1、基础点1植物组织培养的基本过程试管苗植物体2菊花组织培养过程(1)影响植物组织培养的主要因素选材：一般选择未开花植株的茎上部新生的侧枝。营养供应(2)实验操作过程制备MS固体培养基：配制好的培养基进行高压蒸汽灭菌外植体消毒：接种：始终在酒精灯火焰旁进行，对接种工具要用火焰灼烧灭菌。将菊花茎段插入培养基中时注意不要倒插。培养与移栽：在1822 的无菌箱中培养，得到试管苗后进行移栽3月季的花药培养(1)花粉发育过程：花粉母细胞(小孢子母细胞)四分体时期单核期双核期花粉粒。(2)影响花药培养的因素：主要因素是材料的选择和培养基的组成。花药培养一般选择在初花期，选择的花粉处于发育过程中的单核期。(3)
2、实验操作关键材料的选取：挑选完全未开放的花蕾，确定花粉发育时期最常用方法是醋酸洋红法。接种：灭菌后的花蕾，在无菌条件下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。剥离花药时尽量不要损伤花药。培养：温度控制在25 左右，幼小植株形成后才需要光照。如果花药开裂释放出胚状体，就要在花药开裂后尽快将幼小植株分开。重难点1MS培养基(植物组织培养用的培养基)的成分及各成分的作用成分作用微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐蔗糖提供碳源，维持细胞渗透压甘氨酸、维生素、烟酸、肌醇满足离体植物细胞在正常代谢途径受一定影响后所产生的特殊营养需求2菊花茎与月季花药组织培养的比较菊花茎的组织培养月季花药组
3、织培养理论依据植物细胞的全能性植物细胞的全能性材料选取未开花植株茎上部新萌生的侧枝完全未开放的花蕾光照状况每日用日光灯照射12 h开始不需要光照，幼小植株形成后需要光照操作流程菊花组织愈伤组织长出丛芽生根菊花植株影响因素选材、营养、激素、pH、温度、光照等基本过程脱分化、再分化注意点影响植物组织培养的因素及成功的关键(1)影响因素内部因素：材料的选取。外部因素：营养成分的种类及配比；植物激素的用量及使用顺序；pH、温度、光照等。(2)获得成功的关键植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗逆性差，对培养条件要求较高。培养材料一旦被微生物污染，就会导致实验失败。原因是微生物增殖快，生长迅速，消耗养分
4、多，并产生代谢废物毒害培养材料。无菌技术主要包括对操作空间、实验用具、实验材料以及操作者的消毒灭菌。1思维辨析(1)在愈伤组织培养中加入细胞融合的诱导剂，可获得染色体加倍的细胞。()(2)植物组织培养应在无菌条件下进行。()(3)二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的植株。()(4)培育草莓脱毒苗所采用的主要技术是组织培养。()(5)被子植物的花粉发育要经过小孢子四分体时期、双核期和单核期等阶段。()(6)如果通过植物组织培养从愈伤组织中提取某种成分，应先使用生长素后使用细胞分裂素。()答案(1)(2)(3)(4)(5)(6)2下列有关植物组织培养的叙述，正确的是()A愈伤组织是一团
5、有特定结构和功能的薄壁细胞B二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到稳定遗传的植株C用人工薄膜将胚状体、愈伤组织等分别包装可制成人工种子D植物耐盐突变体可通过添加适量NaCl的培养基培养筛选而获得答案D解析愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞，不具有特定的结构和功能；二倍体植株的花粉中只含一个染色体组，培养得到的个体为单倍体，高度不育，其幼苗需用秋水仙素处理后才能稳定遗传；愈伤组织不能用于制备人工种子；用特定的选择培养基可筛选出所需要的突变体类型。3下列关于植物组织培养的叙述，错误的是()A一般来说容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养B对菊花茎段进行组织
6、培养，不加植物激素也能成功C接种后的锥形瓶放入无菌箱中，给予适宜的温度和光照即可D移栽生根的试管苗之前，先打开瓶口，让试管苗在培养间生长几日答案C解析容易进行无性繁殖的植物其细胞全能性较高，容易进行组织培养，A正确；菊花茎段对诱导条件灵敏，即使无植物激素添加，还有许多别的营养元素，本身也具有内源激素，因此不添加激素也能成功，B正确；接种后应暗处培养，有利于脱分化产生愈伤组织，光照下会分化产生维管组织，不利于愈伤组织的产生，C错误；移栽生根的试管苗之前，先打开瓶口，让试管苗在培养间生长几日，目的是提高适应能力，D正确。4关于影响花药培养的因素的说法，不正确的是()A材料选取和消毒是花粉植株诱导成
7、功的关键B选择盛开的或略微开放的花作实验材料C亲本植株的生长条件、材料的低温预处理、接种密度都对实验有影响D应选择完全未开放的花蕾作实验材料答案B解析在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。选择单核期以前的花药接种，质地幼嫩，极易破碎；选择单核期以后的花药接种，花瓣已有些松动，又给材料的消毒带来困难，因此通常选用未开放的花蕾，盛开或略微开放的花，都不宜作为实验材料，此外，亲本植物的生长条件、材料的低温处理以及接种密度等对诱导的成功率都有一定影响。植物组织培养的4个方面(1)理论基础：全能性。(2)基本过程：包括脱分化和再分化。(3)培养基的制备：诱导愈伤组织的固体培养基，
8、分装后要进行灭菌。接种前，要对外植体进行消毒。(4)植物激素的影响：组织培养的培养基中必须加入生长素和细胞分裂素，两种激素的使用顺序和浓度配比将影响组织培养过程中的细胞分裂和分化。考法综述本考点主要考查植物组织培养的过程，特别是生长素和细胞分裂素在植物组织培养过程中的作用，多数省份以一道非选择题的形式出现，难度一般不大。命题法植物组织培养的过程分析如图甲是植物组织培养过程示意图，图乙是植物激素对愈伤组织分化影响的示意图。据图回答下列问题。(1)植物组织培养的原理是植物细胞具有_。(2)在A过程中，为了有利于嫩枝组织细胞启动细胞分裂形成愈伤组织，常常需要在配制好的培养基中添加_。嫩枝组织细胞接种
9、后25天时，若发现其边缘局部污染，原因可能是_。(3)在过程B中，若愈伤组织没有形成根，但分化出了芽，其原因可能是_；若要获得更多的愈伤组织，培养基中两种激素的含量应该是_。(4)切取经光照一段时间后的幼苗芽尖处的组织块，消毒后，接种到诱导再分化的培养基中培养，该培养基中两种植物激素浓度相同。从理论上分析，分化的结果是_；原因是_。答案(1)全能性(2)植物激素嫩枝组织细胞消毒不彻底(3)培养基中生长素较少，细胞分裂素较多细胞分裂素的量中等，生长素较少(4)生根培养基中细胞分裂素与生长素的浓度相等，而经光照后的幼苗芽尖处组织块含较多生长素，因此组织块处的细胞分裂素相对较少，生长素相对较多，故诱
10、导生根解析(1)植物细胞具有全能性，这是植物组织培养的理论基础。(2)植物组织培养过程中，启动细胞分裂和愈伤组织的分化都离不开植物激素，植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、诱导脱分化和再分化的关键性激素。培养的嫩枝组织细胞边缘发生局部污染，可能是因为嫩枝组织细胞消毒不彻底。(3)、(4)从图乙可知，植物激素的种类及其浓度配比都会影响愈伤组织分化的方向，具体结合图示和题干信息回答即可。【解题法】生长素和细胞分裂素在植物组织培养中的作用的判断方法(1)有生长素存在，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。1为了获得植物次生代谢产物，先用植物外植体获得愈伤组织，然后在液体培养基中悬浮培养。请回答下列
11、问题：(1)外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为_。(2)在愈伤组织悬浮培养时，细胞干重、蔗糖浓度和pH的变化如图所示。细胞干重在12 d后下降的原因有_；培养液中蔗糖的作用是_、_。(3)多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体。二倍体愈伤组织细胞经_处理，会产生染色体加倍的细胞。为检测愈伤组织细胞染色体数目，压片前常用纤维素酶和_酶解离愈伤组织。若愈伤组织细胞(2n)经诱导处理后，观察到染色体数为8n的细胞，合理的解释是_、_。(4)为了更好地获得次生代谢产物，生产中采用植物细胞的固定化技术，其原理与酵母细胞固定化类似。下列说法正确的有_(填序号)。选取旺盛生长的愈伤组织细胞包埋
12、必须在光照条件下培养培养过程中需通空气固定化后植物细胞生长会变慢答案(1)脱分化(2)蔗糖浓度下降，pH降低提供能源调节渗透压(3)秋水仙素(低温)果胶经加倍到4n的细胞处于有丝分裂后期经加倍到8n的细胞处于有丝分裂中期(4)解析(1)外植体经脱分化可形成愈伤组织。(2)分析坐标曲线图，可见培养液中的蔗糖浓度已降至较低，pH也由6降为4，因此使得细胞生命活动受阻，细胞干重减小。培养液中的蔗糖可为培养的细胞提供能源，又可调节培养液的渗透压。(3)二倍体愈伤组织经秋水仙素、低温等人工诱导处理，可产生染色体数目加倍的细胞。植物细胞之间除纤维素外，还存在果胶层，因此可利用纤维素酶和果胶酶解离愈伤组织。
13、愈伤组织细胞(2n)经人工诱导后，细胞中染色体数目加倍成4n，染色体数为4n的细胞进行有丝分裂，处于有丝分裂后期的细胞中含有8n条染色体；若加倍到4n的细胞经诱导后继续加倍形成染色体数为8n的细胞，这样的细胞再进行有丝分裂，在中期时会看到染色体数为8n的细胞。(4)通过愈伤组织获得次级代谢产物时，需选择生长旺盛的细胞，由于植物细胞进行有氧呼吸，培养过程需通入空气。愈伤组织细胞没有叶绿体，不进行光合作用，不需光照。植物细胞固定化后，与外界环境的物质交换能力降低，生长变慢。2某年我国某地由于柑橘大实蝇的危害，橘农遭受到了很大的损失，当地政府想尽一切办法帮助橘农尽量减少损失。(1)有人想提取橘皮精油
14、获取利润，一般提取橘皮精油的方法是_法。(2)橘皮精油的提取若采取水蒸气蒸馏法，会出现原料_和有效成分_等问题。(3)某橘农发现自家有一株橘树具有抗虫性状，通常选取_作材料进行植物组织培养大量繁殖无病毒植株。若用花药进行离体培养，则选择花粉发育至_期的花药培养成功率最高。确定花粉发育时期最常用的方法有_法，某些植物的花粉不易着色，需采用_法。(4)影响植物组织培养的因素很多，其中最关键的激素有_。在进行植物组织培养时需保证细胞处于离体状态，原因是_。答案(1)压榨 (2)焦糊水解 (3)茎尖或芽尖单核醋酸洋红焙花青铬矾 (4)生长素和细胞分裂素在柑橘个体发育过程中，不同细胞中遗传信息执行情况不
15、同，细胞分化形成不同的组织和器官解析(1)(2)水中蒸馏的方法对于有些原料不适用，如柑橘，这是因为水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题，因此柑橘芳香油制备一般采用压榨法。(3)一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。选择单核期以前的花药接种，质地幼嫩，极易破碎，选择单核期以后的花药接种，花瓣已有些松动，又给材料的消毒带来困难。确定花粉发育时期最常用的方法有醋酸洋红法，某些植物的花粉不易着色，需采用焙花青铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。(4)植物组织培养时最关键的激素是生长素和细胞分裂素；在进行植物组织培养时需保证细胞处于离体状态，原因是在柑橘个体发育过程中，不同细胞中遗传信息执行情况不同，细胞分化形成不同的组织和器官。
