1、第42讲微生物的培养及应用考纲要求1.微生物的分离和培养。2.培养基对微生物的选择作用。考点一微生物的分离与培养1培养基(1)概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。(2)营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。(3)种类：按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。2无菌技术(1)含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。(2)关键：防止外来杂菌的入侵。(3)不同对象的无菌操作方法(连线)3大肠杆菌的纯化培养(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基操作步骤倒平板的方法及注意事项a请用文字和箭头
2、写出正确的倒平板操作流程：丙乙甲丁。b甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。c丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。(2)纯化大肠杆菌的方法纯化培养原理：想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。纯化大肠杆菌的关键步骤：接种。常用的微生物接种方法有两种a平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。b稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。系列稀释操作(如下图所示)：涂布平板操作(如下图所示)：(3)菌种的保存方法对于频繁使用的菌种，可以
3、采用临时保藏的方法。对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。思维诊断(1)培养基分装到培养皿后进行灭菌(2013江苏，18A)()(2)从有机废水中分离分解有机物的微生物时，接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养(2013江苏，18C)()(3)消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害(2013重庆，5A)()(4)培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊的物质()(5)无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌()(6)下图中甲为平板划线法中最重要的环节，乙为操作的结果：每一次划线后要将接种环灼烧
4、()除第一次划线外，每一次划线的起点都是第一次划线的末端()(7)用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，就能在培养基表面形成单个菌落()题组一培养基及其制备方法分析1不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述，不正确的是()A氮源物质为该微生物提供必要的氮素B碳源物质也是该微生物的能源物质C无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D水是该微生物的营养要素之一答案B解析碳源分为有机碳源和无机碳源。当有机物作为碳源时，既是碳源，又可作为能源；当无机物作为碳源时，只能作为碳源，不能作为能源。该碳源是二氧化碳，属于无机物，不能作为微生物的能源物质。
5、2下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是()A操作顺序为计算称量溶化倒平板灭菌B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C待培养基冷却至50 左右时倒平板D待平板冷却凝固后将平板倒过来放置答案A解析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算称量溶化灭菌倒平板，其顺序不能颠倒。牛肉膏容易吸潮，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。待培养基冷却到50 左右，用手触摸锥形瓶刚刚不烫手，并且培养基处于溶化状态时开始倒平板，平板冷却凝固后才能倒置。1培养基的配制原则(1)目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。(2)营养要
6、协调：注意各种营养物质的浓度和比例。(3)pH要适宜：细菌为6.57.5，放线菌为7.58.5，真菌为5.06.0，培养不同微生物所需pH不同。2微生物对主要营养物质的需求特点不同种类的微生物代谢特点不同，因此对培养基中营养物质的需求也不同。(1)自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。(2)异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。题组二无菌技术的操作3微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染，请分析下
7、列操作中错误的是()煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢接种操作要在酒精灯火焰附近进行无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌培养基要进行高压蒸汽灭菌加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌A B C D答案D解析无菌操作包括消毒和灭菌。需进行消毒处理的有植物的外植体及操作人员的双手等，需进行灭菌的有器皿、培养基、添加剂(指示剂或染色剂)等。煮沸可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢，属于消毒；为防止空气中杂菌污染，接种时要在酒精灯火焰附近进行；家庭制作葡萄酒时所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能灭菌；培养基常进行高压蒸汽灭菌。故操作错误。4细菌培养过
8、程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌()A接种环、手、培养基 B高压锅、手、接种环C培养基、手、接种环 D接种环、手、高压锅答案C解析一般说来灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力，对于培养基、操作器皿和接种环等都需要灭菌。消毒仅指杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害，如操作者的手和衣着需要消毒处理。高压蒸汽通常用于培养基的灭菌。用酒精擦拭双手是消毒的一种方法。火焰灼烧，可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环。消毒和灭菌的辨析项目条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死
9、物体表面或内部的部分对人体有害的微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属工具高压蒸汽灭菌法培养基及容器的灭菌题组三大肠杆菌的纯化方法及过程分析5下图中甲是稀释涂布平板法中的部分操作，乙是平板划线法的操作结果。下列叙述中错误的是()A甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能取菌液B对于浓度较高的菌液，如甲中的稀释倍数仅为102，则所得的菌落不是由单一的细胞或孢子繁殖而成C乙中培养皿中所得的菌落都符合要求D乙中的连续划线的起点是上一次划线的末端答案C解
10、析灼烧后的涂布器如果没有冷却就接触菌种，会将菌体杀死，A正确。稀释倍数过低会导致多个菌体聚集在一起繁殖成菌落，B正确。平板划线法中最后一次划线的末端处形成的菌落才是由单一的细胞或孢子繁殖而成，这种菌落才符合要求，C错误。连续划线中，除了第一次划线外，每一次划线的起点是上一次划线的末端，目的是使得菌体密度越来越小，保证最后划线末端处的菌落是由单一的细胞或孢子繁殖而成。6稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是()A操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释B需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面C不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落D操作过程中对培养基和
11、涂布器等均需进行严格灭菌处理答案C解析只有菌液稀释到一定程度后，在固体培养基表面才能形成单个的菌落，否则可能会出现两个以上的细菌共同形成一个菌落，或菌落出现重叠。两种纯化细菌的方法的比较项目优点缺点适用范围平板划线法可以观察菌落特征，对混合菌进行分离不能计数适用于好氧菌稀释涂布平板法可以计数，可以观察菌落特征吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延适用于厌氧菌和兼性厌氧菌考点二微生物的筛选和计数1土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。(2)统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用
12、稀释涂布平板法。(3)实验流程：土壤取样样品的稀释微生物的培养与观察细菌的计数。2分解纤维素的微生物的分离(1)纤维素酶组成：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。作用纤维素纤维二糖葡萄糖(2)纤维素分解菌的筛选原理纤维素分解菌红色复合物红色消失，出现透明圈筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。实验流程土壤取样：富含纤维素的环境选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的浓度梯度稀释：制备系列稀释液涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落思维诊断(1)选择
13、培养基可以鉴定某种微生物的种类()(2)从物理性状的角度看，选择培养基多属于固体培养基()(3)对细菌进行计数只能采用稀释涂布平板法，而不能用平板划线法()(4)筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源()(5)分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低()(6)纤维素是构成植物细胞壁的主要成分，在纤维素酶的作用下，纤维素可以水解成葡萄糖()(7)刚果红可以与纤维素形成透明复合物，所以可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌()(8)在筛选能分解纤维素的细菌的实验中，选择培养的目的是增大样品中目的菌株的浓度()(9)刚果红染色法只能在培养微生物的时候加
14、入刚果红()题组一选择培养基成分及配制方法的分析1选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的培养基分别为()A伊红美蓝培养基、含青霉素培养基B含青霉素培养基、含氨的无机培养基C含氨的无机培养基、含青霉素培养基D含青霉素培养基、伊红美蓝培养基答案B解析酵母菌是真菌，通常可以用含青霉素的培养基进行选择培养，因为青霉素抑制细菌生长，但不能抑制真菌生长。硝化细菌为自养型生物，能够利用氨转变为亚硝酸和硝酸所释放的能量把无机物转变为有机物以维持自身生命活动，利用含氨的无
15、机培养基可进行选择培养。2苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，为土壤样品。请回答下列问题：(1)中培养目的菌株的选择培养基中应加入_作为碳源，中不同浓度碳源的培养基_(A.影响；B.不影响)细菌的数量，如果要测定中活细菌数量，常采用_法。(2)为对照，微生物在中不生长，在中生长，与培养基的主要区别在于_；使用_法可以在上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是_。(3)实验过程中如何防止其他微生物的污染？_。答案(1)苯酚A
16、稀释涂布平板(2)的培养基没有加入苯酚作为碳源，的培养基加入苯酚作为碳源稀释涂布平板法或平板划线防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基(3)培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程无菌操作解析根据微生物对营养的需求，在培养基中加入或不加某些物质以达到促进目的菌生长，抑制或阻止其他杂菌生长的目的，然后再用涂布平板法、平板划线法或其他方法筛选出单个目的菌落，再接种培养即可获得纯目的菌。为防止培养基中水分蒸发形成的水珠落入培养基中影响菌体生长，所以要将培养皿倒置。在设计实验中要注意单一变量原则和对照原则，操作中要严格进行无菌操作。选择培养基的制作方法(1)在培养基全部营养成分具备的前提下，加入物质：
17、依据某些微生物对某些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以抑制不需要的微生物，促进所需要的微生物生长，如培养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌的生长，从而分离得到酵母菌和霉菌。(2)通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的：培养基中缺乏氮源时，可分离自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存；培养基中若缺乏有机碳源则异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的CO2制造有机物生存。(3)利用培养基的特定化学成分分离特定微生物：如当石油是唯一碳源时，可抑制不能利用石油的微生物的生
18、长，使能够利用石油的微生物生存，从而分离出能消除石油污染的微生物。(4)通过某些特殊环境分离微生物：如在高盐环境中可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高时易失水而不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温的微生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生存。题组二土壤中分解尿素的细菌的分离与计数3下列说法错误的是()A因为土壤中各类微生物的数量不同，所以为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行分离B测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同C只有得到了3个或3个以上菌落数目在30300的平板，才说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数D牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数明显大
19、于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落答案C解析样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目，土壤中各类微生物数量不同，含量最多的是细菌，大约占70%90%，其次是放线菌，最少是真菌，所以为获得不同类型的微生物，要按不同稀释倍数进行分离；在同一稀释度下只要得到2个或2个以上的菌落数目在30300的平板，就说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数；验证选择培养基是否具有选择作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，若后者上的菌落数明显大于前者，说明前者具有筛选作用。4下面是探究如何从土壤中分离出自生固氮菌与计数的实验，完成下列问题：实验原理：农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。
20、将用表层土壤制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离。材料用具：农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛有9 mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛有90 mL无菌水的锥形瓶、恒温箱。(1)方法步骤：倒平板：分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在_旁操作。制备土壤稀释液：取土样10 g加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。用无菌吸管吸取上清液1 mL，转至盛有9 mL的无菌水的试管中，依次稀释到107稀释度。涂布：按照由103107稀释度的顺序分别吸取0.1 mL进
21、行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布_个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布_个。培养：放入恒温箱内，在2830 下培养34 d。细菌的计数：当菌落数目稳定时，选取菌落数在_的平板进行计数。如果测定的平均值为50，则每克样品中的菌株数是_。(稀释度是105) (2)预期结果：相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数_(选填“多于”或“少于”)无氮培养基上的数目。原因是_。答案(1)酒精灯火焰31303005107(2)多于无氮培养基上只有土壤中的自生固氮菌能生长繁殖，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类生存解析(1)在酒精灯火焰旁倒平板，可以减少杂菌的污染。为了保证结果准确，一般设
22、置35个平板，选择菌落数在30300的平板进行计数，并取平均值，则每克样品中的菌株数为(500.1)1055107。(2)牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，以消除无关变量对实验结果的影响，该培养基适合土壤中几乎所有细菌生存，所以，它比无氮培养基上的菌落数目多。稀释涂布平板法计数微生物的注意问题用稀释涂布平板法计数微生物时，要求选择菌落数在30300的平板进行计数。解题时易出现以下误解：(1)只得到1个菌落数在30300的平板是错误的。错误的原因是不符合实验的重复原则，易受到偶发因素的影响。(2)得到3个或3个以上菌落数在30300的平板，也不一定正确，这可能有两种情况：不同平板间差异较大，如得到3个
23、平板，菌落数分别为230、34、240，虽然菌落数均在“30300”之间，这也是不正确的，因为“34”与“230”“240”差异太大，应重新实验找出原因。不同平板之间差异不大，是符合要求的，用其平均值作为估算的最终结果。可见，并不是只要得到3个“菌落数在30300的平板”即可，而应该是涂布的同一稀释度的平板均符合“菌落数在30300的平板”且无较大差异，说明实验操作合格，才能按照计算公式进行计算。题组三分解纤维素的微生物的分离5通过分离分解纤维素的微生物实验，对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选，这只是分离提纯的第一步，还需要进行()A发酵产纤维素酶的实验 B提取纤维二糖的实验C浓缩纤维素分解
24、菌的实验 D提取葡萄糖的实验答案A解析为确定得到的是纤维素分解菌，还需进行发酵产纤维素酶的实验，纤维素酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后产生的葡萄糖进行定量测定。6下面从土壤中筛选纤维素分解菌的实验步骤，正确的是()土壤取样称取10 g土壤加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中吸取0.1 mL进行平板涂布依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度A BC D答案C解析在分离土壤中某细菌时，应先选取土样(10 g)，然后加无菌水获得土壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。两种微生物筛选方法的比较项目土壤中分解尿素
25、的细菌的分离分解纤维素的微生物的分离方法使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养利用富含纤维素的选择培养基进行培养原理土壤中不能分解尿素的微生物因缺乏脲酶而不能正常生长，能够分解尿素的微生物能利用尿素为氮源正常生长，从而起到选择作用因为培养基中含有丰富的纤维素，因此能够分解纤维素的微生物具有更多的生存机会而大量繁殖特有代表过程CO(NH2)2H2OCO22NH3纤维素纤维二糖葡萄糖网络构建要语强记1无菌操作技术包括消毒和灭菌，消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化学药剂消毒和紫外线消毒等；灭菌包括灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。2培养基的制备包括计算、称量、溶化、灭菌、倒平板等步骤，倒置平板的目的是
26、防止培养皿盖上的水滴滴入培养基造成污染。3大肠杆菌的纯化包括平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法要求多次划线，稀释涂布平板法要求菌液要充分地稀释。4微生物的计数要求制作多个平板，且每个平板上能长出30300个菌落。5尿素分解菌和纤维素分解菌的分离都运用了选择培养基，前者所用的培养基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培养基中纤维素是唯一的碳源。探究高考明确考向1(2013江苏，18)某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。下列叙述正确的是()A培养基分装到培养皿后进行灭菌B转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线C接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养D培养过程中每隔一周观察一次答案B解析培养基灭
27、菌后再分装到培养皿中；转换划线角度后要灼烧接种环，冷却后再从上次划线的末端开始进行划线；接种后的培养皿必须放在恒温箱中进行培养，一般每隔12 h或24 h观察一次。2(2012北京，5)高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是()A将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中B将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上C将转基因植物叶片接种到无菌培养基上D将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上答案C解析在酿制葡萄酒的过程中，如果灭菌不彻底会影响葡萄酒的品质，但影响不大；在制作腐乳的过程中，发酵过程有多种微生物的参与，所以该过程不进行严格的无菌操作对结果影响不大；在植物组织培养过程中，如
28、果灭菌不彻底，杂菌产生的物质会影响外植体的生长，甚至杀死外植体，导致培养失败，对结果影响最大；土壤浸出液本身就含有大量的杂菌，另外在选择培养基上只能生存我们所要筛选的细菌，所以无菌操作不严格，对结果影响也不会太大。3(2011新课标，39)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲，该培养基属于_培养基。(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即_和_。(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大
29、说明该菌株的降解能力_。(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_和_。无菌技术要求实验操作应在酒精灯_附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。答案(1)原油选择(2)平板划线法稀释涂布平板法(3)强(4)干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰解析(1)可以将所需要的微生物从混杂的微生物群中分离出来的培养基为选择培养基。欲筛选出能降解原油的菌株，则培养基中应只含有原油而无其他碳源，这样不能降解原油的细菌在此培养基上不能生存，能降解原油的细菌才能在只含原油这一碳源的培养基上生存。(2)分离纯化菌种时，接种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法，其目的都是使聚集在一起的微生物分散成单个
30、细胞，从而能在培养基表面形成单菌落，以便于纯化菌种。(3)降解原油能力越强的菌株，在菌落周围形成的分解圈越大。(4)实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌(如接种环)、干热灭菌(如培养皿)和高压蒸汽灭菌(如培养基)等。无菌技术要求整个实验操作都要在酒精灯火焰附近进行，以避免周围微生物的污染。4(2014新课标，39)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_；然后，将1 mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分
31、别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为_。(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过_灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_。(3)示意图A和B中，_表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中_的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高_的利用率。答案(1)检测培养基平板灭菌是否合格
32、3.8107(2)灼烧将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落(3)B(4)溶解氧营养物质解析(1)为了检测培养基平板灭菌是否合格，可在涂布接种前，随机取灭菌后的空白平板先行培养一段时间。0.1 mL稀释液中平均有(393837)/338个活菌，则每毫升稀释液中活菌的数目为38/0.1380，则稀释前每毫升水样中活菌数目为3801003.8104，则每升水样中活菌数目为3.81041 0003.8107。(2)接种环、接种针等金属用具可直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，以达到迅速彻底灭菌的目的。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，其目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。(
33、3)比较图A和图B可以看出：A培养基中细菌的分布呈线性，是用平板划线法接种培养后得到的结果；B培养基中细菌均匀分布，是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。(4)振荡培养可以提高培养液中溶解氧的含量，还可以使菌体与培养液充分接触，提高了营养物质的利用率，因此振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。练出高分1下图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，据图分析不正确的是()A获得图A效果的接种方法是稀释涂布平板法B获得图B效果的接种方法是平板划线法C若在纯化土壤细菌时菌液浓度过高，培养基上的菌落可能会连成一片D在接种前要对培养基进行消毒处理答案D解析从平板中菌落的分布来看，A图和
34、B图的接种方法分别是稀释涂布平板法和平板划线法。如果菌液的稀释度太低，在培养基上的菌落会连成一片。在接种前要对培养基进行高压蒸汽灭菌处理。2下列有关平板划线接种法的操作的叙述中，错误的是()A将接种环放在酒精灯火焰上灼烧B将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液C蘸取菌液和划线要在酒精灯火焰旁进行D划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连答案D解析划线时要将接种环在酒精灯火焰上灼烧灭菌，A正确。为了防止烧死细菌，接种环需要冷却后再蘸取菌液，B正确。为防止杂菌污染，应在酒精灯附近操作，C正确。划线时为挑选出单个菌落，最后一区和第一区不能相连，故D错误。3用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设
35、置的对照是()A未接种的选择培养基B未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C接种了的选择培养基D接种了的牛肉膏蛋白胨培养基答案D解析选择的目的是为了分离、筛选，对照遵循的原则是单一变量，因此用接种了的普通培养基和选择培养基进行对照，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目。4微生物接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。下列关于这两种接种方法的叙述中，不正确的是()A都只能用固体培养基接种B都能用于微生物的计数C接种培养后均可获得单菌落D接种工具使用后都需要灭菌答案B解析要计数微生物，常采用的接种方法是稀释涂布平板法，故B错误。5分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是()
36、选项尿素琼脂糖葡萄糖硝酸盐ABCD注：“”表示加入，“”表示不加。答案C解析分离土壤中分解尿素的细菌，培养基中要有碳源，且尿素作为唯一的氮源，不能添加硝酸盐。6下列培养基配方中能作为选择培养基、鉴别培养基的依次是()原料蛋白胨/g10101010乳糖/g5555蔗糖/g5555KH2PO4/g2222伊红/g0.4美蓝/g0.065琼脂/g1020NaCl/g20蒸馏水/mL1 0001 0001 0001 000A. B C D答案D解析在培养基中加入伊红和美蓝，可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌，有伊红和美蓝的培养基为鉴别培养基。高浓度的食盐可以抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色
37、葡萄球菌的生长，从而可以将金黄色葡萄球菌分离出来，有高浓度食盐的培养基为选择培养基。7下列有关微生物的培养或纯化的叙述，错误的是()A在培养微生物前要先对培养基进行灭菌处理再接种B培养液中溶氧量的变化会影响酵母菌的繁殖和代谢途径C分离自养型微生物的方法是用以纤维素作为唯一碳源的培养基D分离纯化微生物的常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法答案C解析在培养微生物前要先对培养基进行灭菌处理再接种，防止其他微生物混入，A正确；酵母菌是兼性厌氧型微生物，所以培养液中溶氧量的变化会影响酵母菌的繁殖和代谢途径，B正确；以纤维素作为唯一碳源的培养基是用来分离纤维素分解菌的，分离自养型微生物要用不含有机碳源的培
38、养基，C错误；分离纯化微生物的常用方法是平板划线法和稀释涂布平板法，D正确。8下列关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述中，不正确的是()A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高压蒸汽灭菌后倒平板B取104、105、106倍土壤稀释液和无菌水各0.1 mL涂布不同平板C将实验组和对照组平板倒置，37 恒温培养2448小时D确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的平板进行计数答案D解析制备培养基时，需要将培养基用高压蒸汽灭菌，A正确；接种方法为稀释涂布平板法，即需要制备不同的土壤稀释液后才能倒平板，B正确；对照组和实验组需要放置在恒温培养箱中培养，C正确；一般选择菌落数在30300的平板进行计
39、数，D错误。9用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是()A涂布了一个平板，统计的菌落数是230B涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233答案D解析在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B不正确。C项虽涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3
40、个平板的计数值用来求平均值。10以下有关生物技术实践的叙述中，不正确的是()A在大肠杆菌的分离和培养实验中，划线后盖好培养皿，再将培养皿倒置培养B在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌，符合生物与环境相适应的生物学观点C在酿酒生产上，常向发酵罐中加少量尿素，其目的是作为氮源，用于酵母菌合成蛋白质和核酸D不能用稀释涂布平板法来测定土壤溶液中某活菌数目答案D11普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的淀粉酶基因转入酵母菌中，经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种(过程如图甲所示)。(1)图甲中，过程需要的酶有_。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以_作为唯一碳源。、过程需重复几次
41、，目的是_。(2)某同学尝试过程的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是_；推测该同学接种时可能的操作失误是_。(3)以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种_菌的发酵罐需要先排气，其原因是_。答案(1)限制性核酸内切酶、DNA连接酶淀粉进一步筛选纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌(2)稀释涂布平板法涂布不均匀(3)工程酵母工程酵母菌分解淀粉产生葡萄糖的能力强，导致酒精发酵产生CO2的速率更快解析(1)由题目所给信息可以直接看出，工程酵母菌比普通酵母菌利用淀粉的能力强。在以淀粉为唯一碳源的培养基上，工程酵母菌可以正常增殖，而普通酵母菌不能正
42、常增殖。(2)微生物接种最常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，根据图乙菌落分布情况可确定该同学的接种方法是后者；由图乙中菌落分布不均的可推测该同学接种时可能的操作失误是涂布不均匀。(3)在以淀粉为原料的培养液中，普通酵母菌繁殖慢，产生气体少；工程酵母菌繁殖快，产生气体多。12纤维素是地球上年产量巨大，但未能得到充分利用的物质，尤其以农作物秸秆为甚，我国年产约6亿吨。对其研究利用的报道较多，能降解纤维素的微生物种类很多，目前的研究以丝状真菌为主。请回答下列问题：(1)食草动物能够消化食物的关键是体内存在_酶，能够降解纤维素，该酶是一种复合酶，它至少包括_。(2)目前，研究者多利用以_为唯一碳
43、源的培养基从土壤中分离纤维素分解菌。为检测纤维素分解菌的存在与否还应加入_染料，形成_色复合物，若产生_，则证明有纤维素分解菌存在。(3)下图是工业上利用微生物由纤维素生产乙醇的基本工艺流程：上述工艺流程中环节需要的微生物大多分布在_的环境中。过程要注意对接种器材进行_。答案(1)纤维素C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶(2)纤维素刚果红红透明圈(3)富含纤维素(答案合理即可)灭菌解析(1)纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。正是在这三种酶的协同作用下，纤维素最终被水解成葡萄糖，为微生物的生长提
44、供营养，同样，也可以为人类所利用。(2)一般利用添加了纤维素的选择培养基分离纤维素分解菌，利用刚果红染色法筛选纤维素分解菌，这种方法能够通过在培养基中加入刚果红，看是否产生透明圈直接对微生物进行筛选。(3)能产纤维素酶的微生物应多分布于富含纤维素的环境中，接种前要对接种器材进行灭菌处理。13(原创题)中国家电研究院的洗衣机专家指出，洗衣机内部的环境非常潮湿，洗衣机使用时间越长，内部滋生微生物的机会就越大。看似干净的洗衣机，其内部隐藏着一个健康的隐形杀手。某生物兴趣小组的同学，利用内桶背面的污垢进行了相关实验室实验。(1)培养洗衣机内部微生物的培养基中一般含有_。(2)鉴定洗衣机污垢中是否有菌落
45、时要制备固体培养基，在制备完毕后要进行倒平板操作，将平板倒置。这样做的目的是_。(3)有三种材料或用具需要消毒或灭菌：培养细菌用的培养基与培养皿；玻棒、试管、烧瓶和吸管；实验操作者的双手。其中需要消毒的是_，需要灭菌的是_。(4)检验污垢中是否含微生物时，要将污垢制成水样稀释，然后将稀释水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，这种方法称为_。下图所示的四种菌落分布情况中，不可能由该方法得到的是_。用该方法统计样本菌落数时是否需要对照组？_。为什么？_。(5)判断污垢中微生物的种类可以依据菌落的形状、大小等菌落特征进行初步的_。实验结束后，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉，此目
46、的是_。答案(1)水、碳源、氮源和无机盐(2)防止皿盖上凝结的水珠落入培养皿造成污染，还可使培养基表面的水分更好地挥发(3)(4)稀释涂布平板法D需要因为需要判断培养基是否被杂菌污染(培养基灭菌是否合格)(5)鉴定(或分类)防止造成环境污染解析(1)培养微生物的培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。(2)倒置平板的目的是防止皿盖上凝有的水珠落入培养皿造成污染，同时还可使培养基表面的水分更好地挥发。(3)实验者的双手需要进行消毒处理，培养皿、培养基及其他实验器材等需要进行灭菌处理。(4)本题中将污垢水样接种在培养基上的方法为稀释涂布平板法。D属于利用平板划线法得到的菌落分布。利用稀释涂布平板法统计菌落数时需要设置对照组，将一个未接种污垢水样的培养基放在相同条件下培养，以此判断培养基是否被杂菌污染。(5)污垢中的微生物种类可以根据菌落的形状、大小等进行初步分类。实验结束后，为防止污染环境，应对用过的培养基进行灭菌处理后再倒掉。