1、大鲵病毒性疾病最新研究进展张晗 邓捷 赵虎 孔飞 马红英 姜维 张红星 王启军摘要：中国大鲵（Andrias davidianus）是我国的特有物种，具有极高的产业开发价值，但病毒性疾病严重危害大鲵人工养殖产业的健康发展。本文对大鲵虹彩病毒的分类地位及主要特征、大鲵虹彩病毒病的病理症状及诊断防治措施几个方面进行了简要概述，以期为大鲵病毒性疾病的深入研究提供科学依据。关键词：中国大鲵（Andrias davidianus）;病毒性疾病;诊断防治中国大鲵（Andrias davidianus），俗称“娃娃鱼”，隶属两栖纲（Amphibia）、有尾目（Caudata）、隐鳃鲵科（Cryptobran
2、chidae）。因大鲵具有较高的药用、食用价值，近年来人工养殖规模不断扩大，但疾病亦随之而来。分析大鲵常见疾病危害程度发现，病毒性感染对大鲵养殖危害最为严重。目前发现的感染大鲵的病毒仅大鲵虹彩病毒（Chinese giant salamander iridovirus，GSIV）一种，但其传播速度快、不易控制且患病大鲵得不到有效治疗，死亡率达 90%以上，严重制约大鲵集约化养殖产业的健康发展1-2。本文从 GSIV 分类地位及主要特征、大鲵发病的病理症状及其诊断防治措施几个方面对大鲵病毒性疾病的现状进行概述，以期为后期大鲵病毒性疾病的防治提供坚实的理论依据，并为大鲵产业发展和相关领域研究提供基
3、本资料和参考。1GSIV 分类地位及主要特性虹彩病毒科（Iridoviridae）病毒是一类大型的胞浆型双链 DNA 病毒，该科共包含虹彩病毒属（Iridovirus）、淋巴囊肿病毒属（Lymphocystivirus）、肿大细胞病毒属（Megalocytivirus）、绿虹彩病毒属（Chloriridovirus）和蛙病毒属（Ranavirus）5 个属。虽然不同种属的虹彩病毒形态特征相似，但由于宿主类型不同，其自身大小会随之表现出很大差异。大鲵虹彩病毒（GSIV），亦称大鲵蛙病毒（Chinese giant salamanderranavirus，GSRV），隶属于虹彩病毒科蛙病毒属3。G
4、SIV 粒子直径约 150 nm，平面观察呈六角形，正二十面体对称结构，外周具囊膜;向内依次为对角直径（1505）nm（N=30）、厚 5 nm 的核衣壳及直径（9818）nm（N=27）的核心体。成熟的 GSIV 粒子在受感染细胞的胞浆内呈晶格状排列或出芽至细胞外3。GSIV 经热、酸（pH 3）、碱（pH 10）、有机溶剂（氯仿、乙醚）及胰蛋白酶处理，囊膜及粒子完整性均被破坏，感染能力大幅下降或完全丧失。经反复冻融处理，GSIV囊膜结构被破坏，但依然具有很强的感染能力4-5。2 鲵虹彩病毒病病理症状患病鲵行动呆滞，食欲不振，偶见吐食现象，体表黏液分泌增加。下颌出血，头、四肢、腹部肿大、有出
5、血斑，背部有突起的白色病灶;严重者白色病灶溃烂，四肢皮肤坏死、肌肉溃烂，甚至断肢。解剖可见腹腔内有大量淡黄色或含血液体，肝肿大、呈灰白色或因淤血呈花斑状，脾肿大、紫黑色，肾肿大、出血，肺囊充血、出血，肠腔充满淡黄色或含血液体。光镜下可观察到皮肤组织、胃肠道、肝、肾、脾等几乎全身组织均发生肿胀、变性、坏死、炎症细胞浸润等病变，部分病变细胞内有圆形或椭圆形嗜酸性病毒包涵体。电镜下可见肝、肾、脾的细胞线粒体肿胀、嵴断裂、溶解，粗面内质网扩张，核糖体脱落，染色质浓缩、边集，部分细胞胞浆内可见晶格状排列或散在的病毒粒子2，6。3 大鲵虹彩病毒病诊断方法由于嗜水气单胞菌（Aeromonas hydroph
6、ila）、迟钝爱德华菌（Edwardsiellatarda）、维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）等引起的细菌性感染和 GSIV 感染大鲵的病理特征有明显相似性，并且有可能出现部分细菌与 GSIV 混合感染的情况，所以患病鲵临床症状、病理解剖结果可以作为初步诊断 GSIV 感染的病理学依据，除此之外还可采用如下方法进一步确诊7-9。3.1 电镜检测该方法直观性强、准确度高，但操作复杂，对病毒的检测存在偶然性，不利于 GSIV的快速診断，且需在较高条件的实验室完成。3.2 组织培养法该方法被称为蛙病毒的“金标准”法，可清晰观察病毒粒子最基本的理化特征，但操作过程复杂、要求较高，耗时
7、较长，灵敏度偏低，不利于 GSIV 的快速诊断。3.3 免疫学监测例如 ELISA 检测、Western blot 检测等，均是依据抗原、抗体特异性结合的原理检测出 GSIV，特异性好，灵敏度高，但试验灵敏性非常依赖抗体质量的好坏，且操作复杂，适合在实验室检测研究。3.4PCR 检测包括普通 PCR、荧光定量 PCR、巢式 PCR、套式 PCR 和环介导等温扩增（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP）等。荧光定量 PCR 检测特异性更强、灵敏度更高、可重复、可定量，基于此建立的 TaqMan MGB 荧光定量 PCR 可通过采血检测的方法实现对
8、活体的疾病监测，对大鲵伤害较小10。巢式 PCR、套式 PCR 灵敏度较普通 PCR高，较荧光定量 PCR 略低，但成本也低，适合在基层实验室推广应用11-12。LAMP 方法在 6065的恒温下即可快速完成目的基因的大量扩增，与其他几种 PCR 技术相比，操作快速、高效，无需昂贵仪器设备，适合基层实验室和养殖现场的快速检测7，13。4 大鲵虹彩病毒病防治措施4.1 日常预防措施4.1.1 环境大鲵生境应确保阴凉无风，水质干净，水温 1025，溶氧量 3 mg/L 及以上，pH 6.88.8。定期换水消毒，确保养殖池洁净安全。4.1.2 饵料饵料来源应确保安全，健康无病害，防止投喂携带病毒的饵
9、料。饵料投喂要确保定时、定量、定位、定质，并根据季节、年龄、水温、摄食状况等因素灵活调整。另可在饵料中添加药物以增强组织器官抗病毒功能，提高机体免疫能力14-15。4.1.3 日常管理清楚苗种来源，确保苗种不携带病毒。建立户籍档案和日常生产管理日志，及时掌握大鲵健康状况。合理控制养殖密度。对发现患病的大鲵及时做好隔离，未患病大鲵用黄芪多糖、电解多维、葡萄糖连续 7 天浸泡，同时进行虹彩病毒抽样 PCR 检测。养殖场、养殖水体及养殖用具等用高锰酸钾和聚维酮碘彻底消毒，饵料鱼用高锰酸钾浸泡消毒，工作人员进出患病鲵隔离区时做好严格消毒，防止疫情扩散8。4.2 治疗方法由于 GSIV 引起的病毒性出血
10、症发病快、易扩散、难治疗，易引发继发性感染，目前很难有合适的药物完全治愈。对虹彩病毒和嗜水气单胞菌或柱状黄杆菌（Flavobacteriumcolumnaris）混合感染的大鲵腹腔注射头孢拉定配合氟苯尼考和维生素 C+E 浸泡有一定治疗效果8-9。阿昔洛韦可通过抑制虹彩病毒的胸腺激酶从而降低病毒复制速度，对虹彩病毒病也有一定治疗作用16-17。另外，芍药、人参、黄芪、金银花、蜂胶等中草药具有广谱抗病毒作用，但成分复杂，特异性差，作用机理不甚明确，治疗方式、用量与效果缺乏稳定可靠的数据支持，有待进一步研究。疫苗具有安全性高、特异性强、作用时间长等优点，疫苗免疫被认为是预防水生动物病毒性感染最有效
11、的途径。贾秋红等通过自制的GSIV 灭活疫苗及中西药结合的抗病毒药物对患病鲵的治疗有很好疗效;邓绿洲制备出的GSIV 灭活疫苗提高大鲵特异性免疫的同时，非特异性免疫也有所加强;孙建滨制备的两种GSIV 灭活疫苗均得到较好的免疫应答效果16，18，19。这些研究对高效 GSIV 疫苗新产品的成功研发和批量化生产有很大帮助。5 讨论目前研究表明，使大鲵患病的病毒仅 GSIV 一种，属蛙病毒属，该属病毒被称为“冷血动物杀手”，大多致病性强、免疫原性低，可通过调控自身和宿主细胞的基因表达实现免疫逃逸。蛙属病毒对不同发育阶段的两棲动物感染率存在差异，其中，幼体感染占比约60%，成体占比约 30%，变态发
12、育占比仅 10%。当幼鲵被 GSIV 感染后死亡率高达100%16。所以做好大鲵病毒性感染的预防工作，特别是对幼鲵的预防保护极为重要。提高日常防疫质量的同时，给幼鲵注射 GSIV 疫苗是最佳的预防手段。疫苗种类的选择上，灭活疫苗具有安全性高、生产相对简单等优点，得以普遍应用;亚单位疫苗可去除病毒粒子中一些引起不良反应的成分，安全性更高;核酸疫苗（DNA 疫苗和 RNA 疫苗）等新型疫苗生产成本低、分子结构稳定，更便于运输保存，渔用 DNA 疫苗在1996 年首次应用以来已得到迅速发展，曾宪辉等以 GSIV 主衣壳蛋白（major capsidprotein，MCP）基因构建的 DNA 疫苗诱导
13、大鲵产生了较强的细胞免疫和体液免疫，在大鲵虹彩病毒病的预防中具有潜在的应用价值20。由此可见，继续积极开展大鲵病毒性疾病免疫防控技术、研发高效的 GSIV 疫苗及有效的快速诊断试剂盒，实时监测防控，做到早预防、早发现、早隔离、早治疗，可以有效减少大鲵病毒性疾病发病率，从而确保大鲵养殖产业的可持续发展。参考文献：1 桂朗，张奇亚.中国水产动物病毒学研究概述J.水产学报，2019（43）：168-187.2 耿毅，汪开毓，李成伟，等.蛙病毒感染致养殖大鲵大规模死亡的电镜观察及 PCR检测J.中国兽医科学，2010，40（8）：817-821.3 周小愿，张星朗，吉红，等.大鲵虹彩病毒的形态结构及其
14、包涵体特征J.淡水渔业，2015，45（1）：62-66.4 高正勇，曾令兵，肖汉兵，等.大鲵虹彩病毒理化及生物学特性研究J.淡水渔业，2012，42（5）：17-26.5 王广军.虹彩病毒生物学研究现状及展望J.湛江海洋大学学报，2004，24（3）：74-78.6 耿毅，汪开毓，李成伟，等.养殖大鲵蛙病毒自然感染的病理形态学观察J.中国兽医学报，2011，31（11）：1640-1644.7 刘星星，耿毅，汪开毓，等.大鲵蛙病毒 LAMP 检测方法的建立J.中国兽医学报，2015，35（4）：558-564.8 王芳，余波，史开志，等.虹彩病毒和柱状黄杆菌混合感染大鲵的诊治J.湖北农业科学
15、，2013，52（13）：3102-3104.9 余波，王芳，徐莉，等.一例人工养殖大鲵感染虹彩病毒和嗜水气单胞菌的诊治J.广东农业科学，2013（12）：134-139.10 徐敬钧.基于大鲵蛙病毒 49L-ORF 的 TaqMan MGB 荧光定量 PCR 检测方法的建立及应用D.成都：四川农业大学，2016：33-36.11 刘星星，耿毅，周赵英，等.大鲵蛙病毒巢氏 PCR 检测方法的建立J.中国兽医学报，2014，34（3）：406-410.12 王芳，康超，李永霞，等.大鲵虹彩病毒套式 PCR 诊断方法的建立及应用J.江苏农业科学，2016，44（8）：291-293.13 Noto
16、mi T，Okayama H，Masubuchi H，et al.Loop-mediated isothermalamplification of DNAJ.Nucleic Acids Res，2000，28（12）：e63.14 田功太，陈晓，刘成贵，等.中国大鲵病害生态综合防控体系构建J.湖北农业科学，2016，55（4）：975-979.15 张红星，赵虎，王启军.大鲵病害预防与综合治疗技术J.河南水产，2010（4）：30-33.16 邓绿洲.大鲵蛙病毒（CGSRV）灭活疫苗的研制与免疫效应研究D.成都：四川农业大学，2015：4，31-35.17 Coupar B E H，Goldi
17、e S G，Hyatt A D，et al.Identification of a Bohleiridovirus thymidine kinase gene and demonstration of activity using vaccinavirusJ.Archives of Virology，2005，150（9）：1797-1812.18 贾秋红.大鲵感染虹彩病毒的诊断和治疗J.河北渔业，2014（12）：41-41.19 孙建滨.大鲵虹彩病毒灭活方法比较与疫苗制备技术研究D.武汉：华中农业大学，2013：40-41.20 曾宪辉，曾令兵，周勇，等.大鲵虹彩病毒主衣壳蛋白 MCP 基
18、因 DNA 疫苗的构建及其免疫效果J.中国水产科学，2015，22（5）：1055-1067.Research progress on viral disease of Chinese giant salamanderZHANG Han，DENG Jie，ZHAO Hu，KONG Fei，MA Hongying，JIANG Wei，ZHANG Hongxing，WANG Qijun（Shaanxi Institute of Zoology，Xi，an 710032，China）Abstract：Chinese giant salamander（Andrias davidianus）is a u
19、niquespecies in China，which has a high value of industrial development.However，viral disease affects the aquaculture of Chinese giant salamander.In order todeeply study and then to conquer viral disease，we summarized theclassification status and biological characteristics of Chinese giantsalamander
20、iridovirus（GSIV），the pathological symptoms，the main diagnosticmethods，and the recent measures for the prevention and treatment of viraldisease.Key words：Chinese giant salamander（Andrias davidianus）;viraldisease;prevention and treatment（收稿日期：2020-03-25）基金項目：陕西省科学院重点项目（2015K-03）。作者简介：张晗（1990-），女，硕士，研究实习员，研究方向：水生动物养殖与保护。E-mail：emailprotected。通信作者：王启军（1983-），男，硕士，副研究员，研究方向：水生动物养殖和保护。E-mail：emailprotected。DOI：10.3969/j.issn.1004-6755.2020.04.015
