1、课时跟踪检测（十二）重组DNA技术的基本工具一、选择题1下列有关基因工程的叙述，正确的是()A基因工程是细胞水平上的生物工程B基因工程的产物对人类都是有益的C基因工程育种的优点之一是目的性强D基因工程产生的变异属于人工诱变解析：选C基因工程是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行有目的地改造，然后导入受体细胞内，使目的基因在受体细胞内成功表达，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品，因而基因工程是分子水平上的生物工程；基因工程产生的变异属于基因重组，而不属于人工诱变；基因工程虽是按照人们的意愿改造生物，目的性强，但并不是所有的基因产物对人类都有益。2下列
2、有关E.coli DNA连接酶和T4 DNA连接酶作用的叙述，正确的是()AT4 DNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来BE.coli DNA连接酶只能将双链DNA片段平末端之间进行连接CT4 DNA连接酶既可以“缝合”黏性末端，又可以“缝合”平末端DE.coli DNA连接酶连接平末端的效率比较低解析：选CT4 DNA连接酶可用于连接黏性末端和平末端，A错误，C正确；E.coli DNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端连接起来，B错误；E.coli DNA连接酶不能连接平末端，T4 DNA连接酶可连接平末端但效率较低，D错误。3关于基因工程中载体的叙述，错误的是(
3、)A载体与目的基因结合的过程发生在细胞内B载体须具有一至多个限制酶切点，以便与外源基因连接C基因工程常用的载体有质粒、噬菌体和动植物病毒等D载体须具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择解析：选A载体与目的基因结合的过程发生在细胞外，A错误；载体须具有一至多个限制酶切点，以便与外源基因连接，B正确；基因工程常用的载体有质粒、噬菌体和动植物病毒等，C正确；载体须具有标记基因，以供重组DNA的鉴定和选择，D正确。4在“DNA的粗提取与鉴定”实验中，实验原理是利用DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同来提取的，DNA的溶解度与如图所示曲线的对应点相符合的是()Aa点浓度适合析出DNABb点浓度最
4、适合析出DNACc点浓度最适合析出DNADd点浓度最适合析出DNA解析：选B由曲线可知，a、d点浓度DNA的溶解度较高，适合DNA溶解；b点浓度DNA的溶解度最低，最适合DNA析出；c点浓度DNA的溶解度较b点浓度高，不是最适合DNA析出的点。5如图所示，下列有关工具酶功能的叙述，错误的是()A限制性内切核酸酶可以切断a处BDNA聚合酶可以连接a处C解旋酶可以使b处解开DDNA连接酶可以连接c处解析：选D限制性内切核酸酶切割DNA分子时破坏的是DNA链中的磷酸二酯键，如图a处。DNA聚合酶是将单个脱氧核苷酸加到已有的核酸片段的3末端的羟基上，形成磷酸二酯键，因此DNA聚合酶可以连接a处。解旋酶
5、解开碱基对之间的氢键，即使b处解开。DNA连接酶连接的是两个相邻的脱氧核苷酸的磷酸和脱氧核糖，形成磷酸二酯键，如a处，而图示的c处连接的是同一个脱氧核苷酸的磷酸和脱氧核糖。6作为基因的运输工具载体，必须具备的条件及理由是()A具有某些标记基因，以使目的基因能够与其结合B具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达C对宿主细胞无伤害，以便于重组DNA的鉴定和选择D能在宿主细胞中稳定保存并复制，以便提供大量的目的基因解析：选D作为基因工程的载体必须具备的条件是具有某些标记基因，以便于重组后进行重组DNA的筛选；具有多个限制酶切点，以便于目的基因的插入；对宿主细胞无伤害，能够在宿主细胞中稳定地保存下来并
6、大量复制，以便提供大量的目的基因。7下列关于“DNA的粗提取和鉴定”实验的操作及原理的叙述，正确的是()A用蒸馏水使猪的红细胞涨破获取含DNA的滤液B控制NaCl溶液的浓度可以实现去除杂质的目的C可利用DNA溶于冷酒精的性质进一步纯化DNAD沸水浴条件下，DNA与二苯胺反应呈紫色解析：选BDNA主要存在于细胞核中，哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核，因此不能用来作为提取DNA的材料；由于DNA和蛋白质等物质在NaCl溶液中的溶解度不同，因此可以通过控制NaCl溶液的浓度来去掉杂质；DNA不溶于酒精，而其他杂质易溶于酒精，故利用体积分数为95%的冷酒精可进一步纯化DNA；在沸水浴条件下，DNA与二苯
7、胺反应呈现蓝色。8某科学家从细菌中分离出耐高温淀粉酶(Amy)基因a，通过基因工程的方法，将基因a与载体结合后导入马铃薯植株中，经检测发现Amy在成熟块茎细胞中存在。结合图形分析下列有关这一过程的叙述，正确的是()A获取基因a的限制酶的作用部位是图中的B基因工程所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶、质粒C连接基因a与载体的DNA连接酶的作用部位是图中的D一种限制酶只能识别一种特定的核糖核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子解析：选A获取基因a的限制酶其作用部位是图中的磷酸二酯键，A正确；基因工程所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶，质粒是基因工程中常用的载体，而不是工具酶，B错误；连接基因a与
8、载体的DNA连接酶其作用部位是图中的磷酸二酯键，C错误；一种限制酶只能识别一种特定的脱氧核糖核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子，D错误。9基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶的识别序列和切割位点是，限制酶的识别序列和切割位点是。根据图示判断，下列操作正确的是()A质粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割B质粒用限制酶切割，目的基因用限制酶切割C目的基因和质粒均用限制酶切割D目的基因和质粒均用限制酶切割解析：选A限制酶的识别序列和切割位点是，限制酶的识别序列和切割位点是，由此可知限制酶能够识别和切割限制酶切割后的黏性末端。据题图目的基因两端的核苷酸序
9、列可知，只有用限制酶才能将目的基因切割下来。质粒有Gene和Gene表示的两种标记基因，分别有限制酶的识别序列和限制酶的识别序列；如果用限制酶切割，则Gene和Gene都被破坏，造成重组质粒无标记基因；如果用限制酶切割，则破坏Gene，保留Gene，其黏性末端和切割目的基因所在DNA的黏性末端相同，可以连接形成重组DNA。10以下关于基因工程的操作工具，说法正确的是()A限制酶可以切割DNA和RNABDNA连接酶能将两碱基间通过氢键连接起来C载体的作用是将目的基因导入受体细胞使之稳定存在并表达D切割质粒的限制酶均能特异性地识别6个核苷酸序列解析：选C一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在
10、特定的切点上切割DNA分子，A错误；DNA连接酶的作用是将两个DNA片段通过磷酸二酯键连接起来，B错误；载体的作用是携带目的基因导入受体细胞中，使之稳定存在并表达，C正确；大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，少数限制酶的识别序列由4个、8个或其他数量的核苷酸组成，D错误。11以下是几种不同限制酶切割DNA分子后形成的部分片段。下列叙述正确的是()A以上DNA片段是由3种限制酶切割后产生的B用DNA连接酶可以把连接起来C上述是能用DNA连接酶连接起来的两个片段D限制酶和DNA连接酶作用的部位不同解析：选C图中只有是由同一种限制酶切割形成的，因此题中DNA片段是由4种限制酶切割后产生的，A错误
11、；DNA连接酶可将具有相同黏性末端的DNA片段连接起来，因此不能将连接起来，B错误；由于具有互补的黏性末端，所以能用DNA连接酶连接起来，C正确；限制酶和DNA连接酶作用的部位都是磷酸二酯键，其中限制酶能将磷酸二酯键切断，而DNA连接酶能将磷酸二酯键连接起来，D错误。12某科研小组利用质粒(图甲)和目的基因(图乙)构建重组DNA。下列分析错误的是()A用限制酶Hind和Pst切割质粒，可得到2条DNA片段B不能用Alu酶切割质粒和外源DNA的原因是Alu酶会破坏目的基因C构建重组DNA时，需选择Sma酶和Pst酶同时切割质粒和外源DNAD导入了重组DNA的细菌能在含四环素的培养基上生长，而不能
12、在含氯霉素的培养基上生长解析：选C质粒中含有限制酶Hind和Pst的切割位点，且各含一个，因此用这两种限制酶切割质粒，可得到2条DNA片段，A正确；由图乙可知，限制酶Alu的切割位点位于目的基因上，因此不能用Alu酶切割质粒和外源DNA，否则会破坏目的基因，B正确；用Sma酶和Pst酶同时切割质粒会导致两个抗性基因均被破坏，无法筛选导入重组DNA的细菌，因此构建重组DNA时，不能选择Sma酶和Pst酶同时切割质粒和外源DNA，C错误；构建基因表达载体时，应该选择Hind酶和Pst酶同时切割质粒和外源DNA，这样会破坏氯霉素抗性基因，但没有破坏四环素抗性基因，因此导入了重组DNA的细菌能在含四环
13、素的培养基上生长，而不能在含氯霉素的培养基上生长，D正确。二、非选择题13如图为大肠杆菌及质粒载体的结构模式图，据图回答下列问题：(1)a代表的物质和质粒的化学本质相同，都是_(写中文名字)。自然情况下大肠杆菌能发生的可遗传变异有_。(2)下列常在基因工程中用作载体的是_(填字母)。A苏云金杆菌抗虫基因B土壤农杆菌环状RNA分子C大肠杆菌的质粒D动物细胞的染色体(3)氨苄青霉素抗性基因在质粒DNA上被称为_，其作用是_。(4)若质粒DNA分子的切割末端为，则与之连接的目的基因切割末端应为_；切割形成以上片段的限制酶的识别序列是_。可使用_把质粒和目的基因连接在一起。(5)某种限制酶识别的序列及
14、切点为，那么含该序列的DNA片段被切割后形成的结果是_。解析：(1)a代表的物质是拟核中的DNA分子，质粒是细胞质中的DNA分子，二者都是环状DNA分子，能够自我复制、具有遗传效应、具有双螺旋结构等。大肠杆菌属于原核生物，只能发生的可遗传变异是基因突变。(2)大肠杆菌的质粒是基因工程中常用的载体。(3)质粒上的氨苄青霉素抗性基因是标记基因，可以用于目的基因(或重组质粒)是否导入的鉴定和筛选。(4)根据碱基互补配对原则，目的基因的切割末端应为；目的基因与质粒形成重组DNA需要用到DNA连接酶。切割形成以上片段的限制酶的识别序列是ACGCGT。(5)某种限制酶识别的序列及切点为，那么含该序列的DN
15、A片段被切割后形成的结果是答案：(1)脱氧核糖核酸基因突变(2)C(3)标记基因用于目的基因(或重组质粒)是否导入的鉴定和筛选(4)ACGCGTDNA连接酶(5) 14如图为鸡血细胞中DNA的粗提取和鉴定实验过程中的部分操作示意图，请据图分析，回答下列问题：(1)上述图示中，该实验的正确操作顺序是_(用序号与箭头表示)。(2)步骤中使用2 mol/L NaCl溶液的目的是_。(3)步骤的目的是_，其依据的原理是_。(4)步骤中所得到的丝状物为_色，若要鉴定其主要成分为DNA，可滴加_试剂，_后，如果出现_则证明该丝状物的主要成分为DNA。(5)由于鸡血较难找到，某学生试图用猪血代替，结果没有成
16、功，其原因最可能是_。解析：(1)由分析可知，图中表示的实验正确操作顺序是。(2)DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，DNA能溶于2 mol/L的NaCl溶液。(3)步骤的目的是利用DNA不溶于酒精的性质，除去细胞中溶于酒精的物质提取DNA。(4)提取的DNA呈白色丝状物，鉴定DNA用二苯胺试剂，沸水浴加热5 min，冷却后溶液呈蓝色。(5)猪是哺乳动物，哺乳动物血液中的成熟红细胞没有细胞核和众多的细胞器，细胞中DNA含量很少，因此用猪血代替鸡血来进行该实验难以取得成功。答案：(1)(2)溶解DNA(3)析出并获得DNADNA不溶于酒精(4)白二苯胺沸水浴蓝色(5)猪血含DNA太少(或
17、成熟的红细胞没有细胞核)15下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：限制酶BamHHindEcoRSma识别序列及切割位点(1)一个图1所示的质粒分子经Sma切割前后，分别含有_、_个游离的磷酸基团。(2)要用图1中的质粒和图2中外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma切割，原因是_。(3)与只使用EcoR相比较，使用BamH和Hind两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止_。(4)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入_酶。(5)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_。解析：(1)质粒切割前的环状D
18、NA分子，所有磷酸基团均参与形成磷酸二酯键，不含游离的磷酸基团。从图1可以看出质粒上只含有一个Sma的切割位点，因此切割后质粒变成线性DNA分子，含2个游离的磷酸基团。(2)质粒中抗生素抗性基因为标记基因，由图可知标记基因和外源DNA的目的基因中均含有Sma酶切位点，都可以被Sma破坏。(3)只使用EcoR，则质粒和目的基因两端的黏性末端相同，会导致质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化。(4)需要DNA连接酶催化质粒和目的基因连接，获得重组质粒。(5)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是鉴别和筛选含有目的基因的细胞。答案：(1)02(2)Sma会破坏质粒的抗生素抗性基因和外源DNA中的目的基因(3)质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化(4)DNA连接(5)筛选含有目的基因的细胞
