1、1(2014高考江苏卷)下列关于基因工程技术的叙述，错误的是(多选)()A切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6个核苷酸序列BPCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应C载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因D抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达解析：选ABC。A项，限制性核酸内切酶大多特异性地识别6个核苷酸序列，但也有少数限制性核酸内切酶能识别4个、5个或8个核苷酸序列。B项，PCR反应中温度周期性变化是为变性、复性和延伸创造条件。另外，耐高温的DNA聚合酶只是在延伸阶段发挥催化作用，变性和复性过程不需要酶的催化。C项，载体质粒上的抗生素抗性
2、基因可作为标记基因，供重组DNA的鉴定和选择，而不是抗生素合成基因。D项，目的基因导入受体细胞后不一定能正常表达。2(2014高考重庆卷)如图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下相关叙述，正确的是()A的构建需要限制性核酸内切酶和DNA聚合酶参与B侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到的染色体上C的染色体上若含抗虫基因，则就表现出抗虫性状D只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异解析：选D。A项，为重组Ti质粒，其构建需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶。B项，含重组Ti质粒的农杆菌侵染植物细胞后，重组Ti质粒上的目的基因整合到受体细胞()的染色体上，而并非整个重组Ti质粒整合到的染色体上。
3、C项，目的基因导入受体细胞后不一定能进行表达，所以抗虫基因导入植物细胞后，培育成的植株也不一定具有抗虫性状。D项，转基因抗虫植株是否培育成功，可以从个体水平上进行检测，即观察植株是否具有抗虫性状，如果具有抗虫性状则说明发生了可遗传变异(基因重组)。3(2014高考浙江卷)下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是() A连续细胞系的细胞大多具有二倍体核型 B某些癌细胞在合适条件下能逆转为正常细胞 C由多个祖细胞培养形成的细胞群为一个克隆 D未经克隆化培养的细胞系细胞具有相同的性状解析：选B。A项，连续细胞系的细胞一般都培养了多次，二倍体核型发生了改变，大多数细胞具有异倍体核型。B项，细胞癌变是由基因
4、突变引起的，如果癌细胞在一定条件下(如用秋水仙胺等药物治疗)，则有可能恢复成正常细胞。C项，细胞克隆的最基本的要求是：必须确定所建成的克隆来源于单个细胞。D项，未经克隆化培养的细胞系具有异质性。4(2013高考重庆卷)下图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。下列有关叙述，正确的是()A是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应T淋巴细胞B中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤细胞的形成C同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性D是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群解析：选D。是从小鼠脾脏中获得的能产生抗体的浆细胞，A项错误；中应该使用能促进细胞融合的促融剂，如聚乙二醇等，B项错误；同时具有从脾脏中分离出的浆细胞和骨
5、髓瘤细胞的特性，C项错误；是经筛选培养获得的能产生特异性抗体的细胞群，D项正确。5(2013高考浙江卷)实验小鼠皮肤细胞培养(非克隆培养)的基本过程如下图所示。下列叙述错误的是 ()A甲过程需要对实验小鼠进行消毒 B乙过程对皮肤组织可用胰蛋白酶消化 C丙过程得到的细胞大多具有异倍体核型 D丁过程得到的细胞具有异质性 解析：选C。甲过程表示从实验小鼠身上取皮肤组织小块，该过程需要对小鼠进行消毒，故A项正确。乙过程表示将皮肤组织分散为单个细胞，可用胰蛋白酶进行酶解消化，故B项正确。丙过程表示由组织细胞培养到细胞系的过程，小鼠细胞是二倍体细胞，其细胞系大多数为有限细胞系，能继续培养下去具有异倍体核型
6、的连续细胞系很少，故C项错误。丁过程表示通过选择或纯化从细胞系中获得具有特殊性质的细胞株的过程，细胞株具有异质性，故D项正确。6(2013高考江苏卷)小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克服这个缺陷， 可选择性扩增抗体的可变区基因(目的基因)后再重组表达。下列相关叙述正确的是(多选)()A设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列B用PCR 方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列CPCR 体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA 聚合酶D一定要根据目的基因编码产物的特性选择合适的受体细胞解析：选BD。设计引物时应当考虑需扩增的目的基因与载体两端的序列进行互补配
7、对，A项错误；利用PCR技术扩增目的基因只需要知道基因两端的序列，据此设计合适的引物即可，不必知道基因的全部序列，B项正确；PCR体系中应该用耐高温的DNA聚合酶，而不是从受体细胞中提取的普通DNA聚合酶，C项错误；需根据目的基因的编码产物的特性来选择合适的受体细胞，如果是分泌蛋白，则最好选用真核细胞作为受体细胞，D项正确。7人1抗胰蛋白酶是治疗先天性肺纤维化囊肿、肺气肿以及呼吸窘迫综合征、特异性皮炎等疾病的特效药物。2001年，我国首例4只转有人1抗胰蛋白酶的转基因羊在北京顺义诞生，填补了我国1抗胰蛋白酶药物市场的空白。回答下列问题：(1)在体外，构建人1抗胰蛋白酶基因的表达载体时，用到的工
8、具有_。(2)采用_法将构建好的基因表达载体导入受精卵，然后将受精卵移入_中继续培养得到早期胚胎，然后将其移植入受体母羊的子宫。(3)检测人1抗胰蛋白酶基因是否插入染色体上，可从分子水平上检测，方法是_。(4)在培育转基因羊之前，生产人1抗胰蛋白酶常用的方法是细胞工程或发酵工程。培育出转基因羊后，可以在羊奶或羊尿中分离出该药物。与此相比，试述细胞工程或发酵工程的不足之处。_。解析：(1)构建基因表达载体时，用到的工具有工具酶及载体，工具酶包括限制酶和DNA连接酶，一般常用质粒作载体。(2)培育转基因动物时，需要一定的营养条件，诱导受精卵分裂、分化形成胚胎。(3)在分子水平上检测，应该用DNA分
9、子杂交技术。(4)培育出转基因羊后，可以在羊奶或羊尿中分离出该药物，羊吃的是草(成本低)，产出的奶、尿液均是对环境无害的物质。答案：(1)限制酶(限制性核酸内切酶)、DNA连接酶、载体(2)显微注射发育培养液(3)DNA分子杂交技术(4)成本高、易产生有害废弃物等8我们日常吃的大米中铁含量极低，科研人员通过基因工程等技术，培育出了铁含量比普通大米高60%的转基因水稻，改良了稻米的营养品质。如图为培育转基因水稻过程示意图，请回答：(1)在上述工程中，铁结合蛋白基因称为_，获取该基因后常用_技术进行扩增。(2)构建重组Ti质粒时，通常要用同种限制酶分别切割_和_。将重组Ti质粒转入农杆菌时，可以用
10、_处理农杆菌，使重组Ti质粒易于导入。(3)将含有重组Ti质粒的农杆菌与水稻愈伤组织共同培养时，通过培养基2的筛选培养，可以获得_；培养基3与培养基2的区别是_。(4)检测培育转基因水稻的目的是否达到，需要检测转基因水稻_。解析：本题中培育转基因水稻的目的是获得铁含量比普通大米高的大米，因此目的基因为铁结合蛋白基因，要大量获得一般采用PCR技术进行扩增。要构建重组质粒要用同种限制酶切割含目的基因的DNA片段和质粒。将外植体培养成试管苗的过程要用到不同的培养基，各培养基最明显的差别在于所添加激素的比例不同。答案：(1)目的基因PCR(2)含目的基因的DNA片段质粒CaCl2(3)含有重组质粒的愈
11、伤组织生长素和细胞分裂素的浓度比例不同(4)种子中铁含量9在20世纪初，科学家用植物细胞杂交方法，将白菜的原生质体和甘蓝的原生质体融合，成功地培育出了“白菜甘蓝”杂种植株，据图回答下列问题：(1)过程b完成的标志是_。要促进杂种细胞的分裂生长，培养基中应有营养物质和激素，其中激素包括_和_两类植物激素。(2)在利用杂种细胞培育成为杂种植株的过程中，依据的原理是_，c涉及的分裂方式为_。(3)若白菜细胞内有m条染色体，甘蓝细胞含n条染色体，则“白菜甘蓝”细胞内含_条染色体；若杂种细胞培育成的“白菜甘蓝”植株为四倍体，则此杂种植株的花粉经离体培育得到的植株属于_倍体。(4)要制备“白菜甘蓝”人工种
12、子，要选取具有生根发芽能力的_(结构)等，包裹上人工种皮制得。答案：(1)原生质体再生出新的细胞壁细胞分裂素生长素(2)植物细胞的全能性有丝分裂(3)mn单(4)胚状体10某研究小组以动物肝细胞为材料，测定药物对体外培养细胞的毒性。供培养的细胞有甲、乙两种，甲细胞为肝肿瘤细胞，乙细胞为正常肝细胞。请回答下列有关动物细胞培养的问题：(1)以动物肝脏组织块为培养材料时，需用_处理，使组织分散成单个细胞。在植物体细胞杂交时，应用同样原理的操作是_。(2)细胞培养时，为了促进细胞生长和增殖，除了糖、氨基酸、促生长因子、维生素、无机盐等营养物质外，还需要加入_。(3)培养的细胞不能无限长大，细胞自身限制
13、因素包括_、_。(4)培养_(填“肝肿瘤细胞”或“正常肝细胞”)最终能获得单层细胞，这是因为除了细胞贴壁外，这种细胞还具有_的特点。(5)已知癌基因X过量表达与肝肿瘤的发生密切相关，要试验一种抗肿瘤药物Y对甲细胞生长的影响，可将甲细胞分为两组，A组细胞培养液中加入_，B组细胞培养液中加入等量无菌生理盐水，经培养后，从两组收集等量细胞，通过比较X基因在两组细胞中_和_(生理过程)的差异，确定Y的药效。答案：(1)胰蛋白酶或胶原蛋白酶(答出一种即可)(用纤维素酶和果胶酶)去除细胞壁(制备原生质体)(2)(动物)血清(血浆)(3)细胞表面积和体积比细胞核控制范围(核质比)(4)正常肝细胞接触抑制(5
14、)药物Y转录翻译11下图是某实验室做的通过动物纤维母细胞等获得单克隆抗体的实验研究。据图回答：(1)X、Y、Z细胞的名称分别是_、_、_。(2)过程类似于植物组织培养技术中的_过程。与纤维母细胞相比，诱导干细胞的全能性较_。过程的实质是_。(3)生产单克隆抗体一般不直接培养浆细胞，主要原因是_。(4)处需要筛选，从而得到_细胞，且培养该细胞的气体环境为_。答案：(1)骨髓瘤细胞抗原刺激过的B细胞(或浆细胞)杂交瘤细胞(2)脱分化高基因的选择性表达(3)浆细胞高度分化，不能无限(或大量)增殖(4)能产生特异性抗体的杂交瘤95%的空气5%的CO212(2013高考天津卷)花椰菜易受黑腐病菌的危害而
15、患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定剂量的紫外线处理黑芥原生质体可使其染色体片段化，并丧失再生能力。再利用此原生质体作为部分遗传物质的供体与完整的花椰菜原生质体融合，以获得抗黑腐病杂种植株。流程如下图。据图回答下列问题： (1)过程所需的酶是_。 (2)过程后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的_存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。 (3)原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压，其作用是_。原生质体经过_再生，进而分裂和脱分化形成愈伤组织。 (4)若分析再生植株的染色体变异类型，应剪取再生植株和_植株的根尖，通过_、 _、染色和制片等过程制成装片，然后在
16、显微镜下观察比较染色体的形态和数目。 (5)采用特异性引物对花椰菜和黑芥基因组DNA进行PCR扩增，得到两亲本的差异性条带，可用于杂种植株的鉴定。下图是用该引物对双亲及再生植株14进行PCR 扩增的结果。据图判断，再生植株14中一定是杂种植株的有_。 (6)对杂种植株进行_接种实验，可筛选出具有高抗性的杂种植株。解析：(1)获取植物细胞的原生质体可用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞。(2)根据题干信息可知，供体使用的是叶肉细胞的原生质体，所以可将融合的细胞是否含叶绿体作为初步筛选杂种细胞的标志。(3)原生质体因没有了细胞壁，在低渗溶液中容易吸水涨破，加入甘露醇可保持一定的渗透压，以保持原生质体的完整性。原生质体需再生出细胞壁形成杂种细胞，然后经分裂、脱分化形成愈伤组织。(4)若要分析再生植株的染色体变异类型，需对再生植株细胞和双亲细胞的染色体形态与数目进行比较。植物细胞有丝分裂装片的制作包括解离、漂洗、染色和制片四个步骤。(5)由图可知，植株1、2、4的条带中除了具有花椰菜的DNA片段外，还有来自黑芥的DNA片段，所以是杂种植株。(6)对杂种植株进行病原体(黑腐病菌)接种实验，若不患黑腐病，即为高抗性杂种植株。答案：(1)纤维素酶和果胶酶 (2)叶绿体(3)保持原生质体完整性 细胞壁 (4)双亲(或花椰菜和黑芥) 解离漂洗 (5)1、2、4 (6)黑腐病菌
