1、第40讲生物技术在其他方面的应用 12012南通联考 聚合酶链式反应(PCR技术)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，其简要过程如图K401所示。下列关于PCR技术叙述不正确的是()图K401APCR技术是在实验室中以少量DNA制备大量DNA的技术B反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板CPCR技术中以核糖核苷酸为原料，以指数方式扩增D应用PCR技术与探针杂交技术可以检测基因突变22012滨州模拟 下列有关“血红蛋白提取和分离”的相关叙述中，正确的是()A用蒸馏水进行红细胞的洗涤，其目的是去除
2、细胞表面杂蛋白B将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较大的杂质C血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是使血红蛋白溶于有机溶剂D整个过程不断用磷酸缓冲液处理，是为了维持血红蛋白的结构32012合肥三模 (1)利用生物技术提取和分离血红蛋白步骤是：样品处理粗分离纯化纯度鉴定。请回答相关问题：样品处理中选用哺乳动物的红细胞提取血红蛋白的原因是_。粗分离的方法是_，目的是除去样品中分子量较小的杂质。要除去分子量较大的杂质蛋白可采用_方法，依据的特性是_。(2)家庭酿酒的操作过程：在煮熟冷却的米饭中加少许水和一定量的酵母菌菌种混匀，在米饭中挖一洞后将容器置于28 环境中保温一段时间即成。请回答
3、以下问题。在米饭中间挖一个洞的目的是增加_含量，以有利于开始时酵母菌数量的增加。果酒与果醋发酵对环境要求的主要区别是什么？ (3)器官移植是治疗一些疾病的重要手段，器官移植时如果患者细胞表面的_与移植器官的不相同，则会引起_。因此，将来可通过细胞工程获得患者本人的_在体外培养条件下，通过定向诱导分化，培养出人造组织、器官进行移植。4PCR(多聚酶链式反应)技术是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，图K402表示合成过程，请据图分析回答：图K402(1)A过程高温使DNA变性解旋，对该过程的原理叙述正确的是()A该过程用耐高温的解旋酶破坏氢键B该过程用限制酶破坏磷酸二酯键C该过程不
4、需要解旋酶的作用D该过程与人体细胞的过程完全相同(2)C过程要用到的酶是耐高温的_。这种酶在高温下仍保持活性，因此在PCR扩增时可以_加入，_(需要/不需要)再添加。PCR反应除提供酶外，还需要满足的基本条件有： _。(3)如果把模板DNA的两条链用15N标记，游离的脱氧核苷酸不做标记，控制“90 50 72 ”温度循环三次，则在形成的子代DNA中含有15N标记的DNA占_。(4)如果模板DNA分子共有a个碱基对，其中胞嘧啶m个，则该DNA复制10次，需要加入胸腺嘧啶脱氧核苷酸_个。(5)PCR中由碱基错配引起的变异属于_。假设对一个DNA进行扩增，第一次循环时某一条模板链上发生碱基错配，则扩
5、增若干次后检测所有DNA的扩增片段，与DNA相应片段相同的占_。1C解析 PCR技术是人工合成DNA的方法，原料是脱氧核苷酸而不是核糖核苷酸。2D解析 在血红蛋白的提取与分离中，蒸馏水洗涤红细胞是为了使红细胞吸水破裂，释放血红蛋白；将血红蛋白溶液进行透析，其目的是去除相对分子质量较小的其他非蛋白类物质；血红蛋白释放时加入有机溶剂，其目的是使血红蛋白中的有机杂质溶解在有机溶剂中；在整个过程要保持合适的pH，必须用磷酸缓冲液处理，其目的是维持血红蛋白的结构稳定。3(1)哺乳动物成熟的红细胞无细胞核和各种细胞器，血红蛋白含量丰富，便于提取透析法凝胶色谱法 蛋白质相对分子质量大小(2)氧气酒精发酵要求
6、无氧环境，而醋酸发酵要求有氧环境；对环境温度要求不同；对pH要求不同。(答两点即可，合理给分)(3)蛋白质类物质(或表面抗原)免疫排斥反应胚胎干细胞(或全能干细胞，或ES细胞，或EK细胞)解析 (1)本题要求回答哺乳动物成熟红细胞特点以及血红蛋白含量高。粗分离的方法是透析法，去除小分子杂质，纯化的方法中，凝胶色谱法是为了获得比较纯的蛋白质，该方法的原理是根据蛋白质的相对分子质量大小的不同，质量大的蛋白质先分离出来。(2)酒精发酵要求无氧环境，环境温度为1825 。果醋制作的醋酸杆菌是需氧型，环境温度要求较高3035 。(3)器官移植时，患者细胞表面的抗原决定蛋白与移植器官不同，会引起排斥反应。
7、若用本人的全能干细胞在体外培养获得的器官进行移植可以避免免疫排斥现象。4(1)C(2)DNA聚合酶一次不需要DNA模板、两种引物、四种脱氧核苷酸，通过控制温度使DNA复制在体外反复进行(3)25%(4)(2101)(am)(5)基因突变50%解析 (1)高温所起的作用类似于解旋酶，使双链DNA变为单链。(2)C过程是PCR技术的延伸阶段，当系统温度上升到72 左右，溶液中的四种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下合成新的DNA链。这种DNA聚合酶在高温下不变性，所以一次性加入即可。(3)PCR技术遵循半保留复制的特点。经过三次循环，共产生23个DNA分子，其中有2个DNA分子含有15N标记。(4)在一个双链DNA分子中，CT占碱基总数的一半，故T的数目为(am)，复制10次，相当于新增加了(2101)个DNA分子。故需补充T的数目为(2101)(am)。(5)基因中的碱基对改变属于基因突变。对一个DNA进行扩增，第一次循环时某一条模板链上发生碱基错配，以后按正常配对方式进行扩增，错配链作为模板扩增都是错误的DNA分子，原正常链扩增得到的DNA分子都是正常DNA分子，故若干次后检测所有DNA的扩增片段，与原DNA相应片段相同的占1/2。
