1、2.2.1 动物细胞培养和核移植技术新课标要求1简述动物细胞培养的过程、条件及应用。2简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。3举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用。教学重点（1）动物细胞培养的过程及条件。（2）用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。（3）单克隆抗体的制备和应用。教学难点（1） 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。（2） 单克隆抗体的制备过程。教学方法诱思法、分析法、归纳法。教学工具多媒体教学课件课时安排 2课时教学过程（一）引入新课 利用植物细胞可以培育成植物体，那么，你利用动物细胞能不能大量繁殖动物体，以提高繁殖率呢？这节课我们来学习动物细胞工程（二
2、）进行新课问题动物细胞工程的常用技术手段有哪些？最基础的技术手段是什么？动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等。最基础的技术手段是动物细胞培养。1动物细胞培养1.1概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。分析（1）需分散成单个细胞；（2）需要在培养基上培养；（3）动物细胞培养的实质是细胞增殖。取动物组织块 剪碎、胰蛋白酶处理分散成单个细胞 细胞悬液 转入培养液 原代培养 胰蛋白酶处理 传代培养1.2动物细胞培养的过程：（学生自学总结）问题什么是细胞贴壁？什么是接触抑制？悬液中分散的细胞很快就贴附在有丝分裂，称为
3、细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。问题如何打破接触抑制？需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分别继续培养，让细胞继续增殖。问题细胞传代培养代数有什么特点？ 传代培养的细胞一般传至10代后就不易传下去了，一般来说，细胞在传至1050代左右时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的细胞核型可能发生变化，当继续传代培养时，少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得不死性。所以目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。1.3动物细胞培养的条件（1）无菌、无毒的环境（2）营养：合成培养基成分包括糖、氨基酸、促
4、生长因子、无机盐、微量元素等，通常还需加入血清、血浆等一些天然成分。（3）温度和pH：适宜温度一般与动物的体温相近；pH为7.27.4。（4）气体环境：95空气和5CO2混合气体。问题如何保证无菌、无毒环境？（1）对培养液和所有培养用具进行无菌处理；（2）通常还需要在细胞培养液中添加一定量的抗生素；（3）应定期更换培养液，以便清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害。1.4动物细胞培养技术的应用（1）可大规模生产一些有重要价值的生物制品。（2）培养的动物细胞可作为基因工程中常用的受体细胞。（3）培养的动物细胞可用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性（根据变异率）。（4）培养正常或病变
5、细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究。填表比较 植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养动物细胞培养原理细胞全能性细胞增殖培养基性质固体培养基液体培养基培养基特有成分蔗糖、植物激素葡萄糖、动物血清培养结果植物体细胞株、细胞系培养目的快速繁殖、培育无病毒植株等获得细胞或细胞产物2动物体细胞核移植技术和克隆动物问题为什么不能直接利用动物细胞培育动物体？动物细胞的全能性会随着动物细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能逐渐变弱。因此，需要借助核移植来实现。2.1概念：是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。
6、分析（1）移植的是动物细胞的细胞核；（2）利用去核卵母细胞作为受体细胞；（3）重组细胞需培育成一个新的胚胎。2.1体细胞核移植的过程：课件显示过程，讲解。讲解（1）卵母细胞的采集：从屠宰场收集牛卵巢，在体外培养到减数第二次分裂中期。（2）供体细胞的采集：从供体取体细胞进行培养。（3）供体的细胞核移入去核卵母细胞中，其实质是将去核卵母细胞与供体细胞进行细胞融合，一般采用电激法使细胞融合，所以子代的细胞质基因来自于两个亲本。（4）供体核进入受体卵母细胞后，还需要物质或化学方法激活受体细胞，使其完成减数分裂，因为所选用的受体细胞是处于减数第二次分裂中期的卵母细胞，减数分裂还没有进行完。（5）重组细胞
7、在体外发育成重组胚胎，将早期胚胎移植到受体母牛体内。（6）代孕母牛生出克隆牛。问题受体细胞为什么选用卵母细胞？因为卵母细胞体积大，易操作，而且含有促使细胞核表达全能性的某种物质和营养物质。思考教材49页讨论。2. 3体细胞核移植技术的应用前景问题细胞胞核移植技术的意义是什么？可以快速繁殖动物；属于无性繁殖，可保持优良性状。讲解体细胞核移植的应用有以下几个方面：（1）畜牧业生产中，可加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育。（2）保护濒危物种（3）转基因克隆动物可以作为生物反应器（4）治疗人类疾病（5）组织器官移植（人的核移植胚胎干细胞）（6）研究克隆动物和克隆细胞（7）用克隆动物做疾病模型2.4体细胞核移植技术存在的问题（1）体细胞核移植技术的成功率非常低（2）克隆动物存在着健康问题，许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷等动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养动物体细胞核移植技术和克隆动物概念过程条件应用体细胞核移植的过程核移植技术和克隆动物的概念体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术存在的问题（三）课堂总结
