1、1涵盖范围本单元包括选修1全部内容无菌操作技术实践、发酵技术实践、酶的应用技术实践和生物化学与分子生物学技术实践。2考情分析考查力度：相对固定，如山东理综只出一个8分的简答题。考查内容及形式：(1)微生物的培养与应用多以简答题形式考查。(2)酶的研究与应用，常与必修1中酶的本质、特性等知识有机结合考查。(3)植物的组织培养技术常与植物有效成分提取相结合考查。(4)传统发酵技术及实践应用多以简答题形式考查。(5)酶的研究、DNA和蛋白质提取技术多以选择题形式考查。3复习指导(1)复习线索以转基因微生物培养酶生产酶应用为线索，系统复习微生物培养技术、酶的研究和实践应用。以技术手段、技术流程为主线，
2、复习发酵、组织培养、有效成分及DNA、蛋白质提取等有关知识。(2)复习方法：列表比较法DNA、蛋白质的提取与分离。实践联系发酵技术、植物有效成分提取技术。实验联系植物组织培养、微生物培养实验过程。第40讲无菌操作技术实践考纲要求1.微生物的分离和培养。2.某种微生物数量的测定。3.培养基对微生物的选择利用。4.植物的组织培养。考点一微生物培养基的配制、无菌操作和接种技术1培养基的判断(1)据物理状态的不同，培养基只有液体培养基和固体培养基两种类型()(2)培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种成分()(3)在配制培养基时，除满足营养需求外，还应考虑pH、O2及特殊营养物质的需求()2制备
3、固体培养基的流程3无菌技术连接(连一连)4纯化大肠杆菌的方法常用的微生物接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法。(1)平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。(2)稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面。5微生物的接种过程准备接种接种环灭菌试管灭菌挑取少量菌体划线接种培养易错警示(1)自养微生物与异养微生物所需的营养物质不同自养微生物所需的碳源、氮源来自含碳、含氮的无机物，而异养微生物需要的碳源、氮源来自含碳、含氮的有机物，因此可根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。含氮无
4、机物不但能给自养微生物提供氮源，也能作为能源物质，提供能量，如NH3既作为硝化细菌的氮源也作为能源。(2)配制牛肉膏蛋白胨固体培养基的注意事项倒平板的适宜温度是50 左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。平板需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(3)平板划线操作的注意事项第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环。灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。划线时最后一区不要与第一区相连。划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。1下列无菌操作中，错误的是()A无菌操作的目的是防止杂菌污染B用酒精擦拭双手的方法对操作者进行
5、消毒C实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行D玻璃器皿(吸管、培养皿)可用酒精擦拭答案D解析对操作者应用较温和的方法进行消毒。实验操作过程应在酒精灯火焰附近进行，防止瓶口的微生物污染培养基。对无菌操作用到的玻璃器皿要用干热灭菌的方法彻底消灭其中的微生物，用酒精擦拭不能达到目的。2下列是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的培养基配方。请回答：试剂牛肉膏蛋白胨NaCl琼脂水用量5 g10 g5 g20 g1 000 mL(1)培养基的类型有很多，但培养基中一般都含有水、碳源、_和无机盐。上述培养基配方中能充当碳源的成分是_。培养基配制完成以后，一般还要调节pH，并对培养基进行_处理。该培养基从物理性质上分类
6、属于_。(2)分离纯化微生物最常使用的接种方法是_和_。(3)假设培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是什么？(列举两项)_。答案(1)氮源牛肉膏和蛋白胨灭菌固体培养基(2)平板划线法稀释涂布平板法(3)稀释倍数不够，菌液的浓度太高；划线时，划完第一次没有灭菌即接着划第二次；培养过程中灭菌不严格，受到了其他微生物的污染(任选两个)解析培养基中都应含有水、无机盐、碳源和氮源。配制培养基时加入了琼脂，因此该培养基属于固体培养基。培养基配制完成后要调pH和灭菌。牛肉膏、蛋白胨中含碳元素，可作为有机碳源。分离纯化微生物一般用平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法中每次划线前都要将接种环灼烧
7、灭菌，以杀死上次划线时接种环上残留的菌种；采用稀释涂布平板法时稀释度要足够高，否则会使微生物不能分散成单个细胞。1培养基的营养构成(1)各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。(2)不同培养基要满足不同微生物对pH、特殊营养物质及氧气的需求。2培养基的种类划分标准培养基种类特点用途物理性质液体培养基不加凝固剂工业生产半固体培养基加凝固剂，如琼脂观察微生物的运动、分类、鉴定固体培养基微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种化学成分天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确(用化学成分已知的化学物质配成)分类、鉴定半合成培养基培养基成分有已明确的，也有天
8、然成分功能基础培养基含有野生型微生物所需的所有营养物质用于野生型微生物培养选择培养基缺乏相应的营养成分选择微生物鉴别培养基加入显色剂的培养基用于微生物鉴定3.消毒和灭菌比较比较项目理化因素的作用强度消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭消毒较为温和部分生活状态的微生物不能灭菌强烈全部微生物能4.两种纯化细菌的方法的比较项目优点缺点平板划线法可以观察菌落特征，对混合菌进行分离不能计数稀释涂布平板法可以计数，可以观察菌落特征吸收量较小，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延考点二微生物的分离、培养和数量的测定1分解尿素的细菌的分离与计数(1)完善土壤中分解尿素的细菌的分离与计数分离原理：土壤中细菌之所
9、以能分解尿素，是由于它们体内能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。培养基类型：选择培养基。统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。实验流程：土壤取样样品的稀释微生物的培养与观察细菌的计数。鉴定分解尿素的细菌a原理：CO(NH2)2H2OCO22NH3；由于NH3的产生，培养基碱性增强，pH升高，因此可通过检测pH的变化来判断该化学反应是否发生。b方法：以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌，若指示剂变红，则pH升高，说明该种细菌能分解尿素。(2)判断正误只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素()筛选分解尿素的细菌应以尿素作为培养基中的惟一氮源()
10、统计样品中的活菌一般用平板划线法()在以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则说明筛选到分解尿素的细菌()2分离土壤中能分解纤维素的微生物(1)培养基：以纤维素为惟一碳源的选择培养基。(2)筛选流程土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落。易错警示(1)在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。如果某个平板的菌落数与其他差别甚远，说明该平板操作过程中出现失误，应舍弃。(2)统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
11、因此，统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。3自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。实验步骤：(1)制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。(2)为了得到更加准确的结果，你选用_法接种样品。(3)适宜温度下培养。结果分析：(1)测定大肠杆菌数时，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是_，其理由是_。A一个平板，统计的菌落数是230B两个平板，统计的菌落数是220和260，取平均值240C三个平板，统计的菌落数分别是210、50和
12、520，取平均值260D四个平板，统计的菌落数分别是210、300、240和250，取平均值250(2)一同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中的菌落数是_(涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL)。(3)用这种方法测定的大肠杆菌密度，实际活菌数量要比测得的数量_，因为_。答案实验步骤：(2)稀释涂布平板结果分析：(1)D在设计实验时，一定要涂布至少三个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性；在分析实验结果时，要考虑所设置的重复组的结果是否合理(2)2.34108(3)多当两个或多个细菌连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落解析实验步骤：为了
13、得到更加准确的结果，应用稀释涂布平板法接种样品。结果分析：(1)选取多个菌落数相差不大的平板计数，取其平均值。(2)2340.11052.34108。(3)因为菌落可能由两个或多个细菌连在一起生长而成，所以实际活菌数量要比测得的数量多。4可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是()A以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂B以尿素为惟一氮源的培养基中加入二苯胺试剂C以尿素为惟一氮源的培养基中加入苏丹试剂D以尿素为惟一氮源的培养基中加入双缩脲试剂答案A解析在以尿素为惟一氮源的培养基中，不能分解尿素获得氮源的细菌不能生长，而分解尿素的细菌能利用尿素作氮源，将尿素分解为氨，使pH升高。若培养基中加入酚红指示
14、剂，指示剂变红。此培养基既属于选择培养基，又属于鉴别培养基。1分离微生物的方法从混合样品中获得某种微生物的方法通常有两种：(1)利用该分离对象对某一营养物质有“嗜好”的原理，专门在培养基中加入该营养物质，从而使它成为一种加富培养基。(2)利用该分离对象对某种抑菌物质的抗性，在混合培养物中加入该抑制物，经培养后，原来占优势的微生物生长受抑制，而分离对象却可乘机大大增殖，在数量上占优势。2选择培养基与鉴别培养基的比较种类制备方法原理用途举例选择培养基培养基中加入某些化学物质依据某些微生物对某些物质或环境条件的嗜好、抗性而设计从众多微生物中分离所需的微生物加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌鉴别培养基培养
15、基中加入某种指示剂或化学药品依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中的特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计鉴别不同种类的微生物伊红美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌3. 选择培养基及应用实例(1)选择培养基：在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进需要的微生物的生长，目的是从众多微生物中分离所需要的生物。(2)选择培养基应用实例培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如石油是惟一碳源时，可以抑
16、制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。改变微生物的培养条件，可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养能得到耐高温的微生物。4统计菌落数目的方法(1)显微镜直接计数法原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。方法：用计数板计算。缺点：不能区分死菌与活菌。(2)间接计数法(活菌计数法)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。操作：a.设置重复组，增强实验的说服力与准确性。b为了保证结果
17、准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。计算公式：每克样品中的菌株数(CV)M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。5对照原则的运用(1)判断培养基中是否有杂菌污染，需将未接种的培养基同时进行培养。(2)判断选择培养基是否具有筛选作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基进行接种后培养，观察两种培养基上菌落数目，进行对比得出结论。考点三植物的组织培养1原理：植物细胞的全能性。2基本过程：外殖体愈伤组织试管苗植株3应用实例 (2)月季的花药培养过程过程：材料的选取材料的消毒接种和培养鉴定和筛选。影响花药培养的因素主要有材料的选择和
18、培养基的组成。4影响植物组织培养的因素(判一判)(1)植物激素的浓度可影响细胞分化，但使用的先后顺序及比例不影响组织培养的过程()(2)pH、温度和光照等也影响植物组织培养()易错警示实验操作中易错的几个问题(1)材料的选取：天竺葵的组织培养实验中，应选择嫩幼的叶；月季的花药培养实验中，应选择花粉发育过程中的单核靠边期的花粉进行培养。(2)外殖体消毒：所用消毒剂为体积分数为70%的酒精和质量分数为0.1%的氯化汞溶液，所使用的清洗液是无菌水。5植物组织培养可用于无病毒植株及细胞产物的工厂化生产等方面。请回答相关问题：(1)若要进行兰花无病毒植株的培育，首先选择兰花的_作为外殖体。从外殖体到无病
19、毒植株试管苗，要人为控制细胞的_和_过程。(2)进行组织培养需配制MS培养基，在该培养基中常需要添加_、_等植物激素。欲有利于根的分化，植物激素的用量比例应为_。(3)不同植物的组织培养除需营养和激素外，_等外界条件也很重要。(4)无菌技术也是成功诱导出花粉植株的重要因素，下列各项中使用化学药剂进行消毒的是_，采用灼烧方法进行灭菌的是_。(填序号)培养皿培养基实验操作的双手三角锥形瓶接种环花蕾答案(1)茎尖分生组织脱分化(或去分化)再分化(2)生长素细胞分裂素(两空顺序可以颠倒)生长素多于细胞分裂素(3)pH、温度和光照(4)解析(1)根尖、茎尖约00.1 mm区域中几乎不含病毒。病毒通过维管
20、系统移动，而分生组织中不存在维管系统，且茎尖分生组织中，代谢活力高，竞争中病毒复制处于劣势。(2)生长素与细胞分裂素等植物激素可调节脱分化和再分化。当生长素含量多于细胞分裂素含量时，利于生根。(3)植物培养时，除需要营养、激素外，还需要适宜的温度、pH和光照等。(4)对实验器具进行灭菌处理，对实验过程中的具有生物活性的材料或用具进行消毒处理。1植物组织培养技术和花药离体培养技术的异同 项目内容天竺葵的组织培养月季的花药培养理论依据植物细胞的全能性基本过程脱分化再分化外殖体的细胞类型体细胞生殖细胞操作流程制备培养基外殖体消毒接种培养移栽栽培选材消毒接种和培养筛选和诱导移栽栽培选育影响因素选材、营
21、养、植物激素、pH、温度、阳光等培养结果正常植株单倍体植株生殖方式无性生殖有性生殖可育性可育高度不育，秋水仙素处理后可育2. 植物激素与组织培养(1)生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素，其作用及特点：在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。使用顺序不同，结果不同，具体如下：使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于细胞分裂，但细胞不分化先使用细胞分裂素，后使用生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率提高用量比例不同，结果也不同3影响植物组织培养的因素(1)材料：植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等都会影响实验结果。一般来说，容易进行无性繁殖的
22、植物容易进行组织培养。嫩枝生理状态好，容易诱导脱分化和再分化。(2)营养：常用的培养基是MS培养基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co，有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。(3)环境条件：pH、温度、光照等条件。如天竺葵的组织培养所需pH为5.65.8左右，温度为1520 ，光照强度为1 0002 000 lx条件下灯照射10 h。1(2012北京卷，5)高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是()A将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中B将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上C将转基因植物叶片接种到
23、无菌培养基上D将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上答案C解析在酿制葡萄酒的过程中，如果灭菌不彻底会影响葡萄酒的品质，但影响不大；在制作腐乳的过程中，发酵过程有多种微生物的参与，所以该过程不进行严格的无菌操作对结果影响不大；在植物组织培养过程中，如果灭菌不彻底，杂菌产生的物质会影响外殖体的生长，甚至杀死外殖体，导致培养失败，对结果影响最大；土壤浸出液本身就含有大量的杂菌，另外在选择培养基上只能生存我们所要筛选的细菌，所以无菌操作不严格，对结果影响也不会太大。2(2009安徽卷，6)下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是()A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后
24、倒平板B取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上C将实验组和对照组平板倒置，37 恒温培养2448小时D确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数答案D解析采用稀释涂布平板法统计菌落数目时，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。3(2011新课标全国卷，39)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_为惟一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于_培养基。(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方
25、法有两种，即_和_。(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力_。(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_和_。无菌技术要求实验操作应在酒精灯_附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。答案(1)原油选择(2)平板划线法稀释涂布平板法(3)强(4)干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰解析(1)可以将所需要的微生物从混杂的微生物群中分离出来的培养基为选择培养基。欲筛选出能降解原油的菌株，则培养基中应只含有原油而无其他碳源，这样不能降解原油的细菌在此培养基上不能生存，能降解原油的细菌才能在只含原油这一碳源的培养基上生存。(2)分离纯化菌种
26、时，接种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法，其目的都是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单菌落，以便于纯化菌种。(3)降解原油能力越强的菌株，在菌落周围形成的分解圈越大。(4)实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌(如接种环)、干热灭菌(如培养皿)和高压蒸汽灭菌(如培养基)等。无菌技术要求整个实验操作都要在酒精灯火焰附近进行，以避免周围微生物的污染。4(2009宁夏卷，40)(1)在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑_、_和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、_、_等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。(2)在微生物培养操作过程中，为防
27、止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行_(消毒、灭菌)；操作者的双手需要进行清洗和_；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能_。(3)若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_。(4)通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的_。(5)培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是_。(6)若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。答案(1)温度酸碱度易培养生活周期短(2)灭
28、菌消毒损伤DNA的结构(3)比例合适(4)鉴别(或分类)(5)将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生(6)灭菌解析(1)影响微生物培养的因素除了营养条件外，外界条件主要包括温度、酸碱度和渗透压等。由于大肠杆菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、生活周期短等优点，所以常作为遗传学研究的实验材料。(2)对培养基和培养器皿要进行灭菌，对操作者的双手需要进行清洗和用酒精消毒，静止空气中的细菌在用紫外线照射后能够使蛋白质变性，并损伤DNA结构，使细菌死亡。(3)样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落的数目，实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保
29、证获得的菌落数在30300之间。(4)菌落的特征是判断微生物种类的重要依据，对获得的纯菌种可以依据菌落的特征对细菌进行初步的鉴别。(5)要判断固体培养基是否被污染，可将未接种的培养基在适宜的温度下培养一段时间，若发现有菌落说明培养基已被污染。(6)进行微生物培养时，使用过的培养基及培养物必须经灭菌后才能丢弃，防止培养的微生物扩散到环境中，造成危害。5(2012山东卷，34)辣椒素作为一种生物碱广泛用于食品保健、医药工业等领域。辣椒素的获得途径如下图：(1)图中和分别表示辣椒组织培养中细胞的_和_过程。(2)图中培养外殖体的培养基中常用的凝固剂是_。培养基中的生长素和细胞分裂素用量的比值_(填“
30、高”或“低”)时，有利于芽的分化。对培养基彻底灭菌时，应采取的灭菌方法是_。(3)图中外殖体的消毒所需酒精的体积分数是_。用酶解法将愈伤组织分离成单细胞时，常用的酶是_和纤维素酶。(4)提取辣椒素过程中，萃取加热时需安装冷凝回流装置，其目的是_。答案(1)脱分化(或去分化)再分化(2)琼脂低高压蒸汽灭菌(3)70%果胶酶(4)防止有机溶剂的挥发解析(1)由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程称为脱分化，对脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可重新分化出根或芽等器官，这个过程叫做再分化。(2)培养基中常用的凝固剂是琼脂。同时使用生长素和细胞分裂素时，两者用量的比值大小影响植物细胞的发育方向
31、，生长素和细胞分裂素用量的比值低时，有利于芽的分化；反之，有利于根的分化。培养基应用高压蒸汽灭菌法灭菌。(3)外殖体消毒所用酒精的体积分数是70%。酶解法将愈伤组织分离成单细胞所用的酶是果胶酶和纤维素酶。(4)用萃取法提取植物有效成分时，应在瓶口安装冷凝回流装置，目的是防止加热时有机溶剂的挥发。1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的下列操作中，不正确的是()A操作流程是计算、称量、溶化、灭菌和倒平板B将称好的牛肉膏连同称量纸一同倒入烧杯中再加水、去纸C灭菌后向牛肉膏蛋白胨溶液中加2%琼脂，并使其溶解D将培养基冷却到约50 时，在酒精灯火焰附近倒平板答案C解析琼脂加入到牛肉膏蛋白胨溶液中，溶化后再灭菌。
32、2平板划线法和稀释涂布平板法是接种微生物的两种常用方法，下列描述正确的是()A都要将菌液进行一系列的梯度稀释B平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作C稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养D都会在培养基表面形成单个菌落答案D解析平板划线法不需要进行梯度稀释，稀释涂布平板法需要将不同稀释度的菌液滴加到固体培养基的表面。平板划线法和稀释涂布平板法都能在培养基表面形成单个菌落。3如图为胡萝卜的离体组织在一定条件下培育形成试管苗的过程示意图。下列有关叙述正确的是()A和过程中都会发生细胞的增殖和分化B在利用单倍体育种法培育优质小麦的过程中，不经过愈伤组
33、织阶段C此过程依据的生物学原理是细胞膜具有流动性D利用此过程获得的试管苗可能为杂合子答案D解析表示脱分化，表示再分化。过程中发生细胞的有丝分裂，不发生分化；利用单倍体育种法培育优质小麦的过程中，需采用花药离体培养技术，要经过愈伤组织阶段；植物组织培养过程依据的生物学原理是植物细胞的全能性；此过程是无性生殖，获得的试管苗的遗传物质取决于取材个体，因此可能为杂合子。4大肠杆菌是“明星菌”，在生物技术上常用作“工程菌”。某生物小组的同学利用实验室提供的某品系大肠杆菌及其他必需材料，对该品系大肠杆菌进行了培养、计数。(1)大肠杆菌在生长过程中对各种营养成分所需的量不同，故制备培养基时各营养成分要有合适
34、的_。(2)在制备固体培养基进行倒平板操作时，平板冷凝后，甲同学将平板倒置，其原因是_。(3)乙同学采用平板划线法接种，获得单菌落后继续筛选，在每次划线之前都要灼烧接种环，其目的是_。(4)丙、丁同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果：丙同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230；丁同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，然后取其平均值163作为统计结果。请评价这两位同学的实验结果的有效性：丙同学的结果_，原因是_。丁同学的结果_，原因是_。(5)戊同学在测定大肠杆菌的密度时发现培养基上还有其
35、他杂菌的菌落，由此他判断该品系大肠杆菌被污染了。他的判断是否确切？为什么？_。答案(1)比例(2)培养皿盖上会凝结有水珠，平板倒置可防止水珠落入培养皿中而造成污染，还可使培养皿表面的水分更好地挥发(3)杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种(4)不合理没有设置重复组，结果不具有说服力不合理一个平板上的计数结果与另外两个相差太远(或在操作过程中可能出现了错误，或只简单地计算了平均值)(5)不确切。因为不能确定杂菌是来自培养基还是来自培养过程解析(1)从培养基制备的重要原则入手分析，制备培养基时要注意控制各种营养物质的比例。(2)平板冷凝后培养皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平
36、板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止培养皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(3)灼烧接种环的目的是杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，以免对实验结果造成影响。(4)实验时，至少要涂布3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力和准确性，丁同学虽然涂布了3个平板，但其中一个平板上的菌落数与另外两个平板上的菌落数相差甚远，故不能取这3个平板上的菌落的平均值作为统计结果。(5)判断杂菌的来源时，只有排除其他可能的情况才能得出确切的结论。5尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解
37、作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如下表所示，实验步骤如下图所示。请分析回答问题：KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O葡萄糖尿素琼脂1.4 g2.1 g0.2 g10 g1 g15 g将上述物质溶解后，用自来水定容到1 000 mL(1) 此培养基能否用于植物组织培养？_，理由是_。(2)培养基中加入尿素的目的是_，这种培养基属于_培养基。(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的_和_，实验需要振荡培养，原因是_。(4)转为固体培养时，常采用_(方法)接种，获得单菌落后继续筛选。(5)下列材料或用具中：培养细菌用的培养基与培养皿；
38、玻棒、试管、锥形瓶和吸管；实验操作者的双手。需要灭菌的是_；需要消毒的是_。(填序号)(6)在进行分离分解尿素的细菌实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。A同学的实验结果产生的原因可能有_(填序号)。由于土样不同由于培养基污染由于操作失误没有设置对照(7)在以尿素为惟一氮源的培养基中加入_，细菌合成的_将尿素分解为氨，pH增高，使指示剂变红色。答案(1)不能缺少植物激素(或缺少植物需要的各种营养)(2)筛选目的菌选择(3)尿素葡萄糖为目的菌提供氧气(4)稀释涂布平板法(平板划线法)(5)(6)(7)酚红指示剂脲酶解析(1)微生物与植物生长所需的营养不
39、完全相同，培养微生物的培养基不能用于组织培养。(2)培养基中加入尿素作惟一氮源，分解尿素的微生物可生长，这种培养基属于选择培养基。(3)“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自尿素和葡萄糖。实验需要振荡培养增加溶氧量。(4)在固体培养基上接种用稀释涂布平板法或平板划线法。(5)灭菌要彻底消灭微生物及其芽孢，如或。实验操作者的双手要消毒。(6)A同学从培养基上筛选出的菌落数与其他组相比多，原因可能是土样不同，培养基污染，操作失误等。与是否设置对照无关。(7)由于细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，pH增高，故在以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂将变红。6下图是月季的花药离体培养产生花粉植株的两种途
40、径，请据图回答有关问题：(1)选用的材料合适与否是能否成功诱导出花粉植株的关键。一般来说，选用_期的花粉可提高成功率。选择花药时，一般要通过_来确定其中的花粉是否处于合适的发育期，这时需要对花粉的细胞核进行染色，常用的染色剂是_。(2)上图中花粉经脱分化产生胚状体还是愈伤组织主要取决于培养基中_。(3)胚状体与愈伤组织在结构上的主要区别在于愈伤组织的细胞排列疏松、无规则，是一种高度_的薄壁细胞，胚状体与_发育形成的胚有类似的结构，即具有胚芽、胚轴和胚根。(4)无菌技术也是成功诱导出花粉植株的重要因素，请说明下列各项需要消毒，还是需要灭菌。培养基培养皿接种环花蕾实验操作者的双手锥形瓶_(填编号)
41、需要灭菌，_(填编号)需要消毒。(5)试管苗移栽到土壤前，通常要进行壮苗处理，应如何壮苗？_。答案(1)单核镜检(显微镜观察)醋酸洋红(2)激素的种类及其浓度配比(3)液泡化正常受精卵(或受精卵)(4)(5)将试管苗移栽到经过消毒的培养基中生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中解析(1)单核期花粉对离体刺激较敏感，选用该期花粉可提高培养的成功率；选择花粉时可用显微镜观察进行筛选；对花粉细胞核进行染色应选择碱性染料，常用醋酸洋红。(2)花药离体培养成植株的两条途径之间没有明显的界限，主要取决于植物激素的种类及比例。(3)愈伤组织细胞的特点为细胞排列疏松、无规则、高度液泡化；胚状体具有与胚相似的胚根、胚轴和胚芽等结构。(4)灭菌对象为培养基和实验器材，消毒对象为要保持活性的材料和实验者自身。(5)壮苗是使试管苗进一步适应外界环境的做法。
