1、实验二分离以尿素为氮源的微生物目标：1.掌握分离以尿素为氮源的微生物常用的方法；2.巩固涂布分离法的具体操作。从自然界中分离微生物 自然环境中微生物的种类和数量要受到所处环境中有机物、氧、温度、水分、pH值、光线等各种因素的影响。土壤中的微生物分布的数量：按种类递减，细菌(108个/g)放线菌(107个/g)霉菌(106个/g)酵母菌(105个/g)藻类(104个/g)原生动物(103个/g)。土壤中的大量微生物已成为分离各种抗生素、生理活性物质、酶和氨基酸产生菌的主要来源。目前全世界能分离培养的微生物还不到其总数的1%。从土壤中采集微生物 土壤有机质含量和通气状况 有机质丰富的土壤如耕土,菜
2、园土,近郊土壤,通气保水性能好,适合细菌,放线菌生长繁殖;森林土植被多,枯叶多,有机质丰富,但阴暗潮湿,适合霉菌,酵母菌生长繁殖 土层的纵剖面 采土样最好的土层是525cm。由于阳光照射，1-5cm的表层土的蒸发量较大、又由于紫外线具有杀菌作用，所以该土层的微生物数量较少；25cm以下的土层因土质紧密,空气、营养、水分缺乏,含菌量逐步减少。土壤采样方法:采土样地点选好后,用小铲子去除5cm表土,取离地面5-15cm处的土样10-25克,盛于预先灭菌的牛皮纸袋中扎紧,并标明时间,地点和环境等情况,以备查考。脲，又称尿素CNH2NH2O为蛋白质的降解产物，会污染环境，但可以被含脲酶的微生物分解。为
3、了获得某一特定的微生物菌种，必须进行微生物的分离纯化，把最需要的菌株直接从样品中分离出来。分离纯化选择培养基完全培养基尿素为唯一氮源的培养基土壤稀释液（多种微生物）结果如何？选择培养基：根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的特殊分离培养基，可以将需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。二、实验原理：利用将尿素作为唯一氮源的选择培养基分离出能利用尿素的细菌，再通过稀释涂布分离法，将该菌分散开来，以形成单菌落。一、实验目的：分离以尿素为氮源的微生物三、实验流程：1.制备培养基LB固体培养基（完全培养基）尿素固体培养基灭菌倒平板2.制备一定浓度梯度的细菌悬液3.涂布分离4.培养对照组实验组（制备成10-2、10-3、10-4、10-5土壤稀释液）4.5ml无菌水0.5ml0.5ml0.5ml-4-4-4-5-5-51g土样99ml无菌水-3-4-5LB培养基上10-4、10-5稀释液涂布结果尿素培养基上10-4、10-5稀释液涂布结果37恒温培养四、实验结果五、实验分析与讨论分离出的细菌都是以尿素为氮源的吗？课后讨论 教材28页
