1、江苏省姜堰中学2020至2021学年高二年级春学期2月月考测试 生物学学科试题 2021.2第I卷（选择题 共46分）一、单项选择题：本题包括14小题，每小题2分，共28分。每小题只有一个选项最符合题意。1.组织水肿与内环境渗透压的失衡有关。内环境渗透压可分为胶体渗透压和晶体渗透压，其中由蛋白质等大分子物质形成的渗透压称为胶体渗透压，由无机盐等小分子物质形成的渗透压称为晶体渗透压。毛细血管壁对小分子的通透性大，而蛋白质等大分子则不易通过毛细血管壁。下列说法错误的是A.摄入过多的食盐会引起血浆渗透压升高，组织液渗透压随之升高B.过敏反应中组织胺释放导致毛细血管壁通透性增大易引发组织水肿C.组织水
2、肿的发生主要与组织液和血浆之间的晶体渗透压失衡有关D.静脉输入白蛋白配合利尿剂对于快速缓解组织水肿具有较好的效果2.2021年1月初，我国大部分地区经历了多年未遇的极寒天气。冷空气过境前后心脑血管疾病患者（病例组）与健康人（对照组）体内多巴胺、去甲肾上腺素、肾上腺素含量的变化如下图所示。这几种物质均可以加速心脏跳动、增强心脏收缩、促进小动脉和静脉收缩使人体应对寒冷环境。下列说法错误的是A.这三种物质均可以与突触后膜上的相应受体结合，从而引起突触后膜电位变化B.去甲肾上腺素含量的变化说明心脑血管疾病患者对低温的应激能力比健康人更强C.多巴胺含量对气温变化的反应最敏感，肾上腺素合量反应最迟钝D.极
3、寒天气会导致心脑血管疾病患者血压升高、病情加重3下列与体温调节和水盐平衡调节有关的叙述，正确的是（ ）A体温调节和水盐平衡调节的中枢都位于垂体B若人的垂体功能受损，则会导致机体的尿量减少C机体维持水盐平衡的过程中既有神经调节又有体液调节D在低温环境中人体感觉到寒冷是由于机体散热量大于产热量4下图表示胰岛B细胞与肝细胞在内环境稳态调节过程中的作用，甲、乙、丙分别代表三类血糖调节异常患者的细胞，下列叙述不正确的是（）A图中胰岛素对血糖的调节为体液调节B据图分析可知患者甲的血糖偏高C据图分析可知患者乙的血糖偏低D患者丙可能为一遗传病患者5. 诗经反映了我国古代的社会生活同时也记载了很多的生态学现象，
4、下列有关其内容的叙述错误的是（）A. 小雅鹿鸣中记载“呦呦鹿鸣，食野之苹”反映了典型的捕食关系，其构成了一条简单的食物链B. 诗经国风中记载“燕燕于飞，上下其音”其中的声音作为物理信息通过空气传播C. 邺风简兮中记载：“山有榛，隰有苓”（其中“隰”指低洼地）既体现了不同生物适应不同环境，又体现了生物群落具有垂直结构D. 陈风泽陂中记载：“泽彼之陂，有蒲与荷”反映的是秀美的湿地生态系统，古人在观赏这些景色时留下了很多脍炙人口的诗词，这都是生物多样性直接价值的体现6为助力“美丽乡村”建设，科研人员先后向已被污染的水体中引入以藻类为食的某些贝类，引种芦苇、香蒲等水生植物，以及放养植食性鱼类等。经过一
5、段时间，水体基本实现了“水清”“景美” “鱼肥”的治理目标。下列相关叙述中不正确的是（）A治理前的水体不能实现自我净化说明该生态系统自我调节能力减弱B引种芦苇、香蒲既可吸收水中无机盐，又能遮光抑制藻类生长繁殖C放养植食性鱼类可使生态系统中的物质和能量更好地流向人类D这一案例说明按照人们的意愿大量引种外来物种是生态恢复的重要手段7“无废弃物农业”是生态工程最早的模式之一。如图是“无废弃物农业”中对有机废弃物进行处理的一种方案。有关叙述不正确的是（）A施用有机肥能为作物提供更多的营养物质和能量B从废弃物资源化、无害化角度分析，途径、优于C该模式遵循物质循环再生原理、整体性原理等基本原理D蚯蚓、沼气
6、池中的微生物等分解者能有效促进物质循环利用8现代生物技术造福人类的同时，也可能引起一系列的安全和伦理问题，下列说法不恰当的是（ ）A我国政府不支持任何生殖性克隆人实验B我国主张全面禁止和彻底销毁生物武器C只要有证据表明转基因产品有害，就应禁止该技术的应用D我国已经对转基因食品和转基因农产品实施产品标识制度9北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强。如图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是（ ）A过程获取的抗冻基因与直接从比目鱼体内提取的抗冻基因的结构和功能一样B在重组质粒上，抗冻基因首、末端一定具有启动子和终止子，启
7、动和终止翻译的进程C过程用到的质粒是农杆菌的Ti质粒，要将重组质粒转入农杆菌才能进行筛选D根据抗冻基因制作的DNA探针，可以用来检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在10成纤维细胞具有较强的分裂增殖能力，是较易培养的动物细胞。科学家通过体外诱导成纤维细胞，获得了形态和功能均类似胚胎干细胞的一类细胞，将其称为诱导多能干细胞（简称iPS细胞），并用iPS细胞治疗了镰刀型细胞贫血。下列说法错误的是（ ）A体外培养成纤维细胞时，若要使其保持正常的二倍体核型，则培养代数应控制在10代以内BiPS细胞在形态上应表现出体积大、细胞核小、核仁明显的特点CiPS细胞在功能上应可分化为成年动物体内任何一种组织细胞
8、D将iPS细胞增殖分化出的不同细胞移植回病人体内，理论上可以避免免疫排斥反应11在哺乳动物的受精卵形成过程中，能发生的是（）精子必须发生顶体反应，释放顶体酶 顶体酶可使精子穿过放射冠、透明带、卵细胞膜精子入卵后卵细胞很快完成了减数分裂精子和卵细胞的细胞核分别形成雄原核和雌原核透明带反应防止了多精入卵的发生ABCD12. 沙漠中的啮齿动物和蚂蚁都以植物种子为食。啮齿动物喜欢取食大粒种子、蚂蚁偏爱小粒种子。在该生态系统中大粒种子植物在与小粒种子植物的竞争中处于优势。科研人员在19741977年间，在某一实验区域内进行了啮齿动物的有无对蚂蚁数量影响的相关研究。下列有关分析正确的是（ ）A. 在该生态
9、系统中，蚂蚁和啮齿动物之间没有竞争关系B. 在该生态系统中，蚂蚁和啮齿动物均属于第三营养级C. 移走全部啮齿动物后，蚂蚁的数量会先增加然后维持相对稳定D. 啮齿动物可通过影响植物间的竞争关系对蚂蚁的数量产生影响132020年9月8日在人民大会堂，习近平总书记授予钟南山“共和国勋章”，授予张伯礼、张定宇、陈薇“人民英雄”国家荣誉称号，弘扬他们忠诚、担当、奉献的崇高品质，表彰在抗击新冠肺炎疫情斗争中作出杰出贡献的功勋模范人物。关于陈薇院士研制的疫苗，下列说法错误的是（ ）A新冠肺炎疫苗的研发，需要经过分离病毒菌株、对病毒灭活或减毒、动物试验、三期临床试验等过程，因此研制过程需要比较长的周期B陈薇院
10、士团队将新冠病毒S蛋白基因片段进行改造，插入到腺病毒载体中，获得重组新冠疫苗，注射至体内使腺病毒表达出新冠病毒的抗原而不产生新冠病毒的毒性，获得记忆细胞C陈薇院士团队研发的腺病毒载体疫苗，在选择腺病毒时应选择毒性较大的腺病毒作为载体，使人体获得的免疫力保持时间长久D重组疫苗属于抗原，会使机体产生特异性免疫反应，进而产生相应的抗体和记忆细胞当新冠病毒侵入机体后迅速产生二次免疫应答过程14下列有关植物激素及调节的叙述，错误的是（ ）A生长素和细胞分裂素对侧芽的生长具有相同的作用B在过度失水的植物体内脱落酸的含量显著增加C无根的非洲菊幼苗通过自身幼叶产生生长素促进长根D在种子萌发时，赤霉素与脱落酸的
11、相对比例较种子萌发前高二、多项选择题：本题包括6小题，每小题3分，共18分。全部选对的得3分，选对但不全的得1分，错选或不答的得0分。15新型冠状病毒(2019-nCoV)的检测可以采用实时荧光RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)的方法，RT-PCR的具体过程如图，下列叙述错误的是（ ）APCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶B过程拟对单链cDNA进行n次循环的扩增，理论上需要2n个引物BC该技术用于对某些微量RNA病毒的检测，可提高检测的灵敏度DPCR反应中周期性的温度设置是特定的，与扩增的目的基因和引物无关16下图为机体内发生体液免疫和过敏反应的流程图，图中甲丁代表不同物质，
12、字母代表不同的细胞，数字代表不同的过程，下列叙述正确的是（ ）A第二次注射甲时，产生的浆细胞均来源于E的增殖和分化B图中B细胞只参与特异性免疫，不能参与非特异性免疫C与体液免疫相比，过敏反应特有的过程包括D图中C、E细胞均能识别过敏原17紫花苜蓿产量高，营养丰富，但耐酸性差，作为饲料易造成家畜臌胀病；百脉根耐酸性强，叶片因富含缩合单宁可防止反刍动物臌胀病的发生。研究人员通过植物体细胞杂交最终获得抗臌胀病的新型苜蓿。下列叙述正确的是（ ）A植物体细胞杂交过程中需要先用酶解法去除细胞壁获得原生质体B诱导原生质体融合的方法有物理诱导、化学诱导和生物诱导三种C抗膨胀病型苜蓿新品种与紫花苜蓿、百脉根均不
13、属于同一物种D体细胞杂交育种的过程体现了细胞膜的流动性和细胞的全能性18梅花鹿属于单胎动物，季节性发情。育种工作者希望通过胚胎工程技术对优良品种进行扩大繁殖。下列有关叙述正确的是（）A在母鹿饲料中添加一定量的促性腺激素使其一次排出多个卵子B培养早期胚胎的培养液中含有维生素、激素等多种能源物质C早期胚胎不可进行无限次的分割，以便获得更多的优良后代D梅花鹿的胚胎在早期处于游离状态，为胚胎收集提供可能19下列有关教材实验的叙述，错误的是（ ）A斯他林和贝利斯发现促胰液素的实验说明促胰液素是胰腺在盐酸的作用下产生的B“探究生长素类似物促进插条生根的最适浓度”的实验中，预实验不用设置对照组C“调查某种双
14、子叶植物的种群密度”的实验中，种群个体数较少时，可缩小样方面积D“培养液中酵母菌种群数量的变化”的实验中，先滴菌液再盖玻片会使调查结果偏高20.森林群落中由于老龄树木死亡造成林冠层出现空隙，称为林窗。研究者调查了某森林中林窗与林下的土壤动物群落，得到下图所示的结果。据此不能推断出（ ）A.在各层次中林窗的土壤动物丰富度均高于林下B.光照明显影响了土壤动物群落的水平结构C.林窗和林下土壤动物种类随深度的增加而减少D.林窗和林下不同层次的土壤动物种群密度相同第II卷（非选择题 共54分）三、非选择题（本题共6小题）21(9分)双特异性抗体是指一个抗体分子可以与两个不同抗原或同一抗原的两个不同抗原表
15、位相结合，目前最常利用杂交瘤杂交法来制备。长春花是原产于非洲东海岸的野生花卉，其所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。下图1是科研人员通过杂交杂交瘤细胞技术（免疫的B淋巴细胞和杂交瘤细胞杂交技术）生产能同时识别癌胚抗原和长春碱的双特异性单克隆抗体的部分过程。图2是某双特异性抗体作用图。请分析回答下列问题：（1）与植物体细胞杂交相比，图1中过程特有的诱导融合的方法是_；过程选用的骨髓瘤细胞具有无限增殖的特点，主要原因是_。 （2）为选出能产生专一抗体的细胞，要将从HAT培养基上筛选出的细胞稀释到710个细胞mL-1，将细胞稀释液滴入多孔培养板中，使多孔培养板每孔中有_个细胞，然后筛选出专一抗体检测呈
16、_（选填“阳性”或“阴性”）的细胞进行克隆化培养；该克隆化培养细胞具有的特点为_ 。（3）图1中步骤注射癌胚抗原的目的是_。图1方框内需要经过_次筛选，才能获取单克隆杂交杂交瘤细胞。 （4）假设图2中双特异性抗体分子是由m个氨基酸形成的，下列叙述不正确的有_A该双特异性抗体形成过程中分子量减少18m-80B双特异性抗体可以在人体内持续发挥作用C该特异性抗体能与人体内各类肿瘤细胞结合D双特异性抗体能与药物和肿瘤细胞结合，因而不具有特异性（5）与直接使用长春碱相比，将长春碱与双特异性单克隆抗体结合后给药，对人体的副作用更小，原因是_22(8分)从自然界中的生物体内分离得到的天然酶，在工业生产环境中
17、催化效率往往较低。科研人员对酶的改造包括理性设计方法和非理性设计方法。（1）理性设计是通过定点诱变改变蛋白质中的个别氨基酸，以产生更加理想的酶，此项技术称为_。（2）非理性设计方法主要通过易错PCR技术实现。易错PCR的原理是利用低保真的TaqDNA聚合酶和改变PCR的反应条件，降低DNA复制的保真度，在新DNA链的合成过程中增加碱基错配，从而使扩增产物出现较多点突变的一种体外诱导DNA序列变异的方法。TaqDNA聚合酶负责将碱基与模板链正确地互补配对，Mn2+可以降低这一功能，提高碱基的错配，但非互补的碱基对由于_不易形成，稳定性差，而Mg2+可以提高稳定性，易错PCR时应适当_（填“提高”
18、或“降低”）Mg2+浓度。易错PCR的反应程序为：955min；9530s，5530s，721min，30个循环；7210min。在循环之前的955min处理为预变性，目的是确保_；循环中55处理的目的是使_结合；循环之后72处理时间延长至10min，有利于增加延伸过程中碱基错配的概率。下图是利用易错PCR改造某种天然酶活性的流程示意图。步骤a体现了基因突变具有_特点。步骤b应使受体菌处于_态；步骤c采用_技术筛选突变酶；步骤d将一轮易错PCR筛选获得的有益突变继续进行新一轮的易错PCR，通过连续易错PCR和筛选，导致酶的定向进化，以获得满足人们需求的产物。23(10分)人类众多的行为和生理现
19、象如觉醒、血压、心率、体温等都具有昼夜周期性，这种间隔大约24小时重复一次的生理现象称为生理节律。当人体受到光照时，人体内的生物钟系统将引导并启动从光信号到生理信号的连锁放大过程，从而调节人的行为和生理活动，影响人体的生理节律。人体除了下丘脑视交叉上核（SCN）的主生物钟外，还存在肝脏、胰腺等器官局部生物钟。下图是人体生物钟调节示意图，褪黑素的分泌具有明显的昼夜节律，白天分泌受抑制，晚上分泌活跃，能明显改善睡眠。请回答：（1）在光暗信号引起体内褪黑素的周期性变化的反射中，感光细胞收到光的刺激后，细胞膜外的电位变化过程是_该反射的效应器是_该反射是_（填“条件”或“非条件”）反射。（2）图中去甲
20、肾上腺素是一种_,去甲肾上腺素发挥作用后，大部分是由突触前膜将去甲肾上腺素再摄取，回收到突触前膜处的轴浆内并重新加以利用，这样可以防止松果体细胞_。（3）接受光照刺激后，视神经将神经冲动传递到下丘脑视交叉上核中后，会引起下一个神经元产生_，此过程中存在的信号转换过程是_。下丘脑还能接受褪黑激素的刺激，从图中看，这是一个_调节过程，其意义是_。（4）熬夜打游戏会扰乱生物钟，严重影响人睡眠质量，原因是_。24(10分)某种药物A由于某种原因随着污水进入某大型水库，导致连续爆发“水华”。为防治“水华”，在控制上游污染源的同时，研究人员依据生态学原理尝试在水库中投放以藻类和浮游动物为食的鲢鱼和鳙鱼，对
21、该水库生态系统进行修复。下图1表示该生态系统的营养结构；图2是投放鲢鱼和鳙鱼前后几种鱼的生物积累量。请回答下列问题：（1）流经该生态系统的总能量是_。若大量含药物A的污水流入该水库，会使某些藻类种群大暴发，造成水体的富营养化，这说明_。（2）投放入该水库生态系统中的鲢、鳙鱼属于第_营养级。为确定鲢、鳙的投放量，应根据食物网中的营养级，调查投放区鲢、鳙鱼的_的生物积累量（在本题中指单位面积中生物的总量，以thm-2表示）；还应捕杀鲢、鳙鱼的天敌，目的是_。（3）藻类吸收利用水体中的N、P元素，浮游动物以藻类为食，银鱼主要以浮游动物为食，若要调查水库中银鱼的种群密度，应采用_法。由图可知，将鲢、鳙
22、鱼苗以一定比例投放到该水库后，造成银鱼生物积累量_，引起该变化的原因是_。（4）投放鲢、鳙这一方法是通过人为干预，调整了该生态系统食物网中_，从而达到既提高经济效益又改善了水质的目的，这主要体现的生态工程原理有_。25(9分)基因定点整合可替换特定基因，该技术可用于单基因遗传病的治疗。苯丙酮尿症是由PKU基因突变引起的，将正常PKU基因定点整合到PKU基因突变的小鼠胚胎干细胞的染色体DNA上，替换突变基因，可用来研究该病的基因冶疗过程。定点整合的过程是：从染色体DNA上突变PKU基因两侧各选择一段DNA序列HB1和HB2，根据其碱基序列分别合成HB1和HB2，再将两者分别与基因HSVtk1、H
23、SVtk2连接，中间插入正常PKU基因和标记基因neor，构建出如图所示的重组载体。重组载体和染色体DNA中的HB1和HB2序列发生交换，导致两者之间区域发生互换，如图所示。（1）为获得小鼠的胚胎干细胞，可将小鼠囊胚中的_取出，并用_处理使其分散成单个细胞放入培养瓶，置于_培养箱中培养，培养过程中大部分细胞会贴附在培养瓶的表面生长，这种现象称为_。（2）图中重组载体转化胚胎干细胞时，会出现PKU基因错误整合。错误整合时，载体的两个HSVtk中至少会有一个与neor一起整合到染色体DNA上。已知含有neor的细胞具有G418的抗性，HSVtk1、HSVtk2的产物都能把DHPG转化成有毒物质而使
24、细胞死亡。转化后的胚胎干细胞依次先在含有G418的培养液中进行培养，其目的是_；再在含有_的培养液中进行培养，存活下来的是_的胚胎干细胞，理由是_。（3）将筛选得到的胚胎干细胞培育成小鼠，从个体生物学水平检测，若小鼠_，说明PKU基因成功表达。26(8分) 2020年两位女科学家埃玛纽埃尔卡彭蒂娜和詹妮弗杜德娜因发现“CRISPR / Cas9基因剪刀”而获得2020年诺贝尔化学奖。CRISPR/Cas9 系统可对基因组进行定点编辑，其工作原理如图1所示。该系统主要包含单链向导RNA和Cas9蛋白两个部分，能特异性识别并结合特定的DNA序列，从而引导Cas9蛋白到相应位置并剪切DNA，最终实现
25、对靶基因序列的编辑。请回答下列问题：（1）LMNA基因编码的核纤层蛋白与维持细胞核正常形态有关。科研人员利用CRISPR/Cas9技术对体外培养的HepG2 (人源肺癌细胞)细胞株进行基因编辑，获得了LMNA基因敲除的稳定细胞系。用下图2中的质粒以及含Cas9-sgRNA拼接基因的DNA片段构建表达载体时，应选用_进行酶切。将构建好的表达载体与用_处理的细菌置于适宜反应体系中培养。然后将培养的细菌涂布于含_的平板培养基上，37培养，24h 后挑取菌落，提取质粒作为模板，选择图3中引物组合_和_，通过PCR和电泳技术鉴定是否重组成功。（2）用鉴定成功的工程菌对HepG2细胞进行转染，培养三天后收
26、集HepG2细胞，提取基因组，对其碱基序列进行检测，判断Cas9-sgRNA拼接基因是否导入成功。若从细胞水平进行检测，可以检测HepG2细胞数目增长量或_。 （3）华人科学家张锋是首个将CRISPR基因编辑技术应用于哺乳动物和人类细胞的科学家，为此项技术广泛应用于生命科学和医学领域做出了不可磨灭的贡献。但是更多的学者提出了CRISRP/Cas9基因编辑技术有时存在编辑对象出错而造成“脱靶”，实验发现sgRNA的序列长短影响成功率，越短脱靶率越_，脱靶最可能的原因是_。江苏省姜堰中学2020至2021学年高二年级春学期2月月考测试生物学学科参考答案 2021.21.C2. B3.C4.C5.C
27、6.D7.A8.C9.D10.B11.C12.D13.C14.A15.ABD16.BD17.ACD18.CD19.ABC20.CD21. (9分)（1）灭活的病毒诱导 原癌基因和抑癌基因发生突变 （2）一（或者最多一） 阳性 既能无限增殖，又能产生特异性抗体（或既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体） （3）刺激小鼠产生相应的B淋巴细胞 2 （4）BCD （5）双特异性单克隆抗体能将抗癌药物定向带到癌细胞所在位置，在原位置杀死癌细胞 22. (8分)（1）蛋白质工程 （2）氢键 提高 DNA分子充分（完全、彻底）变性 引物与模板 随机或不定向（答出其一即可） 感受 抗原-抗体杂交 定向 23.(
28、10分) （1）从正电位负电位正电位 松果体（细胞） 非条件 （2）神经递质 一直处于兴奋状态 （3）抑制 电信号化学信号电信号 负反馈 防止产生的褪黑素过多 （4）光照抑制了松果体细胞产生褪黑素 24.(10分) （1）生产者所固定的太阳能，污水有机物中的能量和投入鱼苗中的能量 生态系统的自我调节能力是有限的 （2） 二、三 捕食对象（食物） 提高鲢、鳙鱼的成活率 （3）样方 明显下降 鲢、鳙与银鱼在食物上存在竞争关系 （4）物种种类及比例（营养级的复杂程度） 整体性、物种多样性原理 【详解】（1）结合题意信息可知，流经该生态系统的总能量不只是生产者固定的全部太阳能，而是生产者所固定的太阳能
29、、污水有机物中的能量和投入鱼苗中的能量。若大量含药物A的污水流入该水库，会使某些藻类种群大暴发，造成水体的富营养化，该实例说明生态系统的自我调节能力是有限的。（2）在水库中投放的鲢鱼和鳙鱼是以藻类和浮游动物为食，据此可知鲢、鳙鱼为第二、三营养级，为确定鲢、鳙的投放量，应根据食物网中的营养级，调查投放区鲢、鳙上一营养级的生物积累量，根据能量流动逐级递减的特点，根据上一营养级的生物量，确定鲢鱼鳙鱼的投放量，从而保证流入生态系统的能量大于输出的能量，为保证鲢、鳙的成活率，应捕杀鲢、鳙的天敌，减少被捕食的机会。（3）藻类吸收利用水体中的N、P元素，浮游动物以藻类为食，银鱼主要以浮游动物为食，若要调查水
30、库中银鱼的种群密度，由于银鱼个体小且活动范围较小、活动能力弱，因此，应采用样方法进行调查。由图可知，将鲢、鳙鱼苗以一定比例投放到该水库后，造成银鱼生物积累量明显下降，因为鲢、鳙与银鱼在食物上存在竞争关系，且鲢、鳙在竞争中获得优势导致的。（4）投放鲢、鳙这一方法是通过人为干预，通过提高物种数量，增加了生态系统营养结构的复杂程度，即该方法通过调整了该生态系统食物网中物种种类及比例，从而达到既提高经济效益又改善水质的目的，这主要运用了生态工程的整体性、物种多样性原理。25.(9分) （1） 内细胞团 胰蛋白酶（或：胶原蛋白酶） CO2（或CO2恒温） 细胞贴壁（或：贴壁生长） （2） 筛选出含有PK
31、U基因的细胞（ 错误整合的细胞，和正确整合的细胞）， DHPG PKU基因正确整合（或：PKU基因定点整合） 错误整合的细胞在含有DHPG的培养液中培养时，因含HSVtk而死亡 （3） 不患苯丙酮尿症（尿液中不含大量苯丙酮酸） 【详解】由题意可知，含有neor的细胞具有G418的抗性，故在含G418的培养液存活说明转化后的胚胎干细胞中含neor，而neor与正常的PKU联系在一起，因此能筛选出含有PKU基因的细胞（错误整合和正常整合的均包含），而HSV-tkl、HSV-tk2的产物都能把DHPG转化成有毒物质而使细胞死亡，因此，将筛选的细胞再在含有DHPG的培养液中进行培养，此时能在含DHPG
32、的培养液中存活的细胞是转化后的胚胎干细胞中不含HSV-tk胚胎肝细胞。苯丙酮尿症患者体内缺乏一种酶，导致体内苯丙氨酸不能转化为酪氨酸，而大量转化为苯丙酮酸，在体内积累，随尿液排出，若转基因小鼠的尿液中不含大量苯丙酮酸，说明PKU基因正常表达。26.(8分) （1）EcoRI Ca2+（CaCl2） 嘌呤霉素 （两空位置可调换） （2）细胞核形态 （3）高 sgRNA（向导RNA）越短越容易与DNA其他部位错误结合而脱靶 【详解】用2中的质粒以及含Cas9-sgRNA拼接基因的DNA片段构建表达载体时，应选用EcoRI进行酶切，因为在质粒和目的基因的两端均含有该酶的切割位点，而BamH的酶切位点
33、正好在标记基因内，因此该酶不能选择。将构建好的表达载体与用Ca2+（CaCl2）处理的细菌（增加细菌的通透性）置于适宜反应体系中培养。然后将培养的细菌涂布于含嘌呤霉素的平板培养基上进行筛选，凡是能正常生长的菌落即为带有目的基因的细菌，37培养，24h 后挑取菌落，提取质粒作为模板，根据图中目的基因两侧的碱基序列以及引物的碱基顺序，结合碱基互补配对原则可选择图3中引物组合和进行体外DNA复制，通过PCR和电泳技术鉴定是否重组成功。用鉴定成功的工程菌对HepG2细胞进行转染，培养三天后收集HepG2细胞，提取基因组，对其碱基 (或核苷酸)序列进行检测，判断Cas9-sgRNA拼接基因是否导入成功。若从细胞水平进行检测，可以检测HepG2细胞数目增长量或细胞核形态是否变化来检测。但是更多的学者提出了CRISRP/Cas9基因编辑技术有时存在编辑对象出错而造成“脱靶”由于其他DNA序列也含有与向导RNA互补配对的序列，造成向导RNA错误结合而脱靶，故RNA的序列越短脱靶率越高