1、1(2017长沙长郡中学模拟)下列关于基因工程的叙述中，正确的是()ADNA连接酶和RNA聚合酶催化生成的化学键相同BDNA连接酶对“缝合”序列不进行特异性识别，无专一性催化特点C受体细菌若能表达质粒载体上抗性基因，即表明重组质粒成功导入D培育转基因油菜，需对受体细胞进行氯化钙处理2在DNA的粗提取与鉴定实验中有三次过滤(1)过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液(2)过滤含黏稠物的物质的量浓度为0.14 mol/L的NaCl溶液(3)过滤溶解有DNA的物质的量浓度为2 mol/L的NaCl溶液以上三次过滤分别为了获得()A含核物质的滤液、纱布上的黏稠物、含DNA的滤液B含核物质的滤液、滤液中DNA黏
2、稠物、含DNA滤液C含核物质的滤液、滤液中DNA黏稠物、纱布上的DNAD含较纯DNA滤液、纱布上黏稠物、含DNA滤液3金茶花是中国特有的观赏品种，但易得枯萎病。科学家在某植物中找到了抗枯萎病的基因，下图所示的方法培育出了抗枯萎病的金茶花新品种。相关叙述正确的是()A图中在基因工程中依次叫做基因表达载体、目的基因B形成的操作中使用的酶有限制酶、DNA聚合酶和DNA连接酶C由培育至的过程中，依次经历了脱分化、再分化过程D在幼苗中检测到抗枯萎病基因标志着成功培育出新品种4基因工程利用某目的基因(图甲)和Pl噬菌体载体(图乙)构建重组DNA。限制性核酸内切酶的酶切位点分别是Bgl、EcoR和Sau3A
3、。下列分析错误的是()A构建重组DNA时，可用Bgl和Sau3A切割目的基因所在片段和Pl噬菌体载体B构建重组DNA时，可用EcoR和Sau3A切割目的基因所在片段和Pl噬菌体载体C图乙中的Pl噬菌体载体只用EcoR切割后，含有2个游离的磷酸基团D用EcoR切割目的基因所在片段和Pl噬菌体载体，再用DNA连接酶连接，只能产生一种重组DNA5(2017天津一中调研)chIL基因是蓝藻拟核DNA上控制叶绿素合成的基因。为研究该基因对叶绿素合成的控制，需要构建缺失chIL基因的变异株，构建过程如图所示。下列叙述不正确的是()AchIL基因的基本组成单位是脱氧核糖核苷酸B过程应使用不同的限制性核酸内切
4、酶C构建的基因表达载体中应含有起始密码子和终止密码子D若操作成功，可用含红霉素的培养基筛选出所需变异株6(2018温州中学月考)通常禽流感病毒只能侵染鸟类，人流感病毒只能侵染哺乳类。现用高致病性禽流感病毒和低致病性人流感病毒(哺乳类感染病毒后基本无症状)的核酸完成如下实验，该实验不能说明()A步骤说明流感病毒的遗传物质是DNA片段B步骤需要同种限制酶和DNA连接酶处理cDNA和质粒C通过和产生的活病毒可能是不同病毒间核酸重组的结果D步骤说明猪的呼吸道上皮细胞可作为活病毒的宿主细胞7(2018广州模拟)科学家利用基因工程(DNA重组技术)成功培育出一种能够表达人类乳汁中常见蛋白的转基因水稻，使大
5、米及其制品具有一定的抗菌作用。请回答下列相关问题：(1)在基因工程中，常用到的工具酶是_、_。(2)利用水稻的成熟叶片为材料，同时构建cDNA文库和基因组文库，两个文库相比，cDNA文库中含有的基因数目比基因组文库中的少，其原因是_。(3)在基因表达载体中，启动子是_识别并结合的部位，导入该水稻中的基因表达载体除启动子和目的基因外，还应含有_。若采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞，常用的原核生物是_。 (4)由转基因水稻生产的相关大米制品有一定的抗菌作用，是因为制品中含有_。8胰岛素A、B链分别表达法是生产胰岛素的方法之一。图1是该方法所用的基因表达载体，图2表示利用大肠杆菌作为工程菌生产
6、人胰岛素的基本流程(融合蛋白A、B分别表示半乳糖苷酶与胰岛素A、B链融合的蛋白)。请回答下列问题：(1)图1基因表达载体中没有标注出来的基本结构是_。(2)图1中启动子是_酶识别和结合的部位，有了它才能启动目的基因的表达；氨苄青霉素抗性基因的作用是_。(3)构建基因表达载体时必需的工具酶有_。(4)半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达，可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，其意义在于_。(5)溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链，且半乳糖苷酶被切成多个肽段，这是因为_。(6)根据图2中胰岛素的结构，请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数
7、量。你的推测结果是_，理由是_。9(2018福州一中模拟)请回答基因工程方面的有关问题：(1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似(如下图所示)。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为_。在第_轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。(2)设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下图)，请分别说明理由。第1组：_；第2组：_。(3)PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为_。(4)用限
8、制酶EcoR、Mbo单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1 kb即1 000个碱基对)，请画出质粒上EcoR、Mbo的切割位点。10下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：限制酶BamHBclSau3AHind识别序列及切割位点G GATC CC CTAG GT GATC AA CTAG TGATCCTAGA AGCT TT TCGA A(1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用_两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过_酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于_态
9、的大肠杆菌中。(2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加_，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中_。(3)若BamH酶切的DNA末端与Bcl酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为_，对于该部位，这两种酶_(填“都能”“都不能”或“只有一种能”)切开。(4)若用Sau3A酶切图1质粒最多可能获得_种大小不同的DNA片段。答案精析1ADNA连接酶和RNA聚合酶催化生成的化学键相同，都是磷酸二酯键，A项正确；具有相同黏性末端的DNA才能用DNA连接酶连接，说明DNA连接酶具有专一性，B项错误；抗性基因为遗传标记基因，受体细菌若能表达质粒载体上抗性
10、基因，只能说明作为载体的质粒成功导入到受体细胞中，但重组质粒不一定成功导入，C项错误；将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，不必进行氯化钙处理，D项错误。2A过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液应取滤液(其内含DNA)；过滤含黏稠物的物质的量浓度为0.14 mol/L的NaCl溶液应取黏稠物(因其内含析出的DNA)；DNA易溶于物质的量浓度为2 mol/L的NaCl溶液，故过滤该溶液时应取滤液(其内溶有DNA)。3C分析图示可知：为质粒(载体)，为目的基因(抗枯萎病的基因)，A项错误；为基因表达载体，形成的操作中使用的酶有限制酶和DNA连接酶，B项错误；由含有抗枯萎病基因的离体的金茶花细胞培育至抗
11、枯萎病的金茶花新品种的过程中，采用了植物组织培养技术，依次经历了脱分化、再分化过程，C项正确；在试管苗中检测到抗枯萎病基因，只能说明抗枯萎病基因已经成功导入受体细胞，但不能说明该基因是否表达，新品种培育的成功标志是：新品种表现出抗枯萎病的性状，D项错误。4D由题图可知，Bgl、Sau3 A及EcoR三种酶在目的基因和Pl噬菌体上都有切口，故可用Bgl和Sau 3A或Eco R和Sau 3A切割目的基因所在片段和Pl噬菌体载体，A、B项正确；从图乙知Pl噬菌体载体为环状DNA，只用EcoR切割后产生两条反向双螺旋链状DNA，有2个游离的磷酸基团，C项正确；用EcoR切割目的基因所在片段和Pl噬菌
12、体载体，再用DNA连接酶连接，能产生不止一种重组DNA，D项错误。5C基因的实质是具有遗传效应的DNA片段，所以基本组成单位是脱氧核糖核苷酸，A项正确；过程是chIL基因和质粒重组，过程是红霉素抗性基因和重组质粒1重组，并且要破坏chIL基因，故应选择不同的限制性核酸内切酶，B项正确；构建的基因表达载体应含有启动子和终止子，起始密码子和终止密码子存在于mRNA中，C项错误；重组质粒中含有红霉素抗性基因，导入受体细胞后可用含红霉素的培养基筛选出所需变异株，D项正确。6A步骤说明流感病毒的遗传物质是RNA，A项错误；步骤是基因表达载体的构建，需要同种限制酶和DNA连接酶处理cDNA和质粒，B项正确
13、；据题意可知，两种流感病毒单独存在时不能使猪患流感，但是通过和产生的活病毒可使猪患流感，故可能是不同病毒间核酸重组的结果，C项正确；经过步骤猪患流感了，说明猪的呼吸道上皮细胞可作为活病毒的宿主细胞，D项正确。7(1)限制性核酸内切酶DNA连接酶(2)cDNA文库中只含有叶肉细胞已转录(或已表达)的基因，而基因组文库中含有该植物的全部基因(3)RNA聚合酶标记基因和终止子大肠杆菌(4)溶菌酶(或抗体)解析(1)基因工程中常用到限制酶和DNA连接酶，限制酶是用于切割目的基因和载体，DNA连接酶是为了将目的基因和载体连接。(2)cDNA文库中含有的是部分基因，而基因组文库含有的是该个体的全部基因，即
14、cDNA文库中只含有叶肉细胞已转录(或已表达)的基因，而基因组文库中含有该植物的全部基因。(3)在基因表达载体中，启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点。基因表达载体中除了启动子和目的基因外还需要有标记基因、终止子。如果采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞，常用的原核生物是大肠杆菌。 (4)由转基因水稻生产的相关大米制品有一定的抗菌作用，是因为制品中含有抗菌的物质溶菌酶或抗体。8(1)终止子(2)RNA聚合作为标记基因，将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来(3)限制性核酸内切酶和DNA连接酶(4)防止胰岛素的A、B 链被菌体内蛋白酶降解(5)半乳糖苷酶中含多个甲硫氨酸，而胰岛素A、B 链中不含甲硫
15、氨酸(6)至少2个两条肽链的一端各有一个游离的氨基，氨基酸R基中可能还含有游离的氨基解析基因表达载体包含启动子、终止子、目的基因和标记基因等。启动子是RNA聚合酶的识别和结合位点。氨苄青霉素抗性基因可作为标记基因，将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来。基因工程使用的工具酶包括限制性核酸内切酶和DNA 连接酶。胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏起来，将无法被蛋白酶所识别，防止被水解。溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，若经溴化氰处理相应融合蛋白能获得完整的A链和B链，表明胰岛素A链和B链上并无溴化氰作用位点，不能将其切断；同理，半乳糖苷酶能被切成“多个肽段”，表明其具有多个切点(即“甲硫氨酸”)。
16、胰岛素分子含有两条肽链，至少有2个游离氨基分别位于2条肽链的一端，并且R 基中可能也含有游离的氨基。9(1)15/16三(2)引物和引物局部发生碱基互补配对而失效引物自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效(3)DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上(4)如图所示解析(1)根据PCR过程特点可知，以原来的每条母链为模板合成的两个新DNA分子中，只含有引物A或引物B，而以新合成的子链为模板合成新DNA分子时，两种引物都含有，故第四轮循环共产生16个DNA分子，其中含有引物A的分子是15个，占15/16。由题图知，第一、二轮循环合成的子链长度均不同，根据半保留复制特点，前
17、两轮循环产生的4个DNA分子的两条链均不等长，第三轮循环产生的DNA分子存在等长的两条核苷酸链。(2)引物是单链DNA时才能与DNA结合，而单链DNA的碱基互补配对部分容易形成双链结构而失去其功能。从图示可以看出，组引物和引物局部碱基互补配对，易形成双链结构而失效。组引物相互间不能发生碱基互补配对，但自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效。(3)DNA聚合酶的作用是将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上，而不能直接将两个脱氧核苷酸连在一起。(4)单独用EcoR可将质粒切成一段，说明在其上有一个EcoR切点。单独使用Mbo能将环状质粒切成2.5 kb和11.5 kb两段，说明在质粒上
18、有两个Mbo切点，且切点在2.5 kb和11.5 kb之间。两者共同使用时，环状质粒被切成三段，说明在质粒上共有三个切点，如图所示，说明EcoR的切点在5.5 kb和6 kb之间，如下图所示。10(1)Bcl和HindDNA连接感受(2)四环素引物甲和引物丙(3)都不能(4)7解析(1)选择的限制酶应在目的基因两端存在酶切位点，且至少有一个标记基因，BamH会破坏两个标记基因，因此只能选Bcl和Hind。酶切后的载体和目的基因片段，通过DNA连接酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于感受态的大肠杆菌中。(2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，根据质粒上的抗性基因，应在筛选平板培养基中添加四环素。PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合，沿相反的方向合成子链。(3)根据BamH 和Bcl 的酶切位点，BamH 酶切的DNA末端与Bcl 酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为，与两种酶的酶切位点均不同。(4)根据BamH、Bcl和Sau3A的酶切位点，Sau3A在质粒上有三个酶切位点，完全酶切可得到记为A、B、C三种片段，若部分位点被切开，可得到AB、AC、BC、ABC四种片段，所以用Sau3A酶切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段。
