1、第2课时基因工程的实施过程学习导航明目标、知重点难点 简述基因工程的一般过程。(重点) 理解基因工程每个步骤的原理、方法和过程。(重、难点)阅读教材P1318完成基因工程的实施相关问题基因工程涉及多种技术操作，主要包括获取目的基因，构建基因表达载体，将目的基因导入受体细胞，以及目的基因的检测和鉴定等步骤。1获取目的基因(1)通过基因文库获取目的基因。(2)通过PCR技术扩增目的基因。(3)通过化学方法直接人工合成目的基因。2构建基因表达载体(1)是实施基因工程的核心步骤，其操作过程是将目的基因与质粒、噬菌体或一些动植物病毒等在体外进行重组。(2)一个基因表达载体除了目的基因外，还应包括启动子、
2、终止子和标记基因等。(3)启动子是位于目的基因上游的一段核苷酸序列，是RNA聚合酶识别、结合的部位。(4)终止子是一段特殊的DNA片段，是载体上终止目的基因转录的核苷酸序列。3导入目的基因(1)将基因表达载体导入受体细胞是实施基因工程的重要步骤。(2)将目的基因导入植物细胞的常用方法农杆菌转化法。(3)将目的基因导入动物细胞的常用方法显微注射法。(4)将目的基因导入微生物细胞的方法转化法，用Ca2处理，使大肠杆菌等成为一种能够吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞。4检测和鉴定目的基因用DNA分子杂交法进行DNA水平和RNA水平检测，采用抗原抗体杂交从蛋白质水平检测，有时还需要从个体水平对其生物
3、学特定性状进行检测。 判一判(1)所有的目的基因都可从基因文库中直接获得。()(2)标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。()(3)启动子位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位。()(4)抗虫或抗病的接种实验属于分子水平的检测。() 连一连目的基因的获取与基因表达载体的构建基因工程涉及多种技术操作，首先需要获取目的基因，构建基因表达载体。结合教材P1315第六段内容完成以下探究。 探究1完善下面基因工程的操作示意图，概述基因工程的一般步骤由图分析基因工程的“施工”过程主要包括获取目的基因、构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞及目的基因
4、的检测和鉴定。 探究2结合教材完成下面问题，理解目的基因的获取(1)通过基因文库获取目的基因基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，每个受体菌可能分别含有该种生物的不同基因，称为基因文库。种类：目的基因的获取根据基因的有关信息：基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA、基因的表达产物蛋白质等信息，就可以直接从基因文库中获取目的基因。(2)完善如图关于PCR技术的过程，分析PCR技术扩增目的基因的方法。(3)人工合成法：若基因较小、核苷酸序列已知，可以人工合成。 探究3完善下图，构建基因表达载体(1)观察下图(以质粒作为载体)，
5、并完成其基本过程：(2)完善下面基因表达载体模式图，并分析表达载体的组成及重要构件的作用。1提取目的基因的方法(1)基因组文库表达载体受体细胞目的基因(2)cDNA文库供体生物mRNAcDNA受体菌群目的基因(3)PCR技术目的基因单链DNA双链DNA大量目的基因(4)人工合成2. 突破1目的基因的获取1如图表示基因工程中获取水稻某目的基因的不同方法。下列相关叙述中正确的是()A这三种方法都用到酶，都是在体外进行B碱基对的排列顺序均相同C图示a、b、c三种方法均属人工合成法D方法a不遵循中心法则解析：选A。分析题图可知a为逆转录法获得目的基因，用到逆转录酶；b为直接从生物体获得目的基因，用到限
6、制酶；c为用PCR技术扩增获取目的基因，用到Taq DNA聚合酶，且三种方法均在生物体外进行，故A正确；图示中为逆转录法，为直接分离目的基因，为PCR技术扩增法，由于密码子的简并性，三种方法得到的目的基因中碱基对排列顺序不一定相同，故B、C错误；逆转录法遵循中心法则的内容，故D错误。获取目的基因的四种方法比较方法基因文库的构建PCR技术扩增人工合成基因组文库部分基因文库(如cDNA文库)优点操作简单专一性强可在短时间内大扩增目的基因专一性强，可产生自然界中不存在的新基因缺点工作量大、盲目性大、专一性差操作过程较烦琐，技术要求过高需要严格控制温度，技术要求高适用范围小 突破2基因表达载体的构建2
7、如图是利用基因工程技术培育转基因植物，生产可食用疫苗的部分过程示意图，其中Pst 、Sma 、EcoR 、Apa 为四种限制性核酸内切酶。下列说法错误的是()A图示过程是基因工程的核心步骤B表达载体构建时需要用到限制酶SmaC抗卡那霉素基因的存在有利于将含有抗原基因的细胞筛选出来D除图示组成外，表达载体中还应该含有启动子和终止子等结构解析：选B。图示过程为基因表达载体的构建过程，是基因工程中的核心步骤。构建过程中需要将目的基因完整切割下来，此时要用到限制酶Pst、EcoR。抗卡那霉素基因是标记基因，目的是便于鉴定和筛选含有目的基因的细胞。基因表达载体包括启动子、目的基因、终止子和标记基因等。启
8、动子起始密码(子)；终止子终止密码(子)(1)启动子和终止子都在DNA上，在遗传信息转录时起作用。启动子是启动转录的开始，终止子是DNA分子上决定转录停止的一段DNA序列，其组成单位都是脱氧核苷酸。(2)起始密码子和终止密码子都是mRNA上三个相邻碱基。起始密码子决定翻译的开始，终止密码子决定翻译的停止。将目的基因导入受体细胞学生用书P8受体细胞不同，基因工程的“导入”步骤也不完全相同。结合教材P15第七段P17第二段内容探究目的基因导入受体细胞的方法。(1)目的基因导入植物体细胞最常用的方法是农杆菌转化法。农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染力；当双子叶植物或裸
9、子植物受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，这时农杆菌中Ti质粒的TDNA可进入受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。完善抗软化番茄的培育原理，总结将目的基因导入植物细胞的过程目的基因插入Ti质粒的TDNA农杆菌导入植物细胞目的基因整合到植物细胞染色体上目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。(2)目的基因导入动物细胞常用方法是显微注射法：目的基因表达载体提纯取卵(受精卵)显微注射受精卵发育获得具有新性状的动物。(3)目的基因导入微生物细胞常用方法是Ca2处理法。受体细胞是微生物细胞，其特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等；转化过程是Ca2处理细胞感受态
10、细胞感受态细胞和重组的基因表达载体混合于缓冲液中感受态细胞吸收DNA分子。 (1)目的基因能否在受体细胞中稳定遗传？提示：若是目的基因插入到受体细胞染色体上的DNA分子中，则能稳定遗传；若是目的基因在细胞质中，而细胞分裂时，细胞质是不均分的，子细胞不一定含有目的基因，则不一定稳定遗传。(2)农杆菌转化法中有两次拼接和两次导入。两次拼接的方式和导入的目的都一样吗？ 提示：第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的TDNA的中间部位，第二次拼接(非人工操作)指被插入目的基因的TDNA被拼接到受体细胞染色体的DNA上；第一次导入是将含目的基因的Ti质粒重新导入农杆菌，第二次导入(非人工操作)是指含目的基
11、因的TDNA导入受体细胞。1农杆菌转化法分析(1)构建携带目的基因的表达载体，需要两种工具酶：限制酶和DNA连接酶。(2)基因表达载体(重组质粒)导入农杆菌细胞时，要用Ca2处理农杆菌细胞，使其处于感受态，利于重组质粒的导入。(3)由导入目的基因的受体细胞培育到完整的植株要用到植物组织培养技术。2将目的基因导入动物细胞培育转基因动物时，受体细胞是受精卵，不能用体细胞，因为高度分化的动物体细胞的全能性受到限制。3在基因工程四个步骤中，只有第三步将目的基因导入受体细胞不需碱基互补配对，其余三个步骤都涉及碱基互补配对。 突破1将目的基因导入动植细胞1基因工程操作中将DNA导入受体细胞称为转化。下列相
12、关叙述不正确的是()A被转化的细胞吸收外源DNA是转化的实质B农杆菌转化法适用于所有的植物C动物细胞相对于植物细胞吸收DNA的障碍要小D显微注射法一般用于动物细胞的转化解析：选B。农杆菌转化法只适用于双子叶植物或裸子植物。 突破2将目的基因导入微生物细胞2基因工程中科学家常采用细菌、酵母菌等微生物作为受体细胞，原因主要是()A结构简单，操作方便B繁殖速度快C遗传物质含量少、简单 D性状稳定，变异少解析：选B。目的基因导入受体细胞后，随着受体细胞的繁殖而复制，由于细菌等微生物繁殖速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。因此，基因工程常用的受体细胞有细菌、真菌等。(1)原核生物繁殖快，多
13、为单细胞，遗传物质相对较少，有利于目的基因的复制与表达，因此常采用大肠杆菌等原核生物作为受体细胞。(2)植物细胞的全能性较高，可经植物组织培养过程成为完整植物体，因此受体细胞可以是受精卵也可以是体细胞；动物基因工程中的受体细胞一般是受精卵。 检测与鉴定目的基因学生用书P9基因表达载体导入受体细胞后，并不是所有细胞都能按照预先设定的有效表达，需要对其检测和鉴定。结合教材P17最后两段P18内容完成以下探究。 探究1观察下图，分析DNA水平检测(1)由上图可知，DNA分子杂交法的基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链，在一定条件下(适宜的温度等)按照碱基互补配对原则形成双链。杂交过程是高度特异性
14、的，杂交的双方是待测的DNA和用放射性同位素标记的已知DNA片段(又称基因探针)。若待测核酸中有能与探针互补的特异DNA片段，用于示踪的放射性同位素标记将指示其所在的位置，表明目的基因已插入到转基因生物染色体的DNA中。(2)同理利用DNA和mRNA之间杂交技术，检测目的基因是否转录出mRNA。(3)蛋白质水平检测：先从待测转基因生物中提取蛋白质，再利用相应的抗体进行抗原抗体杂交，若出现杂交带，说明目的基因已表达出相应的蛋白质。 探究2个体水平检测检测指标是检测目的基因所控制的性状。如检测抗虫植物的方法是害虫食用抗虫植株，观察目标是害虫死亡。分子水平和个体水平上检测和鉴定方法的比较类型步骤检测
15、内容方法结果显示分子检测导入检测目的基因是否导入受体细胞DNA分子杂交技术(DNA和DNA之间)是否成功显示出杂交带表达检测目的基因是否转录出mRNA核酸分子杂交技术(DNA和mRNA之间)是否成功显示出杂交带目的基因是否翻译出蛋白质蛋白质分子杂交(抗原和抗体之间)是否成功显示出杂交带个体生物学水平的鉴定确定是否具有抗性及抗性程度；基因工程产品与天然产品的活性是否相同抗虫或抗病的接种实验；基因工程产品与天然产品活性的比较是否赋予了预期抗性或蛋白质活性c 突破1分子水平的鉴定1转基因抗虫棉培育过程中要对Bt基因导入受体细胞后是否可以稳定维持和表达进行检测与鉴定，其中利用到碱基互补配对原则的有()
16、检测棉花的DNA上是否插入了Bt基因检测Bt基因是否在棉花细胞转录出mRNA检测Bt基因是否在棉花细胞翻译成蛋白质检测Bt基因是否赋予了棉花抗虫特性ABCD解析：选A。检测棉花的DNA上是否插入了Bt基因和检测Bt基因是否在棉花细胞转录出mRNA都是用标记的目的基因作探针进行分子杂交，因此都要进行碱基互补配对；检测Bt基因是否在棉花细胞中翻译成蛋白质需进行抗原抗体杂交，检测Bt基因是否赋予了棉花抗虫特性需要做抗虫接种实验，这两项技术都没有涉及碱基互补配对原则。 突破2个体水平上鉴定2下列用于判断目的基因是否转移成功的方法中，不属于分子检测的是()A通过害虫吃棉叶看其是否死亡B转基因生物基因组D
17、NA与DNA探针能否形成杂交带C转基因生物中提取的mRNA与DNA探针能否形成杂交带D转基因生物中提取的蛋白质能否与抗体形成杂交带解析：选A。分子水平的检测包括三个方面：通过DNA杂交检测目的基因是否插入到受体细胞染色体DNA上；通过RNA与DNA杂交，检测目的基因是否转录；通过抗原抗体杂交，检测目的基因是否翻译。通过害虫吃棉叶看其是否死亡，属于个体生物学水平的检测。个体水平的鉴定实际上是检测目的基因是否表达出所控制的性状，除抗虫基因外常见检测方法如下表：转基因生物检测方法观察目标抗病毒(菌)植物病毒(菌)感染未侵染上病斑抗盐植物盐水浇灌正常生长抗除草剂植物喷洒除草剂正常生长获取目的基因产物的
18、转基因生物提取细胞产物与天然产品进行功能活性比较细胞产物功能活性正常 核心知识小结网络构建关键语句1.获取目的基因的常用方法有：从基因文库中获取目的基因、利用PCR技术扩增目的基因和通过化学方法直接人工合成。2.构建基因表达载体是基因工程的核心，一个基因表达载体的组成，除了目的基因外，还必须有启动子、终止子及标记基因。3.将目的基因导入植物细胞的常用方法有农杆菌转化法。4.培育转基因动物时，受体细胞一般是受精卵，目的基因的导入方法常用显微注射法。5.检测目的基因是否导入和转录，常用分子杂交技术；检测目的基因是否翻译，常用抗原抗体杂交技术；有的还需个体生物学水平的接种实验检测其活性。随堂检测 知
19、识点一获取目的基因1图中甲、乙表示从细菌细胞中获取目的基因的两种方法，以下说法中错误的是()A甲方法可建立该细菌的基因组文库B乙方法可建立该细菌的cDNA文库C甲方法要以脱氧核苷酸为原料D乙方法需要逆转录酶参与解析：选C。甲方法是以细菌中的DNA为基础，用限制酶进行切割，它包括了细胞所有的基因，可以建立基因组文库，并且可以从中选出所需的目的基因，不需要模板和原料。而乙方法是用逆转录的方法人工合成目的基因，它只能得到生物的部分基因，基因中只有编码区，所以组成的是该细菌的cDNA文库。 知识点二构建基因表达载体2在基因表达载体的构建中，下列说法正确的是()A一个表达载体的组成只包括启动子、终止子B
20、只有存在启动子才能驱动基因转录出mRNAC基因表达载体的构建是在生物体的细胞内完成的D终止密码子的作用是使转录在所需要的地方停止解析：选B。基因表达载体的构建是基因工程的核心内容，一个表达载体的组成，除了目的基因外，还有启动子、终止子和标记基因等，A错误；启动子在基因的首端，它是RNA聚合酶的结合位点，能控制转录的开始，B正确；基因表达载体的构建是在生物体的细胞外完成的，C错误；终止子在基因的尾端，它控制着转录的结束，而终止密码子是存在于mRNA上的，D错误。3如图所示，若用两种识别切割序列完全不同的限制酶E和F从基因组DNA上切下目的基因，并将之取代质粒pZHZ1(3.7 kb，1 kb1
21、000对碱基)上相应的EF区域 (0.2 kb)，那么所形成的重组质粒pZHZ2()A既能被限制酶E也能被限制酶F切开B能被限制酶E但不能被限制酶F切开C既不能被限制酶E也不能被限制酶F切开D能被限制酶F但不能被限制酶E切开解析：选A。由于限制酶具有特异性，同种限制酶切割形成的黏性末端相同，因此由题意可知，限制酶E和F分别切割目的基因和质粒后，目的基因上的两个黏性末端与质粒上的两个黏性末端分别完全相同，因此形成重组质粒后，仍然具有这两种酶的识别序列，所以既能被限制酶E也能被限制酶F切开，故选A。 知识点三目的基因导入受体细胞4我国上海研究所合成一种具有镇痛作用而又不会使病人上瘾的药物脑啡呔多糖
22、(类似人类中的糖蛋白)。如要采用基因工程和发酵技术让微生物来生产有生物活性的脑啡呔多糖，应选哪种微生物为受体细胞()A大肠杆菌 B大肠杆菌质粒 CT4 噬菌体 D酵母菌答案：D 知识点四目的基因的检测与鉴定5人们常用DNA进行亲子鉴定，其原理是：从被测试者的血滴或口腔上皮提取DNA，用限制性核酸内切酶将DNA样本切成特定的小片段，放进凝胶内，用电泳推动DNA小片段分离，再使用特别的DNA“探针”去寻找特定的目的基因。DNA“探针”与相应的基因凝聚在一起，然后，利用特别的染料在X光下，便会显示由DNA“探针”凝聚于一起的黑色条码，被测试者这种肉眼可见的条码很特别，一半与母亲的吻合，一半与父亲的吻
23、合，反复几次上述过程，每一种“探针”用于寻找DNA的不同部位形成的独特的条码，用几组不同的“探针”，可得到超过99.9%的父系分辨率。请问DNA“探针”是指()A某一个完整的目的基因B目的基因片段的特定DNAC与目的基因相同的特定双链DNAD与目的基因互补的特定单链DNA答案：D6真核生物基因中通常有内含子，而原核生物基因中没有，原核生物没有真核生物所具有的切除内含子对应的RNA序列的机制。已知在人体中基因A(有内含子)可以表达出某种特定蛋白(简称蛋白A)。回答下列问题：(1)某同学从人的基因组文库中获得了基因A，以大肠杆菌作为受体细胞却未得到蛋白A，其原因是_。(2)若用家蚕作为表达基因A的
24、受体，在噬菌体和昆虫病毒两种载体中，不选用_作为载体，其原因是_。(3)若要高效地获得蛋白A，可选用大肠杆菌作为受体。因为与家蚕相比，大肠杆菌具有_(答出两点即可)等优点。(4)若要检测基因A是否翻译出蛋白A，可用的检测物质是_(填“蛋白A的基因”或“蛋白A的抗体”)。(5)艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验为证明DNA是遗传物质做出了重要贡献，也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么，这一启示是_。解析：(1)人为真核生物，从人的基因组文库中获取的基因A含有内含子，基因A转录出的产物中有与内含子对应的RNA序列。大肠杆菌为原核生物，没有真核生物所具有的切除内
25、含子对应的RNA序列的机制，因此以大肠杆菌作为受体细胞，不能切除内含子对应的RNA序列，无法表达出蛋白A。(2)噬菌体和动物病毒均可作为基因工程的载体，但它们的宿主细胞不同。题中受体为家蚕，是一种昆虫，因此，选择昆虫病毒作为载体；噬菌体的宿主是细菌，不适合作为该实验的载体。(3)大肠杆菌具有繁殖快、容易培养、单细胞、遗传物质少等优点，因此，常作为基因工程的受体细胞。(4)常用抗原抗体杂交的方法检测目的基因是否表达，故能用于检测蛋白A的物质为蛋白A的抗体。(5)艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验中，S型菌的DNA转移到了R型菌体内，其对基因工程理论的建立提供的启示是DNA可以从一种生物个体转移到另一
26、种生物个体。答案：(1)基因A有内含子，在大肠杆菌中，其初始转录产物中与内含子对应的RNA序列不能被切除，无法表达出蛋白A(2)噬菌体噬菌体的宿主是细菌，而不是家蚕(3)繁殖快、容易培养(4)蛋白A的抗体(5)DNA可以从一种生物个体转移到另一种生物个体课时作业一、选择题1下列属于获取目的基因的方法的是()利用mRNA反转录形成从基因文库中提取从受体细胞中提取利用PCR技术利用DNA转录人工合成A BC D解析：选D。获取目的基因的方法包括从基因文库中获取目的基因、利用PCR技术扩增目的基因和利用DNA合成仪用化学方法直接人工合成。目的基因属于外源基因，不能从受体细胞中提取，利用DNA转录合成
27、的是RNA，不是目的基因。2如图为基因工程的部分过程示意图，甲丁代表各不同阶段参与的成分。根据图中的资料，下列叙述正确的是()A甲可以是细菌的质粒B乙是某种激素分子C丙可以是植物的RNA分子D丁为抗体分子解析：选A。甲、乙、丙、丁分别为质粒、限制酶、目的基因、DNA连接酶。3下列不属于基因表达载体构建过程的是()A用一定的限制性核酸内切酶切割质粒露出黏性末端B用同一种限制性核酸内切酶切割目的基因露出黏性末端C将切下的目的基因的片段插入到质粒切口处D将重组DNA导入受体细胞中进行扩增解析：选D。用同一种限制性核酸内切酶切割目的基因和载体露出相同的黏性末端，便于目的基因和载体的连接，还可能用其他限
28、制性核酸内切酶切割载体以便插入启动子和终止子。4中美科学家通过改变一种名为NR2B的基因研制出了转基因超级小鼠HobbieJ，HobbieJ比普通老鼠更加聪明，大脑运转更加迅速，它能够轻松完成迷宫任务。下列关于HobbieJ产生过程的描述，错误的是()ANR2B基因可通过PCR技术进行扩增B改变后的NR2B基因作为目的基因，可直接注入小鼠受精卵内C通常采用显微注射技术将改变后的NR2B基因重组质粒导入小鼠受精卵内D可采用基因探针检测改变后的NR2B基因是否导入小鼠体内解析：选B。PCR技术可在体外大量扩增目的基因，A正确；改变后的NR2B基因作为目的基因，需要与运载体结合后才可导入小鼠受精卵内
29、，B错误；将目的基因导入动物细胞常用显微注射技术，C正确；可采用基因探针检测改变后的NR2B基因是否导入小鼠体内，D正确。5水母发光蛋白由236个氨基酸构成，其中Asp、Gly、Ser构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是()A促使目的基因导入宿主细胞中B促使目的基因在宿主细胞中复制C使目的基因容易被检测出来D使目的基因容易成功表达解析：选C。控制该蛋白质的基因为标记基因，便于对目的基因是否导入受体细胞进行检测。6下列关于目的基因导入受体细胞的描述，不正确的是()A基因枪法导入植物体细胞的方法比较经济有效B显微注射法是转基因动物中采用最多的方
30、法C大肠杆菌最常用的转化方法是使细胞的生理状态发生改变D农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞最常用的方法解析：选A。不同生物目的基因导入的方法不同，每种方法都有利有弊。目的基因导入植物细胞常用的方法是农杆菌转化法，该方法比较经济有效；基因枪法成本较高；目的基因导入动物细胞常用的方法是显微注射法；大肠杆菌细胞最常用的转化方法就是用钙离子处理细胞，使细胞的生理状态发生改变，完成转化过程。7科学家已经把人的干扰素基因导入家蚕细胞中，并得到高效的表达。此句中的“表达”的含义是指()A家蚕细胞中检测到人干扰素基因的mRNAB家蚕细胞中检测到人干扰素基因C人干扰素基因在家蚕细胞中进行了转录和翻译D家蚕细胞
31、中提取到人干扰素蛋白解析：选D。家蚕细胞中检测到人干扰素基因的mRNA，说明人的干扰素基因完成了转录，A项错误；家蚕细胞中检测到人干扰素基因，说明人的干扰素基因已经成功导入家蚕细胞中，B项错误；人干扰素基因在家蚕细胞中进行了转录和翻译，产生的是人的干扰素蛋白的前体，还需进一步加工，才能得到人的干扰素蛋白，C项错误；家蚕细胞中提取到人干扰素蛋白，说明人的干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，得到了相应基因的表达产物，D项正确。8抗菌肽对治疗癌症有一定作用，如图表示抗菌肽的合成过程。下列相关说法正确的是()A用PCR技术克隆目的基因不需要DNA解旋酶B基因表达载体包含起始密码子和终止密码子C用显微注射法
32、导入基因表达载体D筛选菌种时用基因探针检测相关蛋白质解析：选A。PCR技术中采用高温变性使DNA解旋，因此用PCR技术克隆目的基因不需要DNA解旋酶，A正确；基因表达载体包含启动子和终止子，而起始密码子和终止密码子在mRNA上，B错误；将基因表达载体导入酵母菌细胞时应用感受态细胞法，C错误；筛选菌种时用基因探针检测相关基因或mRNA，不能用基因探针检测蛋白质，D错误。9下列关于基因工程技术的叙述，正确的是()A切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6个核苷酸序列BPCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应C载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因D抗虫基因即使成功地插
33、入到植物细胞染色体上也未必能正常表达解析：选D。A项，限制性核酸内切酶大多特异性地识别6个核苷酸序列，但也有少数限制性核酸内切酶能识别4个、5个或8个核苷酸序列。B项，PCR反应中温度周期性变化是为变性、复性和延伸创造条件。另外，耐高温的DNA聚合酶只是在延伸阶段发挥催化作用，变性和复性过程不需要酶的催化。C项，载体质粒上的抗生素抗性基因可作为标记基因，供重组DNA的鉴定和选择，而不是抗生素合成基因。D项，目的基因导入受体细胞后不一定能正常表达。10某研究小组为了研制预防H7N9禽流感病毒的疫苗，开展了前期研究工作。其简要的操作流程如下图。下列有关叙述错误的是()A步骤所代表的过程是逆转录B步
34、骤需使用限制酶和DNA连接酶C步骤可用CaCl2处理大肠杆菌，使其从感受态恢复到常态D检验Q蛋白的免疫反应特性，可用Q蛋白与禽流感康复的鸡的血清进行抗原抗体特异性反应实验解析：选C。步骤用CaCl2处理大肠杆菌，使其从常态转为感受态。11DNA探针是利用放射性同位素等标记的特定DNA片段。当DNA探针与待测的非标记单链DNA(或RNA)按碱基顺序互补结合时，形成标记DNADNA(或标记DNARNA)的双链杂交分子，可检测杂交反应结果。用某人的胰岛素基因制成DNA探针，能与之形成杂交分子的是()该人胰岛A细胞中的DNA该人胰岛B细胞中的mRNA该人胰岛A细胞中的mRNA该人肝细胞中的DNAA B
35、C D解析：选C。DNA单链能与其互补链及其转录产生的mRNA分子互补配对而形成杂交分子；人体细胞中都有胰岛素基因，但此基因只有在胰岛B细胞中才能得到表达。12利用基因工程技术生产羧酸酯酶(CarE)制剂的流程如图所示，下列叙述正确的是()A过程需使用RNA聚合酶B过程需使用解旋酶和PCR获取目的基因C过程使用的感受态细胞可用NaCl溶液制备D过程可利用DNA分子杂交鉴定目的基因是否已导入受体细胞解析：选D。A项，过程是通过逆转录获取DNA，逆转录过程需要用到逆转录酶。B项，过程指的是从cDNA文库中获取目的基因，不需要利用PCR技术，也用不到解旋酶。C项，过程中使用的感受态细胞要用CaCl2
36、溶液制备，而不是用NaCl溶液制备。D项，过程鉴定目的基因是否已经导入受体细胞，可以用标记的目的基因为探针来检测受体细胞中是否存在目的基因，即利用DNA分子杂交鉴定。二、非选择题13金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：(1)从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA，通过_获得_用于PCR扩增。(2)设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2)，为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的_位点。设计引物时需要避免引物之间形成_
37、，而造成引物自连。(3)图中步骤1代表_，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。(4)PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏_的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但_的引物需要设定更高的退火温度。(5)如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有_(填序号：升高退火温度降低退火温度重新设计引物)。解析：(1)PCR技术可在体外对DNA进行扩增，模板可以是mRNA经过逆转录获得的cDNA。(2)设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2)时，需在引物中增加适当的限制性核酸内切酶的识别序列，便于目的基因与质粒
38、的连接。为了避免引物自连，设计引物时需要避免引物之间形成碱基互补配对。(3)根据PCR的过程可知，图中步骤1为变性，步骤2为退火(复性)，步骤3为延伸，这三个步骤构成一个循环。(4)退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，过高的退火温度会破坏引物与模板的碱基配对。因G、C之间的氢键数多于A、T之间的氢键数，故GC含量高的引物需要设定更高的退火温度。(5)如果PCR反应得不到任何扩增产物，可能的原因是退火温度过高使扩增效率降低，也可能是未按照目的基因两端的核苷酸序列来设计引物，因此可以采取的措施是降低退火温度、重新设计引物等。答案：(1)逆转录cDNA(2)限制性核酸内切酶碱基互补配对(3)变性
39、(4)引物与模板GC含量高(5)14科学家将鼠体内的能够产生胰岛素的基因与大肠杆菌的DNA分子重组，并且在大肠杆菌中发现了胰岛素的前体物质胰岛素原。其过程如下图所示。请据图回答下列问题：(1)图中2、5、3、7表示通过从供体细胞的DNA中直接分离基因，获得_的过程。(2)图中3代表_，在它的作用下将目的基因和质粒切成黏性末端。(3)经9_的作用将7、6“缝合”形成8重组DNA分子。8往往含有_基因，以便将来检测。(4)图中10表示将重组DNA分子导入_的过程。(5)如在大肠杆菌细胞内发现了胰岛素原，说明成功导入了_，并使之完成了表达过程。解析：(1)图中的2、5、3、7过程是为了获取目的基因。
40、(2)获取目的基因需要用限制酶对DNA进行切割。(3)将目的基因和运载体质粒连接起来构成重组质粒的过程中需要DNA连接酶。8中含有标记基因，便于初步筛选。(4)重组质粒要导入到受体细胞中，在该工程中是导入到了大肠杆菌体内，常用氯化钙处理得到感受态的大肠杆菌，图中10代表了该过程。(5)如果在大肠杆菌细胞内发现了胰岛素原，说明成功导入了目的基因，并且表达成功。答案：(1)目的基因(2)限制酶(限制性核酸内切酶)(3)DNA连接酶标记(4)受体细胞(5)目的基因15下图是从酵母菌中获取某植物需要的控制某种酶合成的基因的流程，结合所学知识及相关信息回答下列问题：(1)图中cDNA文库_(填“大于”“
41、小于”或“等于”)基因组文库。(2)过程提取的DNA需要_的切割，B过程是_。(3)为在短时间内大量获得目的基因，可用_扩增的方法，其原理是_。(4)目的基因获取之后，需要进行_。(5)将该目的基因导入某双子叶植物细胞，常采用的方法是_，其能否在此植物体内稳定遗传的关键是_，可以用_技术进行检测。答案：(1)小于(2)限制酶逆转录(3)PCR技术DNA复制(4)基因表达载体的构建(5)农杆菌转化法目的基因是否整合到植物细胞的染色体上DNA分子杂交16补充正常凝血因子F8可以治疗甲型血友病，因此可以利用转基因技术人工生产F8。某种大肠杆菌的质粒中含有半乳糖苷酶片段序列，大肠杆菌的DNA分子中则含
42、有半乳糖酶片段序列，由于天然大肠杆菌同时具备这两种片段序列，可以使培养基中含有Xgal底物转变成蓝色产物，当缺少任意一个或片段序列，Xgal底物不能转变成蓝色产物。Hind、EcoR、BamH分别为三种限制性核酸内切酶，下图中箭头所指为三种限制酶的切点。请据图回答下列问题：(1)应选用的限制性核酸内切酶是_，选择的依据是_。(2)限制酶作用的化学键是_。(3)控制F8的基因也可以通过人体细胞相应的mRNA来合成，该合成的过程称为_。将经转基因技术处理过的质粒导入大肠杆菌后，再将大肠杆菌接种到含有Xgal底物的培养基培养一段时间后，培养基中出现较多的蓝色菌落，这是因为_。解析：(1)分析题图，目
43、的基因和质粒上都有EcoR的酶切位点，并且能把片段序列切开，作为筛选标记，故符合条件的是EcoR酶，切断片段序列后，不能生成蓝色为重组DNA分子的筛选提供标记。(2)限制酶作用的是DNA分子中两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。(3)由mRNA合成DNA的过程是逆转录。出现较多的蓝色说明成功的重组质粒不多，是因为同一种限制酶作用的目的基因、质粒具有相同的黏性末端，因此会出现质粒的自我环化的空载现象，空载质粒含有完整的、片段序列，能利用培养基中的Xgal底物产生蓝色产物。答案：(1)EcoR切断片段序列，为重组DNA分子的筛选提供标记(2)磷酸二酯键(3)逆转录(反转录)同一种限制酶作用的目的基因、质粒具有相同的黏性末端，因此会出现质粒的自我环化的空载现象，空载质粒含有完整的、片段序列，能利用培养基中的Xgal底物产生蓝色产物
