1、【学习目标】1.掌握目的基因检测与鉴定的方法。2.DNA分子杂交技术的原理。3.总结基因工程操作中的一些注意事项【重点难点】重点: 目的基因检测与鉴定的方法。难点：目的基因检测与鉴定的方法。【自主学习】目的基因的检测与鉴定（1）为什么要检测与鉴定： （2）检测的内容与方法的比较类型步骤检测内容方法结果显示分子检测第一步目的基因是否进入受体细胞是否成功显示出杂交带第二步目的基因是否转录出mRNA是否成功显示出杂交带第三步目的基因是否翻译出蛋白质是否成功显示出杂交带个体水平鉴定（3）目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键是 。（4）什么是探针？ 。（5）DNA分子杂交技术的原理是 。【问题生成】【
2、师生互动，问题探讨】1.为什么需要进行个体生物学水平的鉴定？2.若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？3.DNA分子杂交技术还有哪些应用?4.DNA分子杂交与分子杂交有什么区别？5.基因工程的操作中，哪些过程发生碱基互补配对现象?【课后小结与反思】基因工程操作的8个易错点(1)目的基因的插入位点不是随意的基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入到启动子与终止子之间的部位。(2)基因工程操作过程中只有第三步(将目的基因导入受体细胞)没有碱基互补配对现象第一步存在逆转录法获得DNA，第二步存在黏性末端连接现象，第四步检测存在分子水平杂交方法。(3)原核生物作为受体细胞的优点：繁殖快、多
3、为单细胞、遗传物质相对较少。(4)一般情况下，用同一种限制酶切割质粒和含有目的基因的片段，但有时可用两种限制酶分别切割质粒和目的基因，这样可避免质粒和质粒之间、目的基因和目的基因之间的连接。(5)目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。转化的实质是目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。(6)不熟悉标记基因的种类和作用：标记基因的作用筛选、检测目的基因是否导入受体细胞，常见的有抗生素抗性基因、发光基因(表达产物为带颜色的物质)等。(7)对受体细胞模糊不清：受体细胞常用植物受精卵或体细胞(经组织培养)、动物受精卵(一般不用体细胞)、微生物(大肠杆菌、酵母菌)等。要合
4、成糖蛋白、有生物活性的胰岛素则必须用真核生物酵母菌(需内质网、高尔基体的加工、分泌)；一般不用支原体，原因是它营寄生生活；一定不能用哺乳动物成熟的红细胞，原因是它无细胞核，不能合成蛋白质。(8)还应注意的问题有：基因表达载体中，启动子(DNA片段)起始密码子(RNA)；终止子(DNA片段)终止密码子(RNA)。基因表达载体的构建是最核心、最关键的一步，在体外进行。【自我检测】1目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和检测才能知道。下列属于目的基因检测和鉴定的是（）检测受体细胞是否有目的基因检测受体细胞是否有致病基因检测目的基因是否转录mRNA检测目的基因是否翻译
5、蛋白质ABCD2.在基因工程操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 （ ）A.人工合成目的基因 B.目的基因与运载体结合C.目的基因的检测和表达 D.将目的基因导入受体细胞3.苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞是否已表达，其检测方法是（ ） A是否有抗生素抗性 B是否能检测到标记基因C是否有相应的性状 D是否能分离到目的基因4. 下列获取目的基因的方法中需要模板链的是( ) 从基因文库中获取目的基因 利用PCR技术扩增目的基因 反转录法 通过DNA合成仪利用化学方法人工合成A B C D5.基因工程有广阔的应用前景。回答下列各题：(1)获取目的基因后，短期内要得到大量目的目的基因，可利
6、用_扩增。(2)构建基因表达载体的过程要使用的工具酶有_。(3)受体种类不同，导入方法不同。选育优良动物，目的基因导入的常用方法是_；选育优良植物，目的基因导入采用最多的方法是_。目的基因进入动植物细胞并且在受体细胞维持稳定和表达的过程，称为_。(4)检测目的基因在转基因生物中是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物的体细胞中提取蛋白质，用相应的抗体进行_杂交，看是否有 。6.根据基因工程的有关知识，回答下列问题：(1)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有_和_。(2)质粒运载体用EcoR切割后产生的片段如下：AATTCGGCTTAA为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除
7、可用EcoR切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割，该酶必须具有的特点是_。(3)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即_DNA连接酶和_DNA连接酶。(4)反转录作用的模板是_，产物是_。若要在体外获得大量反转录产物，常采用_技术。(5)基因工程中除质粒外，_和_也可作为载体。(6)若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是_。7.图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对)和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有Msp、BamH、Mbo、Sma4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为CC
8、GG、GGATCC、GATC、CCCGGG。请回答下列问题：(1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由_连接。(2)若用限制酶Sma完全切割图1中DNA片段，产生的末端是_末端，其产物长度为_。(3)若图1中虚线方框内的碱基对被TA碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma完全切割，产物中共有_种不同长度的DNA片段。(4)若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是_。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加_的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因D不能正确表达，其最可能的原因是_ _。
