1、专题一 基因工程与细胞工程考纲要求 1.基因工程的诞生(A)。2.基因工程的原理及技术(A)。3.基因工程的应用(B)。4.蛋白质工程(A)。5.植物的组织培养(B)。6.动物的细胞培养与体细胞克隆(A)。7.细胞融合与单克隆抗体(A)。DNA连接酶 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 药物 基因 自然界中没有 全能性 体细胞杂交 细胞增殖 动物细胞核 化学法 抗原 考点一 基因工程 1(2014江苏卷高考)下列关于基因工程技术的叙述，错误的是(多选)()A切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6个核苷酸序列 BPCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应 C载体质粒
2、通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因 D抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达 解析 限制酶大多是特异性识别6个核苷酸序列，也有的识别4、5或8个核苷酸组成的序列，A错误；DNA聚合酶只是在延伸阶段发挥催化作用，B错误；质粒上一般带有的抗生素抗性基因可作为标记基因，供鉴定和选择，不是抗生素合成基因，C错误；目的基因导入受体细胞后不一定都能正常表达，D正确。答案 ABC 2(2015江苏单科，32)胰岛素A、B链分别表达法是生产胰岛素的方法之一。图1是该方法所用的基因表达载体，图2表示利用大肠杆菌作为工程菌生产人胰岛素的基本流程(融合蛋白A、B分别表示半乳糖苷酶与胰岛素A、B
3、链融合的蛋白)。请回答下列问题：图1 图2(1)图1基因表达载体中没有标注出来的基本结构是_。(2)图1中启动子是_酶识别和结合的部位，有了它才能启动 目 的 基 因 的 表 达；氨 苄 青 霉 素 抗 性 基 因 的 作 用 是_。(3)构建基因表达载体时必需的工具酶有_。(4)半乳糖苷酶与胰岛素A链或B链融合表达，可将胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏在内部，其意义在于_。(5)溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，用溴化氰处理相应的融合蛋白能获得完整的A链或B链，且半乳糖苷酶被切成多个肽段，这是因为_ _。(6)根据图2中胰岛素的结构，请推测每个胰岛素分子中所含游离氨基的数量。你的推测结
4、果是_，理由是_。解析 基因表达载体包含启动子、终止子、目的基因和标记基因等。启动子是RNA聚合酶的识别和结合位点。氨苄青霉素抗性基因可作为标记基因。基因工程使用的工具酶包括限制酶和DNA连接酶。胰岛素肽链上蛋白酶的切割位点隐藏起来，将无法被蛋白酶所识别，防止被水解。溴化氰能切断肽链中甲硫氨酸羧基端的肽键，若经溴化氰处理相应融合蛋白能获得完整的A链和B链，表明胰岛素A链、B链上并无溴化氰作用位点，不能将其切断；同理，半乳糖苷酶能被切成“多个肽段”，表明其具有多个切点(即“甲硫氨酸”)。胰岛素分子含有两条链，至少有2个游离氨基分别位于2条肽链的一端，并且R基团中可能也含有游离的氨基。答案(1)终
5、止子(2)RNA聚合 作为标记基因，将含有重组质粒的大肠杆菌筛选出来(3)限制酶和DNA连接酶(4)防止胰岛素的A、B链被菌体内蛋白酶降解(5)半乳糖苷酶中含多个甲硫氨酸，而胰岛素A、B链中不含甲硫氨酸(6)至少2个 两条肽链的一端各有一个游离的氨基，氨基酸R基团中可能还含有游离的氨基 从近五年高考统计看，对基因工程考查明显多于其他工程技术，考查角度侧重于基因工程工具及特点，基因工程操作程序尤其是基因表达载体的构建与目的基因检测、鉴定。提分必记的关键点 1.基因工程常考的3种基本工具(1)限制性内切酶：识别特定核苷酸序列，并在特定位点上切割DNA分子。(2)DNA连接酶：EcoliDNA连接酶
6、只能连接黏性末端；T4DNA连接酶能连接黏性末端和平末端。(3)运载体：能在宿主细胞内稳定存在并大量复制；有一个至多个限制酶切割位点；具有特殊的标记基因以便对含目的基因的受体细胞筛选。2.基因工程的4大操作程序(1)目的基因的获取(三种方法)：从基因文库中获取。利用_技术扩增：其实质是在体外对目的基因进行大量复制。用化学方法人工合成。(2)基因表达载体的构建(此为“核心步骤”)：基 因 表 达 载 体 的 组 成：目 的 基 因 启 动 子 终 止 子 _复制原点。PCR 标记基因 基因表达载体的构建过程(3)将目的基因导入受体细胞的“3大方法”：导入植物细胞农杆菌转化法(花粉管通道法、基因枪
7、法)。导入动物细胞显微注射法(导入受精卵)。导入微生物细胞使用Ca2处理细胞。同一种限制酶切割 DNA连接酶(4)理清目的基因的检测与鉴定：导入检测：_杂交技术(使用DNA探针)。个体生物学水平鉴定：如对转基因作物进行抗虫或抗病等的接种实验。DNA分子 分子杂交 抗原抗体(1)基因表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞mRNA反转录获得(2015重庆卷，6A)()(2)基因表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原(起)点(2015重庆卷，6B)()(3)借助抗生素抗性基因可将含胰岛素基因的受体细胞筛选出来(2015重庆卷，6C)()(4)启动子和终止密码子均在胰岛素基因的转录中起作用(20
8、15重庆卷，6D)()(5)转基因抗虫棉植株抗虫效果的鉴定必须通过分子检测(2014天津卷，4C)()(6)重组质粒与探针能进行分子杂交是因为DNA分子脱氧核糖和磷酸交替连接(2013安徽，6C)()(7)应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达(2011四川，5D)()(8)每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点(2011浙江，6B)()答案(1)(2)(3)(4)(5)(6)(7)(8)提示(1)人肝细胞不能合成胰岛素，则人肝细胞中不含有胰岛素的mRNA，不能通过反转录获得人胰岛素基因；(2)表达载体的复制启动于复制起点，胰岛素基因的表达启动于启动
9、子；(4)启动子在转录过程中起作用，终止密码子在翻译过程中起作用；(5)抗虫效果需个体生物学水平的鉴定；(6)核酸分子之间能进行分子杂交的原理是“碱基互补配对原则”；(7)欲检测目的基因的完全表达，还必须进行抗原抗体杂交实验。命题角度1 基因工程的工具及操作程序 1(2013江苏单科，22)小鼠杂交瘤细胞表达的单克隆抗体用于人体试验时易引起过敏反应，为了克服这个缺陷，可选择性扩增抗体的可变区基因(目的基因)后再重组表达。下列相关叙述正确的是(多选)()A设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列 B用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列 CPCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的
10、DNA聚合酶 D一定要根据目的基因编码产物的特性选择合适的受体细胞 解析 本题主要考查PCR技术的有关知识。利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列设计引物，但不需知道目的基因的全部序列，需要考虑载体的序列；因PCR反应在高温条件下进行，故反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶；因某些目的基因编码的产物需经特殊的加工修饰过程，故一定要根据目的基因编码产物的特性选择合适的受体细胞。答案 BD 2.(2016江苏卷，33)下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：(1)用图
11、中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用_两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过_酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于_态的大肠杆菌。(2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加_，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中_。(3)若BamH酶切的DNA末端与Bcl酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为_，对于该部位，这两种酶_(填“都能”、“都不能”或“只有一种能”)切开。(4)若用Sau3A切图1质粒最多可能获得_种大小不同的DNA片段。解析(1)选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但BamH和 Sau3A可能使
12、质粒中启动子丢失或破坏抗性基因，因此只能选 Bcl和 Hind。酶切后的载体和目的基因片段，通过 DNA 连接酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于感受态的大肠杆菌。(2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，根据质粒上的抗性基因，应在筛选平板培养基中添加四环素。PCR 技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合,沿相反的方向合成子链。(3)根据 BamH和 Bcl的酶切位点,BamH酶切的 DNA 末端与 Bcl酶切的 DNA 末端连接，连接部位的 6 个碱基对序列为 T GATC CA CTAG GG GATC AC CTAG T，与两种酶的酶切位点均不同。(4)根据Bam
13、H、Bcl和Sau3A的酶切位点，Sau3A在质粒上有三个酶切位点，完全酶切可得到记为A、B、C三种片段，若部分位点被切开，可得到AB、AC、BC、ABC四种片段，所以用Sau3A切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段。答案(1)Bcl和Hind 连接 感受(2)四环素 引物甲和引物丙(3)T GATC CA CTAG GG GATC AC CTAG T 都不能(4)7 1.使用限制酶的注意点(1)一般用同种限制酶切割载体和目的基因。(2)不同的限制酶也能切割出相同的黏性末端。2.DNA连接酶DNA聚合酶 DNA连接酶连接两个DNA片段，而DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸添加到脱氧核苷
14、酸链上。3.限制酶DNA酶解旋酶 限制酶是切割某种特定的脱氧核苷酸序列，并使两条链在特定的位置断开；DNA酶是将DNA水解为组成单位；解旋酶是将DNA的两条链间的氢键打开形成两条单链。4.启动子、终止子(1)启动子(DNA片段)起始密码子(RNA)。(2)终止子(DNA片段)终止密码子(RNA)。5.根据受体种类确定基因工程的受体细胞(1)植物：植物体细胞或受精卵导入方法常用农杆菌转化法、花粉管通道法、基因枪法(本法针对单子叶植物)(2)动物：受精卵或体细胞导入方法为“显微注射法”(3)微生物：细菌导入方法为“感受态法”(4)农杆菌转化法原理：农杆菌易感染植物细胞，并将其Ti质粒上的TDNA转
15、移并整合到受体细胞染色体DNA上。命题角度2 基因工程的应用及蛋白质工程 1(2016江苏卷，22)为在酵母中高效表达丝状真菌编码的植酸酶，通过基因改造，将原来的精氨酸密码子CGG改变为酵母偏爱的密码子AGA，由此发生的变化有(多选)()A植酸酶氨基酸序列改变 B植酸酶mRNA序列改变 C编码植酸酶的DNA热稳定性降低 D配对的反密码子为UCU 解析 改变后的密码子仍然对应精氨酸，氨基酸的种类和序列没有改变，A错误；由于密码子改变，植酸酶mRNA序列改变，B正确；由于密码子改变后C(G)比例下降，DNA热稳定性降低，C正确；反密码子与密码子互补配对，为UCU，D正确。BCD2.(2016天津卷
16、，7)人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值，只能从血浆中制备。下图是以基因工程技术获取重组HSA(rHSA)的两条途径。(1)为获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取_合成总cDNA，然后以cDNA为模板，采用PCR技术扩增HSA基因。下图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出另一条引物的位置及扩增方向。(2)启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是_(填写字母，单选)。A.人血细胞启动子B.水稻胚乳细胞启动子 C.大肠杆菌启动子D.农杆菌启动子(3)利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的
17、是_。(4)人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性。与途径相比，选择途径获取rHSA的优势是_。(5)为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与_的生物学功能一致。解析(1)总cDNA是由细胞内mRNA经逆转录获得。DNA两条链是反向平行的，另一条引物扩增方向应向左。(2)据题意，启动子具有物种特异性，它应与受体细胞启动子一致，应选B。(3)在农杆菌转化时，加入某物质，其目的应为“促进”或“有利于”转化，推测酚类物质可吸引农杆菌侵染水稻受体细胞。(4)水稻是真核细胞，具有对分泌蛋白加工的内质网和高尔基体。途径受体为大肠杆菌，没有上述细胞器。(5)制备的rHS
18、A应具有与HSA相同的生物学功能才具有医用价值。答案(1)总RNA(或mRNA)(2)B(3)吸引农杆菌移向水稻受体细胞，有利于目的基因成功转化(4)水稻是真核生物，具有膜系统，能对初始rHSA多肽进行高效加工(5)HSA 1.界定基因治疗与基因诊断(1)基因治疗 将正常基因导入有基因缺陷的细胞中，使该基因的表达产物发挥功能，以达到治疗的目的其原理为“基因重组”及“基因表达”。(2)基因诊断 制作特定DNA探针与病人样品DNA混合，分析杂交带情况其原理为“DNA分子杂交”2.界定基因工程与蛋白质工程 蛋白质工程 基因工程 基因 人为改造的基因 天然外源基因 实质 定向改造或生产人类所需蛋白质
19、定向改造生物的遗传特性，以获得人类所需的生物类型或生物产品(基因的异体表达)结果 生产自然界中没有的蛋白质 生产自然界中已有的蛋白质 注：对现有蛋白质的改造或制造新的蛋白质，必须通过基因修饰或基因合成实现 考点二 细胞工程 1(2016江苏卷，9)下列有关细胞工程的叙述，正确的是()APEG是促细胞融合剂，可直接诱导植物细胞融合 B用原生质体制备人工种子，要防止细胞破裂 C骨髓瘤细胞经免疫处理，可直接获得单克隆抗体 D核移植克隆的动物，其线粒体DNA来自供卵母体 解析 PEG是促细胞融合剂，但植物细胞不能直接融合，需先去壁形成原生质体才能融合，A错误；制备人工种子应用完整的植物细胞，不需制备原
20、生质体，B错误；骨髓瘤细胞不能产生抗体，C错误；核移植克隆的动物，其线粒体只来自卵细胞即线粒体DNA来自供卵母体，D正确。答案 D 2(2012 江苏单科，22)下列事实能体现细胞全能性的是(多选)()A棉花根尖细胞经诱导形成幼苗 B单细胞的DNA在体外大量扩增 C动物杂交瘤细胞产生单克隆抗体 D小鼠体细胞经诱导培育成小鼠 解析 本题考查细胞全能性的知识。棉花根尖细胞经诱导形成幼苗，小鼠体细胞经诱导培育成小鼠，这均是细胞发育成完整个体，体现了细胞的全能性，故A、D符合题意；DNA在体外大量扩增属于DNA克隆，故B不符合题意；单克隆抗体的制备属于动物细胞融合的应用，故C不符合题意。答案 AD 3
21、(2014江苏卷，29)为了获得植物次生代谢产物，先用植物外植体获得愈伤组织，然后在液体培养基中悬浮培养。请回答下列问题：(1)外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为_。(2)在愈伤组织悬浮培养时，细胞干重、蔗糖浓度和pH的变化如图所示。细胞干重在12d后下降的原因有_；培养液中蔗糖的作用是_、_。(3)多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体。二倍体愈伤组织细胞经_处理，会产生染色体加倍的细胞。为检测愈伤组织细胞染色体数目，压片前常用纤维素酶和_酶解离愈伤组织。若愈伤组织细胞(2n)经诱导处理后，观察到染色体数为8n的细胞，合理的解释是_、_。(4)为了更好地获得次生代谢产物，生产中
22、采用植物细胞的固定化技术，其原理与酵母细胞固定化类似。下列说法正确的有_(填序号)。选取旺盛生长的愈伤组织细胞包埋 必须在光照条件下培养 培养过程中需通空气 固定化后植物细胞生长会变慢 解析(1)外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为脱分化。(2)蔗糖在细胞培养的过程中不断被消耗，细胞干重在12d后下降的原因有蔗糖浓度下降，pH降低。蔗糖的作用是提供能源和调节渗透压。(3)秋水仙素(低温)可诱导染色体数目加倍。一般采用纤维素酶和果胶酶去除植物细胞壁；2n的细胞经染色体加倍后变成4n，处于有丝分裂后期时，染色体数目再加倍，变成8n；或者经加倍到8n的细胞处于有丝分裂中期。(4)植物细胞的固定化过程
23、不需要光的参与，一般选旺盛生长的愈伤组织细胞包埋，正确；培养过程中需通空气，使细胞进行有氧呼吸，正确；固定化后植物细胞与外界培养液的物质交换会受一定的影响，生长会变慢，正确。答案(1)脱分化(2)蔗糖浓度下降，pH降低 提供能源 调节渗透压(3)秋水仙素(低温)果胶 经加倍到4n的细胞处于有丝分裂后期 经加倍到8n的细胞处于有丝分裂中期(4)对细胞工程的考查仅次于基因工程，考查内容多涉及动物细胞培养与融合技术，体细胞核移植技术(常渗透考查胚胎工程技术)及植物组织培养和体细胞杂交技术，答题关键语句均源自教材，故精准记忆教材相关内容是解题关键。1.高考必记关键点(1)植物组织培养的2个关键(2)植
24、物激素的使用 _比例较高，促进芽分化，抑制根形成；_比例较高，促进根分化，抑制芽形成。(3)光照的使用 _阶段不需要给予光照，_阶段需要给予光照，以利于叶绿素的形成。细胞分裂素 固体 细胞分裂素 生长素 脱分化 再分化 2.植物体细胞杂交的关键(1)酶解法用酶和果胶酶去除细胞壁。(2)促融剂_。(3)杂种细胞的形成标志_的形成。(4)培养杂种植株的技术植物组织培养。纤维素 聚乙二醇 新细胞壁 3.动物细胞培养的特殊条件(1)营养条件：加入动物血清、血浆等。通入氧气以满足代谢的需要。通入二氧化碳以。(2)胰蛋白酶的两次使用：首先用胰蛋白酶处理动物的器官或组织，以制备单细胞悬液；培养过程中发生时，
25、同样要用胰蛋白酶使细胞分散开。(3)避免杂菌污染的措施：培养液及培养用具灭菌处理，加入一定量的，定期更换培养液。维持培养液的pH 接触抑制 抗生素 4.动物体细胞核移植技术 减中 胚胎移植(1)细胞核移植主要在同种动物、同种组织的细胞之间进行(2015江苏，3B)()(2)产生抗人白细胞介素8抗体的杂交瘤细胞的筛选必须通过分子检测(2014天津，4B)()(3)培育草莓脱毒苗所采用的主要技术是组织培养(2012广东，2A)()(4)去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理(全国，5B)()(5)乳腺细胞比乳腺癌细胞更容易进行离体培养(2015 江苏，3A)()(6)动物杂交瘤细
26、胞 产生单克 隆抗体体 现了细胞 的全能性(2012江苏，22C)()答案(1)(2)(3)(4)(5)(6)提示(1)细胞核移植是将体细胞核移入同种生物去核卵母细胞(M中期)中；(5)分裂能力越强的细胞，越易进行离体培养；(6)杂交瘤细胞并未发育成“完整个体”，故未体现细胞全能性。1(2013江苏单科，11)某种极具观赏价值的兰科珍稀花卉很难获得成熟种子。为尽快推广种植，可应用多种技术获得大量优质苗，下列技术中不能选用的是()命题角度1 植物细胞工程及其应用 A利用茎段扦插诱导生根技术快速育苗 B采用花粉粒组织培养获得单倍体苗 C采集幼芽嫁接到合适的其他种类植物体上 D采用幼叶、茎尖等部位的
27、组织进行组织培养 解析 通过花粉粒组织培养获得的是单倍体，不能保持原植株的优良特性，故B错误。B2(2012江苏单科，31)某研究组对籼稻开展了组织培养及相关研究，请回答下列问题。(1)2，-4D常用于籼稻愈伤组织的诱导，对形态的发生有一定的抑制作用。为促进愈伤组织再分化，在配制分化培养基时需_(填“升高”、“保持”或“降低”)2，4D的浓度。(2)当籼稻愈伤组织在只含有细胞分裂素的培养基上培养时，出现具有分生能力的绿色芽点，但不能继续出芽，通常在培养基中添加_，以促进幼苗形成。(3)研究中用显微镜可以观察到的现象是_(填下列序号)。绿色芽点细胞排列松散 刚融合的籼稻和稗草杂交细胞发生质壁分离
28、 胚状体细胞中有叶绿体 分化的愈伤组织内各细胞的形态大小一致(4)经组织培养筛选获得的籼稻叶绿素突变体，其叶绿素a与叶绿素 b 的 比 值 显 著 大 于 对 照，叶 绿 素 总 量 不 变。某 同 学 用_(填序号：绿色红色蓝紫色黄色)光照射突变体和对照叶片，检测到两者光合放氧速率差异不大。若取等量色素提取液进行层析，会发现突变体第_条色素带(自上而下)窄于对照组。(5)胚乳(3n)由一个精子与两个极核受精发育而成。若用籼稻种子的胚乳诱导愈伤组织，培育三倍体，需适时剔除胚，以免胚的存在 影 响 愈伤 组 织 细胞 的 _，还 可避 免 再 生苗 中 混 有_。解析 本题主要考查植物组织培养的
29、相关知识。(1)因2，4D能抑制形态的发生，所以在促进愈伤组织再分化时，分化培养基中应降低2，4D的浓度。(2)添加适量的生长素利于愈伤组织再分化出芽，促进幼苗的形成。(3)有分生能力的绿色芽点细胞排列紧密；刚融合的籼稻和稗草杂交细胞还没有再生细胞壁，不能发生质壁分离；愈伤组织由无定形状态的薄壁细胞构成，其内的细胞形态大小不一致；因胚状体细胞中有具有分生能力的绿色芽点，用显微镜可观察到胚状体细胞中有叶绿体。(4)因籼稻叶绿素突变体中叶绿素a与叶绿素b的比值增大而叶绿素总量不变，所以突变体中叶绿素a增加，叶绿素b减少，则自上而下第4条色素带变窄；因叶绿素a、b主要吸收红光和蓝紫光，对绿光和黄光吸
30、收较 少，所以用绿光和黄光照射突变体和对照叶片，检测到两者放氧速率差别不大。(5)胚由二倍体细胞组成，在培育三倍体时，需要剔除种子中的胚，以免胚的存在影响愈伤组织细胞的增殖与分化，还可避免出现二倍体幼苗。答案(1)降低(2)适量的生长素(3)(4)4(5)增殖与分化 二倍体幼苗 植物体细胞杂交的原理、方法及目的(1)原理：细胞膜的流动性及细胞的全能性。(2)促融方法：物理法：离心、振动、电激等；化学法：聚乙二醇(PEG)。(3)意义：克服远缘杂交不亲和的障碍，大大扩展了杂交的亲本组合范围。注：体细胞杂交即两个细胞融合成一个细胞再发育成完整植株的过程，不管是染色体数、基因型还是染色体组数都采用直
31、接相加的方法。1.下图是克隆羊的培育流程图，根据所学知识回答下列问题。命题角度2 动物细胞工程及其应用(1)培育克隆羊时用到的卵母细胞可以从屠宰场收集，并在体外培养到_。(2)从供体羊中取上皮细胞，用胰蛋白酶处理，然后进行分散培养。培养过程一般在_中进行，整个过程必须保证细胞处于_的环境中，所需营养物质要与体内基本相同。(3)通过_法吸出卵母细胞中的细胞核，微型吸管除了将细胞核吸除外，往往还会将_一并吸出。(4)去核的卵母细胞与供体细胞通过电击后融合，供体核进入受体卵母细胞，构建成重组胚胎。融合后的重组胚胎，需要用物理或化学的方法进行激活，使其完成_过程。(5)将重组胚胎发育到一定阶段，移植到
32、同种的、_相同的其他雌性动物体内，使之继续发育，最后形成克隆羊。移入的胚胎能够存活，是因为代孕子宫并不会对其发生_，同时能够在子宫内建立正常的生理和组织联系。答案(1)减数第二次分裂中期(2)二氧化碳培养箱 无菌、无毒(3)显微操作 第一极体(4)细胞分裂和发育(5)生理状态 免疫排斥反应 2.用小鼠(2n40)制备单克隆抗体的过程如图所示，请回答下列问题：(1)细 胞 融 合 实 验 完 成 后，融 合 体 系 中 存 在 的 细 胞 类 型 有_种(只考虑两两融合细胞)，体系中出现多种类型细胞的原因是_。(2)从阳性细胞筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞所用的技术是_。(3)杂交瘤细胞中的染色
33、体数为_条，在增殖过程中能形成_个四分体。(4)杂交瘤细胞在体外培养过程中，会产生接触抑制现象吗？_。理由是_。在培养中为避免毒害，常采取的措施是_。(5)在肿瘤治疗中，利用单克隆抗体制备的“生物导弹”的导弹头是_，瞄准装置是_。答案(1)3 细胞融合是随机的，且融合率达不到100%(2)抗原抗体杂交技术(3)80 0(4)不会 杂交瘤细胞具有无限增殖的特性 定期更换培养液(5)杀死癌细胞的药物 单克隆抗体(1)在动物细胞培养过程中，一般情况下10代以内的细胞核型不变，10代以后有些细胞核型可能会发生改变，50代以后的细胞可能发生癌变。(2)单克隆抗体制备过程中的两次筛选 第一次筛选：利用特定选择培养基筛选，获得杂交瘤细胞，即AB型细胞(A为浆细胞，B为骨髓瘤细胞)，该细胞既能分泌抗体又能大量增殖，筛选掉A、B、AA、BB型细胞。第二次筛选：利用多孔板法和抗原抗体杂交法筛选，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。(3)界定“克隆”动物与“试管”动物
