1、课后限时训练(三十)(建议用时：40分钟)1微生物与我们的生活健康有着密切的联系，请回答下列问题。(1)实验室常用的灭菌方法为_，如果实验器材不能遇水，则用_。(2)微生物的分离提纯方法主要有_和_法。(3)培养微生物的培养基根据用途不同，物理性质有所差异。扩大培养一般用_培养基，分离菌种用_培养基。它们在物理性质上的不同主要原因是_。(4)某些微生物能利用尿素是因为它们能合成和分泌_。其分解尿素的方程式为：_。【解析】(1)实验室常用的灭菌方法为高压蒸汽灭菌法；若实验器材不能遇水，则可以用干热灭菌法。(2)微生物的分离提纯方法主要有划线分离法和涂布分离法，划线分离法操作简单，涂布分离法操作复
2、杂但更易将单菌落分开。(3)扩大培养微生物一般用液体培养基，分离菌种用固体培养基；两种培养基的差别在于后者含有琼脂。(4)能利用尿素的微生物含有脲酶，此酶能分解尿素产生氨。【答案】(1)高压蒸汽灭菌法干热灭菌法(2)划线分离法涂布分离(3)液体固体是否含有琼脂(4)脲酶CO(NH2)2H2O2NH3CO22有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境，研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离能降解苯磺隆菌株的实验过程如下图所示。请回答问题：(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、_、_四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是_。(2)纯化菌株时，通常使用
3、的划线工具是_。在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始，这样做的目的是_。(3)若要检测土样中的细菌含量，应采用_法。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养一段时间，这样做的目的是_。然后，将1 mL土壤溶液稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升土壤溶液中的活菌数为_个。【解析】(1)微生物生长所需要的主要营养物质包括碳源、氮源、水和无机盐。使用选择培养基是因为选择培养基上只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长和繁殖，同时又能抑制或阻止其他微生物生长。(2)平板划线法接种时常使用接种环划线。在第
4、二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始，这样做的目的是使聚集的菌体逐步减少以便获得单个菌落。(3)涂布分离法常用来进行微生物的分离和计数。为检验培养基平板灭菌是否合格，常需要在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板培养基先行培养一段时间，观察有无菌落形成，若没有菌落形成则表明培养基灭菌合格，否则不合格。根据题意，每升土壤溶液中的活菌数为：(393837)31000.11 0003.8107(个)。【答案】(1)氮源无机盐只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长和繁殖(2)接种环使聚集的菌体逐步减少以便获得单个菌落(3)涂布分离检测培养基平板灭菌是否合格3.81073某研究小组研究了不同浓度的土霉素(一
5、种抗生素)对大肠杆菌生长的影响，实验结果见下图1。图1图2(1)实验结果表明，对大肠杆菌抑制作用最明显的是浓度为_(图1中数字)的土霉素。(2)该实验中，接种大肠杆菌时所使用的接种方法是_，在培养和接种大肠杆菌时要特别注意进行_操作。为更好地体现土霉素对大肠杆菌的抑制作用，实验中还应增加一组_作为空白对照。为了严格控制土霉素的剂量，对圆纸片的要求是_。为减少实验误差，每一浓度的土霉素还要制备_。(3)长期大量使用土霉素容易引起大肠杆菌产生抗药性，这一过程的实质是大肠杆菌种群的_发生了变化。(4)该研究小组运用上述实验方法还研究了相同浓度的A、B、C三种不同抗生素对大肠杆菌生长的影响。请在图2中
6、图示这一处理方案(可模仿图1加以必要的注解)。【解析】(1)据图1分析，号圆纸片的抑菌圈最大，说明该浓度的土霉素对大肠杆菌抑制作用最明显。(2)图中接种大肠杆菌时所使用的接种方法是涂布分离法。接种和培养大肠杆菌的关键是无菌操作。该实验要遵循对照原则，故还应该增加一组用无菌水浸泡的圆纸片作为空白对照。圆纸片的大小、质地属于无关变量，应该相同或一致。为减少实验误差，每一浓度的土霉素还要制备多个圆纸片进行重复实验。(3)长期大量使用土霉素容易引起大肠杆菌产生抗药性，这一过程的实质是大肠杆菌种群发生了进化，其抗药性基因频率发生了变化。(4)该方案的自变量为相同浓度的A、B、C三种不同抗生素，注意在图中
7、要标记清楚，具体图解见答案。 【答案】(1)(2)涂布分离法无菌用无菌水浸泡的圆纸片大小、质地相同多个圆纸片(3)抗药性基因频率(4)4幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：请回答：(1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有_，它能以尿素作为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现_色环带。(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是_灭菌。A高压蒸汽B紫外灯照射C70%酒精浸泡D过滤(3)步骤X表示_。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，然后将菌液_到培养基平面上。稀释菌液的目的是为了获得_菌落。(
8、4)在培养时，需将培养皿倒置并放在_中。若不倒置培养，将导致_。(5)临床上用14C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将14C标记的_分解为NH3和14CO2。【解析】(1)幽门螺杆菌(Hp)含有脲酶，能以尿素为氮源，在加入尿素和酚红指示剂的培养基中培养Hp，由于尿素经脲酶的降解可产生碱性的NH3，NH3能使培养基中的酚红由红黄色变成红色，故菌落周围会出现红色环带。(2)由于尿素加热会分解，对尿素溶液进行灭菌最好用G6玻璃砂漏斗过滤。(3)微生物的分离和培养步骤是：配制培养基灭菌、倒平板接种培养。为获得单菌落，接种操作前应先将菌液稀释，然后将菌液涂布到培养基平面上即可。(4)微生
9、物培养时需将培养皿倒置并放在恒温培养箱中，若不倒置培养，则无法形成单菌落。(5)幽门螺杆菌能将14C标记的尿素分解为NH3和14CO2，故临床上常用14C呼气试验检测人体内幽门螺杆菌的存在与否。【答案】(1)脲酶红(2)D(3)接种涂布单(4)恒温培养箱无法形成单菌落(5)尿素5为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1)该小组采用涂布分离法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，这样做的目的是_；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养
10、后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为_个。(2)该小组采用划线分离法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过_灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始，这样做的目的是_。(3)示意图A和B中，_表示的是用涂布分离法接种培养后得到的结果。AB(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中_的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高_的利用率。【解析】(1)取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，可依据是否产生菌落确
11、定培养基的灭菌效果是否理想。由样品中菌株数计算公式：(CV)M知：1 mL水样中菌株数为(380.1)1003.8104，故每升水样中的活菌数为3.8107个。(2)利用接种环接种时，接种环需灼烧灭菌。利用划线分离法分离细菌时，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始，这样可以将聚集的菌体逐步稀释以便得到单个菌落。(3)涂布分离法是用涂布器将菌液均匀涂布在培养基表面，故培养后产生的菌落应随机分布在培养基表面，即B表示的是用涂布分离法接种培养后得到的结果。(4)液体培养基通过振荡可提高溶氧量，同时使菌体与营养物质充分接触，提高营养物质的利用率，从而提高细菌的生长速度。【答案】(1)检测培
12、养基平板灭菌是否合格3.8107(2)灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3)B(4)溶解氧营养物质6临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用_法或_法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。(2)取该单菌落适当稀释，用_法接种于固体培养基表面，在37 培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一
13、段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B_；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明_；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的_。(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素_。【解析】(1)将细菌接种到固体培养基上的方法有划线分离法和涂布分离法。(2)由(1)获取的致病菌单菌落，经过适当稀释，用涂布分离法接种至固体培养基表面进一步培养。(3)在检测致病菌对抗生素的敏感性实验中，若含A种抗生素的滤纸片周围出现透明圈，说明周围的致病菌死亡，该致病菌对A种抗生素敏感；若含B种抗生素的滤纸片周围没有出现透明圈，说明致病菌对B种抗生素不敏感；若含C种抗生素的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明该致病菌对C的敏感性比对A的弱；若含D种抗生素的滤纸片周围透明圈也比含A的小，说明A、B、C、D四种抗生素的杀菌效果最显著的为A。透明圈中出现的菌落为耐药菌。(4)根据(3)中分析，为达到抗菌目的最好选用抗生素A。【答案】(1)划线分离涂布分离(2)涂布分离(3)敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A的弱耐药菌(4)A
