1、课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、选择题1关于土壤取样的叙述错误的是(C)A土壤取样，应选取肥沃湿润的土壤B先铲去表层土3 cm左右，再取样C取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D应在火焰旁称取土壤解析取样用的小铁铲和信封在使用前需要进行灭菌处理，C错误。2在分解尿素菌的分离和鉴定中，对先后用到的两种培养基，叙述正确的是(B)A加入酚红指示剂作为选择培养基，再加入唯一碳源作为鉴别培养基B加入唯一氮源作为选择培养基，再加入酚红指示剂作为鉴别培养基C加入唯一氮源作为鉴别培养基，再加入酚红指示剂作为选择培养基D加入唯一碳源作为选择培养基，再加入酚酞指示剂作为鉴别培养基解析在分解尿素菌的分离
2、和鉴定中，应该先加入尿素作为分解尿素菌的唯一氮源，分解尿素菌合成的脲酶，能分解尿素，产生氨，氨呈碱性；然后加入酚红指示剂培养细菌，指示剂将变为红色。3需要在火焰旁操作的有(D)土壤取样称取土壤稀释土壤 涂布平板微生物的培养ABCD解析土壤中尿素分解菌的分离和计数中除土壤取样外，其余均需要无菌操作。4分离土壤中分解尿素菌的实验操作中，对于获得纯化的尿素分解菌的单菌落影响最大的是(C)A制备浸出液的土壤取自土壤的表层B涂布前涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌C牛肉膏蛋白胨培养基中添加尿素作为氮源D接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒解析制备浸出液的土壤取自土壤的表层与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不
3、大，A错误；涂布器未在酒精灯外焰上灼烧灭菌可能会造成污染，与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大，B错误；该培养基必须以尿素为唯一的氮源，不能使用牛肉膏蛋白胨培养基或在其中添加尿素作为氮源，该操作对实验影响最大，C正确；接种操作者的双手未用酒精棉进行消毒，可能会造成污染，但与纯化的尿素分解菌的单菌落有关但影响不大，D错误。5下列叙述不正确的是(D)A因为土壤中各类微生物的数量不同，所以，为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行分离B测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同C如果得到了多个菌落数目在30300的平板，则说明稀释操作比较成功D牛肉膏蛋白胨培
4、养基上的菌落数目明显少于选择培养基上的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落解析牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显多于选择培养基上的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落，D错误。6分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是(B)加尿素不加尿素加琼脂不加琼脂加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸盐不加硝酸盐ABCD解析要分离分解尿素的细菌应以尿素为唯一氮源，故需要错误，故C错误。需要用固体培养基必须加入琼脂，故正确，错误，D错误。需要加碳源即葡萄糖，故正确，错误。不需要氮源，故不需要加硝酸盐，故错误，正确，因此A错误，B正确。7下图表示从土壤中分离能降解酚类化合物对羟基苯甲酸的微生物的实验过程。下列与该
5、实验相关内容的叙述中不正确的是(D)A实验中所用的培养基均属于选择培养基B通过图中、过程目的是增加目标微生物的数量C统计处培养基中的菌落数并不一定代表接种到上的活菌数D在处培养基上能生长的一定是能降解对羟基苯甲酸的微生物解析从混合物中分离某种微生物要用选择培养基，需要在培养基中加入特定的物质，如羟基苯甲酸，在该培养基中所需要的微生物能大量繁殖，故AB正确；稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确，一般设置35个平板，选择菌落数在30300
6、的平板进行计数，并取平均值。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示，故C正确；有些微生物可以利用其它微生物的代谢产物来进行生长繁殖，所以在选择培养基上生长的微生物不一定是所选择的微生物，故D错误。8实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细菌在事先准备好的琼脂平板上画3条等长的平行线(3条线均与图中的链霉素带接触)，将平板置于37 条件下恒温培养3天，结果如图所示。从实验结果分析，以下叙述不正确的是(D)A链霉素能阻止结核杆菌的生长B链霉素对结核杆菌比对霍乱菌更有效C链霉素对结核杆菌比对伤寒菌更有效D链霉素可以用于治疗伤寒病人解析从图中可以看出，这
7、是含有链霉素的选择培养基，接种的三种细菌中，霍乱菌和结核杆菌都可以被杀灭，并且链霉素对结核杆菌杀灭的有效程度大于霍乱菌，而伤寒菌照常生长不受影响，所以链霉素不能用于治疗伤寒病人。选项D错。9在缺乏氮源的培养基上，大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌的生长；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出(C)A乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌B固氮细菌、大肠杆菌、放线菌C固氮细菌、霉菌、放线菌D固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌解析固氮细菌可以在无氮培养基上生长；青霉素可以抑制细菌和放线菌的生长，但不会抑制霉菌的生长；加
8、入10%的酚的培养基可以抑制细菌和霉菌的生长，但不会抑制放线菌的生长。10测定土壤中细菌数量一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102、103和104倍稀释，其原因是(C)A细菌个体小，真菌个体大B细菌易稀释，真菌不易稀释C细菌在土壤中数量比真菌多D随机的，没有原因解析土壤中的微生物大约70%90%是细菌，真菌的数量要比细菌少；样品的稀释度越高，在平板上生成的菌落数目就越少；在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30300，适于平板计数，所以细菌的稀释倍数要高于真菌的稀释倍数。11欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，下列实
9、验操作不正确的是(D)A将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释B同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板C可将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照D用加入刚果红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌解析欲从土壤中分离出能分解尿素的细菌，要将土壤用无菌水进行一系列的梯度稀释，同一浓度的土壤稀释液应至少涂布三个平板，同时要将未接种的培养基在相同条件下培养作为对照，以检查培养基灭菌是否彻底；筛选分解尿素的细菌要用酚红指示剂。12下列有关土壤中微生物的分离与计数的说法，不正确的是(D)A因为土壤中各类微生物的数量不同，所以为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离B测定土壤中不同微生物的数量，选用的稀
10、释范围不同C如果得到了2个或2个以上菌落数目在30300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数D牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显小于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落解析样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目。实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30300之间适于计数的平板。土壤中不同类型的微生物的数量不同，因此在测定其数量时，选用的稀释范围也不同。将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，从而说明选择培养基具有筛选作用。二、非选择题13在调查某湖水中H细菌指数(1升水中含有的H细菌
11、个数)的实验中，先将5升湖水水样浓缩至5毫升，然后各取浓缩水样1毫升，涂布到4个培养皿中培养，培养后统计的菌落数分别是42、38、55、18。请回答：(1)培养基中的蛋白胨和淀粉分别为细菌生长提供了_氮源、碳源和维生素_、_碳源_。(2)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水水样的平板置于_恒温培养箱_中培养，培养的温度设定在37 。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种_等量无菌水_作为对照。(3)细菌培养产生的单个菌落在生态学中称为_种群_。根据上述结果计算，被检样的H细菌指数为_45_。用这种方法测定密度，实际活菌数目要比测得的数目_多_，原因是_当两个或多个细胞连
12、在一起时在平板上观察到的是一个菌落_。(4)为了纯化获得的H细菌，在微生物的实验室培养过程中，关键是_防止杂菌污染_，而实验结束后，使用过的培养基应该进行_灭菌_处理后才能倒掉。解析(1)蛋白胨通常为微生物提供氮源、碳源和维生素，淀粉通常作为碳源。(2)恒温培养箱能够保证细菌生长最适温度，故细菌数量增长较快。在另一平板上接种等量无菌水作为对照，判断平板上是否灭菌彻底。(3)细菌培养产生的单个肉眼可见的子细胞群体称为菌落，生态系统中称为种群。计算时应去掉18这个偏差较大组，其他3组(42、38、55)取平均值为45。用稀释涂布平板法进行微生物计数时，由于两个或多个细胞连在一起时在平板上观察到的是
13、一个菌落，所以实际活菌数目要比测得的数目多。(4)为了纯化获得的H细菌，在微生物的实验室培养过程中，关键是防止杂菌污染；实验结束，为避免微生物污染环境和感染操作者，使用过的培养基应该进行灭菌后才能倒掉。14(2020河北省衡水中学高三大联考)科研人员发现，工业污水中有一种极难降解的含氮有机物NS(无色的NS与碘作用可形成蓝色反应)，但可被NS分解菌高效降解。请分析回答下列问题：(1)在筛选NS分解菌的过程中，以NS为唯一氮源的培养基属于_选择_培养基，NS可为NS分解菌提供生长所需的_碳源和氮源_等营养物质。若要对NS分解菌加以纯化并计数，可采用_稀释涂布平板_法接种。(2)NS分解菌培养过程
14、中，获得纯净培养物的关键是_防止外来杂菌的污染(或“无菌技术”)_，为排除杂菌污染，应设置的对照实验是_不接种的空白培养基_。(3)欲鉴定筛选得到的NS分解菌是否具有实用价值，在培养NS分解菌的培养基中除了加入必需的营养物质外还需要加入_碘_用于颜色反应鉴别NS分解菌。若用上述培养基比较不同菌株降解NS能力的大小，请用简洁的语言写出设计思路：_用含相同NS浓度的上述培养基培养不同菌株，一定时间后，通过测定菌落周围透明圈的大小(或直径)来确定不同菌株降解NS能力的大小_。解析 (1)在筛选NS分解菌的过程中，以NS为唯一氮源的培养基能抑制其他不需要的微生物的生长，而促进所需要的NS分解菌的生长，
15、所以该培养基属于选择培养基；NS是一种含氮的有机物，所以NS可为NS分解菌提供生长所需的碳源和氮源等营养物质。若要对NS分解菌加以纯化并计数，可采用稀释涂布平板法接种。(2)微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的污染(或“无菌技术”)，为排除杂菌污染，应设置不接种的空白培养基做对照实验。(3)无色的NS与碘作用可形成蓝色反应，所以可在培养基中加入碘，以用于颜色反应鉴别NS分解菌；可用含相同NS浓度的上述培养基培养不同菌株，一定时间后，通过测定菌落周围透明圈的大小(或直径)来确定不同菌株降解NS能力的大小。15自生固氮菌能独立完成固氮作用，在农业生产中具有广泛的用途，研究人员欲从
16、土壤中筛选出自身固氮菌菌株。请回答下列问题：(1)培养微生物的培养基中，一般都含有水、_碳源_、氮源和无机盐。对培养基进行灭菌的常用方法是_高压蒸汽灭菌法_，要从土壤样品中分离出自身固氮菌，在获得土壤浸出悬液后，可以采用稀释涂布平板法将菌液涂布于缺_氮_的培养基上进行筛选。(2)在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌液量不易过多的原因是_培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果_，涂布培养四天后，可通过观察_菌落_的形态特征来统计土壤中自生固氮菌的种类。(3)纯化自身固氮菌培养的接种方法主要有稀释涂布平板法和_平板划线_法两种。(4)实验结束后，使用过的培养基应该进行_灭菌_处理后，才能扔掉。解析(1)培养微生物的培养基中，一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。对培养基进行灭菌的常用方法是高压蒸汽灭菌法，自生固氮菌可以从空气中的氮气获取氮源，要从土壤样品中分离出自生固氮菌，在获得土壤浸出悬液后，可以采用稀释涂布平板法将菌液涂布于缺氮的培养基上进行筛选。(2)在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌液量不易过多的原因是避免培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果；涂布培养四天后，可通过观察菌落的形态特征(大小、形状、颜色、光泽等)来统计土壤中自生固氮菌的种类。(3)纯化自身固氮菌培养的接种方法主要有稀释涂布平板法和平板划线法两种。
