基pH升高，指示剂变红色，从而达到鉴定目的。答案：(1)不能耐受高浓度尿素(不能利用尿素)氮源pH、无菌(2)菌落土壤中不同微生物的密度不同(3)产脲酶细菌可以分解尿素，使培养基pH升高，指示剂变红色3下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题：(
34、1)制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。(2)为了得到更加准确的结果，选用适宜的方法接种样品：如图是利用_法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，为达到这一目的，操作上应注意_。(3)适宜温度下培养。结果分析：甲同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为524个，那么每毫升样品中的细菌数是(接种时所用稀释液的体积为0.1 mL)_个。用这种方法所得的数量比实际活菌数量要_，因为_。(4)乙、丙同学测定同一样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果：乙同学在该浓度下涂布了1个平板，统计的菌落数为47；丙同
35、学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为43、54、326，然后取其平均值141作为统计结果。请评价这两位同学实验结果的有效性。乙同学的结果_，原因是_。丙同学的结果_，原因是_。(5)丁同学采用血细胞计数板计数(规格为1625，0.1 mm3)，统计4个中格中的细菌数，计算出每个小格所含细菌的平均数为2个，则每毫升样品中的细菌数是(稀释倍数为103)_个。解析：(2)由图可知，此接种方法为平板划线法，为达到稀释的目的，从第二次划线开始，接种环均要灼烧，冷却后从上一区划线末端开始划，首尾不能重叠。(3)根据公式每毫升样品中的细菌数524/0.11055.24108，用这种方法所得的数量比实际活菌数量要少，因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的是一个菌落。(4)乙同学在该浓度下涂布了1个平板没设重复实验，所以结果无效；丙同学涂布的3个平板计数结果差距太大，应该存在操作失误，结果无效。(5)每毫升样品中的细菌数是(22516)/0.11031038109。答案：(2)平板划线第二次及以后每次划线前接种环要灼烧，冷却后从上一区划线末端开始划，首尾区不重叠以便于分散菌种(3)5.24108少当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的是一个菌落(4)无效没有设置重复实验，结果不具有说服力无效一个平板上的菌落计数结果与另外两个相差太大(5)8109
