1、1(2014山东济南3月模拟)下图为某转基因小鼠培育过程示意图，表示相关过程。请回答：(1)过程注射的A物质是_，目的是使供体母鼠_。(2)过程把目的基因和运载体连接需要在_的催化下完成，过程常用的方法是_。(3)过程要通入的气体除氧气外，还要含有5%左右的_，其作用是_。(4)蛋白质水平检测目的基因的表达通常采用的方法是_。为获得较多基因组成相同的转基因小鼠，常采用_的方法。解析(1)对小鼠注射促性腺激素的目的是促进超数排卵，从而获得更多的受精卵。(2)基因表达载体的构建需要的工具酶是限制酶和DNA连接酶，而将目的基因导入小鼠的受精卵一般采用显微注射法。(3)在培养受精卵时，培养液中要加入动
2、物血清使受精卵正常分裂，通入CO2调节培养液的pH。(4)检测目的基因是否成功表达，常采用抗原抗体杂交技术。要得到多个转基因小鼠可利用胚胎分割技术将早期胚胎进行分割，再进行胚胎移植，这样得到的小鼠基因型完全相同，因此也叫克隆。答案(1)促性腺激素超数排卵(2)DNA连接酶显微注射法(3)CO2维持培养液的pH(4)抗原抗体杂交胚胎分割移植(或克隆)2如图是克隆羊的培育流程图，根据所学知识回答下列问题。(1)培育克隆羊时用到的卵母细胞可以从屠宰场收集，并在体外培养到_。(2)从供体羊中取上皮细胞，用_处理，然后进行分散培养。培养过程一般在_(填仪器)中进行，整个过程必须保证细胞处于_的环境中，所
3、需营养物质要与体内基本相同。(3)通过显微操作吸出卵母细胞中的细胞核，此过程中除了可以吸出细胞核，往往还可以将_一并吸出。(4)去核的卵母细胞与供体细胞通过电刺激后融合，_进入受体卵母细胞，构建成重组胚胎。融合后的重组细胞，需要用物理或化学的方法进行激活，使其完成减数分裂和发育进程。(5)将重组胚胎发育到一定阶段，移植到同种的、_相同的其他雌性动物体内，使之继续发育，最后形成克隆羊。移入的胚胎能够存活，是因为受体并不会对其发生_，同时能够在子宫内建立正常的生理和组织联系。答案(1)减数第二次分裂中期(2)胰蛋白酶二氧化碳培养箱无菌、无毒(3)第一极体(4)供体核(5)生理状态免疫排斥反应3(2
4、014江西师大等重点中学联考)下图为绿色荧光小鼠制备流程图， Gfp是绿色荧光蛋白基因，请分析回答：(1)构建表达载体需要的酶是_，表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、_、_、终止子和复制原点等。(2)图中载体上的Neo基因是一种抗生素抗性基因，图中步骤所用的G418是一种抗生素(对细胞有毒害作用)，添加G418的目的是_。(3)图中所用的胚胎干细胞来自于_。(4)图中步骤要将细胞注射入图中囊胚的_位置，图中步骤胚胎移植前要对代孕母鼠用激素进行_处理。(5)可以使用_方法在蛋白质水平上鉴定小鼠是否存在绿色荧光蛋白。解析(1)基因工程中常用限制性核酸内切酶切割目的基因和运载体，后用DNA连接酶连
5、接目的基因和运载体。基因表达载体包括启动子、标记基因、目的基因、复制原点、终止子等。(2)Neo基因是一种抗生素抗性基因，而G418是一种抗生素，该物质对细胞有毒害作用，所以培养液中添加G418可将导入目的基因的胚胎干细胞筛选出来。(3)胚胎干细胞来自早期胚胎或原始性腺，它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。(4)囊胚时期的内细胞团将发育成幼体的各种组织和器官，所以应将含目的基因的胚胎干细胞注射入囊胚的内细胞团中。胚胎移植前要对供体和受体进行同期发情处理，以使供体和受体具有相同的生理状态。(5)在分子水平鉴定目的基因是否表达产生相应蛋白质，可采用抗原抗体杂交方法。答案(1)限制性核
6、酸内切酶和DNA连接酶标记基因启动子(2)筛选出导入目的基因的胚胎干细胞(3)早期胚胎或原始性腺(4)内细胞团同期发情(5)抗原抗体杂交4如图为纯种荷斯坦小奶牛的繁殖过程，请据图回答下列问题。(1)克隆动物培育过程与图示繁殖过程相比，特有的技术手段是_技术，这两种动物繁殖的方式相比，实质性的区别为前者是_，后者是_。(2)一般用_激素对供体母牛做超数排卵处理，用_激素处理受体牛以便接受胚胎。(3)如果培育转基因荷斯坦奶牛，可采用_技术将药用蛋白基因导入到_中，在检测受体细胞中的染色体DNA上是否插入了目的基因时，常采用的方法是_技术，根据是否显示出杂交带进行鉴定。(4)上述技术应用于人类所得到
7、的婴儿通常叫_，在生育方面有什么积极意义？但在传统伦理道德观念上又有什么争论？_。解析动物克隆的技术手段主要是核移植，而图示技术手段为体外受精(其实质是有性生殖)。为使图示技术流程顺利完成，一般用促性腺激素处理供体牛使其超数排卵，用孕激素处理受体牛使其易接受胚胎并利于胚胎着床。答案(1)核移植无性生殖有性生殖(2)促性腺孕(3)显微注射受精卵DNA分子杂交(4)试管婴儿解决患不孕不育症夫妇的生育问题；冲击现有的婚姻、家庭和两性关系5(2015江西赣州六校高三期末联考)以下是科学家采用不同方法培育良种牛的过程，请据图回答下列有关问题。(1)图中对良种奶牛进行处理时用到的激素是_，过程必须用到_酶
8、，过程使用的是_酶。表示_技术，表示基因工程中_过程；若方法C是最常用的将目的基因导入动物细胞的方法，则方法C是_。(2)如果转基因牛D的牛奶中含有_，则说明血清蛋白基因在个体水平已表达成功，其他细胞中不含血清蛋白是_的结果。(3)图中A和B分别是指_和_。解析(1)对供体母牛进行超数排卵用促性腺激素，过程是将质粒切开必须用到限制酶，过程是由RNA得到DNA的过程需要逆转录酶，过程是将DNA在体外进行大量复制，可以应用PCR技术，是将目的基因和载体重组在一起的表达载体的构建，将目的基因导入到动物细胞常用的方法是显微注射法。(2)基因工程在表达水平上的检测看是否翻译出相应的蛋白质，即如果表达出血清蛋白说明血清蛋白基因表达成功。其他细胞不含有此血清蛋白是细胞分化时基因的选择性表达的结果。(3)受精卵在体外发育成胚胎需要进行早期胚胎培养和胚胎移植技术。答案(1)促性腺激素限制逆转录PCR基因表达载体的构建显微注射法(2)血清白蛋白基因选择性表达(3)早期胚胎培养(受精卵培养)胚胎移植
